Orientador: Ana Gabriela Sálvio / Resumo: A Doença Enxerto Contra o Hospedeiro (DECH) é uma das principais complicações em pacientes pós transplante de células tronco hematopoiéticas (TCTH), onde as células T do doador agridem os tecidos do receptor resultando em uma das principais causas de mortalidade e morbidade. Ocorre em cerca de metade dos pacientes que realizaram transplante de células tronco hematopoiéticas (TCTH). A pele é um dos órgãos mais acometidos. A DECH é dividida da forma aguda (DECH-a) e crônica (DECH-c), de acordo com o tempo de aparecimento dos achados clínicos e histopatológicos. A DECH de pele é classificada em graus variados, de I a IV, de acordo com o comprometimento. O presente estudo teve como objetivo avaliar a incidência de DECH-a cutânea entre os pacientes submetidos ao TCTH alogênico, aparentado, no Serviço de Transplante de Medula Óssea do Hospital Amaral Carvalho em Jaú/SP. Também foi objetivo do estudo a análise do perfil destes pacientes, a incidência e o impacto da doença na mortalidade precoce nos 100 primeiros dias pós TCTH. Os procedimentos metodológicos envolveram análise retrospectiva de dados retirados de planilhas do setor administrativo do Serviço de Transplante de Medula Óssea do Hospital Amaral Carvalho em Jaú/SP, contendo informações de 1113 pacientes que estiveram internados para a realização de transplante de medula óssea alogênico, aparentado, no período de agosto de 1996 a dezembro de 2013. Foram incluídos 582 pacientes cujas as doenças eram de linhagem mielóide - as ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

The difficulty to repair chondral lesions due to low mitotic activity, absence of vessels and blood supply, nerves and lack of support by the immobility of articular chondrocytes is a challenge for the orthopedist. Conventional and surgical alternatives usually result in relieving symptoms of the patient without, however, the formation of hyaline tissue at the injury site. Gene and cell therapy has been very promising as a treatment option. There is a great prospect for clinical use of modern technology, emerging as an alternative solution for the patient. This work aimed to develop a lesion in the trochlear groove articular cartilage of dogs using the technique of trochleoplasty widely used as a treatment of patellar dislocation in dogs. The study included 36 dogs, divided into three groups of 12 animals each with different treatments. For the control group 1arise grafting was not used, the group 2 was placed sponge collagen sponge (Gelfoam ®) and group 3 (cells) beyond the collagen sponge is added to the same total fraction of autologous mononuclear cells previously collected and processed in the laboratory. Each group was subdivided into groups of four animals that were differentiated by the follow-up period was 30, 60 and 90 days postoperatively. We evaluated clinical, radiologic, fluorescent, perimetry and histological and comparative analysis between the three groups. Animals with the addition of cells was better with clinically early support of the operated limb compared to other groups. Other evaluations were similar among all animals with no statistical differences but unlike previous studies signs of hyaline repair were found. It is concluded that the use of cell therapy accelerated the repair of cartilage injury with no difference in the quality of the final model. / A dificuldade de reparo de lesões condrais, devido a baixa atividade mitótica, pela ausência de vasos e irrigação sanguinea, ausência de suporte nervoso e pela imobilidade dos condrócitos articulares é um desafio para os ortopedistas. Alternativas convencionais e cirúrgicas normalmente resultam em alívio de sintomas do paciente sem, no entanto, a formação de tecido hialino no local da lesão. A terapia celular e gênica tem-se mostrado muito promissora como opção de tratamento. Há uma grande perspectiva de uso clínico desta moderna tecnologia, surgindo como alternativa de solução para o paciente. Este trabalho constituiu em desenvolver lesão em cartilagem articular no sulco troclear de cães através da técnica de trocleoplastia muito utilizada como tratamento de luxação de patela de cães. Foram utilizados 36 cães, divididos em 3 grupos de 12 animais com tratamentos diferentes. No grupo 1 (controle) não se colocava enxertia, no grupo 2 (esponja) se colocava esponja de colágeno (Gelfoam®) e no grupo 3 (células) além da esponja de colágeno se adicionava a mesma a fração total de células mononucleares autógenas previamente colhidas e processadas em laboratório. Cada grupo foi subdividido em grupos de 4 animais que se diferenciavam pelo período de acompanhamento que foi de 30, 60 e 90 dias de pós-operatório. Foram realizadas avaliações clínicas, radiológicas, fluorescentes, perimetrias e histológicas e análises comparativas entre os três grupos estudados. Os animais com adição de células se mostrou superior clinicamente com apoio precoce do membro operado em relação aos demais grupos. As demais avaliações se mostraram semelhantes entre todos os animais sem diferenças estatísticas mas diferentemente dos estudos anteriores se encontrou sinais de reparação hialina. Concluindo assim que o uso de terapia celular acelerou o processo de reparação em lesão cartilaginosa sem diferença na qualidade do tecido final do modelo proposto.