O objetivo do presente estudo foi avaliar ossos maxilares e lesões periapicais induzidas em ratas ovariectomizadas submetidas ou não ao tratamento com bisfosfonato (Alendronato - ALD) ou com inibidor da catepsina K (Odanacatib - ODN). Foram utilizadas 45 ratas, divididas em 6 grupos: I sham (cirurgia de ovariectomia fictícia); II sham e lesão periapical (LP); III - ovariectomia (OVX) sem LP; IV OVX e LP; V OVX, LP e ALD; e Grupo VI - OVX, LP e ODN. Um dia após a realização da OVX ou da cirurgia fictícia, os animais dos grupos V e VI começaram a receber ALD ou ODN, via gavagem. Decorridas 9 semanas da realização da OVX, os primeiros molares dos grupos II, IV, V e VI foram submetidos à indução de LP por 3 semanas. Decorrido este período, foi realizada colheita microbiológica dos canais radiculares para a quantificação de micro-organismos e os animais foram submetidos à eutanásia. Fêmures foram analisados por meio de densitômetro, para registro da densidade mineral óssea (BMD). As maxilas foram analisadas por meio de microtomografia computadorizada (micro-CT) para avaliação da microarquitetura e BMD do osso interradicular e as mandíbulas para avaliação do volume das LP. Os primeiros molares inferiores foram submetidos ao processamento histotécnico, sendo os cortes corados com hematoxilina e eosina (HE) e analisados em microscopia convencional. Paralelamente, foi realizada a análise morfométrica da área das lesões periapicais, em microscopia de fluorescência e histoenzimologia para a atividade da TRAP. Os primeiros molares superiores foram submetidos à detecção da expressão gênica de citocinas, marcadores da osteoclastogênese e de metaloproteinases da matriz. Os resultados obtidos foram submetidos à análise estatística apropriada, com nível de significância de 5%. A OVX afetou a BMD do fêmur e da maxila e a microarquitetura apenas do fêmur. O ALD recuperou a BMD dos ossos avaliados. A OVX não foi capaz de influenciar nos níveis de contaminação microbiana do canal radicular. As LP dos animais do grupo IV apresentaram expressão aumentada de RANK, RANKL, IL-1β, IL-6, TNF-α, MMP-8 e 13, enquanto o tratamento com ALD (grupo V) foi capaz de reduzir a expressão de IL-6 e MMP-8, ao mesmo nível que nas LP do grupo II. Além disso, as LP do grupo IV foram maiores (área e volume), em comparação às dos grupos II e V. O ODN, na dose e frequência de administração aplicada, não foi capaz de promover alterações significantes. A OVX e os tratamentos antirreabsortivos não influenciaram no número de osteoclastos ao redor da LP. Assim, concluiu-se que a condição hipoestrogênica induzida pela OVX foi capaz de diminuir a BMD do fêmur e da maxila e alterou a microarquitetura do fêmur. Apenas o ALD foi capaz de recuperar o fenótipo da BMD, ou seja, retorno aos níveis observados nos animais saudáveis. Ainda, a OVX agravou o processo de reabsorção, a inflamação e a expressão de MMPs, provocando lesões periapicais maiores. O ALD e o ODN proporcionaram uma melhora da resposta periapical. Entretanto, apenas o tratamento com ALD recuperou o fenótipo, fazendo com que as lesões periapicais fossem similares às lesões dos animais saudáveis. / The aim of this study was to evaluate maxillary bones and apical periodontitis induced in ovariectomized rats treated or not with bisphosphonate (Alendronate - ALD) or cathepsin K inhibitor (Odanacatib - ODN). Forty-five female rats were divided into 6 groups: I sham surgery; II - sham and apical periodontitis (AP); III - ovariectomy (OVX) without AP; IV - OVX and AP; V - OVX, AP and ALD; and Group VI - OVX, AP and ODN. One day after OVX or sham surgery, the animals in groups V and VI started receiving ALD or ODN, by gavage. After 9 weeks, the first molars of the rats in groups II, IV, V and VI were subjected to induction of AP for 3 weeks. Microbiological root canal sampling was collected for quantification of microorganisms and the animals were euthanized. Bone mineral density (BMD) of the femurs was analyzed by bone densitometry. The maxillas were analyzed by microcomputed tomography (micro-CT) to determine the microarchitecture and BMD of the interradicular bone while the mandibles were analyzed to determined AP volume. The mandibular first molars were subjected to histotechnical processing and hematoxylin and eosin-stained histological sections were examined with conventional microscopy. In addition, a morphometric analysis of AP area was performed using fluorescence microscopy and tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) histoenzymology. The maxillary first molars were used to evaluate the gene expression of cytokines, osteoclastogenesis markers and matrix metalloproteinases (MMP) using RT-PCR. The results were subjected to appropriate statistical analysis with 5% significance level. OVX affected femoral and maxillary BMD and femoral microarchitecture. ALD recovered the BMD of both types of bones. OVX was not able to influence the microbial levels of the root canal. In group IV, AP showed increased expression of RANK, RANKL, IL-1β, IL-6, TNF-α, MMP-8 and MMP-13, while ALD treatment (group V) reduced IL-6 and MMP-8 expression to the same level as the AP in group II. In group IV, AP area and volume were larger than in groups II and V. ODN, in the dosage and frequency of administration applied, was not able to promote significant changes. OVX and antiresorptive treatments did not influence the number of osteoclasts around the AP region. In conclusion, the hypoestrogenic condition induced by OVX was able to decrease the BMD of femur and maxilla and only the microarchitecture of the femur. ALD was able to recover the BMD phenotype, i.e., return to the levels observed in healthy animals. Furthermore, OVX exacerbated resorption, inflammation and MMP expression, inducing larger lesions. Treatment with ALD and ODN resulted in an improvement of the periapical response. However, only ALD recovered the phenotype, with AP similar to that of healthy animals.