Made available in DSpace on 2014-06-12T23:00:31Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8528_1.pdf: 1129473 bytes, checksum: 38f9d5eb952ac83b36aa25ae08eddf4a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2003 / Esta pesquisa procurou investigar, in vitro, a capacidade antimicrobiana da radiação laser, pulsada, Nd:YAG, em microrganismos anaeróbios coletados do sistema de canais radiculares, de dente uniradicular, com necrose pulpar e lesão periapical. Dois grupos foram definidos para estudo comparativo. Grupo não irradiado e grupo experimental ou irradiado. Após 8 horas de incubação no meio líquido de cultura, tioglicolato de sódio, 4 cubetas especiais foram preenchidas, cada uma, com 300 μL desse meio inoculado. Depois de identificados, foram irradiados, individualmente, por 3½ minutos, com as respectivas potências de 1,5 W, 2,0 W, 2,5 W e 3,0 W. Em seguida, foram procedidas as diluições em água destilada esterilizada, na proporção 1:10 até a 10-6 tanto do grupo controle quanto do grupo irradiado e, disseminados, posteriormente, em placas de Petri contendo o meio sólido tioglicolato enriquecido com hemina e vitamina K. Esta seqüência, foi repetida a cada 4 horas até que fossem completadas 24 horas desde o início da coleta. Uma variante, todavia, foi introduzida na 20ª hora: o tempo de irradiação, para a potência 3 W, foi alterado para 6 minutos. Os parâmetros de irradiação utilizados foram os seguintes: a) 1,5 W, taxa de repetição: 10 Hz, tempo de pulso: 100 μs, energia de pulso: 150 μJ, área efetiva de atuação do laser: 1,1x10-2 cm2 e densidade de energia: 140 mJ/cm2; b) 2,0 W, taxa de repetição: 10 Hz, tempo de pulso: 100 μs, energia de pulso: 200 μJ, área efetiva de atuação do laser: 1,1x10-2 cm2 e densidade de energia: 180 mJ/cm2; c) 2,5 W, taxa de repetição: 10 Hz, tempo de pulso: 100 μs, energia de pulso: 250 mJ, área efetiva de atuação do laser: 1,1x10-2 cm2 e densidade de energia: 230 J/cm2; d) 3,0 W, taxa de repetição: 10 Hz, tempo de pulso: 100 μs, energia de pulso: 300 μJ, área efetiva de atuação do laser: 1,1x10-2 cm2 e densidade de energia: 280 mJ/cm2. Os resultados demonstraram que um decréscimo microbiano expressivo ocorreu na 20ª hora, com a potência de 3,0 W por 6 minutos de irradiação: 1,60 log10 UFC/mL (Unidade Formadora de Colônia por mililitro) e que na 16ª hora, nenhuma das potências empregadas conseguiu reduzir a população de anaeróbios, momento caracterizado pelo maior crescimento bacteriano: 1,47 log10 UFC/mL. Concluindo: há uma distância experimental a ser percorrida, antes que se possa falar em esterilização de canais radiculares, utilizando-se o laser pulsado de Nd:YAG

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-09-05T15:57:33Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_ODONTO_Simone Cristina Leal Tosta dos Santos.pdf: 2724182 bytes, checksum: 314ec82f253ba8d7f6d48c7b80fffee2 (MD5) / Approved for entry into archive by Delba Rosa (delba@ufba.br) on 2016-10-06T12:32:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_ODONTO_Simone Cristina Leal Tosta dos Santos.pdf: 2724182 bytes, checksum: 314ec82f253ba8d7f6d48c7b80fffee2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-06T12:32:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_ODONTO_Simone Cristina Leal Tosta dos Santos.pdf: 2724182 bytes, checksum: 314ec82f253ba8d7f6d48c7b80fffee2 (MD5) / CAPES;CNPQ / As lesões periapicais crônicas (LPCs) são consideradas patologias frequentes na cavidade bucal, resultantes de cárie dentária, fratura dentária, iatrogenia ou outras circunstâncias que levem a contaminação pulpar. A expansão das LPCs está associada à participação de células inflamatórias, que liberam fatores estimuladores da atividade osteolítica, como RANK (receptor ativador do fator nuclear kB) e seu ligante RANKL, bem como inibidores como OPG ( osteroprogerina) e outras citocinas inflamatórias, como TNFα ( tumor de necrose tumoral alfa), IL33 (Interleucina 33) e Catepsina K (Catps K). A proposta deste trabalho foi investigar a participação de fatores estimuladores (RANKL, TNFα, IL33 e Catpsk K) e inibidor (OPG) da osteoclastogênese, como como a relação entres eles, no desenvolvimento e evolução do Cisto Radicular(CR) e Granuloma Perioapical (GP). Foram utilizados 30 CRs e 22 GPs, dos quais, cortes parafinados foram submetidos à imunoistoquímica pela técnica da imunoperoxidade. As proteínas estudadas mostraram imunoexpressão tanto no epitélio e cápsula dos CRs, quanto no tecido conjuntivo dos GPs. Nos CRs houve diferença na expressão dos fatores osteoclastogênicos estudados (p=0,000), sendo a menor positividade obtida pela OPG. Para os GPs, diferença estatisticamente significativa na imunoexpressão, também foi observada (p=0,000) e o RANKL mostrou a menor positividade. Ao comparar a expressão imunoistoquímica de todas as proteínas entre CRs e GPs, somente a OPG apresentou diferença estatisticamente significativa (p=0,000). Não foi observada correlação estatisticamente significativa da expressão imunoistoquímica das proteínas estudas com os parâmetros clinicomorfológicos: tamanho da lesão periapical e intensidade do infiltrado inflamatório (p >0,05). O RANKL, TNFα, IL33 e Catps K participam do desenvolvimento e reabsorção óssea dos CRs e GPs. A OPG teve participação distinta, sendo mais evidente nos GPs, implicando em menor crescimento quando comparado aos CRs.

