Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / La nitrofurantoína es un antibiótico derivado del nitrofurano utilizado como fármaco de primera elección para el tratamiento de infecciones del tracto urinario. Sin embargo, este fármaco produce serios efectos adversos principalmente de origen gastrointestinal. Se postula que las reacciones adversas se deberían al estrés oxidativo provocado por la nitroreducción de la nitrofurantoína que genera especies reactivas del oxígeno. Por lo tanto, BG126®, preparado herbal a base de hojas de Buddleja globosa Hope, podría mitigar los efectos adversos de nitrofurantoína; este fitofármaco se ha caracterizado por su alta actividad antioxidante (datos aún no publicados). Los resultados de este estudio clínico doble ciego y randomizado, mostraron que el tratamiento asociado de nitrofurantoína (200mg/día) y BG126® (2 cápsulas/día), efectivamente disminuyó los efectos adversos gastrointestinales de pacientes mujeres con infección bacteriana del tracto urinario (ITU). Entre estas reacciones adversas se cuantificó nausea, dolor abdominal y diarrea. Más aún, este tratamiento conjunto potenció la actividad antibacteriana de la nitrofurantoína; al final del tratamiento, todos los pacientes que recibieron nitrofurantoína y BG126® presentaron urocultivos negativos, mientras que el 19% de los pacientes que recibieron sólo nitrofurantoína mostraron urocultivos positivos, lo cual indica la presencia de cepas bacterianas resistentes a nitrofurantoína. Cabe destacar que a capacidad antioxidante plasmática de ambos grupos de pacientes no fue significativamente diferente. Así, no se observaron diferencias significativas en la capacidad reductora de hierro, ni en los niveles de MDA de ambos grupos de pacientes, el que recibió sólo nitrofurantoína y aquel que recibió en forma conjunta nitrofurantoína y BG126®. Estos resultados parecen indicar que la absorción de BG126® es baja y por tanto, el efecto observado es mayoritario a nivel de la pared gastrointestinal. El aumento de la resistencia a antibióticos de las diferentes cepas bacterianas que infectan al hombre, es un problema de salud pública a nivel mundial. Si sumamos a lo anterior, las reacciones adversas de los fármacos antibacterianos, como son los derivados de nitrofuranos, las estrategias terapéuticas contra las diversas infecciones bacterianas se ven muy limitadas. Interesantemente, BG126® no sólo disminuyó la severidad de las reacciones adversas provocadas por la nitrofurantoína, sino que al parecer potenció su efecto antibacteriano. Nuevos experimentos están en proceso con el objeto de dilucidar los mecanismos que permitan explicar el comportamiento antibacteriano de nitrofurantoína comparada con la mezcla nitrofurantoína-BG126® / Nitrofurantoin is an antimicrobial drug specially selected for treatment of the urinary tract infections. However, this therapy produces severe adverse reactions, mainly in the gastrointestinal tract. It has been postulated that the adverse reactions induced by nitrofurantoin are originated through its reductive metabolism. This drug suffers nitroreduction, reaction which generate reactive oxygen species and so, oxidative stress. Since, the preparation of Buddleja globosa Hope leaves, BG126®, may mitigate the nitrofurantoin adverse reactions; this phytodrug has a high antioxidant activity (date unpublished). The results of this randomized double-blinded clinical trial, showed that the associated treatment of nitrofurantoin (200mg/día) and BG126® (2 capsules/day), in fact, decrease the gastrointestinal nitrofurantoin adverse reactions in woman patients with urinary tract infection (UTI). Among them, we measured nausea, abdominal pain and diarrhea. Moreover, this associated treatment potentiated the nitrofurantoin antibacterial activity; at the end of the treatment, all of the patients that received nitrofurantoin and BG126® showed negatives urocultures, while 19% of the patients that received only nitrofurantoin showed positives urocultures, so indicating the presence of nitrofurantoin resistant bacterial strains. It’s important to highlight that the plasmatic antioxidant capacity of both groups of patients were not significantly different. We did not observed significant differences in the ferric reducing ability of plasma and in the levels of plasmatic MDA of both patients groups that received only nitrofurantoin and that received nitrofurantoin and BG126®. These results suggest that BG126® absorption was low and the main effect was on the gastrointestinal wall. It is necessary to note that the antibacterial resistance in several of bacteria’s strains that infects human beings has increased and is a worldwide public health problem. In addition, many of antibacterial drugs induce severe adverse reactions, between them the nitrofuran derivatives. These data have provoked a decrease in the therapeutic strategies against the bacterial infections. BG126® not only decreased the severity of the adverse drug reactions due to nitrofurantoin, it also apparently enhanced the antibacterial effect. New experiments are in process with the aim to elucidate the mechanisms involved in the antibacterial effects of nitrofurantoin associated to BG126® observed