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 407930 bytes, checksum: 2e2e384d18c87e7272273f070c122bed (MD5) Previous issue date: 2006-09-29 / The necessity to treat different etiologies, magnitudes and localization of bone defects has stimulated the search and development of materials capable to substitute the bone. Autogenous bone graft, although considered ideal because his behavior, in the majority of the situations, presents intrinsic morbidity of attainment, and limitation as for the amount and morphology. The bone s bank allows to provide great part of the current necessities, but it possess related problems with cost, infrastructure necessity and, in human medicine, legal issues. The ideal bone substitute must be osteogenic, biocompatible, capable to provide scaffolds, to propagate other substances, to be easily usable in the clinic and have adjusted ratio cost-benefit. On the other side, in determined applications, it is desirable that some of these characteristics predominate on others, depending on the necessity of the case to treat. This paper has for objective to evaluate the Porites astreoides coral as alternative of bone substitute in the fulfillment of small defects, associate or not to the autogenous bone marrow, and to compare its morphology and composition with normal bone tissue. With this intention there was accomplish a comparative study of the structural and morphologic properties of Porites astreoides coral samples, synthetic hydroxyapatite and bone of young and adult dogs, by x-rays diffraction; and an experimental study, comparing the samples previously, in the repair bone defects in dogs tibia , by radiographic and histology evaluations. / A necessidade de tratar defeitos ósseos de diferentes etiologias, magnitudes e localizações têm estimulado a busca e desenvolvimento de materiais capazes de substituir o osso. O autoenxerto, mesmo sendo considerado o enxerto ideal por seu comportamento, na maioria das situações, apresenta morbidade intrínseca a sua obtenção, e limitação quanto à quantidade e morfologia. Os bancos de ossos permitem resolver grande parte das necessidades atuais, mas possui problemas relacionados a custo, necessidade de infra-estrutura e, em medicina humana, de ordem médico-legal. O substituto ósseo ideal deve ser osteogênico, biocompatível, capaz de proporcionar suporte estrutural e de veicular outras substâncias, facilmente utilizável na clínica e com adequada proporção custo-benefício. Por outro lado, em determinadas aplicações, é desejável que algumas dessas características predominem sobre outras, dependendo da necessidade do caso a tratar. Esta dissertação tem por objetivo avaliar o coral Porites astreoides como alternativa de substituto ósseo no preenchimento de pequenos defeitos, associado ou não à medula óssea autógena, e comparar a sua morfologia e composição com a do tecido ósseo normal. Para tal propósito foi realizado um estudo comparativo das propriedades estruturais e morfológicas de amostras do coral Porites astreoides, hidroxiapatita sintética e de ossos de cães jovens e adultos, por meio da difração de raios-x; e um estudo experimental, comparando as amostras citadas anteriormente, na reparação de falhas ósseas realizadas na tíbia de cães, por meio de avaliações radiográficas e histológicas.

Submitted by ANA LETICIA SGAVIOLLI null (ana.lsgaviolli@sp.senac.br) on 2016-10-25T21:37:48Z No. of bitstreams: 1 Submissão - 25.10.16.pdf: 954213 bytes, checksum: f27af9c710378005f768acd829e6aae3 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-11-01T19:55:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 serignolli_als_me_bot.pdf: 954213 bytes, checksum: f27af9c710378005f768acd829e6aae3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-01T19:55:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 serignolli_als_me_bot.pdf: 954213 bytes, checksum: f27af9c710378005f768acd829e6aae3 (MD5) Previous issue date: 2016-09-02 / A Doença Enxerto Contra o Hospedeiro (DECH) é uma das principais complicações em pacientes pós transplante de células tronco hematopoiéticas (TCTH), onde as células T do doador agridem os tecidos do receptor resultando em uma das principais causas de mortalidade e morbidade. Ocorre em cerca de metade dos pacientes que