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Diabetes is classified as a metabolic disorder, since its establishment promotes several systemic and oral changes. One of the causes of these alterations is the excess of reactive oxygen species (ROS) presents in the diabetic patient tissues, leading to oxidative stress increase. Metformin, the anti-hyperglycemic more used in the type-2 diabetics treatment, is a ROS scavenger. Furthermore, recent studies have shown a bone repair increase attributed to the drug. However, there are not reports searching the relationship between metformin and apical bone repair in the type-2 diabetes individuals. Therefore, the aim of this study was evaluate the treatment effect with metformin on the development of apical periodontitis (AP) in healthy and type-2 diabetes rats. Addicionally, biochemical parameters related to metabolic disorder were evaluated in order to complement the pharmacological study. For this purpose, forty eight Wistar rats were fed either with a standard diet (SD) or high fat, low protein, moderate carbohydrate diet (HFLPMC). Rats in each diet were divided into three subgroups: i) saline (daily/four wk); ii) metformin (500mg/kg, daily/two wk); iii) metformin (500mg/kg, daily/four wk). At the sixth experimental week, the pulp chambers of first mandibular molars were exposed in order to permit the AP development. Glucose tolerance test was performed in the week before euthanasia. At the tenth experimental week, the animals were euthanized and it was collected the fallowing structures: liver, abdominal adipose tissue, interscapular brown adipose tissue and mandible. Also, it was collected blood to determine levels of plasma insulin, total and HDL cholesterol. Catalase and reduced glutathione (GSH) were measured and the size of apical periodontitis was estimated from radiographs of the mandible. After 30 minutes of sucrose administration, the rats fed with HFLPMC diet presented greater blood glucose levels than the ones fed with SD. However, the metformin administration did not affect this concentration. Moreover, plasma insulin levels were higher in the HFLPMC+Saline group than in the SD+Saline group. Catalase levels in the HFLPMC+Saline group were significantly lower than SD+Saline group (p = 0,0267) and metformin increased these levels in the animals fed with HFLPMC diet. It was observed a similar behavior with GSH levels. In the radiographic analysis, treatment with metformin did not affect the AP size. Therefore, based on the results, we suggest that metformin has not a positive effect over the bone metabolism. / O diabetes é reconhecido por ser uma desordem metabólica, pois seu estabelecimento promove uma série de alterações no funcionamento do organismo como um todo, repercutindo inclusive, na cavidade oral. Uma das principais causas destas alterações é a quantidade excessiva de espécies reativas de oxigênio (ROS) que está presente no organismo do paciente com diabetes, levando a um aumento do estresse oxidativo. A metformina, o anti-hiperglicemiante mais utilizado para o tratamento do diabetes tipo 2, também possui a propriedade sequestradora de ROS. Adicionalmente, estudos recentes têm mostrado um maior reparo ósseo associado ao tratamento com o fármaco. No entanto, não existem dados disponíveis na literatura informando se a metformina é capaz de alterar o desenvolvimento das periodontites apicais (PA) em ratos com diabetes tipo 2. Portanto, o objetivo principal deste estudo foi determinar se a metformina tem a capacidade de prevenir ou interferir no desenvolvimento das PA em ratos sadios e com diabetes tipo 2. Além disso, parâmetros bioquímicos relacionados com desordem metabólica foram avaliados a fim de complementar o estudo farmacológico. Para tal, quarenta e oito ratos Wistar foram utilizados. O modelo de diabetes tipo 2 foi alcançado submetendo vinte quatro animais à ingestão de uma dieta especial [High Fat, Low Protein, Moderate Carbohydrate (HFLPMC)] por 70 dias. Os animais sadios receberam uma dieta padrão [standard diet (SD)] durante todo o período experimental. Dentro de cada dieta, os ratos foram divididos conforme os protocolos de tratamento medicamentoso a seguir: i) solução salina (diarimente/quatro semanas); ii) metformina (500mg/kg, diariamente/duas semanas); iii) metformina (500mg/kg, diariamente/quatro semanas). A abertura da câmara pulpar para propiciar o desenvolvimento das PA foi realizada na sexta semana do experimento e uma semana antes da eutanásia os animais foram submetidos ao teste oral de tolerância à glicose. Após dez semanas do início do experimento, os animais foram eutanasiados e as seguintes estruturas foram coletadas e pesadas: fígado, tecido adiposo abdominal e marrom. A mandíbula foi removida e dissecada e radiografias periapicais foram obtidas para mensurar o tamanho da PA. Adicionalmente, amostras de sangue foram retiradas para posterior determinação do colesterol total e HDL e insulina plasmática. Os níveis de catalase e glutationa reduzida (GSH) foram mensurados a fim de determinar o estresse oxidativo no fígado. Os níveis de glicose sanguínea após 30 minutos de administração de sacarose foram maiores no grupo HFLPMC+Salina que no grupo SD+Salina, porém a metformina não teve efeito sobre este parâmetro. Os animais submetidos à ingestão da dieta HFLPMC e salina apresentaram concentrações superiores de insulina plasmática e níveis significativamente inferiores de catalase (p = 0,0267) que os animais do grupo SD+Salina. Um comportamento similar à catalase foi observado nos níveis de GSH e a metformina aumentou a concentração de ambos nos animais alimentados com a dieta HFLPMC. O tratamento com metformina não afetou o tamanho da PA. Portanto, com base nos nossos resultados, sugere-se que a droga não tem efeito positivo sobre o metabolismo ósseo.

