In Acute Myocardial Infarction (AMI), inflammation is a prerequisite for healing but it can paradoxically extend tissue injury; hence it needs to be modulated. Here, we investigated the role of the pro resolving GPCR FPR2/ALX and its agonist Annexin A1 (AnxA1) in AMI using mice lacking of the Fpr2/3 genes and with an in-frame GFP gene ‘knocked-in’. We developed protocols aimed to determine GFP expression as an indication of Fpr2 gene activity. Also, the Left Anterior Descending Coronary Artery of male Fpr2/3 KO and littermate controls (WT) was occluded for 30min and re-opened for 90min. At the end tissue injury and inflammatory response were studied. A significant proportion of Fpr2/3 KO perished during the procedure. The rest survived up to 90 min and exhibited a larger infarct size, with higher troponin I and inflammation markers (KC, TNFα) than WT animals. At the end of reperfusion, Fpr2/3 KO displayed an unbalanced production of pro and anti-inflammatory lipids (higher PGE2, PGI2, LTB4 and attenuated PGA1, RvD2, LXA4) and a deregulated activation of the cardioprotective IL-6/JAK/STAT3 signalling. Administration of AnxA1 afforded cardioprotection (reduction of infarct size; Troponin I, Caspase3 activity and TNFα) in WT but not in Fpr2/3 KO. A parallel in vitro investigation on the functional FPR2/ALX domains required by AnxA1 and other agonists was also conducted. HEK-293 cells transfected with FPR1, FPR2/ALX and FPR1/FPR2 chimeric receptor were used and calcium flux, 4 pERK and gene modulation analysed. AnxA1 required the N-terminus and the II and III extracellular loops of FPR2/ALX to evoke canonical responses. SAA interacted/activated the I and the II extracellular loops of FPR2/ALX, whereas the compound 43 suffices the I extracellular loop. In summary, the FPR2/AnxA1 pathway exerts a protective role in AMI. AnxA1 mimetic that activated selective FPR2/ALX domains can be synthetize to prevent tissue damage caused by AMI.

Made available in DSpace on 2014-08-26T17:31:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 69577.pdf: 1300093 bytes, checksum: c7113316350bfbf1edebdf53c7e1f74c (MD5) / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Fernandes Figueira. Departamento de Ensino. Programa de Pós-Graduação em Saúde da Criança e da Mulher. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / O estado nutricional (EN) é marcador de prognóstico para pacientes com Fibrose Cística (FC) . O objetivo deste trabalho foi avaliar a associação do EN com o perfil inflamatório, prática de atividade física e ingestão alimentar de crianças e adolescentes com FC. O estudo foi observacional do tipo transversal com indivíduos acompanhados no Instituto Fernandes Figueira, da Fundação Osvald o Cruz. Foram selecionados 46 crianças de oito a 18 anos com diagnóstico con firmado de FC. A avaliação do estado nutricional foi feita pelos indicadores altura/idade, pelo índice de massa corporal/ Idade (IMC/I) e pelo IMC em kg/m2 (OMS 2006). Para compos ição corporal utilizou - se a Equação de Slaughter (1988), Circunferência e área muscular do braço e dobra cutânea tricipital. A ingestão dietética foi avaliada pelo recordatório alimentar de 24horas. As citocinas (IL - 1, IL6 e IL 8) por método Elisa e a prot eína C reativa ( PCR ) por nefelometria Avaliou - se a associação entre estado nutricional e as variáveis estudadas por modelos bivariados e multivariados de regressão linear com significância p<0,05. A média de idade encontrada foi de 11,9±2,83 anos, sendo 6 0,9% do gênero feminino, 57,8% apresentou comprometimento do estado nutricional pelo IMC/I, 37,8% e 52,2% pela CMB e AMB respect ivamente e 15,6% baixa estatura . A DCT apresentou - se r eduzida em 17,8% dos pacientes , 26,1% das crianças estavam com percentual de gordura baixo segundo a equação de Slaughter, . A med ia da razão DCSe/DCT apresentou risco e/ou elevação da distribuição de gordura na região abdominal em 55,6% dos pacientes , 22,9% praticou de atividade física, 76,1% atingiu a recomendação de ingest ão energética, sendo significativamente maior no grupo de pacientes em risco ou desnutridos. A razão de ingestão de n6/n3 foi adequada mas os l ipídeos foram consumidos a baixo do percentual recomendado em 54,3% dos casos e os carboidratos ac ima em 32,6% . Os valores de PCR foram inferiores a 0,5mg/dL (prova inflamatória negativa) em 71,1% dos casos. A maioria , 52,2% e 62,5% dos pacientes desnutridos segundo a