realizaram transplante de células tronco hematopoiéticas (TCTH). A pele é um dos órgãos mais acometidos. A DECH é dividida da forma aguda (DECH-a) e crônica (DECH-c), de acordo com o tempo de aparecimento dos achados clínicos e histopatológicos. A DECH de pele é classificada em graus variados, de I a IV, de acordo com o comprometimento. O presente estudo teve como objetivo avaliar a incidência de DECH-a cutânea entre os pacientes submetidos ao TCTH alogênico, aparentado, no Serviço de Transplante de Medula Óssea do Hospital Amaral Carvalho em Jaú/SP. Também foi objetivo do estudo a análise do perfil destes pacientes, a incidência e o impacto da doença na mortalidade precoce nos 100 primeiros dias pós TCTH. Os procedimentos metodológicos envolveram análise retrospectiva de dados retirados de planilhas do setor administrativo do Serviço de Transplante de Medula Óssea do Hospital Amaral Carvalho em Jaú/SP, contendo informações de 1113 pacientes que estiveram internados para a realização de transplante de medula óssea alogênico, aparentado, no período de agosto de 1996 a dezembro de 2013. Foram incluídos 582 pacientes cujas as doenças eram de linhagem mielóide - as mielopatias malignas (Leucemia Mieloide Aguda, Leucemia Mieloide Crônica, Síndrome Mielodisplásica e Doença Mieloproliferativa Crônica) para que o grupo pesquisado se tornasse homogêneo em termos de drogas e condicionamento. Esses 582 pacientes englobaram 2 grupos: pacientes que apresentaram DECH-a exclusiva de pele e pacientes que não apresentaram nenhum tipo de DECH. Todos os dados foram revisados e submetidos a análise estatística univariada e multivariada. Na análise univariada, observa-se maior sobrevida em 10 anos para os indivíduos com DECH-a de pele grau I e II (p=0.039) e para os transplantados com células de Medula Óssea (0.018). Essa significância estatística foi mantida na análise multivariada. A principal causa da mortalidade nos primeiros 100 primeiros dias do transplante foi a recidiva da doença de base, sendo a DECH aguda responsável por 6% dos óbitos nesse período. Não houve diferença significativa para os outros dados pesquisados. Conclui-se então que uma escolha adequada de doadores, além do uso de fonte de medula óssea como principal escolha para realização de transplante de medula óssea, podem diminuir a incidência de DECH-a de pele, além de aumentar a sobrevida dos pacientes transplantados. / Graft versus host disease (GVHD) is a major complication occurred in patients posttransplantation hematopoietic stem cell transplantation (HSCT), where the donor's T cells attack the recipient's tissues resulting in a major cause of mortality and morbidity.This is a recurrent and severe event, which occurs in about half of patients who underwent hematopoietic stem cell transplantation (HSCT), the skin is one of the most affected organs. GVHD is divided as acute (GVHD) and chronic (chronic GVHD), according to the time, clinical and histopathological findings. This study aimed to evaluate the incidence of GVHDskin among patients undergoing allogeneic HSCT, akin in Marrow Transplant Service Bone Amaral Carvalho Hospital, Jaú / SP, the profile of this patient and the impact of the disease in early mortality in the first 100 days after HSCT. The methodological procedures involved retrospective analysis of data from spreadsheets in the administrative sector of the Bone Marrow Transplant Service, Hospital Amaral Carvalho - Jau, containing information of 1,113 patients who were hospitalized for performing allogeneic bone marrow transplantation, related in the period August 1996 to December 2013. to equalize the analysis were included only 582 patients whose diseases were of myeloid lineage - malignant myelopathy (Acute myeloid Leukemia, Chronic myeloid Leukemia, Myelodysplastic Syndrome and Chronic myeloproliferative disease) so that the study group became homogeneous in terms of drugs and conditioning. These 582 patients were divided into 2 groups: patients with GVHDexclusive skin and patients without any GVHD. All data were reviewed and subjected to statistical analysis. In univariate analysis, there is greater survival at 10 years for patients with GVHD to skin grade I and II (p = 0.039) and the transplanted cells Bone Marrow (0018). This significance was maintained in multivariate analysis. The main cause of mortality in the first 100 early days of transplantation was the recurrence of the underlying disease, and acute GVHD responsible for 6% of deaths in this period. There was no significant difference for the other surveyed data. It was concluded that a suitable choice of donors, and the use of bone marrow source as the primary choice for bone marrow transplantation, can reduce the incidence of GVHD, the skin, and increase the survival rate of transplant patients.