Fatores microbianos, mecânicos e intrínsecos ao hospedeiro são os responsáveis pelo insucesso endodôntico e necessidade de reintervenção. Polimorfismos genéticos são diferenças na sequência do DNA humano que influenciam na susceptibilidade do organismo frente a doenças e nas suas respostas ao meio ambiente. O objetivo do presente estudo foi investigar o envolvimento de aspectos moleculares e clínicos na resposta do hospedeiro frente ao tratamento endodôntico, por meio da análise da expressão e frequência de polimorfismos dos genes reguladores do processo de remodelação óssea em pacientes submetidos ao tratamento endodôntico. Pacientes que apresentaram necrose pulpar e lesão periapical instalada no momento do tratamento endodôntico foram chamados para consulta de acompanhamento. Foram incluídos no presente estudo 150 pacientes, que apresentaram tratamento concluído há no mínimo um ano antes da consulta de acompanhamento. Desse total, 64 pacientes apresentaram sinais e sintomas clínicos/radiográficos indicativos de lesões periapicais persistentes, e 86 indivíduos apresentaram reparação da lesão. No momento do acompanhamento, foram coletas amostras de saliva dos pacientes como fonte de DNA genômico, o qual foi extraído a partir do pellet de células sedimentado e genotipado para RANK (rs3826620), RANKL (rs9594738) e OPG (rs2073618) por PCR em tempo real. A frequência dos genótipos e alelos foi avaliada por meio da razão de chance (odds ratio), teste do qui-quadrado ou teste exato de Fisher, utilizando os softwares Epi Info 3.5.2 e Graphpad Prism. O tempo de acompanhamento após o tratamento foi utilizado como covariável na análise de regressão logística múltipla para cada um dos polimorfismos. O nível de significância estabelecido foi de 5%. Foi observada associação na distribuição dos alelos do polimorfismo em RANK entre os grupos (p=0,04). No polimorfismo em RANKL, a distribuição dos genótipos apresentou diferença estatisticamente significante entre os grupos (p=0,05). O tempo de acompanhamento esteve associado aos casos de lesões periapicais persistentes para cada um dos polimorfismos analisados (p<0,05), sendo que na análise ajustada pelo tempo como covariável, os polimorfismos rs3826620 em RANK (p=0.02) e rs9594738 em RANKL (p=0.03) continuaram associados a lesões periapicais persistentes. O polimorfismo rs2073618 em OPG não foi associado a distribuição dos grupos em nenhuma das análises (p>0,05). Conclui-se que polimorfismos em RANK e RANKL estão associados ao risco do desenvolvimento de lesões periapicais persistentes / Microbial, mechanical and related to host response factors are responsible for endodontic failure and requirement for reintervention. Genetic polymorphisms are differences in the sequence of human DNA that influence in the susceptibility to diseases and host response to the environment. The aim of this study was to evaluate the association between molecular and clinical aspects in the host response to root canal therapy (RCT), by analyzing the expression and frequency of polymorphisms of genes regulating the bone remodeling process in patients submitted to endodontic treatment. Patients that presented pulp necrosis and apical periodontitis at the time of RCT, with at least 1 year of follow-up after RCT were recalled. Sixty-four subjects with signs/symptoms of PAP and 86 subjects with root canaltreated teeth exhibiting healthy perirradicular tissues (healed) were included. At the time of follow-up visit, saliva samples from patients were collected as a source of genomic DNA, which was extracted from the pellet of sedimented cells and used for RANK (rs3826620), RANKL (rs9594738) and OPG (rs2073618) genotyping by real-time PCR. Genotype and allele frequencies were compared by chi-square test or Fishers exact tests and odds ratio was implemented, using Epi Info 3.5.2 and Graphpad Prism. A logistic regression analysis was also performed using time of follow-up as co-variate. All tests were performed with an established alpha of 0.05. An association between allele distribution and the polymorphism in RANK was observed. Subjects that carry the allele T had a lower risk to have PAP (p=0.04). In RANKL polymorphism, the genotype distribution was statistically significant different between PAP and healed groups (p=0.05). Time of follow-up was associated with PAP (p<0.05). In the logistic regression analysis using time as a co-variant, RANK rs3826620 (p=0.02) and RANKL rs9594738 (p=0.03) were associated with PAP. The polymorphism rs2073618 in OPG was not associated with PAP (p>0.05). We conclude that polymorphisms in RANK and RANKL are associated with the risk of developing persistent periapical lesions

Objetivo: Avaliar, in vivo, o efeito do tratamento endodôntico em sessão única utilizando a Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (aPDT) no reparo de lesões periapicais induzidas em dentes de cães, por meio da avaliação histopatológica e imunohistoquímica da angiogênese e de marcadores de formação óssea. O tratamento endodôntico em duas sessões com curativo de demora à base de hidróxido de cálcio (CH) foi utilizado como controle. Métodos: Lesões periapicais foram induzidas em 48 pré-molares superiores e inferiores de 6 cães, com 12 meses de idade. Após instrumentação dos canais radiculares, os dentes foram divididos, aleatoriamente, em 4 grupos: CH/120dias (d) e CH/180dias (d): canais radiculares preenchidos com curativo à base de CH; aPDT/120d e aPDT/180d: canais radiculares condicionados com fotossensibilizador à base de fenotiazina (10 mg/mL), por 1 minuto e irradiados com laser de diodo em toda a extensão dos canais, conforme as recomendações do fabricante. Em seguida, todos os canais radiculares foram obturados com cimento AH Plus e, após 120 ou 180 dias, os animais foram eutanasiados e os blocos contendo dentes e tecido ósseo foram submetidos ao processamento histotécnico e à coloração de hematoxilina e eosina (HE) para a análise descritiva da região periapical e