Doctora en Farmacología / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento hasta diciembre de 2016 / La importancia mundial que hoy tienen las plantas medicinales ha fomentado el desarrollo de fitofármacos por las compañías farmacéuticas. A diferencia de los fármacos sintéticos, las etapas para el desarrollo de fitofármacos (formulaciones que contienen extractos de hierbas polivalentes), no están claramente definidos, estandarizados y normalizados. Estas preparaciones a base de hierbas son muy diversas y los estudios farmacocinéticos y farmacodinámicos de ellos son escasos. De ahí la importancia de la normalización de los procesos que intervienen en la obtención de extractos herbales y fitofármacos, así como la determinación de la dosis, la seguridad y la eficacia de fitofármacos. El estudio de los parámetros farmacocinéticos requiere datos experimentales, que se resumen en las curvas de dosis-respuesta. En estas curvas se representa la concentración plasmática del fármaco en función del tiempo después de su administración. La concentración individual de principios activos en los extractos de hierbas es muy baja, por lo que es difícil su cuantificación plasmática utilizando los métodos de HPLC clásicos. Asimismo, se ha observado que existe una correlación directa entre la concentración plasmática de los principios activos presentes en un fármaco con los efectos farmacológicos observados. Si se acepta esta correlación, la cuantificación del principio activo podría ser reemplazada por cualquier efecto medible en plasma. Las hojas de las plantas en general, poseen un alto contenido de antioxidantes, siendo mayoritarios los compuestos polifenólicos. Existen diversas publicaciones que indican que estos compuestos ejercen diferentes efectos farmacológicos relacionados con su actividad antioxidante. Así, preparados de ellos se han asociado a la terapia clásica de patologías tales como enfermedades cardiovasculares y neurodegenerativas (16, 62, 64). Considerando los antecedentes expuestos, en este trabajo se utilizaron extractos hidro-alcohólicos de hojas de Buddleja globosa Hope (matico) y Plantago major L. (Llantén). Extractos hidro-alcohólicos de matico y llantén, previamente caracterizados por su actividad antioxidante in vitro, fueron administrados oralmente a ratas Sprague-Dawley. El análisis de la capacidad antioxidante plasmática a través del tiempo, mostró un aumento de la capacidad de reducir hierro y una disminución de la concentración plasmática de malondialdehído, producto de la oxidación de los lípidos celulares. Por otra parte, el análisis cromatográfico (HPLC) del plasma de las ratas, no mostró los picos correspondientes a los marcadores polifenólicos seleccionados para cada planta (estándares de polifenoles). Como una forma de detectar la presencia de los marcadores seleccionados en los extractos, muestras de los extractos fueron analizadas por LC-masa. Los cromatogramas obtenidos por este método mostraron la presencia en los extractos de los marcadores seleccionados; por lo tanto, la no aparición de ellos en los cromatogramas HPLC confirma la falta de sensibilidad del método HPLC implementado para cuantificar tan pequeñas cantidades de principios activos. El aumento de la capacidad antioxidante plasmática sin embargo, demuestra que hubo absorción de los antioxidantes presentes en las dosis orales de los extractos herbales administrados a las ratas. Estos resultados nos permiten postular que para determinar los parámetros farmacocinéticos de fitofármacos, la determinación del efecto farmacológico, en este caso el efecto antioxidante, podría reemplazar a la concentración plasmática. Cabe destacar que este trabajo representa el primer intento para determinar parámetros farmacocinéticos de fitofármacos, preparados herbales polivalentes. Sin embargo, se necesitan nuevos experimentos que permitan estandarizar las condiciones experimentales