Orientador: Lígia Niero-Melo / Banca: Lucilene Silva Ruiz e Rezende / Banca: Eduardo Moreira de Queiroga / Resumo: A infiltração de MO por tumores não-hematológicos tem sido descrita desde 1935 e, mais recentemente, desperta interesse da comunidade científica, pois inúmeros trabalhos têm relacionado a presença de células tumorais na MO com o processo de carcinogênese e a progressão tumoral. O presente estudo teve por objetivo o levantamento dos casos com diagnóstico de mielopatia infiltrativa por tumores nãohematológicos, provenientes da Faculdade de Medicina de Botucatu - UNESP e do Hospital Amaral Carvalho - Jaú, avaliados, retrospectivamente, no período de 1998 a 2008 (num universo de 15.191 coletas de MO). Incluímos 193 pacientes, dos quais 171 eram adultos e 22 crianças (idade ≤ 21 anos), com paridade entre os sexos (1:1) e mediana de idade de 55 anos. Foram analisados dados clínicos, diagnóstico e estadiamento do tumor primário, sítios de metástases, características laboratoriais (hemograma e marcadores tumorais séricos), características da MO, tratamento e a relação desses fatores com a sobrevida dos pacientes, através do programa de estatística SPSS®. Os resultados encontrados apontam que os tumores que mais frequentemente infiltraram a MO nos adultos foram: tumores de mama, próstata e sítio primário indeterminado, e neuroblastoma nas crianças. A análise da MO revelou positividade de 80% para mielograma e BMO, e presença de fibrose em 32% dos pacientes (40%, quando associados a áreas de necrose no mesmo material). Na avaliação hematológica observamos: anemia, alteração de leucócitos e plaquetopenia. Houve diferença, estatisticamente significante, com maior mediana de sobrevida global (p= 0,000) para pacientes do sexo feminino, portadores de adenocarcinoma de mama, em estádios iniciais e que receberam algum tipo de tratamento (quimio, radio e/ou hormonioterapia). Na análise de sobrevida, a partir do diagnóstico de mielopatia infiltrativa, houve... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Bone marrow (BM) infiltration by nonhematopoietic tumors has been described since 1935, and a increased number of papers about this topic have been published. Some of the studies have related the relationship between the presence of peripheral circulating tumors cells, bone marrow infiltration, carcinogenesis and tumor progression. This study has, as essential objective, the evaluation of infiltrative mielopathy by nonhematopoietic tumors from Faculdade de Medicina de Botucatu - UNESP and Hospital Amaral Carvalho - Jaú. Data were analised retrospectively from 1998 January to 2008 August (15.191 bone marrow samples). We have included 193 patients. One hundred seventy one were adults and 22 were children (considered age ≤ 21 years), with similar number of patients by gender, and median age 55 years. Medical records from the selected patients were analised, with focus on clinical aspects, primary site of tumor, initial stage, metastatic sites, hematologic and bone marrow features, treatment and the relationship between this data and survival. Results have demonstrated that most frequent solid tumors in adults were breast cancer, prostate cancer and undetermined primary site, and neuroblastoma among children. Bone marrow revealed infiltration in 80% of samples by myelogram and BM biopsy, and fibrosis in 32% (40% when associated with necrosis area). We observed anaemia, leukocyte alterations and thrombocytopenia as hematologic features. There were significant differences in global survival, wich was better among female patients, diagnosis of breast cancer, initial clinical stages and who has received any type of treatment (chemotherapy, radiotherapy and/or hormoniotherapy). When we analised survival since diagnosis of infiltrative mielopathy, adult patients with leucoeritroblastic reaction and trombocytopenia, and undetermined primary site tumors, melanoma or gastrointestinal tumors had... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Rogério Martins Amorim / Coorientador: Fernanda da Cruz Landim Alvarenga / Coorientador: Reneé Laufer-Amorim / Banca: Ana Liz Garcia Alves / Banca: Maria Verônica de Souza / Banca: Brunna Patrícia A. da Fonseca / Banca: Márjorie de Assis Golim / Resumo: O interesse terapêutico e biológico nas células-tronco tem aumentando nos últimos anos, fato este demonstrado pelo número crescente de pesquisas e publicações na área. Na espécie equina, as pesquisas envolvendo o uso da terapia celular com células-tronco mesenquimais (CTMs) estão focadas, particularmente para o tratamento de lesões tendíneas e osteoarticulares, havendo poucos relatos da sua utilização em outros tecidos, tais como o sistema nervoso. Desta forma, as vias de aplicação mais utilizadas até então para uso clínico em equino são as intralesionais e intra-articulares, carecendo assim na medicina equina de estudos pré-clínicos que avaliem a segurança de administração das CTMs em outras vias, tais como a intratecal por via liquórica. Nesse sentido, o objetivo geral deste estudo foi a obtenção, o cultivo e a caracterização das CTMs provenientes da medula óssea (MO) de equinos, além da avaliação da viabilidade e da segurança de aplicação dessas células autólogas por via intratecal através do espaço atlanto-occiptal. Também foi avaliado in vitro o potencial de transdiferenciação das CTMs-MO em fenótipos neurais, utilizando-se dois protocolos de diferenciação neural: P1 (forksolin e ácido retinóico) e P2 (2- mercaptoetanol). Ao término do cultivo primário, a análise imunofenotípica revelou a presença de CTMs com elevada expressão do marcador CD90, seguida de menor expressão para o marcador CD44 e ausência de expressão do marcador CD34. Nos ensaios de diferenciação nas tri-linhagens mesodermais ficou evidenciada a resposta positiva às diferenciações osteogênica (OST), condrogênica (CDG) e adipogênica (ADP) caracterizadas pela deposição de matriz extracelular rica em cálcio (OST), proteoglicanos e colágeno... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Biological and therapeutic interest in stem cells has increased in recent years, a fact demonstrated by the crescent number of research and publications in the area. In equine species, research involving the use of cell therapy with mesenchymal stem cells (MSCs) are focused, particularly for the treatment of tendineous and osteoarticular injuries, having scarces reports of its use in other tissues such as the nervous system. Thus, the pathways of administration most used so far for clinical use in equines are the intralesional and intra-articular, needing thereby in equine medicine of preclinical studies that asses the security of administration of MSCs in other pathways such as intrathecal by liquoric way. In this sense, the general aim of this study was the obtaining, cultivation and characterization of MSCs from bone marrow (BM) of equines, besides the evaluation of the feasibility and safety of application of these autologous cells by intrathecal pathway through atlanto-occipital space. It was also evaluated in vitro the potential of transdifferentiation of MSCs-MO in neural phenotypes, using two protocols of neural differentiation: P1 (forksolin and retinoic acid) and P2 (2- mercaptoethanol). At the end of the primary culture immunophenotypic analysis revealed the presence of MSCs with high expression of marker CD90, followed by the lower expression for the marker CD44 and absence of expression of marker CD34. In tests of differentiation in the tri-lineage mesodermal became evidenced the positive response to osteogenic (OST), chondrogenic (CDG) and adipogenic (ADP) differentiation characterized by the deposition of extracellular matrix rich in calcium (OST), proteoglycans and collagen II (CDG) and deposition of intracellular lipid droplets (ADP). In immunocytochemical characterization MSCs were... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A terapia celular para doenças cardiovasculares representa uma nova e promissora opção terapêutica, principalmente para a cardiopatia isquêmica. A injeção de células mononucleares de medula óssea (CMMO) pela via intracoronariana (ICO) é a mais estudada em ensaios clínicos. Embora já se tenha documentado efeitos benéficos com essa terapia, dados relativos aos mecanismos de interação entre as células transplantadas e o ambiente microvascular cardíaco são escassos. A avaliação das CMMO na microcirculação miocárdica tem o potencial de esclarecer seus mecanismos de ação, abrindo novas possibilidades terapêuticas. O objetivo do estudo foi descrever e avaliar uma inovadora técnica de injeção ICO direta e visualização in vivo das CMMO na microcirculação miocárdica de pequenos roedores, após um período de isquemia miocárdica global (IMG) seguida de reperfusão, na presença e na ausência da aterosclerose. Materiais e Métodos: A técnica de transplante cardíaco heterotópico cervical (TCHC) em murinos foi modificada com a inserção e fixação de um microcateter conectado a uma seringa, no tronco braquiocefálico do animal doador. IMG foi induzida ocluindo-se a artéria nutridora do enxerto com um microclamp vascular, por 1 hora. As CMMO foram isoladas e marcadas antes da injeção ICO. Microscopia intravital de fluorescência (MIF) foi usada para análise da microcirculação coronariana do ventrículo direito (VD), incluindo arteríolas, capilares e vênulas pós-capilares. Parâmetros de perfusão e permeabilidade microvasculares e as interações entre as CMMO e células endoteliais foram estudados. O impacto da aterosclerose na recuperação, fenótipo e função celular também foi avaliado. Resultado: A MIF permitiu análise detalhada da microcirculação coronariana e da cinética das CMMO injetadas pela via ICO. A IMG afetou a microcirculação, reduzindo a densidade capilar funcional (DCF). Tal redução foi maior na presença de aterosclerose. A principal área de retenção celular foi a rede capilar e não as arteríolas ou vênulas. Nem a presença de isquemia, nem de aterosclerose alterou o número de células retidas. O número de CMMO retidas não aumentou na presença de isquemia, nem de aterosclerose e não se correlacionou com a perfusão microvascular ou inflamação prévios à injeção. Houve forte correlação entre o número de CMMO retidas e a expressão de CXCR4. A injeção de CMMO não afetou negativamente a DCF e a microcirculação. Aterosclerose não alterou o número de CMMO obtidas após isolamento por gradiente de Ficoll. A expressão de CD54 estava reduzida em camundongos ApoE-/-. CMMO de doadores ateroscleróticos geraram um número aumentado de unidades formadoras de colônias de granulócitos e macrófagos. A análise ecocardiográfica da função do VD do enxerto cardíaco cervical foi exeqüível. Conclusões: A injeção ICO direta e a visualização detalhada da cinética das CMMO na microcirculação coronária in vivo por MIF foi possível. A IMG provocou redução da densidade capilar funcional. A retenção das CMMO após injeção ICO se deu nos capilares e provavelmente depende da expressão de CXCR4. / Cell therapy for cardiovascular disease represents a promising new therapeutic option, especially for ischemic heart disease. The intracoronary (ICo) injection of bone marrow mononuclear cells (BMMC) is the most commonly studied rote in clinical trials. Although it has been documented beneficial effects with this therapy, data pertaining the mechanisms of interaction between