mensuração das lesões periapicais, em microscopia convencional, e contagem de vasos sanguíneos sob luz convencional e no modo fluorescente. A análise imunohistoquímica foi realizada para avaliação dos marcadores da formação óssea osteopontina (OPN) e fosfatase alcalina (ALP). Os dados obtidos foram analisados estatisticamente utilizando os testes two-way ANOVA e qui-quadrado, com nível de significância de 5%. Resultados: Aos 120 dias, os dentes do grupo CH/120d apresentaram processo de reparo avançado, com ligamento periodontal apenas ligeiramente aumentado, presença abundante de fibras colágenas e escassas células inflamatórias. Os dentes do grupo aPDT/120d apresentaram o ligamento periodontal moderadamente aumentado e o infiltrado inflamatório era moderado. Poucas fibras colágenas foram observadas. Aos 180 dias, o mesmo padrão foi observado. As lesões periapicais nos grupos tratados com curativo à base de hidróxido de cálcio foram menores que as lesões nos grupos tratados com aPDT (p<0,001), e apresentaram maior número de vasos sanguíneos (p<0,0001), independentemente dos períodos de avaliação. Além disso, os dentes dos grupos tratados com pasta à base de hidróxido de cálcio apresentaram imunomarcação significativamente mais intensa para ALP e OPN (p<0,001), em ambos os períodos. Conclusões: Embora o tratamento com a aPDT tenha estimulado a angiogênese e a expressão dos marcadores da formação óssea, o tratamento endodôntico realizado em duas sessões empregando curativo à base de hidróxido de cálcio estimulou mais intensamente esses processos e promoveu melhor reparo das lesões periapicais / Aim: The aim of this study was to evaluate the in vivo effect of one-session endodontic treatment with antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) in the repair of apical periodontitis, in dogs\' teeth, by histopathologic evaluation and imunohistochemistry for angiogenesis and bone formation markers. Two-session treatment with a calcium hydroxide (CH) dressing was used as control. Methods: Apical periodontitis were induced in 48 upper and lower premolars of six 12-monthold dogs. After root canals instrumentation, teeth were randomly divided into 4 groups: CH/120days (d) and CH/180days (d): root canals filled with CH-based dressing; aPDT/120d and aPDT/180d: root canals conditioned with phenothiazinebased photosensitizer (10 mg/mL) for 1 minute and irradiated with diode laser throughout the canals and according to the manufacturer\'s recommendations. Root canals were filled with AH Plus cement, and after 120 or 180 days, the animals were euthanized and teeth were submitted to histotechnical processing and HE staining for description of the periapical region and measurement of apical periodontitis in conventional microscopy and for counting blood vessels under conventional and fluorescent microscopy. Immunohistochemical analysis was performed to evaluate the bone formation markers osteopontin (OPN) and alkaline phosphatase (ALP). Data were statistically analyzed using two-way ANOVA and chi-square test with a significance level of 5%. Results: At 120 days, teeth in Group CH/120d presented the periodontal ligament only slightly enlarged with advanced repair and abundant collagen fibers. Inflammatory cells were scarce. Teeth in group aPDT/120d presented the periodontal ligament moderately enlarged and the inflammatory infiltrate was moderate. Few collagen fibers were observed. At 180 days, the same pattern was observed. Apical periodontitis in CH-treated groups were smaller than the lesions in aPDT-treated groups (p<0.001) and had a greater number of blood vessels (p <0.0001), regardless of evaluation periods. The teeth treated with calcium hydroxide showed significantly more intense immunostaining for ALP and OPN (p<0.001), in both periods. Conclusions: Although aPDT has stimulated angiogenesis and the expression of bone formation markers, the two-session endodontic treatment with a calcium hydroxide-based dressing stimulates them more intensely and promoted better apical periodontitis repair

O objetivo desse estudo in vivo foi avaliar a intensidade de expressão de moléculas indicadoras da diferenciação celular com fenótipo mineralizador em dentes de cães com rizogênese incompleta e lesão periapical induzida experimentalmente submetidos à irrigação dos canais radiculares por pressão apical negativa (EndoVac®) e à irrigação por pressão apical positiva (irrigação convencional). Foram utilizados 30 dentes (60 raízes), divididos em 3 grupos: Grupo EndoVac® Irrigação com pressão apical negativa (n=20), Grupo Convencional Irrigação com pressão apical positiva (n=20); e Grupo Controle com Lesão Periapical (n=20). Após indução de lesões periapicais, os canais radiculares dos grupos Endovac e Convencional foram instrumentados com limas manuais, empregando o sistema de irrigação correspondente. Decorridos 90 dias, os animais foram eutanasiados e os espécimes submetidos ao processamento histotécnico. Cortes representativos de cada grupo foram corados com hematoxilina e eosina (HE), para descrição histopatológica das regiões apical e periapical. Os cortes foram submetidos à para marcação de osteopontina (OPN), fosfatase alcalina (ALP) e fator de transcrição RUNX2 nas regiões apical e periapical das raízes. Para avaliação da intensidade da expressão desses marcadores foi realizada uma análise semi-quantitativa por meio de um sistema de escores. Os dados foram analisados estatisticamente pelo teste não-paramétrico de Kruskal-Wallis e pós-teste de Dunn e o nível de significância adotado foi de 5%. Com relação à descrição histopatológica, achados distintos foram observados em cada grupo. Resumidamente, o grupo Endovac demonstrou um tecido conjuntivo bem organizado, invaginando-se para o interior do canal radicular, e exibiu um processo de reparo mais avançado, com relação aos demais grupos. A avaliação das imunomarcações para RUNX2 revelou que no grupo Endovac® houve marcação significantemente mais intensa (p=0,03), em