implementadas de tal forma que esta metodología pueda que esta metodología pueda ser utilizada en el estudio farmacocinético de fitofármacos / The global importance now given to medicinal plants has encouraged the development of phytodrugs by pharmaceutical companies. Different to synthetic drugs, the stages for the development of phytodrugs (formulations containing polyvalent herbal extracts), are not clearly defined, standarized and normalized. These herbal preparations are very diverse and the pharmacokinetics and pharmadynamics studies of them are scarce. Hence the importance of standardizing the processes involved in obtaining herbal extracts and phytodrugs, as well as, the, the dosage, safety and efficacy of phytodrugs. The study of pharmacokinetic parameters requires experimental data, which are summarized in dose-response curves. These curves plot the plasmatic drug concentration versus time after administration. The individual concentration of active ingredients in herbal extracts are very low, so their plasmatic quantification is difficult using the classis HPLC methods. It has been observed that there is a direct correlation between plasma concentrations of the active ingredients present in a drug with the pharmacological effects observed. If this correlation is accepted, the quantification of the active ingredient could be replaced by any measurable effect on plasma. In general, the leaves of plants have a high content of antioxidants, being polyphenolic compounds the major constituents. There are different publications indicating that these compounds have many pharmacological effects related to its antioxidant activity. This is the reason why the use of herbal preparations has been associated with conventional theraphy of diseases such as cardiovascular and neurodegenerative (16, 62, 64). Considering the above, this study used hydro-alcoholic extracts of leaves of Buddleja globosa Hope (matico) and Plantago major L. (Llantén). Hydro-alcoholic extracts of matico and llantén, previously characterized for their in vitro antioxidant activity, were orally administered to Sprague-Dawley rats. Analysis of plasma antioxidant capacity over time showed an increase in the ability to reduce iron and a decreased in the concentration of plasmatic malondialdehyde, product of celular lipid oxidation. Moreover, chromatographic analysis (HPLC) of rat’s plasma showed no peak corresponding to the polyphenolic markers selected for each plant (polyphenols standards). As a way to detect the presence of polyphenols markers, extract samples were analyzed by LC-mass chromatography. The chromatograms Obtained by this method showed the presence of the selected markers in the extracts; therefore, the non-appearance of them in the HPLC chromatograms confirms the lack of sensitivity of the HPLC method implemented to quantify such small amounts of active principles. The increase in plasma antioxidant capacity however, shows absorption of antioxidant compounds present in the oral doses of herbal extracts given to rats. These results allow us to postulate that to determine the pharmacokinetic parameters of phytodrugs, determination of pharmacological effect, in this case antioxidante effect, could replace the determination of plasmatic concentration levels. It is worthy to note that this work represents the first attempt to determine pharmacokinetic parameters of phytodrugs (polyvalent herbal preparations). However, further experiments to standardize experimental conditions implemented so that this methodology can be used in pharmacokinetic studies of phytodrugs, are needed / Conicyt

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico

La presente publicación pretende resumir el conocimiento científico químico-biológico sobre el Piper aduncum L., y sus especies sinónimas, P. angustifolium y P. elongatum. Se han logrado aislar e identificar más de 50 compuestos en dichas especies, los cuales pueden ser agrupados en cromenos, fenilpropanoides, derivados de ácido benzoico y flavonoides. Se presenta una discusión de las actividades biológicas encontradas para los extractos crudos y los compuestos aislados de ellos. / This review article covers the present knowledge on the chemistry and biological activities of Piper aduncurn and its synonyms P. angustifoliurn and P. elongaturn. More than 50 compounds have been isolated from these species, which can be grouped as chromenes, phenylpropanoids, benzoic acid derivatives and flavonoids. The biological activities of the crude extracts, and the compounds isolated from them, are discussed.