transplanted cells and cardiac microvascular environment are lacking. Assessment of BMMC in myocardial microcirculation has the potential to clarify its mechanisms of action, opening new therapeutic possibilities. The objective of the study was to describe and to evaluate an innovative technique of direct ICo injection and in vivo visualization of BMMC in myocardial small rodents, after a period of global cardiac ischemia (GMI) and reperfusion, in the presence and absence of atherosclerosis. Materials and Methods: The syngeneic murine cervical heterotopic heart transplantation (CHHT) technique was modified by inserting and fixing a catheter connected to a syringe into the donor animal brachiocephalic trunk. GMI was induced occluding the nutritive artery of the graft for 1 hour. Bone marrow mononuclear cells were isolated and labeled prior to ICo injection. Intravital fluorescence microscopy (IFM) was used for analysis of the coronary microcirculation of the right ventricle (RV), including arterioles, capillaries and venules. Parameters of microvascular perfusion, microvascular permeability and the interactions between the BMMC and endothelial cells were studied. The impact of atherosclerosis on the recovery, phenotype and cellular function was also evaluated. Results: The IFM has allowed detailed analysis of both the coronary microcirculation, as the kinetics of BMMC. The GMI affected microcirculation, reducing the functional capillary density (FCD). This reduction was higher in the presence of atherosclerosis. The main area of cell retention was the capillary network, not the arterioles or venules. The number of BMMC retained was not increased in the presence of ischemia, neither of atherosclerosis and didnt correlate with microvascular perfusion or inflammation before injection. Cell retention was strongly correlated with BMMC expression of CXCR4. BMMC injection didnt affect negatively the FCD and microcirculation. Atherosclerosis didnt change the number of BMMC recovered after Ficoll gradient isolation. BMMC expression of CD54 was reduced in ApoE-/- mice. BMMC of atherosclerotic donors have generated a greater number of colony forming units of granulocytes and macrophages. The RV function analyses of the cardiac graft could be performed by echocardiography. Conclusions: The direct ICo injection and detailed visualization of BMMC kinetics in the coronary microcirculation in vivo was possible. The IRCG caused reduction of functional capillary density. Retention BMMC after ICo injection occurred in the capillaries and probably depends on the expression of CXCR4.

Nos dias atuais, é crescente o interesse das diversas áreas do conhecimento pela discussão da qualidade de vida das pessoas submetidas ao transplante de medula óssea. O presente estudo tem como objetivos descrever as experiências de crianças e adolescentes sobreviventes do transplante de medula óssea e apreender como esta modalidade terapêutica afetou a qualidade de suas vidas. Participaram do estudo 14 crianças/adolescentes, com idade entre 7 e 17 anos, submetidos ao TMO em um hospital-escola do interior de São Paulo. Nesta pesquisa, de natureza qualitativa, utilizou-se a entrevista como recurso para a coleta de dados, realizada no domicílio ou nos retornos ambulatoriais. Agruparam-se os dados obtidos em três temas: o passado - lembranças da doença e do tratamento; o presente - crescer e viver na condição de ser transplantado e o futuro - novos caminhos pela vida. Ao descrever a experiência da criança e do adolescente submetidos ao transplante de medula óssea, evidenciou-se o referencial da qualidade de vida, construído segundo suas próprias vivências com a doença e o tratamento. O estudo mostrou que a criança e o adolescente que sobreviveram ao transplante de medula óssea viveram seu cotidiano dentro de seus limites e possibilidades, num movimento de reestruturação e readaptação, projetando no futuro a esperança da concretização de planos e sonhos. Mediante os resultados dos dados empíricos, pode-se afirmar que, apesar das dificuldades vivenciadas pelas crianças e adolescentes frente à doença e ao TMO, os sobreviventes têm uma visão otimista de suas vidas. / Nowadays, various knowledge areas take an increasing interest in the discussion about the quality of life of people submitted to bone marrow transplantation. This study aims to describe the experiences of children and adolescents who survived this kind of transplantation and to learn how this therapy mode affected their quality of life. Study participants were 14 children/adolescents between 7 and 17 years old, submitted to BMT at a school hospital in the interior of São Paulo, Brazil. In this qualitative research, data were collected by means of interviews, which were held at the participants’ homes or when they returned to hospital. Data were grouped into three theme areas: the past – memories of the illness and treatment; the present – growing up and living as a transplant survivor and the future – new roads in life. In describing the children’s and adolescents’ experience, the quality of life reference framework was disclosed, which is constructed according to their own experiences with the disease and treatment. The study demonstrated that children and adolescents who survived bone marrow transplantation lived their daily life within their limits and possibilities, in a restructuring and readjustment movement, projecting the hope of realizing plans and dreams in the future. As a result of empirical data, it can be affirmed that, in spite of the difficulties experienced by the children and adolescents in relation to the disease and the BMT, survivors have an optimistic view on their lives.