comparação ao grupo controle. Com relação à expressão de OPN, não foi possível encontrar diferença estatisticamente significante entre os grupos (p=0,15). Após análise das imunomarcações para ALP, observou-se diferença estatisticamente significante entre os grupos (p=0,0021), sendo que o grupo Endovac® apresentou marcação significantemente mais intensa com relação ao grupo controle. Os resultados do presente estudo in vivo permitiram concluir que a irrigação por pressão apical negativa (EndoVac®) apresentou potencial mineralizador, indicando ser o melhor sistema de irrigação para dentes com ápice incompleto e lesão periapical / The objective of this in vivo study was to evaluate the expression intensity of molecules indicating cell differentiation with mineralizing phenotype in immature dogs teeth with experimentally induced apical periodontitis subjected to irrigation of root canals using negative apical pressure (EndoVac®) and positive apical pressure (conventional irrigation). Thirty teeth (60 roots) were divided into 3 groups: EndoVac® Group - negative apical pressure irrigation (n=20), Conventional Group - positive apical pressure irrigation (n=20); and Control Group with apical periodontitis (n=20). After induction of periapical lesions, the root canals of the EndoVac ® and Conventional groups were instrumented with hand files, using the corresponding irrigation system. After 90 days, the animals were euthanized and the specimens were submitted to histotechnical processing. Representative sections of each group were stained with hematoxylin and eosin (HE) for histopathological description of the apical and periapical regions. The sections were submitted to osteopontin (OPN), alkaline phosphatase (ALP) and RUNX2 transcription factor Immunostaining in the apical and periapical regions of the roots. A semi-quantitative analysis was performed to evaluate the expression intensity of these markers, using a score system. Data were statistically analyzed by the Kruskal-Wallis non-parametric test and Dunn post-test, and the significance level was set at 5%. Regarding the histopathological description, different findings were observed in each group. Briefly, the EndoVac® group demonstrated a well-organized connective tissue, invaginating into the root canal, and exhibited a more advanced repair process in relation to the other groups. RUNX2 immunostaining revealed that in the EndoVac® group there was a significantly stronger (p=0.03) immunostaining in comparison to the control group. Regarding the OPN expression, it was not possible to find a statistically significant difference between the groups (p=0.15). After analyzing ALP immunostaining, a statistically significant difference was observed between the groups (p=0.0021), and the EndoVac® group showed a markedly stronger mark immunostaining than the control group. The results of the present in vivo study allowed concluding that negative apical pressure irrigation (EndoVac®) presented mineralizing potential, indicating that it is the best irrigation system for teeth with an open apex and apical periodontitis

As lesões periapicais ocasionam destruição dos tecidos apicais e periapicais, por meio da exacerbação da resposta inflamatória e imune. O sistema imunológico é ativado e células são recrutadas para o local da lesão, incluindo os macrófagos, que podem ser polarizados em macrófagos M1 e M2.O presente estudo teve como objetivo quantificar macrófagos M1 e M2 em cistos periapicais de dentes decíduos e permanentes.Foram selecionados 15 casos de cistos periapicais de dentes decíduos e 10 cistos periapicais de dentes permanentes. Em todos os casos foi realizada análise histopatológica em HE, classificando o tipo e o grau do infiltrado inflamatório, por meio de escores. Além disso, foi realizada a quantificação dos marcadores CD68 (M1+, M2+) e CD163 (M1-,M2+) por meio da análise imunohistoquímica. Os resultados obtidos foram submetidos ao teste de Mann Whitney, com nível de significância de 5%.Embora tenham sido detectados macrófagos M1 e M2 tanto nas lesões dos dentes decíduos quanto dos permanentes, houve maior prevalência de macrófagos M2 (p<0,05). A comparação entre dentes decíduos e permanentes evidenciou maior quantificação de macrófagos M1 nas lesões dos dentes permanentes (p=0,002). Pôde-se concluir que os macrófagos M1 e M2 estão presentes nos cistos periapicais de dentes decíduos e permanentes, com maior quantidade de células M2. Além disso, os cistos periapicais dos dentes permanentes apresentaram maior quantidade de macrófagos M1, em comparação aos cistos dos dentes decíduos / The radicular lesion leads to the apical and periapical tissues destruction throughout an inflammatory and immune response. The immune system is activated and cells are recruited to the lesion site, which includes macrophages that can be polarized into M1 and M2 macrophages. The objective of this study was to quantify M1 and M2 macrophages in radicular cysts in permanent and deciduous teeth. In total, 15 radicular cysts cases in deciduous teeth and 10 in permanent teeth were selected. A histopathologic analysis in HE was performed, allowing the type and inflammatory infiltrates level classification in scores. In addition, the CD68 (M1+, M2+) and CD163 (M1-, M2+) markers were quantified through an immunohistochemistry analysis. The data acquired were submitted to a Mann Whitney test, with a 5% significance level. A higher prevalence of M2 macrophages (p<0.05) was observed, despite both M1 and M2 macrophages have been detected in the permanent and deciduous teeth lesions. The comparison between permanent and deciduous teeth presented a higher M1 macrophages quantity in permanent teeth lesions (p=0.002). In summary, the M1 and M2 macrophages are present in deciduous and permanent teeth radicular cysts, with a higher quantity of M2 cells. Moreover, the radicular cysts in permanent teeth have shown a higher M1 macrophages quantity when compared to cysts in deciduous teeth

