Resumo: A uveíte em mamíferos tem sido relacionada à infecção por Leptospira spp., e, embora ocorra com maior frequência na espécie equina, já foi observada e relatada em outras espécies mamíferas, inclusive na humana. O objetivo deste trabalho foi investigar a relação entre a infecção por leptospiras e a ocorrência de alterações oculares em cães. Para a obtenção dos dados foram utilizados 32 cães, em idade reprodutiva, recolhidos pelo Centro de Controle de Zoonoses do Município de São José do Rio Preto, que apresentaram reação negativa, em duas provas de soroaglutinação microscópica (SAM) no intervalo de sete dias. Dos 32 cães, 20 foram inoculados com uma cepa patogênica de Leptospira interrogans sorovariedade Canicola e 12 formaram o grupo controle. Com a finalidade de avaliar as possíveis alterações do globo ocular post mortem, oito cães (cinco inoculados e três controles) foram sacrificados nos dias: sete, 15, 30 e 45 após o dia da inoculação. Amostras de humor aquoso, de um dos olhos de cada animal, foram retiradas para realização de PCR e SAM; o outro globo ocular foi retirado para realização de exame histopatológico e para a técnica de coloração de Levaditi. Nos dias zero, três, cinco, sete, 10 e após, a cada cinco dias, inclusive no dia do sacrifício, foram realizadas avaliações do estado físico do animal, do globo ocular e realizadas colheitas de sangue. O soro sanguíneo foi submetido à SAM para estabelecer os títulos obtidos em cada fase da infecção. Embora todos os animais tenham apresentado títulos sorológicos, indicando o sucesso da infecção, nenhum dos testes de detecção resultou positivo em até 45 dias de observação; no exame clínico apenas três animais apresentaram alterações perceptíveis: dois apresentavam irritação ocular, com hiperemia da esclera e um animal apresentava lacrimejamento... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Uveitis in mammals has been related to Leptospira spp. And although it occurs more frequently in the horse has already been observed and reported in other mammalian species, including the human. The aim of this study was to investigate the relationship between leptospira infection and the occurrence of ocular changes in dogs. To obtain the data were used 32 dogs in the reproductive age, collected by the Center for Zoonosis Control in São José do Rio Preto, which showed negative reaction in both tests of microscopic agglutination test (MAT) within seven days. Of the 32 dogs, 20 were inoculated with a pathogenic strain of Leptospira interrogans sorovar Canicola and 12 formed the control group. With the aim of assessing possible changes of the eye post mortem, eight dogs (five inoculated and three controls) were sacrificed on days: seven, 15, 30 and 45 days after inoculation. Samples of aqueous humor of one eye of each animal were removed for PCR, and MAT, and the other eye was removed for histological examination and the staining technique Levaditi. On days zero, three, five, seven, 10 and, thereafter, every five days, including the day of sacrifice, were assessed the physical condition of the animal, the eyeball and blood samples. The serum was subjected to SAM to establish the qualifications obtained at each stage of infection. Although all animals have serologic evidence indicating the success of infection, no detection tests resulted positive in up to 45 days of observation and by clinical examination only three animals showed noticeable changes: two had eye irritation with redness of the sclera and one animal showed tearing. We conclude that 45 days of infection with Leptospira interrogans sorovar Canicola are not enough to cause serious damage to the ocular system of dogs / Orientador: Raul José Silva Gírio / Coorientador: Fernanda Senter Magajevski / Banca: Luis Antonio Mathias / Banca: Heloisa Cristina da Silva / Mestre

Resumo: Com a crescente disponibilidade das biotécnicas de reprodução animal, o comércio dos produtos envolvidos com essas práticas também está em expansão, oferecendo a possibilidade de melhoria dos índices zootécnicos às produções de bovinos. Porém deve-se levar em consideração que há riscos sanitários em práticas como a inseminação artificial caso não se realize o controle do material biológico utilizado. Dentre os agentes infecciosos que podem estar presentes no sêmen e passíveis de serem transmitidos por esse estão a leptospirose e a brucelose, enfermidades responsáveis por grandes perdas reprodutivas e econômicas na bovinocultura mundial. Este projeto teve como objetivos detectar molecularmente esses patógenos em amostras de sêmen bovino provenientes de centrais de comercialização brasileiras, utilizando um kit comercial para extração de DNA ("RTP Bacteria DNA Mini Kit" (Invitek®), aperfeiçoá-lo para a extração de DNA bacteriano a partir de sêmen e avaliar sua aplicabilidade à rotina laboratorial. O DNA bacteriano foi extraído e quantificado por eletroforese em gel de agarose. Pretendeu-se também realizar reação em cadeia da polimerase (PCR) utilizando os "primers" B4 e B5 para amplificação do DNA de Brucella spp. e os "primers" Lep 1 e Lep 2 para Leptospira spp. O kit de extração foi otimizado com sucesso, e todas as 96 amostras examinadas foram negativas para qualquer DNA bacteriano. Os resultados podem ser úteis para estabelecer alternativas de controle sanitário em touros doadores de sêmen e permitir o fornecimento de material genético livre de patógenos, aumentando o "status" sanitário da reprodução