Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-03-18T18:57:31Z No. of bitstreams: 1 Carolina Cavalcante de Oliveira. Avaliação...pdf: 2043072 bytes, checksum: 9b851b7151151d31ece09f57762f2b0e (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-03-18T18:57:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Carolina Cavalcante de Oliveira. Avaliação...pdf: 2043072 bytes, checksum: 9b851b7151151d31ece09f57762f2b0e (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-03-18T18:58:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Carolina Cavalcante de Oliveira. Avaliação...pdf: 2043072 bytes, checksum: 9b851b7151151d31ece09f57762f2b0e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-18T18:58:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carolina Cavalcante de Oliveira. Avaliação...pdf: 2043072 bytes, checksum: 9b851b7151151d31ece09f57762f2b0e (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Introdução: A tuberculose (TB), doença crônica causada por Mycobacterium tuberculosis (Mtb), é uma das doenças infecciosas que mais acomete a população brasileira, com 2.832 óbitos em 2010. Na infecção causada pelo Mtb, a interação das células T com os macrófagos (MØs) infectados é fundamental na imunidade protetora contra o bacilo. A Mce1A é uma proteína da parede celular do Mtb que confere grande capacidade de aderência, invasão e sobrevivência em MØs. Contudo, a caracterização da proteína Mce1A pode fornecer um biomarcador para diagnóstico e monitoramento do tratamento. Nosso objetivo é avaliar a produção de IgG total anti-Mce1A em pacientes com TB e seus comunicantes domiciliares (CDTB). Material e métodos: Indivíduos diagnosticados com TB pulmonar e CDTB foram submetidos a coleta de sangue por punção venosa. O diagnóstico da TB foi baseado em quadro clínico e/ou radiografia sugestiva e/ou baciloscopia do escarro positiva. Nos CDTB, a infecção foi determinada a partir da reação do teste tuberculínico (TT) e avaliação radiográfica. Soro dos três grupos foi coletado e armazenado a -20ºC, até a determinação dos níveis de IgG total anti-Mce1A por meio de um ensaio imunoenzimático (ELISA). Resultados: Entre janeiro de 2012 e outubro de 2013 foram identificados 50 pacientes com TB pulmonar e 50 CDTB, dentre os quais 23 foram TT positivo e 27 foram TT negativo. A média de idade da população estudada foi de 37,8 anos (DP ± 20,4). O gênero masculino prevaleceu entre os pacientes com TB (68%), porém nos CDTB, o gênero feminino prevaleu (62%). A maioria dos indivíduos incluídos foram vacinados com BCG (71,4%). Cerca de 20% dos CDTB, TT negativo (18,5%) e TT positivo (20,8%), relataram que tiveram contato prévio com um doente com TB. Pacientes com TB tinham níveis de IgG anti-Mce1A (1,380±0,2950) estatisticamente maiores que indivíduos TT negativo (IgG anti-Mce1A: 1,049±0,2666). A diferença entre os grupos TT positivo (IgG anti-Mce1A 2.018±0.2807) e TT negativo (IgG anti-Mce1A: 1,049±0,2666) também foi estatisticamente diferente. Todos os grupos estudados tiverem diferença estatística na produção de anticorpos (p<0,0001). Não houve diferença estatística entre os pacientes com TB e indivíduos TT positivo (p>0,05). Conclusão: A produção de IgG total anti-Mce1A ocorreu em pacientes com TB e seus comunicantes domiciliares. Pacientes com TB e indivíduos TT positivo apresentam maior produção de anticorpos IgG total anti-Mce1A em comparação aos indivíduos TT negativo, sugerindo o potencial papel desta imunoglobulina como biomarcador de doença e de infecção tuberculosa. / Introduction: Tuberculosis (TB), a chronic disease caused by Mycobacterium tuberculosis (Mtb), is an infectious disease that affects the Brazilian population, with 2,832 deaths in 2010. In Mtb infection, the interaction of T cells with infected macrophages (MØs) is critical in protective immunity against the bacillus. The Mce1A is a cell wall protein of Mtb which gives great adhesion characteristics, invasion and survival in MØs. However, the characterization of protein Mce1A can provide a biomarker for diagnosis and monitoring of treatment. Our goal is to evaluate the production of total IgG anti-Mce1A TB patients and their household contacts (HHC). Material and Methods: Individuals diagnosed with pulmonary TB and HHC were subjected to blood collection by venipuncture. The diagnosis of TB was based on clinical and/or suggestive radiography and/or positive sputum smear. In HHC, infection was determined from the reaction of the tuberculin skin test (TST) and radiographic evaluation. Three groups of serum was collected and stored at -20 ° C until determination of the levels of anti-Mce1A total IgG by an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results: Between January 2012 and October 2013, 50 patients were identified with pulmonary TB and 50 HHC, of which 23 were positive TST and 27 were negative TST. The average age of the study population was 37.8 years (SD ± 20.4). The males predominated among patients with TB (68%), but the HHC, the prevailed females (62%). Most individuals vaccinated with BCG were included (71.4%). About 20% of HHC, negative TST (18.5%) and positive TST (20.8%) reported that they had previous contact with a TB patient. TB patients had levels of IgG anti-Mce1A (1.380 ± 0.2950) statistically higher than individuals negative TST (anti-Mce1A IgG: 1.049 ± 0.2666). The difference between the positive TST groups (anti-Mce1A IgG 2.018 ± 0.2807) and negative TST (anti-Mce1A IgG: 0.2666 ± 1.049) was also statistically different. All groups had statistically difference in antibody production (p <0.0001). There was no statistical difference between patients with TB and positive TST individuals (p> 0.05). Conclusion: The production of anti-Mce1A total IgG occurred in TB patients and their household contacts. TB patients and TST positive individuals have a higher production of anti- Mce1A IgG antibodies overall compared to individuals negative TST, suggesting the potential role of immunoglobulin biomarker for TB disease and infection.