O receptor NLRP12 é um receptor intracelular que está envolvido no reconhecimento de PAMPs e DAMPs durante uma infecção. Foi visto que durante a osteoclastogênese, há uma diminuição da transcrição de NLRP12, e que este receptor inibe a reabsorção óssea através da supressão da via alternativa de NF-κB, exercendo um papel protetor sobre o tecido ósseo. Além disso, foi observado que a deficiência de NLRP12 em monócitos sob o estímulo de RANKL levou a maior estabilização de NIK e maior translocação de RelB para o núcleo, aumentando a formação dos osteoclastos in vitro. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar o papel de NLRP12 no desenvolvimento e progressão da lesão periapical induzida em camundongos. Para isso, foi induzida a lesão periapical dos primeiros molares inferiores dos camundongos fêmeas C57/Bl6 (WT) e camundongos deficientes para o receptor NLRP12 (Nlrp12-/-). Após 14 e 21 dias, as amostras de mandíbula foram submetidas às análises: determinação da área de lesão periapical em cortes histológicos; expressão gênica de marcadores osteoclastogênicos por qPCR; contagem de osteoclastos submetidos ao ensaio de histoenzimologia (TRAP); avaliação enzimática das MMPs por Zimografia. Os linfonodos cervicais foram submetidos à análise da expressão dos fatores de transcrição T-bet, RORγt, GATA-3 e Foxp-3 por qPCR. Aos 14 dias, na análise histomorfométrica os animais Nlrp12-/- apresentaram uma maior lesão periapical quando comparados aos animais WT, associado com o aumento da expressão de Trap, Catepsina K e MMP-9 em amostras de hemi-mandíbulas com lesão. Além disso, o número de células TRAP positivas foi significantemente maior em Nlrp12-/- com lesão quando comparado com seu controle, enquanto no grupo WT com e sem lesão foram semelhantes. Assim como foi observado o maior aumento dos osteoclastos presentes no local da lesão dos animais Nlrp12-/-, estes também se mostraram com maior atividade gelatinolítica de MMP-9 e MMP-2 em relação ao seu controle, diferente dos animais WT que não apresentaram diferença entre os grupos controle e com lesão. Ainda nesse período, foi observado nas amostras de linfonodos cervicais que, no grupo Nlrp12-/- houve uma tendência à maior expressão de RORγt, seguidos de menor expressão de T-bet quando comparados com o grupo WT. Aos 21 dias, os animais WT e Nlrp12-/- apresentaram lesões periapicais de tamanhos semelhantes. Além disso, somente o grupo Nlrp12-/- com lesão apresentou um aumento significativo da expressão de Trap em relação ao seu controle e a expressão de Catepsina K foi semelhante em ambos os grupos. Neste período houve um aumento na quantidade de células TRAP positivas em ambos os grupos com lesão quando comparados com seus respectivos controles, entretanto também não houve diferença entre os animais WT e Nlrp12-/-. A atividade de MMP-9 e MMP-2 foram semelhantes entre os animais WT e Nlrp12-/- e entre seus respectivos controles aos 21 dias. Nossos dados sugerem que a deficiência de NLRP12 levou a uma maior perda óssea aos 14 dias de lesão periapical e que isso ocorre via modulação da formação e atividade dos osteoclastos. Portanto, o NLRP12 inibe a osteoclastogênese e a atividade dos osteoclastos durante a fase inicial da lesão periapical, retardando o desenvolvimento da doença. / NLRP12 is an intracellular sensor that recongnizes PAMPS and DAMPs during infeccion. It was seen that NLRP12 transcription is down-regulated during osteoclastogenesis, and NLRP12 protect bone via suppression of alternative NF-κB-induced osteoclastogenesis. It has been shown that NLRP12 deficiency in monocytes under RANKL stimuli exhibited more stabilization of NIK and nuclear translocation of RelB, increasing osteoclasts formation in vitro. Therefore, the aim of this study was to evaluate the role of NLRP12 in the development and progression of experimentally induced periapical lesions in mice. Periapical lesions were induced in first molars of WT and NLRP12 knockout (KO) mice. Samples were collected at 14 and 21 days of the lesion for the analyses. Jaw samples with lesion and control area were subjected to periapical lesions area determination by histological sections; osteoclastogenic markers expression by q-PCR; count of osteoclasts submitted to the enzyme assay for TRAP; evaluation of MMPs activity by Zymography. The expression of T cells markers´ transcription factors was evaluated in lymph nodes by q-PCR. Fourteen days after periapical lesion induction, histological analysis revealed that NLRP12KO mice exhibited higher area of periapical lesion compared to WT group, which was associated with up-regulated mRNA expression of Trap, Cathepsin K and MMP-9 in the jaw samples. Moreover, the number of multinuclear TRAP-stained cells was significantly higher in the NLRP12KO with lesion group when compared to it control, whereas in the WT the number between the lesion and control groups were similar. Still, NLRP12KO showed higher MMP-9 and -2 gelatinolytic activity than it control, unlike WT mice that showed no difference between control and lesion group. In this period, NLRP12KO mice lymph nodes showed more RORγt expression than WT mice and less T-bet expression. At 21 days, WT and NLRP12KO presented periapical lesions of similar sizes. In addition, NLRP12KO group with lesion showed a significant increase in Trap expression when compared with their control, but the increase in Trap e Cathepsin K was similar in both groups. Additionally, there was an increase of multinuclear TRAP-stained cells in both lesion groups when compared with their respective controls; however, there was also no difference between WT and NLRP12KO mice. MMP-9 and -2 activity was similar between WT and NLRP12KO and with their respective controls at 21 days. Our results suggest that NLRP12 deficiency led to increased bone loss at 14 days of periapical lesion and it occurs due to increased osteoclasts formation and activity. Therefore, NLRP12 inhibits osteoclastogenesis and osteoclasts activity during the early stages of periapical lesion, slowing the development of the disease.