de bovinos no Brasil / Abstract: With the increasing disponibility of animal reproduction biotechniques, trading of products involved with these activities is also in expansion offering improving possibilities in zootecnic indexes of bovine herds. However, considerations should be taken about sanitary risks in practices like artificial insemination if any control is applied to this biological material. Among infectious agents that could be present and transmitted by semen are leptospirosis and brucellosis, diseases that are responsible for numerous reproductive and economic losses in world's cattle culture. The goals of this project were to molecularly detect these pathogens in bovine semen samples from Brazilian artificial insemination centers using a commercial kit for DNA extraction (RTP Bacteria DNA Mini Kit (Invitek®), to improve it for extracting bacterial DNA from semen and to analyze its applicability in laboratory routine. Bacterial DNA was extracted and quantified by agarose gel electrophoresis. We also intended to realize polymerase chain reaction (PCR) using primers B4 and B5 for amplification of Brucella spp. DNA and primers Lep 1 e Lep 2 for Leptospira spp. DNA. The extraction kit was successfully optimized and all of 96 examined samples were negative for any bacterial DNA. Results could be useful to establish alternative measures of sanitary control in semen donors and to allow the supplying of genetic material free of pathogens, increasing sanitary status of bovine reproduction in Brazil / Orientador: Raul José Silva Gírio / Coorientadora: Fernanda Senter Magajevski / Banca: Luis Antonio Mathias / Banca: Vera Cláudia Lorenzetti Magalhães Cursi / Mestre

Orientador: Raul José Silva Girio / Banca: Luís Antonio Mathias / Banca: José Rafael Modolo / Resumo: Conhecendo-se a predileção das leptospiras pelo aparelho urogenital, e a crescente utilização de técnicas de reprodução assistida na espécie canina, o presente trabalho objetivou pesquisar a presença e a ação da Leptospira no sêmen e testículo de cães. Foram utilizados 32 animais, dos quais 20 foram inoculados com uma cepa patogênica de Leptospira interrogans sorovar Canicola e 12 não receberam inóculo algum, sendo considerados animais-controle. Assim, os 32 animais experimentais foram reunidos em quatro grupos de estudo encerrando cinco cães inoculados e três cães-controle por grupo. Os animais do grupo um foram sacrificados após sete dias da inoculação, os animais do grupo dois sacrificados 15 dias após a inoculação, os animais do grupo três sacrificados após 30 dias de incubação e os animais do grupo quatro foram sacrificados após 45 dias da inoculação da cepa patogênica. Após o sacrifício, colheram-se fragmentos de testículo para pesquisa de Leptospira no parênquima testicular pela técnica de coloração de Levaditi. Nos dias zero (dia da inoculação), três, cinco, sete, dez, e a partir daí de cinco em cinco dias após a inoculação da cepa patogênica de Leptospira, foram colhidas amostras de sangue e sêmen. No sêmen, foram realizados exames andrológicos e PCR, no sangue, além da pesquisa de anticorpos pela técnica de soroaglutinação microscópica (SAM), foram verificados os níveis hormonais de testosterona. Dos 20 cães infectados, apenas um não apresentou título detectável na prova de SAM no período analisado. No grupo dois, foi verificada uma queda significativa nos valores do vigor e da concentração espermática, nos cães infectados, durante grande parte do período de estudo...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Considering the Leptospira predilection for the urogenital system and the increasing of utilization of assisted reproduction in dogs, this work aimed to search the presence and the role of Leptospira in semen and testicles from dogs. From 32 animals, 20 were inoculated with a pathogenic Leptospira interrogans serovar Canicola strain and 12 received no inoculum, acting as control animals. The 32 experimental animals were distributed in four groups with five inoculated and three control dogs per group. Animals from group one were sacrificed seven days after inoculation, animals from group two were sacrificed 15 days after inoculation, animals from group three were sacrificed 30 days after inoculation, and animals from group four were sacrificed 45 days after inoculation. Testicle fragments were collected after dog sacrifices for searching Leptospira in testicle parenchyma using Levaditi stain technique. Blood and semen samples were collected at day zero (inoculation day), three, five, seven, ten and then by each five days after pathogenic Leptospira strain inoculation. Andrologic exams and PCR were performed with semen. Blood samples were used to detect antibodies using microscopic agglutination test (MAT) and verify testosterone levels. Only one of the 20 infected dogs had no detectable titre using MAT. Spermatic vigor and spermatic concentration had a significant decrease in group two during most part of the study. In three of nine days of semen collection, only spermatic concentrations were significantly lower in infected animals from group three. In this study it was possible to detect Leptospira DNA in semen samples from 16 of the 20 dogs inoculated with L. interrogans serovar Canicola strain. Thereby it was not possible to correlate the decrease of testosterone serum levels in infected animals with those detected in control animals...(Complete abstract, click electronic access below) / Mestre