O presente estudo objetivou-se avaliar o perfil das citocinas como indicador prognóstico em diferentes protocolos de tratamento da mamite bovina. De um total de 130 vacas em lactação da raça holandesa foram selecionadas cinco vacas sem alteração ao exame do leite (C-), cinco vacas sem grumos no leite, mas com CMT positivo e 30 vacas com mamite clínica. Os animais com mamite clínica foram alocados em três grupos. O grupo G1 (n=10) recebeu tratamento com antibiótico sistêmico (enrofloxacina), enquanto o grupo G2 (n=10) recebeu somente antibiótico intramamário (sulfato de cefquinoma) e o grupo G3 (n=10) foi tratado com os dois princípios (enrofloxacina sistêmico e sulfato de cefquinoma intramamário). Os grupos controle foram formados respectivamente por animais negativos para as duas provas (C1; n=5), e negativos para a prova de fundo escuro e positivos para CMT (C2; n=5). Amostras de leite e sangue foram colhidas antes do tratamento (M0) e no segundo (M1), quinto (M2) e décimo segundo dia (M3) após o término do tratamento para serem submetidas a exame bacteriológico do leite, antibiograma do leite, dosagem de citocinas no leite e no sangue (IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α INF-γ) e dosagem de imunoglobulinas no leite e no sangue (IgG1, IgG2, IgM e IgA). Foi verificada a normalidade da distribuição dos resultados, utilizando-se teste de Anderson-Darling. Para a avaliação das diferenças entre as médias dos resultados obtidos, foram realizados os testes de análise de variância ANOVA One-way (Unstacked) (para dados com distribuição normal) e Mann-Whitney (para dados que não apresentaram distribuição normal), sendo as análises consideradas significativas as que apresentaram P≤0,05. Todos os animais do G3 apresentaram cura clínica e 80% cura bacteriológica nos momentos subsequentes ao tratamento (M1a M3). Ao se avaliar a resposta imunológica desse grupo, notou-se primeiramente o aumento de IL-6 sérico no M1 acompanhado de IgG1 e IgG2, os quais juntamente com o aumento de IL-4 e TNF-α perpetuaram a inflamação até o M2, enquanto que na glândula mamária já se iniciava a resolução da inflamação com o aumento de IL-10. Por outro lado, os animais do grupo G2 apresentaram cura clínica e bacteriológica no M1, porém esta não se manteve. Imunologicamente, após o tratamento, o perfil predominante desse grupo foi o Th2 com aumento de IgG1 e IL-4. Ao final do experimento, alguns animais do grupo G2 voltaram a manifestar a doença clinicamente, e tal fato foi acompanhado da diminuição das concentrações de IL-4, IgG1 e de IL-6 no leite. Nos animais do grupo G1 houve cura clínica não absoluta e 40% de cura bacteriológica no M3. Imunologicamente, observou-se altos níveis de IL-6 e IL-8 no leite durante todo o período de tratamento e diminuição de IgG2 sérico no M3 correlacionado negativamente com a IgG2 láctea, caracterizando uma resposta local tardia. Os resultados permitem inferir que o acompanhamento por mais de duas semanas da dinâmica da resposta imunológica depende da eficiência do protocolo antimicrobiana para se estabelecer um prognóstico. Além disso, a definição precoce da resposta imune pode ser dificultada pelo mais intenso tratamento antimicrobiano observado nos animais do tratamento combinado (G3) sendo insuficiente para debelar precocemente a infecção quando usado um tratamento antimicrobiano ineficiente. / The present study aimed to evaluate the cytokine profile as a prognostic in different treatment of bovine mastitis indicator. A total of 130 lactating cows of Holstein cows five without change to the examination of milk (C -), five cows in milk without lumps , but with positive CMT and 30 cows with clinical mastitis were selected . Animals with clinical mastitis were divided into three groups. The G1 (n = 10) received treatment with systemic antibiotics (enrofloxacin), while the G2 (n = 10) received only antibiotic intramammary (Cefquinome sulfate) and G3 (n = 10) group was treated with the two principles (systemic enrofloxacin and intramammary cefquinome sulfate). Control groups were formed respectively by the two negative tests (C1, n = 5) animals, and negative for evidence of dark and positive background for CMT (C2, n = 5). Milk and blood samples were collected before treatment (M0) and second (M1) , fifth (M2) and the twelfth day (M3) after completion of treatment to undergo bacteriological examination of milk , milk antibiogram, dosage cytokines in milk and blood (IL-1 , IL-2 , IL-4 , IL-6 , IL-8 , IL-10 , TNF- α IFN- γ ) and serum immunoglobulin in milk and blood (IgG1 , IgG2 , IgM and IgA) . Normal distribution of the results was verified using the Anderson- Darling test. For the evaluation of differences between the means