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Existen diversos antecedentes de las propiedades farmacológicas de B. globosa tanto de su actividad analgésica como antiinflamatoria en trabajos anteriores realizados en nuestro laboratorio, como también en publicaciones científicas, esto condujo a continuar con el estudio farmacológico y químico de esta especie. Uno de los objetivos de nuestro trabajo consistió en aislar el verbascósido y el 7-O-glucósido de luteolina, además de comparar los rendimientos de los diferentes extractos obtenidos a partir de hojas recolectadas en la localidad de Padre Las Casas, IX Región, Temuco, en relación a los extractos obtenidos en el sector del Campus Antumapu, RM, Santiago. Los extractos fueron fraccionados con solventes de polaridad creciente. El seguimiento cromatográfico se realizó mediante cromatografía en capa fina (c.c.f.) en gel de sílice, usando como fase móvil acetato de etilo: ácido fórmico: ácido acético: agua en proporción 10: 1,1: 1,1: 2,6, (4A) revelando con 2-aminoetil difenilborinato al 1% en metanol (NP) y comparando con sus correspondientes patrones. Se estableció la metodología analítica mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) para cuantificar el contenido de verbascósido presente en el extracto etanólico bioactivo (EET). El estudio dermatológico consistió en la evaluación de la cesión de los geles de EET al 1% y 10%, gel de 7-O-glucósido de luteolina 1% y gel de ácido cafeico al 1% a través de una membrana semipermeable. Los resultados fueron analizados por metodología HPLC En la evaluación farmacológica se utilizó el ensayo de inhibición de la enzima glicógeno fosforilasa (GPa), en el cual se evalúo el porcentaje de inhibición de la enzima por parte del EET. Los resultados de esta investigación permitieron demostrar que no existe una variación significativa entre los rendimientos de los extractos obtenidos en distintas regiones, sin embargo esto no implica que la variación geográfica no influya en la abundancia de los metabolitos secundarios activos. En relación a la evaluación de la cesión de los geles, los resultados demostraron que el verbascósido no es capaz de penetrar la membrana in vitro, lo mismo ocurrió para el 7-O-glucósido de luteolina a diferencia del ácido cafeico que sí pudo atravesar la membrana, esto nos llevó a postular que in vivo ocurre una hidrólisis del verbascósido, mediada por enzimas cutáneas, liberándose ácido cafeico, quien sería el responsable de generar las propiedades terapéuticas del gel. En el ensayo de inhibición de la enzima GPa, el EET demostró ser capaz de inhibir a la enzima en un 51%, presumiendo un posible efecto hipoglicemiante

Memoria para optar al título de Bioquímico / La degradación química de los alimentos es un proceso espontáneo e inducido por efecto de la luz, el calor y la presencia de trazas de algunos iones metálicos de transición, factores que inducen la formación de especies reactivas del oxígeno (ROS). Con el objetivo de preservar los alimentos de la degradación química, la industria alimentaria a utilizado durante años principalmente BHT y BHA; sin embargo, recientes estudios de toxicidad han provocado restricciones de su uso a nivel internacional, lo que ha motivado la búsqueda de sustitutos, cuya inocuidad no pueda ser cuestionada. Una posible alternativa a los antioxidantes sintéticos son los extractos naturales de reconocida actividad antioxidante, la cual estaría dada principalmente por su capacidad de secuestrar radicales libres del oxígeno atribuible principalmente a su alta concentración de polifenoles. Estos antecedentes permiten postular que extractos naturales enriquecidos en polifenoles podrían proteger los alimentos de la degradación química, preservando así sus características nutritivas y organolépticas. El objetivo de este trabajo fue comparar la capacidad de BHT y los extractos de Bluddleja globosa (matico) y Rosmarinus officinalis (romero) de proteger los lípidos y el contenido tiólico de filetes de Oncorhynchus mykiss (trucha arcoiris). El BHT y los preparados de matico y romero inhibieron la lipoperoxidación y protegieron la disminución del contenido de tioles de homogeneizados de filetes de trucha arcoiris, ambos fenómenos inducidos por el sistema Fe3+/ascorbato. Los polifenoles de los antioxidantes serían los principales responsables de la protección del contenido tiólico, mientras que los