Avaliar in vivo o efeito da Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (aPDT), após tratamento endodôntico em sessão única, em dentes de cães com lesão periapical, em comparação ao tratamento em duas sessões com o uso de curativo de demora à base de hidróxido de cálcio. Material e Métodos: Após a indução experimental da lesão periapical e instrumentação dos canais radiculares, 48 dentes foram distribuídos nos seguintes grupos: I e III Uso de curativo de demora com pasta à base de hidróxido de cálcio (Calen®); e II e IV -Tratamento em uma única sessão com utilização da aPDT. Os canais radiculares foram obturados e decorridos os períodos experimentais de 120 dias (Grupos I e II) e 180 dias (Grupos III e IV), os animais foram submetidos à eutanásia. Após processamento histotécnico, análise microscópica descritiva/semi-quantitativa, avaliação morfométrica do tamanho da lesão periapical em microscopia de fluorescência e análise radiográfica foram realizadas. Foram utilizados os testes de Kruskal Wallis e exato de Fisher (=0,05). Resultados: Na análise microscópica descritiva, os grupos I e III apresentaram áreas cementárias reparadas, com numerosos feixes colágenos no ligamento periodontal e presença suave de células inflamatórias. Nos grupos II e IV as áreas de reabsorção cementária não estavam reparadas, com reduzida presença de células e fibras e presença de células inflamatórias. Na análise semi-quantitativa do selamento biológico apical houve diferença significante (p<0,0001) entre os grupos I e II; e entre os grupos III e IV (p<0,0001). A análise em microscopia de fluorescência evidenciou diferença significante entre os grupos, após 120 dias (p=0,0004) e após 180 dias (p=0,0081), sendo que os grupos I e III apresentaram lesões periapicais menores. A porcentagem de redução radiográfica das lesões evidenciou diferença significante entre os grupos (p<0,05), com maior porcentagem de redução para os grupos I e III. Com relação à análise imunohistoquímica, nos grupos I, II e IV, as marcações para RANK, RANKL e OPG indicaram sinalização pró-reabsortiva, embora a marcação para RANKL no grupo I tenha sido pouco intensa. Já no grupo III, as marcações evidenciaram ocorrência de neoformação óssea. Conclusão: O tratamento em duas sessões com o uso de curativo de demora à base de hidróxido de cálcio promoveu maior redução no tamanho das lesões periapicais e estágio mais avançado de reparo, evidenciado pelos melhores resultados histopatológicos, imunohistoquímicos e radiográficos, em comparação ao tratamento em uma única sessão com utilização do protocolo de aPDT avaliado. / To evaluate one-session endodontic treatment with aPDT and two-session treatment with calcium-hydroxide (CH)-based dressing in dog\'s teeth with apical periodontitis. Methods: After experimental induction of apical periodontitis, 48 teeth were randomly assigned to the following groups: Group I (one-session treatment with aPDT 120 days); Group II (one-session treatment with aPDT 180 days); Group III (two-session treatment with CH-based dressing -120 days) and Group IV (two-session treatment with CH-based dressing -180 days). The animals were euthanized after 120 and 180 days. After histotechnical processing, microscopic and radiographic analyses were performed. Data were analyzed by Kruskal-Wallis and Fishers exact tests (=0.05). Results: In the microscopical analysis, Groups I and III presented repaired cemental areas, with various colagen bundles in the periodontal ligament and mild presence of inflamatory cells. In the groups III and IV the present resorbed cemental areas were not repired, with reduced number of cells and fibers and the presence of inflamatory cells. The semi-quantitative analysis of the apical clousure, there was a significant difference (p<0.0001) between groups I and II; and between groups III and IV (p<0.0001). In the fluorescence microscopy analysis, there was a significant difference between groups, aftter 120 days (p=0.0004) and after 180 days (p=0.0081). The groups I and III presented smaller periapical lesions. The percentage of radiographic reduction of lesions demonstrated a significant difference between groups (p<0.05) with a higher reducton in group I and II. Regarding the immunohistochemistry analysis, in the groups I, II and IV, RANK, RANKL and OPG staining indicated pro-resorption signaling; although the RANKL immunostaining in the group I were not intense. In the group III, the immunostaining demonstrated the occurrence of bone neoformation. Conclusion: Two-session treatment with CH based promoted more reduction in the periapical lesion size and more repair advanced stage, highlighting better histopathological, immunostaining and radiographic results in comparison with one-session treatment with aPDT protocol used.

O objetivo deste estudo foi avaliar a morfologia da superfície externa de ápices radiculares de dentes decíduos de humanos com necrose pulpar, com e sem lesão periapical visível radiograficamente, e de dentes com vitalidade pulpar, por meio da microscopia eletrônica de varredura (MEV). Dezenove dentes foram extraídos sendo cinco dentes com vitalidade pulpar (Grupo I), seis com necrose pulpar sem lesão periapical (Grupo II) e oito com necrose pulpar e lesão periapical (Grupo III). Os dentes (incisivos e molares) foram lavados com solução salina e imersos em solução de tripsina 0,03g/mL por 20 minutos. Decorrido esse período, os dentes foram lavados com solução tampão de cacodilato de sódio 0,1M e armazenados em solução de Karnovsky modificada. Após 5 dias, os ápices radiculares foram seccionados, desidratados em série crescente de etanol, submetidos à secagem pelo método do ponto crítico com dióxido de carbono, fixados em \"stubs\" e metalizados com ouro puro para análise em MEV. A superfície do ápice radicular foi avaliada com relação à presença de fibras e áreas de reabsorção dentinária e cementária. Na superfície radicular apical dos dentes com vitalidade pulpar e com necrose pulpar sem lesão periapical foi observada a presença de fibras e ausência de reabsorção em todos os casos (100%). Por outro lado, todos os espécimes (100%) com necrose pulpar e presença de lesão periapical apresentaram ausência total de fibras e áreas de reabsorção cementária. Áreas de reabsorção dentinária foram observadas em 2 espécimes. Os resultados obtidos demonstraram a presença de diferenças morfológicas na região apical de dentes decíduos com diferentes graus de patologia pulpar e periapical. A presença de áreas de reabsorção cementária e ausência de fibras nos dentes decíduos com lesão periapical indicam a necessidade da aplicação de medidas terapêuticas específicas. / The objective of this study was to evaluate, by scanning electron microscopy (SEM), the morphology of the outer surface of root apexes of human primary teeth with pulp vitality and teeth with pulp necrosis, with and without radiographically visible periapical lesion. Nineteen teeth were extracted, being five teeth with pulp vitality (Group I), six with pulp necrosis without periapical lesion (Group II) and eight with pulp necrosis and periapical lesion (Group III). The teeth (incisors and molars) were washed in saline and immersed in 0.03 g/mL trypsin solution during 20 minutes. After this period, the teeth were washed in 0.1 M sodium cacodylate buffer solution and stored in modified Karnovsky\'s solution. After 5 days, the root apexes were sectioned, dehydrated in an ascending ethanol series, critical-point dried with CO2, mounted on stubs, and sputter-coated with gold for SEM analysis. The root apex surface was examined with respect to the presence of fibers and areas of dentinal and cemental resorption. In the apical root surface of the teeth with pulp vitality and teeth with pulp necrosis without periapical lesion presence of fibers and absence of resorption were observed in all cases (100%). On the other hand, all specimens (100%) with pulp necrosis and periapical lesion showed total absence of fibers and areas of cemental resorption. The results of this study demonstrated the existence of morphological differences in the apical region of primary teeth with different degrees of pulpal and periapical pathology. The presence of areas of cemental resorption and absence of fibers in the primary teeth with periapical lesion indicate the need for application of specific therapeutic measures.