of the results obtained , tests of ANOVA One -way (unstacked) (for data with normal distribution) and Mann - Whitney test ( for data that were not normally distributed) were performed and the analyzes considered significant if P ≤ 0.05 showed that . All G3 animals showed clinical cure and bacteriological cure in 80 % subsequent to treatment time (M1a M3). In evaluating the immune response of this group was noted primarily increased serum IL-6 in M1 together with IgG1 and IgG2, which together with the increased IL -4 and TNF- α to perpetuate inflammation M2 while mammary gland that has already started the resolution of inflammation with increased IL-10. On the other hand, the G2 group showed clinical and bacteriological cure in M1, but this was not maintained. Immunologically, after treatment, the predominant profile of this group was to increase the Th2 IgG1 and IL-4. At the end of the experiment, some animals from G2 again manifesting the disease clinically, and this fact was accompanied by decreased concentrations of IL - 4 , IgG1 and IL - 6 in milk. In animals of G1 there was no absolute clinical cure and bacteriological cure 40 % of the M3. Immunologically , it was observed high levels of IL-6 and IL-8 in the milk during the treatment period and a decrease in serum IgG2 M3 negatively correlated with milk IgG2 , featuring a late local response . The results may imply that monitoring for more than two weeks of the dynamics of the immune response depends on the efficiency of the antimicrobial protocol to establish a prognosis. In addition, the early definition of the immune response may be complicated by better antimicrobial treatment of animals observed in combined treatment (G3) being insufficient to overcome the infection early inefficient when used antimicrobials.

Objetivou-se neste trabalho, comparar se o tratamento homeopático eliminou ou não o agente causal das mastites subclinicas; se houve alteração na contagem de células somáticas (CCS) e a variação da produção láctea antes e depois do tratamento homeopático proposto. Utilizou-se 34 glândulas mamárias de 22 vacas que apresentavam mastite subclinica, CMT 2+ e 3+, pluríparas entre o terceiro e sexto me de lactação e entre a segunda e a quinta cria. Foram divididas em 2 grupos. O grupo teste-homeopatia recebeu 15 glóbulos do medicamento Phytolaca decandra 6 CH duas vezes ao dia,e o grupo controle recebeu 15 glóbulos inertes, duas vezes ao dia, por 15 dias consecutivos. Ao final do experimento, não houve diferença significativa entre as contagens de células somáticas da secreção láctea das glândulas quando comparadas antes e depois do tratamento homeopático, bem como quando comparou-se ambos os grupos. Porém, observou-se que a produção láctea dos animais tratados com remédio homeopático aumentou significativamente (P<0,05) em 2,5 kg/leite/dia em média. No grupo tratado com placebo não houve diferença significativa na produção láctea no mesmo período. / Mammary gland inflammatory process has been particularly frequent and important in dairy cattle and gives a lot of damage. Infectious mastitis is the most important injury either by economic or public health points of view. Identify the aggressor microorganism and somatic cells count (SCC) in milk are important tools to avail the sanitary conditions of the herd and how victim react against the aggressor. In clinical mastitis, the signs of the injury and resulting reaction of the organism who suffer the injury are evident, clear, so are seem signs and symptoms of inflammation. Otherwise, in sub-clinical mastitis, signs and symptoms of inflammations are not seen, and to realize it there are technical methods. In this case, the option was use as sub-clinical mastitis indicator the Tamis test (black ground cup) and the CMT (California Mastitis Test). Then, was chosen 22 cows that obtained score 2+ and 3+ on CMT test of each teat, between third and sixth months milking and second and fifth birth. They were separated into two groups. Homeopathy is a kind of therapy that has been recently used in animals with such satisfactory results. The conventional drugs have restricted use on organic production and in same cases are forbidden. In the start of this investigation, before the homeopathic treatment, was collected, from the each teat that had sub-clinical mastitis (CMT 2+ and 3+), two milk samples. One of then was sent to somatic cells count (SCC) and another to the microbiological laboratory to identify the microorganism. Milk production from each cow, were under control all time. Since this point the group called Test-homeopathy received the homeopathic medication Phytolacca decandra 6 ch, 15 pills twice a day, and the group called Control, received