compuestos o-difenoles-diterpénicos serían los responsables principales de la actividad antilipoperoxidante. Cabe señalar que estos principios activos naturales poseen efectos benéficos para la salud humana y animal. Por lo tanto, preparados enriquecidos en polifenoles y o-difenoles-diterpénicos no sólo actuarían como antioxidantes de alimentos, sino además, podrían contribuir a mejorar la calidad de vida de los consumidores / Chemical degradation is a spontaneous and induced process by light, heat and the presence of metallic ions traces, factors which induce the formation of oxygen reactive species (ROS). To preserve foods from chemical degradation, food industries have used for a long time principally BHT and BHA; however, toxicity studies recently have been published and the international use of these antioxidants are under study. A possible alternative to replace BHT and BHA could be the use of natural extracts as preserving agents. Natural extracts have antioxidant properties due to the high poliphenols concentration and their capacity to scavenger oxygen radicals. These data permit postulate that natural extracts enriched in poliphenols compounds may prevent chemical degradation of foods, so preserving their nutritive and organoleptic properties. The aim of this work was to compared the capacity of BHT, an hydroalacoholic extract of Buddleja globosa (matico) and a dry extract of Rosmarinus officinalis (romero) to prevent the oxidation of lipids and thiol groups present in Oncorhynchus mykiss (rainbow trout) stakes. BHT and the extracts of matico and romero inhibited the lipoperoxidation and prevented the thiol oxidation of Oncorhynchus mykiss stakes, both phenomenon induced by Fe3+/ ascorbate. Protection of thiol oxidation seems to be mediated by the poliphenols present in the natural extract, and the antilipoperoxidant action would be mediated by the o-diphenol-diterpene. It is necessary to note that natural active principles induce benefic effects on human and animal health. Thus, natural preparations enriched in poliphenols and o-diphenol-diterpene would act as food antioxidants and besides improving the health of consumers

Comprueba los efectos cicatrizantes y antiinflamatorios, así como los posibles efectos tóxicos de los extractos acuoso, alcohólico y polvo micronizado de las hojas de Piper angustifolium R. & P., se identificaron los principios activos responsables de la actividad farmacológica, los cuales se determinaron como metabolites secundarios presentes en una fracción del extracto administrado, obteniéndose una fracción farmacológicamente más efectiva, por contener flavononas, fíavonas o isoflavonas. Experimentalmente se observó mejor efecto cicatrizante con la administración del extracto alcohólico por vía tópica que por la peroral en lesiones inducidas en lomo del ratón. El efecto citoprotector sobre úlceras producidas por estrés e indometacina en la mucosa gástrica de ratas y ratones fue más marcado, así como el efecto antisecretorio ai disminuir el volumen y número de miliequivalentes/iitro de iones hidrógeno de la secreción gástrica, evaluados por el procedimiento de píloro ligado en ratas. La toxicidad aguda en ratones por vía peroral, demostró una dosis letal 50 sobre 15,000 mg/kg, para el extracto acuoso y el micronizado; y 2366,2 mg/kg para el alcohólico. La subcrónica en ratas (3 meses), del extracto acuoso, a 15 y 45 mg/kg, por vía peroral; histopatológicamente no evidenció cambios morfológicos orgánicos; sin embargo hubo aumento de globulinas séricas y disminución de colesterol. También se hizó el seguimiento clínico a 12 pacientes ambulatorios, observándose una tendencia a la disminución de los puntajes según la escala de Liker utilizada antes y después de ocho síntomas característicos de la úlcera péptica; como son dispepsia, dolor epigástrico, dolores rítmicos, sensación de llenura, náuseas, pirosis, y sialorrea. / Tesis