A lesão periapical de origem endodôntica é consequência de necrose pulpar causada pela presença de microorganismos no interior do sistema de canais radiculares. Essa lesão é geralmente crônica e assintomática e, portanto, os exames de imagem são importantes para sua detecção. A tomografia computadorizada de feixe cônico (TCFC) é uma tecnologia avançada, de grande utilidade para a avaliação de lesões periapicais e suas características. O objetivo deste trabalho foi determinar a prevalência de lesões periapicais no complexo maxilo-mandibular detectadas em imagens de TCFC e classificar as lesões encontradas, de acordo com os seguintes critérios: idade e gênero do paciente; indicação do exame de TCFC; localização e extensão da lesão; grau de comprometimento de cortical óssea e condição do dente associado. Para isso, foram interpretadas imagens de 300 pacientes obtidas em tomógrafo i-CAT Classic da FOB-USP e de um centro radiológico. Em uma primeira etapa, os exames foram selecionados de acordo com os critérios de inclusão (pacientes &#x2265; 12 anos de idade; arcos dentários com pelo menos 1 dente não-retido e protocolos de escaneamento dos exames de FOVs de 6, 8 ou 13cm e tamanhos de voxel de 0,25 ou 0,3) e analisados no software i-CAT Vision. Os dados do paciente como idade e gênero foram anotados, bem como o motivo para realização do exame. Procedeu-se a avaliação individual de cada dente por meio de cortes parassagitais ao arco, anotando a quantidade total de dentes e destacando os que apresentaram lesão periapical para posterior análise. Na segunda etapa do estudo, 2 examinadores, sendo uma radiologista e um endodontista avaliaram apenas os exames nos quais foram detectadas lesões periapicais. Cada lesão foi vista em 3 planos (sagital, axial e coronal) e medidas do maior diâmetro no corte mais expressivo foram feitas, usando ferramenta do software. Localização da lesão, comprometimento de cortical e condição do dente relacionado também foram anotados nessa etapa. Como resultado, obteve-se que 51,40% do total de pacientes cujo exame de TCFC permitia observar apenas 1 arco com lesão ou ambos os arcos dentários (n=214) apresentaram lesão periapical. Do total de 5.585 dentes avaliados de 300 pacientes, 192 apresentaram lesão (3,44%). Em relação à idade dos pacientes com lesão, o grupo de 60-69 anos apresentou maior prevalência (73,07%) e o grupo de 12-19 anos apresentou menor prevalência (15%). Em relação a gênero, a prevalência foi similar entre homens e mulheres, sendo a diferença estatisticamente não-significativa. Os exames solicitados como complementação de avaliação endodôntica apresentaram maior prevalência de lesão. A localização mais frequente de lesões periapicais foi em molares inferiores (5,91%) e a menos frequente em incisivos e caninos inferiores (0,63%). As lesões com dimensão entre 4-8mm de diâmetro foram as mais frequentemente encontradas (30,72%, kappa intra=0,87, kappa inter=0,79). A maioria das lesões não apresentou comprometimento de cortical óssea (76,28%, kappa intra=0,97, kappa inter=0,96). Dentes com tratamento endodôntico inadequado apresentaram maior quantidade de lesões (78,18%, kappa intra=0,95, kappa inter=0,85). A partir da análise da amostra estudada, concluiu-se, portanto, que lesões periapicais são frequentemente encontradas em exames de TCFC com diferentes prescrições e que a presença de lesões periapicais tem associação significativa entre idade do paciente, tipo e condição do dente relacionado. / Periapical lesion of endodontic origin is a consequence of the pulp necrosis caused by the presence of microorganisms within the root canal system. This lesion is usually chronic and asymptomatic and, therefore, the image examinations are important for its detection. Cone beam computed tomography (CBCT) is an advanced new technology, which can be very useful for the assessment of periapical lesions and their features. The aim of this study was to determine the prevalence of periapical lesions in jaws detected in CBCT images, as well as to classify the found lesions into the following criteria: patients age and gender; purpose of the CBCT scan; location and size of the lesion, as well as cortical bone and related tooth condition. The images of 300 patients who underwent a Classic i-CAT CBCT scan in Bauru Dental School (FOB-USP) and in a private radiologic office were assessed. The first part of the study involved the selection of the exams according to the inclusion criteria (patients &#x2265; 12 years old; maxilla/ mandible with at least 1 present tooth and scanning protocols using 6, 8 or 13 cm FOV and 0.25 or 0.3 voxel) using i-CAT Vision software. Data about patients age and gender were recorded, as well as the reason for the CBCT scan. Each tooth has been individually assessed in transversal slices. The total amount of teeth in each jaw and the presence or absence of periapical lesion have been recorded. In the second part of the study, 2 examiners (Dental Radiology and Endodontics experts) assessed the examinations in which periapical lesions have been detected. Each lesion has been evaluated in 3 dimensions (sagittal, axial and coronal) and the measurement was performed using specific tool of the software in the largest diameter (mm) in the most representative slice. The lesion location, cortical bone condition and related tooth condition were also recorded. Periapical lesion was found in 51.40% of the patients who presented CBCT images of a single jaw with lesion or both jaws (n=214). From the total amount of 5585 evaluated teeth of 300 patients, 192 presented lesion (3.44%). Concerning patients age, the 60-69 years old group presented the higher prevalence (73.07%) and the 12-19 years old group presented the lower prevalence (15%). As far as gender is concerned, the prevalence has been similar between men and women and the difference was not statistically significant. The scans performed in order to complement endodontic assessment presented the higher prevalence of periapical lesion. The most frequent location of the lesions was mandibular molars (5.91%) and the less frequent was mandibular incisors and canines (0.63%). The lesions with 4-8mm size were the most frequently found (30.72%, intra kappa=0.87, inter kappa=0.79). The most part of the lesions has not presented cortical bone changes (76.28%, intra kappa=0.97, inter kappa=0.96). The higher prevalence of lesion has been found in teeth with inadequate endodontic treatment (78.18%, intra kappa=0.95, inter kappa=0.85). It is possible to conclude that periapical lesions may be frequently found in CBCT examinations of different purposes and that the presence of periapical lesions has significant association with patients age and tooths type and condition.