O objetivo do presente estudo foi avaliar ossos maxilares e lesões periapicais induzidas em ratas ovariectomizadas submetidas ou não ao tratamento com bisfosfonato (Alendronato - ALD) ou com inibidor da catepsina K (Odanacatib - ODN). Foram utilizadas 45 ratas, divididas em 6 grupos: I sham (cirurgia de ovariectomia fictícia); II sham e lesão periapical (LP); III - ovariectomia (OVX) sem LP; IV OVX e LP; V OVX, LP e ALD; e Grupo VI - OVX, LP e ODN. Um dia após a realização da OVX ou da cirurgia fictícia, os animais dos grupos V e VI começaram a receber ALD ou ODN, via gavagem. Decorridas 9 semanas da realização da OVX, os primeiros molares dos grupos II, IV, V e VI foram submetidos à indução de LP por 3 semanas. Decorrido este período, foi realizada colheita microbiológica dos canais radiculares para a quantificação de micro-organismos e os animais foram submetidos à eutanásia. Fêmures foram analisados por meio de densitômetro, para registro da densidade mineral óssea (BMD). As maxilas foram analisadas por meio de microtomografia computadorizada (micro-CT) para avaliação da microarquitetura e BMD do osso interradicular e as mandíbulas para avaliação do volume das LP. Os primeiros molares inferiores foram submetidos ao processamento histotécnico, sendo os cortes corados com hematoxilina e eosina (HE) e analisados em microscopia convencional. Paralelamente, foi realizada a análise morfométrica da área das lesões periapicais, em microscopia de fluorescência e histoenzimologia para a atividade da TRAP. Os primeiros molares superiores foram submetidos à detecção da expressão gênica de citocinas, marcadores da osteoclastogênese e de metaloproteinases da matriz. Os resultados obtidos foram submetidos à análise estatística apropriada, com nível de significância de 5%. A OVX afetou a BMD do fêmur e da maxila e a microarquitetura apenas do fêmur. O ALD recuperou a BMD dos ossos avaliados. A OVX não foi capaz de influenciar nos níveis de contaminação microbiana do canal radicular. As LP dos animais do grupo IV apresentaram expressão aumentada de RANK, RANKL, IL-1&beta;, IL-6, TNF-&alpha;, MMP-8 e 13, enquanto o tratamento com ALD (grupo V) foi capaz de reduzir a expressão de IL-6 e MMP-8, ao mesmo nível que nas LP do grupo II. Além disso, as LP do grupo IV foram maiores (área e volume), em comparação às dos grupos II e V. O ODN, na dose e frequência de administração aplicada, não foi capaz de promover alterações significantes. A OVX e os tratamentos antirreabsortivos não influenciaram no número de osteoclastos ao redor da LP. Assim, concluiu-se que a condição hipoestrogênica induzida pela OVX foi capaz de diminuir a BMD do fêmur e da maxila e alterou a microarquitetura do fêmur. Apenas o ALD foi capaz de recuperar o fenótipo da BMD, ou seja, retorno aos níveis observados nos animais saudáveis. Ainda, a OVX agravou o processo de reabsorção, a inflamação e a expressão de MMPs, provocando lesões periapicais maiores. O ALD e o ODN proporcionaram uma melhora da resposta periapical. Entretanto, apenas o tratamento com ALD recuperou o fenótipo, fazendo com que as lesões periapicais fossem similares às lesões dos animais saudáveis. / The aim of this study was to evaluate maxillary bones and apical periodontitis induced in ovariectomized rats treated or not with bisphosphonate (Alendronate - ALD) or cathepsin K inhibitor (Odanacatib - ODN). Forty-five female rats were divided into 6 groups: I sham surgery; II - sham and apical periodontitis (AP); III - ovariectomy (OVX) without AP; IV - OVX and AP; V - OVX, AP and ALD; and Group VI - OVX, AP and ODN. One day after OVX or sham surgery, the animals in groups V and VI started receiving ALD or ODN, by gavage. After 9 weeks, the first molars of the rats in groups II, IV, V and VI were subjected to induction of AP for 3 weeks. Microbiological root canal sampling was collected for quantification of microorganisms and the animals were euthanized. Bone mineral density (BMD) of the femurs was analyzed by bone densitometry. The maxillas were analyzed by microcomputed tomography (micro-CT) to determine the microarchitecture and BMD of the interradicular bone while the mandibles were analyzed to determined AP volume. The mandibular first molars were subjected to histotechnical processing and hematoxylin and eosin-stained histological sections were examined with conventional microscopy. In addition, a morphometric analysis of AP area was performed using fluorescence microscopy and tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) histoenzymology. The maxillary first molars were used to evaluate the gene expression of cytokines, osteoclastogenesis markers and matrix metalloproteinases (MMP) using RT-PCR. The results were subjected to appropriate statistical analysis with 5% significance level. OVX affected femoral and maxillary BMD and femoral microarchitecture. ALD recovered the BMD of both types of bones. OVX was not able to influence the microbial levels of the root canal. In group IV, AP showed increased expression of RANK, RANKL, IL-1&beta;, IL-6, TNF-&alpha;, MMP-8 and MMP-13, while ALD treatment (group V) reduced IL-6 and MMP-8 expression to the same level as the AP in group II. In group IV, AP area and volume were larger than in groups II and V. ODN, in the dosage and frequency of administration applied, was not able to promote significant changes. OVX and antiresorptive treatments did not influence the number of osteoclasts around the AP region. In conclusion, the hypoestrogenic condition induced by OVX was able to decrease the BMD of femur and maxilla and only the microarchitecture of the femur. ALD was able to recover the BMD phenotype, i.e., return to the levels observed in healthy animals. Furthermore, OVX exacerbated resorption, inflammation and MMP expression, inducing larger lesions. Treatment with ALD and ODN resulted in an improvement of the periapical response. However, only ALD recovered the phenotype, with AP similar to that of healthy animals.