Suddleia globosa Hoppe (Matico) es un arbusto que crece desde Santiago a Valdivia en Chile, se le atribuye tradicio nalmente efectos antiúlcerosos. La investigación farmacológica de esta planta se inició con el estudio histológico de las hojas y tallo, determinación de la composición quimica del extracto etanólico, purificación, determinación de la actividad antibacteriana, los bioensayos de Toxicidad en Artemia salina y se determinó la DL50 en ratones albinos Cepa CF-1. Se realizó la Verificación de la actividad antiulcerosa gástrica en diferentes modelos experimentales de inducción ulcerativa entre ellos: estrés por restricció n e hipotermia (4° C), estrés quirúrgico de ligadura de piloro e inmovilización, y por inoculación de Helicobacter pylori. y el estudio del efecto sobre la musculatura lisa en órganos aislados. En el estudio histológico, las hojas presenta excrece ncias en determinadas células ccn la apariencia de bolsa oleifera, como depósi to de compuestos volátiles y aromáticos, es una planta de estructura secundaria. De los estudios fitoquímicos del Extracto Etanólico de hojas y tallo (EFM)se encontró flavonoides, como Quercetina y Rutina, taninos, alcaloides, y compuestos fenó licos de los cuales se aisló 5 fraccio nes, por cromatografía en capa fina y por espectrofotometria UV; identificadas como F1: 6-Aquil - 4' - hidroxi - 7- 0 - Glicosil lsoflavona, F2: 5,7,8 - Trihidroxi - 4' - Q - Metil Flavona, F3: 5,7 - Dihidroxi - 6,8 - di-Q - Metil Flavona, F4: 5,7 - Dihidroxi - 6,8 - Dialquil Flavona, F5: 6,8 - Dialquil- 4'- hidroxí - 7 - O- Metil Isoflavona,. La mejor y mayor actividad biológica mostrada se obtuvo con el EFM. La CLso de Artemia salina fue 300 ppm y DLsoen ratones no mostró efecto hasta 2000 mg/Kg. En los estudios de actividad antiulcerosa del EFM frente a estrés e hipotermia demostró una protección del 85%, resultado estadísticamente significatívo (p < 0.05) similar al patrón Ranitidina, en el modelo quirúrgico de ligadura del píloro e inmovilización para inducció n ulcerativa el EFM protegió un 58%, frente a Ranitidina 54% y al Bismuto con 42% , y en el modelo inducidas por H. Pylori se verifica su actividad de protección y recuperación de la mucosa gástrica con un 60% de inhibición de ulceración mientras que Claritromicina + Ranitidina + Bismuto drogas de elección ejercen un 70% de esta inhibición. Finalmente se comprobó un marcado efecto relajante del S, globosa, en las contracciones intestinales de ileon y duodeno, especialmente aquellas inducidas por Aceti lcolina. La Suddleia globosa (Matico) presenta un marcado efecto antiulceroso en nuestros modelos experimentales. Los alcaloides, los taninos, flavonas e isoflavonas presentes en el extracto podrian ser los responsables por esta actividad, así como del efecto relajante en la musculatura lisa, posiblemente por antagonismo de Acetilcolina: confirmando un elevado potencial terapéutico. / Tesis

Investiga la composición química, la actividad antioxidante y el efecto fungistático sobre Candida albicans ATCC 10231 del aceite esencial de las hojas de Piper aduncum L. “matico”. Está investigación presenta un enfoque cuantitativo y utiliza un diseño experimental. El aceite esencial se obtuvo mediante destilación por arrastre de vapor de agua y la composición química se determinó mediante cromatografía de gases/espectrometría de masas (CG/EM). La actividad antioxidante fue evaluada mediante los métodos de captación de los radicales 2,2- difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH●) y 2,2`-azinobis (3-etilbezotiazolin)-6-sulfónico (ABTS●+). El efecto fungistático fue evaluado mediante el método de microdilución colorimétrica en caldo. Se identificaron 35 componentes químicos, de los cuales ocho representan el 76,53 % del área total del pico en el cromatograma Los principales compuestos volátiles fueron fenilpropanoides (1, 2, 4-trimetoxi-5-(1-propenil)- benceno (39,32 %) y metileugenol (12,85 %)), hidrocarburos sesquiterpenoides (germacreno D (7,52 %), biciclogermacreno (5,88 %), beta-cariofileno (2,82 %) y omega-cadineno (2,81 %)), un hidrocarburo monoterpenoide (beta-ocimeno (2,34 %)) y un monoterpenoide oxigenado (4,7,7-trimetilbiciclo [2.2.1] (2,99 %)). El aceite esencial (IC50 de 1087,359 µg/mL y de 147,832 µg/mL para DPPH● y ABTS●+, respectivamente) mostró baja actividad antioxidante comparado con el estándar Trolox® (IC50, 2 y 2,68 µg/mL para DPPH● y ABTS●+, respectivamente). Además, presentó valores bajos de TEAC de 1,839 y 17,79 μg Trolox/mg para DPPH● y ABTS●+, respectivamente. El aceite esencial (MIC, 1,24 mg/mL) también exhibió bajo efecto fungistático comparado con ketoconazol (MIC <0,0,03/mL). En conclusión, la actividad antioxidante y el efecto fungistático del aceite esencial de Piper aduncum L fueron bajos, sin embargo, el alto contenido de fenilpropanoides lo hace un candidato prometedor para futuras investigaciones. / Tesis