O objetivo deste trabalho foi avaliar, por meio de microscopia eletrônica de varredura (MEV), a presença de microrganismos sob a forma de biofilme na região do ápice radicular de dentes decíduos de humanos, com diferentes graus de patologia pulpar e periapical. Dezoito dentes foram selecionados em três situações clínicas específicas: dentes decíduos portadores de vitalidade pulpar (Grupo I), portadores de necrose pulpar sem lesão periapical visível radiograficamente (Grupo II) e portadores de necrose pulpar e nítida lesão periapical visível radiograficamente (Grupo III). Após exodontia, os dentes foram lavados com solução salina e imersos em solução de tripsina a 0,03 g/mL por 20 minutos. A seguir, foram lavados com solução tampão de cacodilato de sódio a 0,1M e armazenados em solução de Karnowsky modificada. Após cinco dias, os dentes foram seccionados e desidratados em soluções crescentes de etanol e submetidos à secagem no ponto crítico, fixados em \"stubs\" e metalizados para análise em MEV. Nos dentes do Grupo I e II, a superfície radicular estava recoberta por fibras colágenas, sem a presença de bactérias, em 100% das amostras. Nos dentes portadores de necrose pulpar e nítida lesão periapical visível radiograficamente (Grupo III), o ápice radicular apresentava ausência de fibras e presença de áreas de reabsorção com microrganismos em seu interior, representados predominantemente por cocos e bacilos, porém filamentosos e espiroquetas também foram observados, em 100% dos casos. Assim, observou-se que houve a presença de microrganismos sob a forma de biofime apical na região do ápice radicular apenas nos dentes decíduos portadores de necrose pulpar e nítida lesão periapical visível radiograficamente. / The purpose of this study was to evaluate, by scanning electron microscopy (SEM), the presence of microorganisms organized as biofilms in the apical root third of vital and nonvital human primary teeth. Eighteen teeth were selected in three clinical situations: Group I - pulp vitality, Group II - pulp necrosis without periapical lesion and Group III - pulp necrosis with well defined radiographically visible periapical lesion. After extraction, the teeth were washed with saline and immersed in 0.03 g/mL trypsin solution during 20 minutes. Next, the teeth were washed in 0,1M sodium cacodilate buffer and stored in receptacles containing modified Karnovsky solution. After 5 days, the teeth were sectioned, dehydrated in an ethanol series, critical-point dried with CO2, sputter-coated with gold and examined by SEM. The results showed that in the teeth of Groups I and II, the root surface was covered by collagen fibers, without the presence of bacteria in all specimens (100%). In the teeth with pulp necrosis with well defined radiographically visible periapical lesion (Group III), the root apex showed no collagen fibers and presence of resorption areas containing microorganisms (cocci, bacilli, filaments and spirochetes) in all cases (100%). The presence of microorganisms organized as biofilms was detected only in the primary teeth with pulp necrosis and radiographically visible periapical lesion.

A molécula adaptadora myeloid differentiation primary response gene 88 (MyD88) está envolvida na ativação de receptores Toll-like (TLRs), os quais são responsáveis pelo reconhecimento precoce pelas células do hospedeiro de patógenos invasores e pelo desencadeamento da resposta imunológica. O objetivo do presente estudo foi caracterizar o desenvolvimento e a progressão de lesões periapicais induzidas experimentalmente em dentes de camundongos knockout (KO) para a molécula MyD88 (MyD88 KO), comparados a animais wild-type (WT). Lesões periapicais foram induzidas nos primeiros molares inferiores de 30 camundongos WT e de 30 camundongos MyD88 KO. Decorridos 7, 21 e 42 dias, os animais foram submetidos à eutanásia em câmara de CO2 e as mandíbulas foram removidas e submetidas ao processamento histotécnico. A seguir, cortes representativos foram corados com hematoxilina e eosina (HE), para descrição das características do canal radicular e das regiões apical e periapical e para contagem do número de células inflamatórias (neutrófilos), em microscopia de luz, e para mensuração da área das lesões periapicais, em microscopia de fluorescência. Espécimes sequenciais foram analisados por meio de: histoenzimologia para a atividade da TRAP, para contagem de osteoclastos; coloração de Brown & Brenn, para localização de bactérias; e imunohistoquímica, para identificação de marcadores da osteoclastogênese (RANK, RANKL e OPG). Os dados foram submetidos à análise estatística por meio dos testes não-paramétricos de Mann-Whitney, Kruskal-Wallis e pós-teste de Dunn, utilizando o programa SPSS (Statistical Package for the Social Sciences) versão 17.O, com nível de significância de 5%. As demais análises foram expressas de maneira qualitativa. Com relação à extensão das lesões periapicais, o grupo MyD88 KO apresentou valores significantemente maiores do que o grupo WT nos períodos de 7 (p=0,001) e 21 dias (p=0,05), sendo que após 42 dias foi observada tendência de maiores valores, porém sem diferença significante (p=0,09). Foi observada maior quantidade de neutrófilos no grupo MyD88 KO, em comparação aos animais WT (p=0,01 em 7 dias; p=0,004 em 21 dias; e p<0,001 em 42 dias). Por outro lado, com relação à quantidade de osteoclastos, não foi observada diferença significante entre ambos os grupos, em todos os períodos experimentais (p=0,884 em 7 dias; p=0,506 em 21 dias; e p=0,211 em 42 dias). A análise microscópica descritiva do grupo MyD88 KO revelou um infiltrado inflamatório mais intenso, com presença abundante de células porlimorfonucleadas e mononucleadas e com grande destruição tecidual, após 7, 21 e 42 dias. A coloração de Brown e Brenn evidenciou uma maior disseminação bacteriana, inclusive nos tecidos periapicais, no grupo MyD88 KO, quando comparado aos animais WT. Com relação à imunohistoquímica, foram observadas marcações para RANK, RANKL e OPG de forma semelhante entre os dois grupos de animais. Com base nas metodologias e nos resultados obtidos no presente estudo pode-se concluir que na ausência da MyD88 os animais apresentaram lesões periapicais mais extensas, com um infiltrado inflamatório severo e com número significantemente maior de neutrófilos, quando comparados aos animais WT, sugerindo o importante papel desta molécula na resposta imune e inflamatória no combate à infecção de origem endodôntica. / The adaptor molecule myeloid differentiation primary response gene 88 (MyD88) is involved in the activation of toll-like receptors (TLRs), which are responsible for the early recognition by the host cells of invading pathogens and for triggering the immune response. The aim of the present study was to characterize the formation and progression