Avaliar in vivo o efeito da Terapia Fotodinâmica Antimicrobiana (aPDT), após tratamento endodôntico em sessão única, em dentes de cães com lesão periapical, em comparação ao tratamento em duas sessões com o uso de curativo de demora à base de hidróxido de cálcio. Material e Métodos: Após a indução experimental da lesão periapical e instrumentação dos canais radiculares, 48 dentes foram distribuídos nos seguintes grupos: I e III Uso de curativo de demora com pasta à base de hidróxido de cálcio (Calen®); e II e IV -Tratamento em uma única sessão com utilização da aPDT. Os canais radiculares foram obturados e decorridos os períodos experimentais de 120 dias (Grupos I e II) e 180 dias (Grupos III e IV), os animais foram submetidos à eutanásia. Após processamento histotécnico, análise microscópica descritiva/semi-quantitativa, avaliação morfométrica do tamanho da lesão periapical em microscopia de fluorescência e análise radiográfica foram realizadas. Foram utilizados os testes de Kruskal Wallis e exato de Fisher (=0,05). Resultados: Na análise microscópica descritiva, os grupos I e III apresentaram áreas cementárias reparadas, com numerosos feixes colágenos no ligamento periodontal e presença suave de células inflamatórias. Nos grupos II e IV as áreas de reabsorção cementária não estavam reparadas, com reduzida presença de células e fibras e presença de células inflamatórias. Na análise semi-quantitativa do selamento biológico apical houve diferença significante (p<0,0001) entre os grupos I e II; e entre os grupos III e IV (p<0,0001). A análise em microscopia de fluorescência evidenciou diferença significante entre os grupos, após 120 dias (p=0,0004) e após 180 dias (p=0,0081), sendo que os grupos I e III apresentaram lesões periapicais menores. A porcentagem de redução radiográfica das lesões evidenciou diferença significante entre os grupos (p<0,05), com maior porcentagem de redução para os grupos I e III. Com relação à análise imunohistoquímica, nos grupos I, II e IV, as marcações para RANK, RANKL e OPG indicaram sinalização pró-reabsortiva, embora a marcação para RANKL no grupo I tenha sido pouco intensa. Já no grupo III, as marcações evidenciaram ocorrência de neoformação óssea. Conclusão: O tratamento em duas sessões com o uso de curativo de demora à base de hidróxido de cálcio promoveu maior redução no tamanho das lesões periapicais e estágio mais avançado de reparo, evidenciado pelos melhores resultados histopatológicos, imunohistoquímicos e radiográficos, em comparação ao tratamento em uma única sessão com utilização do protocolo de aPDT avaliado. / To evaluate one-session endodontic treatment with aPDT and two-session treatment with calcium-hydroxide (CH)-based dressing in dog\'s teeth with apical periodontitis. Methods: After experimental induction of apical periodontitis, 48 teeth were randomly assigned to the following groups: Group I (one-session treatment with aPDT 120 days); Group II (one-session treatment with aPDT 180 days); Group III (two-session treatment with CH-based dressing -120 days) and Group IV (two-session treatment with CH-based dressing -180 days). The animals were euthanized after 120 and 180 days. After histotechnical processing, microscopic and radiographic analyses were performed. Data were analyzed by Kruskal-Wallis and Fishers exact tests (=0.05). Results: In the microscopical analysis, Groups I and III presented repaired cemental areas, with various colagen bundles in the periodontal ligament and mild presence of inflamatory cells. In the groups III and IV the present resorbed cemental areas were not repired, with reduced number of cells and fibers and the presence of inflamatory cells. The semi-quantitative analysis of the apical clousure, there was a significant difference (p<0.0001) between groups I and II; and between groups III and IV (p<0.0001). In the fluorescence microscopy analysis, there was a significant difference between groups, aftter 120 days (p=0.0004) and after 180 days (p=0.0081). The groups I and III presented smaller periapical lesions. The percentage of radiographic reduction of lesions demonstrated a significant difference between groups (p<0.05) with a higher reducton in group I and II. Regarding the immunohistochemistry analysis, in the groups I, II and IV, RANK, RANKL and OPG staining indicated pro-resorption signaling; although the RANKL immunostaining in the group I were not intense. In the group III, the immunostaining demonstrated the occurrence of bone neoformation. Conclusion: Two-session treatment with CH based promoted more reduction in the periapical lesion size and more repair advanced stage, highlighting better histopathological, immunostaining and radiographic results in comparison with one-session treatment with aPDT protocol used.