Pancitopenia é uma manifestação frequente na leishmaniose visceral (LV) cuja patogenia não é esclarecida. Neste estudo, a patogenia foi analisada em cão e camundongo com LV. Cães com LV, naturalmente infectados, sem coinfecção com erliquiose, foram classificados de acordo com as alterações hematimétricas em: pancitopenia, bicitopenia, citopenia e sem alterações hematológicas. O mielograma revelou um aumento na proporção mielóide:eritróide nos cães infectados em relação ao grupo controle. Havia mudanças no padrão morfológico e quantitativo nas células sanguíneas, particularmente na série eritróide em cães pancitopênicos. Na contagem diferencial, notou-se a diminuição da porcentagem de linfócitos, plasmócitos e monócitos que tinham correlação com a gravidade das alterações hematológicas. No exame histopatológico da medula óssea, observaram-se aumento na celularidade, hiperplasia megacariocítica, proliferação macrofágica e degeneração e/ou necrose. No estudo de fatores de crescimento e citocinas, o aumento da expressão de IFN-?, GM-CSF, IL-7 e TNF-? parece assumir um papel importante nos cães bicitopênicos, e IL-3 nos cães com citopenia. A expressão de IGF-I, em contraste, estava diminuída significantemente em cães pancitopênicos em relação aos demais grupos. Os dados sugerem, portanto, a ocorrência de uma dishematopoiese com a diminuição da expressão de IGF-I na doença severa. Em camundongos C57BL/6 infectados por via intravenosa com L. (L.) donovani, as alterações hematológicas foram analisadas com 28 dias pós-infecção quando vimos o desenvolvimento de um quadro pancitopênico. O mielograma revelou displasia celular, aumento na proporção mielóide:eritróide e do índice de maturação mielóide, bem como, uma hipoplasia eritróide. Além disso, observamos um aumento significante na porcentagem de linfócitos e macrófagos nos animais infectados. No exame histopatológico havia um aumento significante da celularidade com infiltrado e/ou proliferação de células mononucleares similares a macrófagos. Na caracterização dessas células por microscopia confocal, estas expressavam F4/80, um marcador típico de macrófagos residentes e/ou estromais. Por citometria de fluxo, constatamos um aumento significante na porcentagem de células F4/80+ em proliferação. Além disso, utilizamos outros marcadores expressos em macrófagos como CD169 e CD11b, e vimos que a população F4/80+CD169+CD11b+ estava diminuída nos camundongos infectados. Com base nesses dados, consideramos o camundongo C57BL/6 infectado por L. (L.) donovani um bom modelo para o estudo da dishematopoiese na LV e que os macrófagos estromais devam ter um papel importante, o que merece estudos futuros mais aprofundados. / Pancytopenia is a common manifestation in visceral leishmaniasis (VL) that may contribute to lethality. We assessed the factors involved in the pathogenesis of pancytopenia in canine and murine VL. We selected dogs with VL but without erlichiosis that were classified according to hematological alterations in: pancytopenia, bicytopenia, cytopenia and dogs infected without hematological changes. The myelogram revealed an increase in the myeloid:erythroid cell ratio in infected dogs compared with healthy dogs and changes in the morphological and quantitative patterns in hematopoietic cells, particularly in erythroid series of the pancytopenic dogs. In differential cell count, decrease in the percentage of lymphocytes, plasma cells and monocytes correlated with the severity of hematological changes. In the histopathological examination of the bone marrow, the main alterations were the increase in cellularity, megakaryocytic hyperplasia, macrophage proliferation and degeneration and/or necrosis. Addressing the growth factors and cytokines, increased expression of IFN-?, GM-CSF, IL-7 and TNF-? seemingly plays an important role in bicytopenic dogs, and the expression fo IL-3 in dogs with cytopenia. In contrast, pancytopenic dogs had a significant decrease in the IGF-I expression compared with other groups. The data suggest a dyshematopoiesis with participation of IGF-I in severe stage of disease. In L. (L.) donovani-intravenously infected C57BL / 6 mice hematological changes were evaluated at 28 days post-infection when pancytopenia was established. The bone marrow examination showed cellular morphological changes, an increase in myeloid:erythroid ratio and myeloid maturation index, and erythroid hypoplasia. Moreover, we observed a significant increase in the percentage of lymphocytes and macrophages in infected animals. In histopathological examination, we observed a significant increase in the cellularity accompanied by infiltration and/or proliferation of mononuclear cells resembling macrophages. We characterized these cells as F4/80+ cells by confocal microscopy, a typical marker of residents and/or stromal macrophages. Using flow cytometry, we found a significant increase in the percentage of F4/80 in proliferation. In addition, we used other macrophage markers such as CD169 and CD11b, when a reduction in F4/80+CD169+CD11b+ population was shown in infected mice. Based on these data, we may consider L. (L.) donovani-infected C57BL/6 mouse a good model for the study of dyshematopoiesis in VL and that stromal macrophage may have important role in the in the hematopoiesis that deserve further studies .