of experimentally induced periapical lesions in teeth of MyD88 knockout (MyD88 KO) mice compared with wildtype (WT) mice. Periapical lesions were induced in the mandibular first molars of 30 WT and 30 MyD88 KO mice. After 7, 21 and 42 days, the animals were euthanized in a CO2 chamber and the mandibles were removed and subjected to histotechnical processing. Representative histological sections were stained with hematoxylin and eosin (HE) for description of the features of the root canal and the apical and periapical regions, and for counting of inflammatory cells (neutrophils) under conventional light microscopy and for determination of the size of the periapical lesions under fluorescence microscopy. Sequential specimens were evaluated by: TRAP histoenzymology, for osteoclast counting; Brown & Brenn staining, for localization of bacteria; and immunohistochemistry for identification of osteoclastogenesis markers (RANK, RANKL, OPG). Data were subjected to statistical analysis by the nonparametric Mann-Whitney and Kruskal-Wallis tests and the Dunn post-test, using the SPSS (Statistical Package for the Social Sciences) software, version 17.0. The significance level was set at 5%. The other analyzes were displayed qualitatively. Regarding the periapical lesion size, the MyD88 KO group presented significantly higher values than the WT group in the periods of 7 (p=0.001) and 21 days (p=0.05). Tendency for higher values was observed after 42 days, though without significant difference (p=0.09). A larger number of neutrophils in the MyD88 KO group were observed compared with the WT animals (p=0.01 at 7 days, p=0.004 at 21 days and p<0.001 at 42 days). On the other hand, regarding the number of osteoclasts, no statistically significant difference was observed between the groups at any of the experimental periods (p=0.884 at 7 days, p=0.506 at 21 days and p=0.211 at 42 days). Descriptive microscopic analysis of the MyD88 KO group revealed a more intense inflammatory infiltrate, with abundant presence of polymorphonuclear and mononuclear cells and wide tissue destruction, after 7, 21 and 42 days. Brown & Brenn staining showed an increased bacterial dissemination, including the periapical tissues in the MyD88 KO group, when compared with the WT animals. As for immunohistochemistry, RANK, RANKL and OPG immunostainings were similar between the two groups of animals. Based on the employed methodology and the obtained results, it may be concluded that in the absence of MyD88, the animals showed larger periapical lesions, with a severe inflammatory infiltrate and a significantly larger number of neutrophils, when compared with WT animals, suggesting the important role of this molecule during the immune and inflammatory response against infections of endodontic origin.

Resumo Introdução: Estudos epidemiológicos reportam elevada prevalência de lesão periapical em diferentes países, concluindo que esta constitui um problema de saúde que afeta grande parte da população. Proposição: O objetivo deste estudo clínico randomizado foi efetuar uma avaliação comparativa pós-tratamento endodôntico de dentes permanentes com lesão periapical crônica, realizado em sessão única ou em duas sessões com o uso de hidróxido de cálcio, por 14 dias, como curativo de demora entre sessões, por meio de exames de Tomografia Computadorizada de Feixe Cônico (TCFC). Metodologia: Foram selecionados 26 dentes pareados de 13 pacientes atendidos na clínica de Endodontia da Universidade Ceuma (UniCeuma), de São Luís - MA, os quais foram divididos randomicamente em dois grupos (n=13/grupo) empregando a técnica de amostragem casual simples (sorteio). No Grupo I os dentes foram instrumentados e obturados na mesma sessão, enquanto no Grupo II, após a instrumentação, foi utilizado curativo de demora entre sessões com a pasta Calen®, por 14 dias, quando então foi efetuada a obturação dos canais radiculares. As imagens de TCFCs foram obtidas em dois momentos distintos: (1) antes do tratamento; e (2) após doze meses do tratamento. O volume das lesões foi obtido pré e pós-tratamento endodôntico, em mm&sup3;, e foi calculada a porcentagem de redução volumétrica das lesões periapicais para cada grupo. A redução volumétrica dos dentes dos Grupos I e II foram comparadas por meio do teste t de Student para amostras pareadas. Foi avaliado também se havia diferença estatisticamente significante na frequência de casos com redução volumétrica maior que 50% entre os Grupos (&alpha;&sup2; likelihood ratio). Os testes foram realizados empregando o programa estatístico SPSS 19.0, com nível de significância de 5%. Resultados: Os volumes tomográficos médios iniciais e finais das lesões periapicais dos Grupos I e II foram, respectivamente, GI - 73,47 mm&sup3;; 27,73 mm&sup3; e GII - 65,94 mm&sup3;; 12,84 mm&sup3;. A redução percentual média das lesões periapicais foi maior para o Grupo II (79,25%), em comparação ao Grupo I (68,35%), embora sem apresentar diferença significante (p>0,05). Não foi observado reparo completo, após 12 meses, em nenhum caso, em ambos os grupos. Observou-se redução superior a 50% em todos os dentes do Grupo II, enquanto que apenas 69,2% dos dentes do Grupo I atingiram esse percentual, evidenciando que a redução volumétrica da lesão periapical superior a 50% foi maior com o uso do curativo de demora entre sessões (p<0,05). Conclusão: A avaliação pelo método da TCFC, no período de 12 meses, não evidenciou reparação completa em nenhum dos casos tratados em sessão única ou com o uso de curativo de demora entre em sessões, demonstrando que esse período de acompanhamento não é suficiente para a regressão total da lesão periapical. Em ambos os grupos foi observada redução volumétrica das lesões periapicais semelhante após 12 meses, sendo que foi evidenciado reparo mais avançado (mais de 50% de redução volumétrica), no grupo onde foi utilizado curativo de demora entre sessões à base de hidróxido de cálcio por 14 dias, fornecendo subsídios para sua indicação do ponto de vista clínico, em dentes portadores de lesão periapical crônica, previamente à obturação dos canais radiculares. / Abstract Introduction: Epidemiological studies have demonstrated a high prevalence of periapical lesion in different countries, stating that it is a health problem that affects great part of the world population. Aim: The aim of this randomized clinical study was to conduct a comparative evaluation after endodontic treatment of permanent teeth with chronic periapical lesion completed in a single session or in two sessions with 14-day calcium hydroxide interappointment intracanal medication, using cone beam computed tomography (CBCT). Methodology: Twenty-six pairs of teeth from 13 patients treated at the Endodontics Clinic of Ceuma University (UniCeuma), São Luís, MA, Brazil, were selected and randomly