AMB e CMB respectivamente, possuía esta medida maior que 0,5mg/dL. O TNF - α e a Il 8 foram as únicas citocinas que se associaram de mod o significativo com o IMC. N a análise de regressão linear múltipla as variáveis estatisticamente significativas foram: IL - 8 , Atividade física e VET. Os desfechos estudados foram, percentual de g ordura, adequação do IMC , CMB e AMB. A análise dos compartimentos corporais foi o método mais sensível de avaliação do estado nutricional, o tecido gorduroso foi preservado e a ingestão calórica adequada não foi capaz de preservar a MCM o que sugere um mec anismo semelhante ao da caquexia. O consumo total de lipídeos ainda foi baixo apesar da sua importância para FC, com adequação da razão n6/n3. A dosagem sérica de citocinas não parecem demonstrar a inflamação sistêmica. A única citocina que se associou p ositivamente com o percentual de gordura corporal foi a IL - 8 e parece mais relacionada ao tecido adiposo visceral do que a inflamação presente na FC. Desta forma na FC também deve ser dada maior atenção aos fatores como a pratica da atividade física e ingestão alimentar principalmente de lipídeo, assim como a medida da adiposidade abdominal na avaliação nutricional para prevenção de doenças cardiovasculares. / Nutritional status is a prognostic marker in patients with Cystic Fibrosis. The aim of this study was to evaluate the association of the inflammatry status, physical activity and food intake of children and adolescents with CF. The stud y was observational, cross - sectional subjects followed by the Fernandes Figueira Institute, Oswaldo Cruz Foundation. We selected 46 patients from 8 to 18 years old with a confirmed diagnosis of CF. The nutritional status was made by anthropometric height/a ge and body mass index (BMI) in kg/m2 (WHO 2006). For body composition the equation of Slaughter (1988) was used, mid - upper arm circumference and upper arm muscle area and triceps skinfold thickness. Dietary intake was assessed by a 24 - hour dietary recall. Cytokines by ELISA and CRP for nefelometria evaluated the association between nutritional status and the variables studied by bivariate models and multivariate linear regression with significance p <0.05. The average age was 11.9 ± 2.83 years, 60.9% femal e, 57.8% had poor nutritional status by BMI/ I, 37.8% and 52.2% for the MUAC and UAM respectively an d 15.6% short stature. The TSF was presented reduced in 17.8% of patients and 26.1% according to the equation of Slaughte r. The average of the ratio SST / TSF showed a distribution of abdominal fat, 22.9% practiced physical activity, 76.1% reached the recommended energy intake, was significantly higher in patients at risk or malnourished. The ratio n6/n3 intake was adequate but lipids were consumed below the rec ommended percentage in 54.3% of cases and 32.6% up on carbohydrates. CRP values in 71.1% o f cases were less than 0.5 mg/ dL. Most malnourish ed patients according to the UMA and this measur e had CRP greater than 0.5 mg/dL. TNF - α and Il 8 were the only cyto kines that were associated significantly with BMI. After multiple linear regression analysis the variables were statistically significant: IL - 8 , Physical activity and VET. The body composition analysis was the most sensitive method for assessing the nutri tional status, the fat tissue was preserved and adequate caloric int ake was not able to preserve FFM suggesting a mechanism similar to cachexy . The total lipid was still low despite its im portance for CF , with adequacy ratio n6/n3. Serum cytokines do not a ppear to systemic inflammation. The only cytokine that was positively associated with body fat percentage was the IL - 8 and seems more related to visceral adipose tissue than inflammation present in CF. CRP may be a marker of malnutrition. Thus CF should also be given greater attention to environmental factors such as the practice of physical activity and food intake mainly lipid ,as the measurement of waist circumference in the nutritional assessment for cardiovascular disease prevention.