placebo, 15 pills twice a day, for both groups. At the end of 15 days of treatment, a new double collect of milk samples from each same teats were done. The samples were sent again to the microbiological laboratory to identify the microorganism implicated and to somatic cells counter (SCC) laboratory. The weight of milk production of each cow was controlled before and after treatment of each cow from both groups. At the end of research, there were no significant rates between somatic cells counts (SCC) of the milk when compared before and after homeopathic treatment, as well as when compared among both groups. But, it was observed that milk production of cows which received homeopathic treatment had an increase statistically significant (P<0,05) on 2,5 kg of milk/ day in media, and the group which received placebo there were no significant rates in milk productions in the same time.

Objetivou-se neste trabalho, comparar se o tratamento homeopático eliminou ou não o agente causal das mastites subclinicas; se houve alteração na contagem de células somáticas (CCS) e a variação da produção láctea antes e depois do tratamento homeopático proposto. Utilizou-se 34 glândulas mamárias de 22 vacas que apresentavam mastite subclinica, CMT 2+ e 3+, pluríparas entre o terceiro e sexto me de lactação e entre a segunda e a quinta cria. Foram divididas em 2 grupos. O grupo teste-homeopatia recebeu 15 glóbulos do medicamento Phytolaca decandra 6 CH duas vezes ao dia,e o grupo controle recebeu 15 glóbulos inertes, duas vezes ao dia, por 15 dias consecutivos. Ao final do experimento, não houve diferença significativa entre as contagens de células somáticas da secreção láctea das glândulas quando comparadas antes e depois do tratamento homeopático, bem como quando comparou-se ambos os grupos. Porém, observou-se que a produção láctea dos animais tratados com remédio homeopático aumentou significativamente (P<0,05) em 2,5 kg/leite/dia em média. No grupo tratado com placebo não houve diferença significativa na produção láctea no mesmo período. / Mammary gland inflammatory process has been particularly frequent and important in dairy cattle and gives a lot of damage. Infectious mastitis is the most important injury either by economic or public health points of view. Identify the aggressor microorganism and somatic cells count (SCC) in milk are important tools to avail the sanitary conditions of the herd and how victim react against the aggressor. In clinical mastitis, the signs of the injury and resulting reaction of the organism who suffer the injury are evident, clear, so are seem signs and symptoms of inflammation. Otherwise, in sub-clinical mastitis, signs and symptoms of inflammations are not seen, and to realize it there are technical methods. In this case, the option was use as sub-clinical mastitis indicator the Tamis test (black ground cup) and the CMT (California Mastitis Test). Then, was chosen 22 cows that obtained score 2+ and 3+ on CMT test of each teat, between third and sixth months milking and second and fifth birth. They were separated into two groups. Homeopathy is a kind of therapy that has been recently used in animals with such satisfactory results. The conventional drugs have restricted use on organic production and in same cases are forbidden. In the start of this investigation, before the homeopathic treatment, was collected, from the each teat that had sub-clinical mastitis (CMT 2+ and 3+), two milk samples. One of then was sent to somatic cells count (SCC) and another to the microbiological laboratory to identify the microorganism. Milk production from each cow, were under control all time. Since this point the group called Test-homeopathy received the homeopathic medication Phytolacca decandra 6 ch, 15 pills twice a day, and the group called Control, received placebo, 15 pills twice a day, for both groups. At the end of 15 days of treatment, a new double collect of milk samples from each same teats were done. The samples were sent again to the microbiological laboratory to identify the microorganism implicated and to somatic cells counter (SCC) laboratory. The weight of milk production of each cow was controlled before and after treatment of each cow from both groups. At the end of research, there were no significant rates between somatic cells counts (SCC) of the milk when compared before and after homeopathic treatment, as well as when compared among both groups. But, it was observed that milk production of cows which received homeopathic treatment had an increase statistically significant (P<0,05) on 2,5 kg of milk/ day in media, and the group which received placebo there were no significant rates in milk productions in the same time.