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-02-04T12:57:27Z No. of bitstreams: 1 Iukary Takenami Avaliação de biomarcadores....2015.pdf: 2420884 bytes, checksum: b10235421512081a9897b20afdf98354 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2016-02-04T12:57:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Iukary Takenami Avaliação de biomarcadores....2015.pdf: 2420884 bytes, checksum: b10235421512081a9897b20afdf98354 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-04T12:57:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Iukary Takenami Avaliação de biomarcadores....2015.pdf: 2420884 bytes, checksum: b10235421512081a9897b20afdf98354 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz, Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / INTRODUÇÃO: A tuberculose (TB), doença crônica infecciosa causada por Mycobacterium tuberculosis, é considerada um grave problema de saúde pública no país. A caracterização de antígenos protéicos e/ou lipídios que induzem uma resposta imunológica no hospedeiro, torna-se um importante passo para o desenvolvimento de novas ferramentas de diagnóstico e resposta terapêutica. Dentre os diferentes antígenos, em especial a mammalian cell entry protein 1A (proteína Mce1A), e os fosfolipídios da parede celular do bacilo como a cardiolipina (CL), os fosfatidilinositol (FI), fosfatidilcolina (FC), fosfatidiletanolamina (FE) e o sulfatide (SL), são, em sua maioria altamente imunogênicos, podendo então ser úteis no sorodiagnóstico. Portanto, o objetivo do estudo é avaliar a produção de anticorpos anti- Mce1A e anti-fosfolipídios como biomarcadores no diagnóstico e no monitoramento do tratamento da TB pulmonar. Além disso, o estudo também objetivou avaliar o perfil de citocinas e quimiocinas produzidas em sobrenadantes de cultura após estímulo in vitro com a proteína Mce1A. PACIENTES E MÉTODOS: O estudo foi conduzido no 6º Centro de Saúde Rodrigo Argolo e no Instituto Brasileiro para Investigação da Tuberculose (IBIT). A população de estudo foi composta por pacientes recém diagnosticados com TB pulmonar, seus respectivos comunicantes domiciliares (infectados por M. tuberculosis e saudáveis) e pacientes diagnosticados com outras doenças pulmonares. RESULTADOS: Pacientes com TB produzem uma forte e consistente resposta de anticorpos anti-Mce1A e anti-fosfolipídios (anti-CL, anti-FE, anti-FI e anti-FC) quando comparados com os indivíduos do grupo controle. Além disso, após início do tratamento os níveis de anti-Mce1A e anti-fosfolipídios diminuem significativamente. O sobrenadante de culturas dos pacientes TB, após cultura com Mce1A, induzem uma acentuada produção de TNF, o que não se observa nas demais citocinas e quimiocinas avaliadas. CONCLUSÃO: Estes resultados sugerem que os anticorpos anti- Mce1A e anti-fosfolipídios desempenham potencial papel como biomarcadores sorológicos no diagnóstico da TB pulmonar. Além disso, a proteína Mce1A parece desempenhar um papel importante na produção de TNF, que pode contribuir com a indução de necrose pelo bacilo, permitindo sua evasão das respostas imunes e favorecendo a dispersão do bacilo para outras células não infectadas. / INTRODUCTION: Tuberculosis (TB), chronic infectious disease caused by Mycobacterium tuberculosis, is still a serious public health problem in the country. The characterization of protein and/or lipids antigens that induce an immune response in the host, it is an important step in the development of new diagnostic tools and monitoring TB treatment response. Among the different antigens, particularly mammalian cell entry protein 1A (Mce1A protein), and phospholipids from the cell wall of bacillus such as cardiolipin (CL), phosphatidylinositol (PI), phosphatidylcholine (PTC), phosphatidylethanolamine (PE) and sulfatide (SL), are highly immunogenic and can be used for improvement of the serodiagnosis. Therefore, the aim of the study is to evaluate the production of anti-Mce1A and anti-phospholipids as biomarkers for diagnosis and monitoring of TB treatment response. In addition, the study also aimed to evaluate the profile of cytokines and chemokines produced in vitro after stimulation with Mce1A protein in culture supernatants. PATIENTS AND METHODS: The study was conducted on the 6º Centro de Saúde Rodrigo Argolo and the Instituto Brasileiro para Investigação da Tuberculose (IBIT). The study population consisted of newly diagnosed pulmonary TB patients, their household contacts (infected by M. tuberculosis and healthy) and patients diagnosed with other lung diseases. RESULTS: Patients with TB produce a strong and consistent response to anti-Mce1A and anti-phospholipids (anti-CL, anti-PE, anti- PI and anti-PTC) than those in the control groups. Furthermore, after the beginning of the treatment, anti-Mce1A and anti-phospholipid levels were significantly decreased compared with TB patient at baseline. Culture supernatants of TB patients after stimulation with Mce1A induce a strong TNF production, which is not observed in the other evaluated cytokines and chemokines. CONCLUSION: These results suggest that anti-Mce1A and anti-phospholipids play role as potential serum biomarker in the diagnosis of pulmonary TB. Furthermore, Mce1A protein appears to play an important role in TNF production, which may contribute to the induction of necrosis by M. tuberculosis, allowing for avoidance of immune responses and facilitating the dispersion of bacillus to other uninfected cells.