assigned to two groups (n=13/group) by simple random sampling (draw). In Group I, the teeth were instrumented and filled in the same session, while in Group II, after instrumentation, an intracanal medication (Calen® paste) was used for 14 days between sessions, and then the root canals were filled. CBCT scans were obtained at two moments: (1) before endodontic treatment; and (2) 12 months after treatment. The pre- and postoperative volume of the periapical lesions was measured in mm&sup3;, and the percentage of lesion volume reduction was calculated for each group. Periapical lesion volume reduction in Groups I and II were compared using Students t-test for paired samples. The existence of statistically significant difference in the frequency of cases with >50% lesion volume reduction between the groups (&alpha;&sup2; likelihood ratio) was also assessed. SPSS 19.0 statistical software was used and a significance level of 5% was set for analyses. Results: The mean pre- and postoperative tomographic volumes of the periapical lesions were, respectively: GI: 73.47 mm&sup3;; 27.73 mm&sup3; and GII 65.94 mm&sup3;; 12.84 mm&sup3;. The mean percentage of volume reduction of the periapical lesions was greater in Group II (79.25%) than Group I (68.35%), though without statistically significant difference (p>0.05). After 12 months, complete repair was not observed in ay specimen of neither of the groups. Volume reduction >50% was observed in all teeth of Group II, while only 69.2% of Group Is teeth presented such reduction, indicating that lesion volume reduction >50% was significantly greater with the use of an interappointment intracanal medication (p<0.05). Conclusion: CBCT imaging 12 months post-endodontic treatment did not show complete repair in any of the teeth treated in a single session or medicated with an intracanal dressing between sessions, suggesting that this follow-up period is not sufficient for complete lesion regression. In both groups, similar periapical lesion volume reduction was observed after 12 months, with a more advanced repair (>50% volume reduction) in the group in which a calcium hydroxide interappointment intracanal medication was used, providing clinical evidence to indicate its use in teeth with chronic periapical lesion prior to definitive root canal filling.

A citocina IL-33 apresenta papel dual e está envolvida com a resolução ou progressão de inúmeras doenças, além disso, acredita-se que a via IL-33/ST2 esteja envolvida no equilíbrio entre a atividade de osteoclastos e osteoblastos. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel do receptor ST2 no desenvolvimento e progressão de lesões periapicais experimentalmente induzidas em camundongos. Lesões periapicais foram induzidas em primeiros molares inferiores de camundongos WT e ST2 knockout (KO). Decorridos 7 e 14 dias, as amostras de mandíbula foram submetidas às análises: determinação da área de lesão periapical em cortes histológicos e do volume por microtomografia computadorizada (&mu;CT); contagem de osteoclastos submetidos ao ensaio de histoenzimologia (TRAP); expressão gênica de marcadores osteogênicos e osteoclastogênicos por q-PCR; quantificação de neutrófilos por ensaio de mieloperoxidases. Os linfonodos foram submetidos à análise da expressão dos fatores transcricionais T-bet, GATA-3, RORc e Foxp-3 por q-PCR. Análise estatística utilizada foi One-way ANOVA, seguido de pós-teste de Bonferroni. Aos 14 dias, observou-se maior extensão da lesão periapical em animais WT que em ST2KO (p<0,05). O tamanho da lesão nos animais ST2KO permaneceu igual em função do tempo. Foi observada maior quantidade de neutrófilos na lesão do grupo WT aos 7 dias, em comparação aos animais ST2KO (p<0,05). Na expressão de T-bet, GATA-3, RORc e Foxp-3 não foram observadas diferenças estatisticamente significantes. O número de osteoclastos contados nos animais ST2KO foi maior que o observado em WT aos 7dias e aos 14 dias (p<0,05). A expressão de Runx2 foi maior no grupo lesão dos animais ST2KO quando comparado a seu respectivo controle. Os outros marcadores relacionados com a formação óssea não apresentaram diferenças estatisticamente significantes. Dentre os marcadores relacionados com a reabsorção óssea, a catepsina K e o MMP-9 apresentaram maior expressão aos 14 dias, na lesão dos animais WT quando comparada à expressão na lesão dos animais ST2KO (p<0,05). Com base nos resultados obtidos no presente estudo, pode-se concluir que na ausência do receptor ST2 as lesões periapicais são menos extensas e embora em maior quantidade, os osteoclastos são menos ativos. Nossos resultados sugerem um importante papel da via IL-33/ST2 na ativação dos osteoclastos e desenvolvimento da lesão periapical. / The IL -33 cytokine presents a dual role and is involved either in the resolution and progression of many diseases. Furthermore, it is believed that this pathway is involved between osteoclast and osteoblast activity balance. The aim of this study was to evaluate the role of ST2 receptor in the development and progression of experimentally induced periapical lesions in mice. Periapical lesions were induced in first molars of WT and ST2 knockout (KO) mice. After 7 and 14 days, jaw samples were subjected to various analysis: determination of periapical lesions area by histology and volume by computed microtomography (&mu;CT); osteoclasts number by TRAP histoenzymology; osteogenic and osteoclastogenic markers expression by q-PCR; neutrophil quantification by myeloperoxidase activity. The expression of transcription factors T-bet, GATA-3, RORC and Foxp-3 in lymph nodes were analysed by q-PCR. Statistical analysis was done by One-way ANOVA and Bonferroni post-test. It was observed a greater extent in periapical lesions of WT compared to ST2KO animals at 14 days (p<0.05). There is no progression in the lesion of ST2KO mice with the time. A larger number of neutrophils in WT group was observed, compared to ST2KO mice evaluated at 7 days (p<0.05). The expression of T-bet, GATA-3, RORc and Foxp-3 were not statistically significant different among the groups. The number of osteoclasts in lesions of ST2KO animals were greater than the observed in WT, at 7 and 14 days (p<0.05). Although, other osteogenic markers showed no statistically significant difference, Runx2 expression in ST2KO was higher in lesion side compared to control side at 14 days. The markers related to bone resorption, cathepsin K and MMP-9, were significantly abrogated in the lesion side of ST2KO mice, at 14 days (p<0.05). Based on the results, it can be concluded that although larger amounts of osteoclast were counted in ST2KO, the lesion was less extensive and osteoclasts less active. It all suggests that the IL-33/ST2 pathway play an important role in osteoclasts activation and periapical lesion development.