O presente estudo objetivou-se avaliar o perfil das citocinas como indicador prognóstico em diferentes protocolos de tratamento da mamite bovina. De um total de 130 vacas em lactação da raça holandesa foram selecionadas cinco vacas sem alteração ao exame do leite (C-), cinco vacas sem grumos no leite, mas com CMT positivo e 30 vacas com mamite clínica. Os animais com mamite clínica foram alocados em três grupos. O grupo G1 (n=10) recebeu tratamento com antibiótico sistêmico (enrofloxacina), enquanto o grupo G2 (n=10) recebeu somente antibiótico intramamário (sulfato de cefquinoma) e o grupo G3 (n=10) foi tratado com os dois princípios (enrofloxacina sistêmico e sulfato de cefquinoma intramamário). Os grupos controle foram formados respectivamente por animais negativos para as duas provas (C1; n=5), e negativos para a prova de fundo escuro e positivos para CMT (C2; n=5). Amostras de leite e sangue foram colhidas antes do tratamento (M0) e no segundo (M1), quinto (M2) e décimo segundo dia (M3) após o término do tratamento para serem submetidas a exame bacteriológico do leite, antibiograma do leite, dosagem de citocinas no leite e no sangue (IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-&alpha; INF-&gamma;) e dosagem de imunoglobulinas no leite e no sangue (IgG1, IgG2, IgM e IgA). Foi verificada a normalidade da distribuição dos resultados, utilizando-se teste de Anderson-Darling. Para a avaliação das diferenças entre as médias dos resultados obtidos, foram realizados os testes de análise de variância ANOVA One-way (Unstacked) (para dados com distribuição normal) e Mann-Whitney (para dados que não apresentaram distribuição normal), sendo as análises consideradas significativas as que apresentaram P&le;0,05. Todos os animais do G3 apresentaram cura clínica e 80% cura bacteriológica nos momentos subsequentes ao tratamento (M1a M3). Ao se avaliar a resposta imunológica desse grupo, notou-se primeiramente o aumento de IL-6 sérico no M1 acompanhado de IgG1 e IgG2, os quais juntamente com o aumento de IL-4 e TNF-&alpha; perpetuaram a inflamação até o M2, enquanto que na glândula mamária já se iniciava a resolução da inflamação com o aumento de IL-10. Por outro lado, os animais do grupo G2 apresentaram cura clínica e bacteriológica no M1, porém esta não se manteve. Imunologicamente, após o tratamento, o perfil predominante desse grupo foi o Th2 com aumento de IgG1 e IL-4. Ao final do experimento, alguns animais do grupo G2 voltaram a manifestar a doença clinicamente, e tal fato foi acompanhado da diminuição das concentrações de IL-4, IgG1 e de IL-6 no leite. Nos animais do grupo G1 houve cura clínica não absoluta e 40% de cura bacteriológica no M3. Imunologicamente, observou-se altos níveis de IL-6 e IL-8 no leite durante todo o período de tratamento e diminuição de IgG2 sérico no M3 correlacionado negativamente com a IgG2 láctea, caracterizando uma resposta local tardia. Os resultados permitem inferir que o acompanhamento por mais de duas semanas da dinâmica da resposta imunológica depende da eficiência do protocolo antimicrobiana para se estabelecer um prognóstico. Além disso, a definição precoce da resposta imune pode ser dificultada pelo mais intenso tratamento antimicrobiano observado nos animais do tratamento combinado (G3) sendo insuficiente para debelar precocemente a infecção quando usado um tratamento antimicrobiano ineficiente. / The present study aimed to evaluate the cytokine profile as a prognostic in different treatment of bovine mastitis indicator. A total of 130 lactating cows of Holstein cows five without change to the examination of milk (C -), five cows in milk without lumps , but with positive CMT and 30 cows with clinical mastitis were selected . Animals with clinical mastitis were divided into three groups. The G1 (n = 10) received treatment with systemic antibiotics (enrofloxacin), while the G2 (n = 10) received only antibiotic intramammary (Cefquinome sulfate) and G3 (n = 10) group was treated with the two principles (systemic enrofloxacin and intramammary cefquinome sulfate). Control groups were formed respectively by the two negative tests (C1, n = 5) animals, and negative for evidence of dark and positive background for CMT (C2, n = 5). Milk and blood samples were collected before treatment (M0) and second (M1) , fifth (M2) and the twelfth day (M3) after completion of treatment to undergo bacteriological examination of milk , milk antibiogram, dosage cytokines in milk and blood (IL-1 , IL-2 , IL-4 , IL-6 , IL-8 , IL-10 , TNF- &alpha; IFN- &gamma; ) and serum immunoglobulin in milk and blood (IgG1 , IgG2 , IgM and IgA) . Normal distribution of the results was verified using the Anderson- Darling test. For the evaluation of differences between the means of the results obtained , tests of ANOVA One -way (unstacked) (for data with normal distribution) and Mann - Whitney test ( for data that were not normally distributed) were performed and the analyzes considered significant if P &le; 0.05 showed that . All G3 animals showed clinical cure and bacteriological cure in 80 % subsequent to treatment time (M1a M3). In evaluating the immune response of this group was noted primarily increased serum IL-6 in M1 together with IgG1 and IgG2, which together with the increased IL -4 and TNF- &alpha; to perpetuate inflammation M2 while mammary gland that has already started the resolution of inflammation with increased IL-10. On the other hand, the G2 group showed clinical and bacteriological cure in M1, but this was not maintained. Immunologically, after treatment, the predominant profile of this group was to increase the Th2 IgG1 and IL-4. At the end of the experiment, some animals from G2 again manifesting the disease clinically, and this fact was accompanied by decreased concentrations of IL - 4 , IgG1 and IL - 6 in milk. In animals of G1 there was no absolute clinical cure and bacteriological cure 40 % of the M3. Immunologically , it was observed high levels of IL-6 and IL-8 in the milk during the treatment period and a decrease in serum IgG2 M3 negatively correlated with milk IgG2 , featuring a late local response . The results may imply that monitoring for more than two weeks of the dynamics of the immune response depends on the efficiency of the antimicrobial protocol to establish a prognosis. In addition, the early definition of the immune response may be complicated by better antimicrobial treatment of animals observed in combined treatment (G3) being insufficient to overcome the infection early inefficient when used antimicrobials.