A leishmaniose visceral é uma infecção grave que leva a pancitopenia. Quando se trata de disfunções medulares decorrentes de infecção por Leishmania (Leishmania) infantum há poucas abordagens descrevendo as alterações na mielopoiese e os mecanismos que levam a pancitopenia na LV. Alguns estudos demonstram uma relação importante entre a pancitopenia e o fator de crescimento insulin-like growth fator-I (IGF-I), no entanto, o seu papel endógeno na hematopoiese ainda não está claro. Propomos estudar a influência desse fator na hematopoiese e sua relação com o desenvolvimento da pancitopenia em hamsteres infectados por via intra-peritoneal com 2x107 de amastigotas por L. (L.) infantum. Avaliamos em 90 e 120 dias pós-infecção a LDU (Leishman-Donovan units) no baço e fígado, quando observamos tendência à progressão da infecção. Aos 60 dias pós-infecção, os animais com LV desenvolveram a plaquetopenia como primeira alteração hematológica, e a partir dos 90 dias pós-infecção, a anemia, e a leucopenia com reduções significantes nos leucócitos totais, linfócitos e neutrófilos. Já aos 120 dias de infecção, os leucócitos totais diminuíram significantemente acompanhados por uma redução de linfócitos, monócitos e eosinófilos. A partir desses dados, focamos a análise da medula óssea nos hamsteres com 90 e 120 pós-infecção. No mielograma, vimos alterações somente nos hamsteres com LV aos 90 dias pós-infecção, com um aumento significante na proporção células mielóides imaturas: células mielóides maduras. Na biópsia da tíbia, houve um aumento significante da celularidade quando comparados com seu respectivo controle, apenas no período de 90 dias pós-infecção. Em adição, observamos uma proliferação e/ou infiltrado macrofágico significante nos hamsteres com LV, mas sem diferença estatística nos períodos de 90 e 120 dias pós-infecção. Na avaliação semi-quantitativa de fibras de reticulina, somente aos 90 dias pós-infecção, observamos aumento significante nos infectados comparados aos controles, caracterizando um quadro fibrótico. Foi medida a expressão de mRNA de IGF-I por PCR em tempo real, aos 90 e 120 dias pós-infecção, onde ocorreu um aumento significante da expressão de IGF-I nos animais infectados em relação aos controles aos 90 dias. Como expostos, os hamsteres com LV apresentam alterações hematológicas como anemia, leucopenia e plaquetopenia, e ainda alterações na medula óssea como aumento da celularidade, proliferação macrofágica e fibrose acompanhados por um aumento da expressão de IGF-I. Assim podemos concluir que nossos dados indicam que o hamster se constitui num bom modelo para o estudo da patogênese da pancitopenia e das alterações medulares decorrentes da infecção por L.(L.) infantum. Neste modelo, ocorre alteração da expressão de IGF-I durante a evolução da infecção com possível papel na patogenia da pancitopenia. / Visceral leishmaniasis is a serious infection that leads to pancytopenia. When it comes to spinal cord dysfunction resulting from infection Leishmania (Leishmania) infantum there are few approaches describing the changes in myelopoiesis and mechanisms that lead to pancytopenia in LV. Some studies have shown a significant relationship between pancytopenia and insulin-like growth factor-growth factor I (IGF-I), however, their endogenous role in hematopoiesis is still not clear. We propose to study the influence of this factor in hematopoiesis and its relationship to the development of pancytopenia in hamsters infected intraperitoneally with 2x107 amastigotes by L. (L.) infantum. Evaluated at 90 and 120 days post-infection the LDU (Leishman-Donovan units) in the spleen and liver, when we observed a tendency to progression of the infection. At 60 days post-infection, animals with LV developed thrombocytopenia as the first hematologic changes, and from 90 days post-infection, anemia, and leukopenia with significant reductions in total leukocytes, lymphocytes and neutrophils. Already at 120 days of infection, total leukocytes decreased significantly accompanied by a decrease lymphocytes, monocytes and eosinophils. From these data, we focus on the analysis of the bone marrow in hamsters with 90 and 120 post-infection. The myelogram changes seen only in hamsters with LV at 90 days post-infection, with a significant increase in the proportion immature myeloid cells: mature myeloid cells. Biopsy of the tibia, there was a significant increase in cellularity compared with their respective control, only 90 days post-infection. In addition, we observed a proliferation and / or infiltration significant macrophage in hamsters with LV, but no statistical difference in the periods of 90 and 120 days post-infection. In semi-quantitative assessment of reticulin fibers, only at 90 days post-infection, we observed a significant increase in infected compared to controls, featuring a fibrous framework. MRNA expression of IGF-I was measured by real-time PCR, at 90 and 120 days post-infection, where a significant increase in IGF-I expression in infected animals compared to controls at 90 days occurred. As set out, the present hamsters VL hematological disorders such as anemia, leukopenia and thrombocytopenia, as well as changes in bone marrow cellularity increased, macrophage proliferation and fibrosis accompanied by a reduction in IGF-I expression. Thus we can conclude that our data indicate that the hamster is a good model to study the pathogenesis of pancytopenia and marrow changes resulting from infection by L. (L.) Infantum. In this model, alteration of IGF-I expression during the course of infection with a possible role in the pathogenesis of pancytopenia.