Submitted by Eunice Novais (enovais@uepg.br) on 2018-06-15T14:46:06Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Adrian Camargo Araujo.pdf: 327036886 bytes, checksum: 5c9228c3ce134fc4755379a9d23ac40b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-15T14:46:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Adrian Camargo Araujo.pdf: 327036886 bytes, checksum: 5c9228c3ce134fc4755379a9d23ac40b (MD5) Previous issue date: 2016-02-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O objetivo deste trabalho foi investigar se a indução de lesão periapical em molares de ratos promove alterações comportamentais nesses animais. Foram utilizados 81ratos Wistar machos, com aproximadamente 45 dias de idade, sendo 27 animais utilizados como controle negativo (Controle) ,27 submetidos à abertura coronária e exposição da câmara pulpar para a contaminação do canal radicular e mantidos com o dente aberto por 7, 15 e 30 dias (CCA) e 27 submetidos à abertura coronária e exposição da câmara pulpar mantidos com o dente aberto por 7, 15 e 30 dias e após estes períodos tiveram o dente fechado com resina composta por mais 7 dias (CCF). Os testes comportamentais utilizados neste estudo foram o Labirinto em Cruz Elevado (LCE) e o Campo Aberto (CA). Ambos foram aplicados no início e ao final de cada período experimental. Após os períodos experimentais os animais foram sacrificados por excesso anestésico e as mandíbulas removidas, seccionadas e fixadas para posterior análise radiográfica e histológica. Foi utilizada a análise de variância (ANOVA) de dois critérios para os dados do comportamento animal. No grupo CCF foi utilizado o teste t student pareado para as comparações antes e depois do dente fechado com resina composta. Para todos os testes o nível de significância foi de 0,05. As lesões periapicais induzidas levaram a alteração comportamental nos animais, mostrando provável aumento no nível de ansiedade, no grupo CCA, até 15 dias após a indução, e no grupo CCF, em todos os períodos, principalmente em 30 dias. O modelo animal utilizado mostrou-se satisfatório em induzir as lesões periapicais inflamatórias. Os aspectos radiográficos foram concordantes com os microscópicos. As lesões periapicais induzidas em ratos, em ambos os grupos teste (CCA e CCF), apresentaram áreas radiolúcidas significativamente maiores em comparação ao grupo controle, presença de necrose pulpar, reabsorção óssea e infiltrado inflamatório polimorfonuclear em todos os períodos (7, 15 e 30 dias). O grupo CCA apresentou microabscessos nos períodos de 7 e 30 dias e intensa reabsorção óssea em 15 dias, e o grupo CCF, formação de microabscessos nos períodos de 15 e 30 dias. / The aim of this study was to investigate if induced periapical lesion in rat molars can lead to behavioral changes in these animals. Eighty-one male Wistar rats were used, with approximately 45 days of age, 27 animals were used as control (Control), 27 were submitted to a coronary opening and exposure of the pulp to root canal contamination and left open for 7,15 and 30 days (CCA), and 27 were submitted to a coronary opening and exposure of the pulp and left for 7,15 and 30 days and after the experimental period the tooth was closed with composite resin and kept closed for 7 more days (CCF). All analyzes were performed at 7, 15 and 30 days. The behavioral tests used in this study were the Elevated Plus Maze (LCE) and Open Field (CA). Both were applied at the beginning and at the end of each experimental period. After the experimental period the animals were sacrificed by anaesthetic overdosage, and the jaws were removed, sectioned and fixed for further radiographic and histologic analysis.. The analysis of variance (ANOVA) two criteria was used for animal behavior data. In the CCF group the t student paired test was used for comparisons between before and after close the tooth with composite resin. For all tests, the significance level was 0.05. Induced periapical lesions led to behavioral changes in animals, showing probable increase in the level of anxiety, in the CCA group, up to 15 days after induction, and the FCC group, in all periods, mostly at 30 days. The animal model utilized showed satisfactory in inducing inflammatory periapical lesions. The radiographic and microscopic findings were in accordance. Periapical lesions induced in rats in both test groups (CCA and CCF), had significantly higher radiolucent areas compared to the control group, presence of pulp necrosis, bone resorption and polymorphonuclear inflammatory infiltrate at all periods (7, 15 and 30 days). The CCA group exhibited microabscesses at 7 and 30 days and intense bone resorption within 15 days, and the CCF group, microabscesses formation at 15 and 30 days.