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:38:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_monica_daiana_de_paula_peters.pdf: 790918 bytes, checksum: 5864e184e9f5f8ef1a064bd0c1a8a344 (MD5) Previous issue date: 2012-02-28 / This thesis presents two studies about evaluation of different levels of mastitis and their treatments besides analyzing the corresponding pain responses in dairy cows. The first study is about the effects of mastitis levels upon somatic cells count, pain thresholds and acute phase proteins concentration (APP): serum amyloid A (SAA) and fibrinogen. One hundred lactating cows were evaluated with different mastitis levels, being classified as follows: level zero (healthy cow), level 1 (subclinical mastitis first degree), level 2 (subclinical mastitis second degree), level 3 (subclinical mastitis third degree), level 4 (clinical mastitis). SCC of the milk from cows affected with clinical mastitis is significantly higher than milk from cows with subclinical mastitis at different levels, as well as healthy cows. Sensibility to pain is similar among clinical and subclinical mastitis, but cows presenting clinical mastitis show lower resistance to pain than healthy cows. Pain threshold measured in the hind limbs (right or left) is not affected by affected mammary gland side. Acute phase proteins (SAA and fibrinogen) are not affected by absence or occurrence of mastitis. The second study evaluated the non steroid anti-inflammatory (AINE) ketoprofen associated to antibiotic upon pain sensibility of cows affected by clinical mastitis. The pain threshold measured on the period without treatment was significantly lower than in the first day after beginning of the treatment, which was similar to the threshold measured on the second day after the beginning of the treatment, which was similar to that measured before the treatment. Variability in pain threshold among cows was larger at the period before the beginning of treatment, but it decreased on the first day after the beginning of the treatment. Cows with clinical mastitis and treated with AINE show reduction in pain sensibility just on the first day after the beginning of the treatment. Clinical mastitis cause pain in dairy cows, being needed more researches aimed at adoption of an efficient treatment to decrease pain sensibility to increase animal welfare. / A presente tese apresenta dois trabalhos que envolvem a avaliação da mastite em seus diferentes níveis, bem como seu tratamento, analisando as respostas de dor de vacas leiteiras em função destes aspectos. O primeiro refere-se aos efeitos dos diferentes níveis de mastite sobre a contagem de células somáticas, limiar de dor e níveis de proteínas de fase aguda (PFAs), amilóide sérica A (SAA) e fibrinogênio. Foram avaliadas 100 vacas em lactação com níveis diferentes de mastite, sendo assim classificadas: nível 0 - vaca sadia; nível 1 - mastite subclínica grau 1; nível 2 - mastite subclínica grau 2; nível 3 - mastite subclínica grau 3; nível 4 - mastite clínica. A CCS do leite de vacas com mastite clínica foi significativamente superior a de vacas com a doença nos diferentes níveis subclínicos, bem como a de vacas sadias. A sensibilidade à dor entre casos de mastite clínica e subclínica é semelhante e apenas vacas com mastite clínica apresentam menor resistência à dor do que vacas sadias. O limiar de dor nos membros posteriores, direito ou esquerdo, não sofre influência do lado da glândula mamária afetada pela mastite. As concentrações de PFAs, SAA e fibrinogênio, não são influenciadas pela ausência ou ocorrência de mastite. O segundo trabalho avaliou os efeitos da utilização do antiinflamatório nãoesteróide (AINE) cetoprofeno, em associação com antibiótico, na sensibilidade à dor de vacas acometidas por mastite clínica. Verificou-se que o limiar de dor no período sem tratamento foi significativamente menor que no primeiro dia após o início do tratamento e este, por sua vez, não diferiu do limiar no segundo dia após o início do tratamento. No entanto, o limiar, dois dias após o início do tratamento também não diferiu do limiar no momento sem tratamento. Observou-se uma maior variação nas respostas de limiar de dor das vacas no período que antecedeu ao tratamento, com redução desta no primeiro dia após iniciado o tratamento. Vacas com mastite clínica tratadas com AINE apresentam redução na sensibilidade à dor apenas no primeiro dia após o início do tratamento. A mastite clínica causa dor em vacas leiteiras, sendo necessários mais estudos visando adotar tratamentos eficientes na redução da sensação dolorosa para assim atender ao bem-estar animal.