O receptor NLRP12 é um receptor intracelular que está envolvido no reconhecimento de PAMPs e DAMPs durante uma infecção. Foi visto que durante a osteoclastogênese, há uma diminuição da transcrição de NLRP12, e que este receptor inibe a reabsorção óssea através da supressão da via alternativa de NF-&kappa;B, exercendo um papel protetor sobre o tecido ósseo. Além disso, foi observado que a deficiência de NLRP12 em monócitos sob o estímulo de RANKL levou a maior estabilização de NIK e maior translocação de RelB para o núcleo, aumentando a formação dos osteoclastos in vitro. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar o papel de NLRP12 no desenvolvimento e progressão da lesão periapical induzida em camundongos. Para isso, foi induzida a lesão periapical dos primeiros molares inferiores dos camundongos fêmeas C57/Bl6 (WT) e camundongos deficientes para o receptor NLRP12 (Nlrp12-/-). Após 14 e 21 dias, as amostras de mandíbula foram submetidas às análises: determinação da área de lesão periapical em cortes histológicos; expressão gênica de marcadores osteoclastogênicos por qPCR; contagem de osteoclastos submetidos ao ensaio de histoenzimologia (TRAP); avaliação enzimática das MMPs por Zimografia. Os linfonodos cervicais foram submetidos à análise da expressão dos fatores de transcrição T-bet, ROR&gamma;t, GATA-3 e Foxp-3 por qPCR. Aos 14 dias, na análise histomorfométrica os animais Nlrp12-/- apresentaram uma maior lesão periapical quando comparados aos animais WT, associado com o aumento da expressão de Trap, Catepsina K e MMP-9 em amostras de hemi-mandíbulas com lesão. Além disso, o número de células TRAP positivas foi significantemente maior em Nlrp12-/- com lesão quando comparado com seu controle, enquanto no grupo WT com e sem lesão foram semelhantes. Assim como foi observado o maior aumento dos osteoclastos presentes no local da lesão dos animais Nlrp12-/-, estes também se mostraram com maior atividade gelatinolítica de MMP-9 e MMP-2 em relação ao seu controle, diferente dos animais WT que não apresentaram diferença entre os grupos controle e com lesão. Ainda nesse período, foi observado nas amostras de linfonodos cervicais que, no grupo Nlrp12-/- houve uma tendência à maior expressão de ROR&gamma;t, seguidos de menor expressão de T-bet quando comparados com o grupo WT. Aos 21 dias, os animais WT e Nlrp12-/- apresentaram lesões periapicais de tamanhos semelhantes. Além disso, somente o grupo Nlrp12-/- com lesão apresentou um aumento significativo da expressão de Trap em relação ao seu controle e a expressão de Catepsina K foi semelhante em ambos os grupos. Neste período houve um aumento na quantidade de células TRAP positivas em ambos os grupos com lesão quando comparados com seus respectivos controles, entretanto também não houve diferença entre os animais WT e Nlrp12-/-. A atividade de MMP-9 e MMP-2 foram semelhantes entre os animais WT e Nlrp12-/- e entre seus respectivos controles aos 21 dias. Nossos dados sugerem que a deficiência de NLRP12 levou a uma maior perda óssea aos 14 dias de lesão periapical e que isso ocorre via modulação da formação e atividade dos osteoclastos. Portanto, o NLRP12 inibe a osteoclastogênese e a atividade dos osteoclastos durante a fase inicial da lesão periapical, retardando o desenvolvimento da doença. / NLRP12 is an intracellular sensor that recongnizes PAMPS and DAMPs during infeccion. It was seen that NLRP12 transcription is down-regulated during osteoclastogenesis, and NLRP12 protect bone via suppression of alternative NF-&kappa;B-induced osteoclastogenesis. It has been shown that NLRP12 deficiency in monocytes under RANKL stimuli exhibited more stabilization of NIK and nuclear translocation of RelB, increasing osteoclasts formation in vitro. Therefore, the aim of this study was to evaluate the role of NLRP12 in the development and progression of experimentally induced periapical lesions in mice. Periapical lesions were induced in first molars of WT and NLRP12 knockout (KO) mice. Samples were collected at 14 and 21 days of the lesion for the analyses. Jaw samples with lesion and control area were subjected to periapical lesions area determination by histological sections; osteoclastogenic markers expression by q-PCR; count of osteoclasts submitted to the enzyme assay for TRAP; evaluation of MMPs activity by Zymography. The expression of T cells markers´ transcription factors was evaluated in lymph nodes by q-PCR. Fourteen days after periapical lesion induction, histological analysis revealed that NLRP12KO mice exhibited higher area of periapical lesion compared to WT group, which was associated with up-regulated mRNA expression of Trap, Cathepsin K and MMP-9 in the jaw samples. Moreover, the number of multinuclear TRAP-stained cells was significantly higher in the NLRP12KO with lesion group when compared to it control, whereas in the WT the number between the lesion and control groups were similar. Still, NLRP12KO showed higher MMP-9 and -2 gelatinolytic activity than it control, unlike WT mice that showed no difference between control and lesion group. In this period, NLRP12KO mice lymph nodes showed more ROR&gamma;t expression than WT mice and less T-bet expression. At 21 days, WT and NLRP12KO presented periapical lesions of similar sizes. In addition, NLRP12KO group with lesion showed a significant increase in Trap expression when compared with their control, but the increase in Trap e Cathepsin K was similar in both groups. Additionally, there was an increase of multinuclear TRAP-stained cells in both lesion groups when compared with their respective controls; however, there was also no difference between WT and NLRP12KO mice. MMP-9 and -2 activity was similar between WT and NLRP12KO and with their respective controls at 21 days. Our results suggest that NLRP12 deficiency led to increased bone loss at 14 days of periapical lesion and it occurs due to increased osteoclasts formation and activity. Therefore, NLRP12 inhibits osteoclastogenesis and osteoclasts activity during the early stages of periapical lesion, slowing the development of the disease.