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / IntroduÃÃo: A via da hemeoxigenase-1 (HO-1) possui aÃÃes antioxidantes. Por outro lado, a ciclo-oxigenase 2 (COX-2) està envolvida na patogÃnese de muitas doenÃas inflamatÃrias e sua inibiÃÃo seletiva reduz eventos inflamatÃrios sem efeitos gÃstricos. Entretanto, ensaios clÃnicos demonstraram que os inibidores seletivos de COX-2 estÃo associados com efeitos cardiovasculares. Objetivo: Avaliar a interaÃÃo entre as vias da HO-1/BVD/CO e da COX-2 no controle da nocicepÃÃo e da inflamaÃÃo. MÃtodos: Protocolo 1: No modelo de contorÃÃo abdominal induzido por Ãcido acÃtico, camundongos foram prÃ-tratados com etoricoxibe (inibidor seletivo da COX-2; 0,1, 1 ou 10mg/Kg; i.p) ou com moduladores da via HO-1/BVD/CO, a saber: Hemina (substrato da via HO-1/BVD/CO; 0,3, 1, ou 3mg/Kg; s.c), DMDC (doador de CO; 0,00025, 0,025 ou 2,5ÂMol/Kg; s.c) ou ZnPP-IX (inibidor especÃfico da HO-1; 1, 3 ou 9mg/Kg; s.c). Os animais prÃ-tratados com etoricoxibe ou com os moduladores da via HO-1/BVD/CO receberam, apÃs 30 e 60 min, respectivamente, a injeÃÃo (i.p) de Ãcido acÃtico, seguido da quantificaÃÃo do nÃmero de contorÃÃes abdominais. Realizou-se ainda no mesmo modelo a coadministraÃÃo de doses inefetivas de etoricoxibe com hemina ou DMDC e de uma dose efetiva de etoricoxibe com ZnPP-IX. ApÃs 4 h da injeÃÃo de Ãcido acÃtico, a bilirrubina (produto da conversÃo de BVD pela enzima BVD redutase) foi entÃo dosada no lavado peritoneal. Protocolo 2: No modelo de placa quente, os camundongos foram prÃ-tratados com hemina (0,3, 1, ou 3mg/Kg; s.c), DMDC (0,00025, 0,025 ou 2,5ÂMol/Kg; s.c) ou ZnPP-IX (1, 3 ou 9mg/Kg; s.c) e, apÃs 30, 60 e 90 min, foi medido o tempo de permanÃncia dos animais na placa quente (55ÂC). Protocolo 3: No modelo de edema de pata induzido por carragenina (Cg), ratos foram prÃ-tratados com etoricoxibe (0,1, 1 ou 10mg/Kg; i.p) 30 min antes de receber a injeÃÃo sub-plantar na pata traseira direita de Cg, ou 60 min antes com Hemina (0,3, 1, ou 3mg/Kg; s.c), DMDC (0,25, 2,5 ou 25ÂMol/Kg; s.c) ou ZnPP-IX (1, 3 ou 9mg/Kg; s.c). Realizou-se ainda no mesmo modelo a coadministraÃÃo de doses nÃo efetivas de etoricoxibe com hemina ou DMDC e de uma dose efetiva de etoricoxibe com ZnPP-IX. Em seguida, o edema da pata foi medido por meio de um pletismÃmetro 1, 2, 3 e 4 h apÃs 60 min da injeÃÃo de Cg. ApÃs 4 h da injeÃÃo de Cg, amostras de tecidos da pata foram coletadas para anÃlise imunohistoquÃmica com anticorpos anti-COX-2 e anti-HO-1. Resultados: Hemina ou DMDC reduziram (p<0,05) o nÃmero de contorÃÃes e o edema de pata na 3 h, enquanto que o ZnPP-IX potencializou (p<0,05) o efeito do Ãcido acÃtico aumentando (p<0,05) o nÃmero de contorÃÃes e o edema de pata na 3 h, intensificando a aÃÃo da Cg. A coadministraÃÃo de etoricoxibe com hemina ou DMDC reduziu (p<0,05) o nÃmero de contorÃÃes. A coadministraÃÃo de etoricoxibe com DMDC reduziu (p<0,05) o edema de pata na 3 h, o que nÃo foi observado de forma significativa (p>0,05) na co-administraÃÃo de etoricoxibe com hemina. Jà na coadministraÃÃo de etoricoxibe com ZnPP-IX, observou-se que o ZnPP-IX reduziu o efeito analgÃsico e antiedematogÃnico do etoricoxibe. Nos modelos de placa quente, a administraÃÃo de hemina, DMDC ou ZnPP-IX nÃo afetou o tempo de permanÃncia dos camundongos na placa. ConclusÃo: A via da HO-1/BVD/CO à ativada nos modelos de contorÃÃo por Ãcido acÃtico e edema de pata por Cg, mas parece nÃo participar na mediaÃÃo central da nocicepÃÃo. O efeito analgÃsico e antiedematogÃnico do etoricoxibe depende, pelo menos parcialmente, da participaÃÃo da via da HO-1/BVD/CO. / Introduction: Heme oxygenase-1 (HO-1) plays a preventive role in oxidative stress. In contrast, COX-2 is involved in the pathogenesis of many inflammatory diseases and COX-2 selective inhibition has been shown to be effective in reversing inflammation without gastric side effects. However, serious cardiovascular effects of some selective COX-2 inhibitors emerged from clinical studies. Purpose: To assess the interaction between heme oxygenase -1/ biliverdin/ carbon monoxide (HO-1/BVD/CO) and cyclooxygenase-2 (COX-2) pathways for nociception and inflammation control in rats and mice. Methods: Protocol 1: In the abdominal writhe model induced by acetic acid, mice were pretreated with etoricoxib (selective COX-2 inhibitor; 0.1, 1 or 10mg/Kg; i.p) or with HO-1/BVD/CO pathway modulators, knowingly: Hemin (substrate of HO-1/BVD/CO pathway; 0.3, 1 or 3mg/Kg; s.c), DMDC (CO donor; 0.00025, 0.025 or 2.5ÂMol/Kg; s.c) or ZnPP-IX (specific HO-1 inhibitor; 1, 3 or 9mg/Kg; s.c). Animals pretreated with etoricoxib or HO-1/BVD/CO pathway modulators received the acetic acid injection (i.p.) after 30 and 60 min, respectively. Next, the number of abdominal contortions was quantified. In the same model, ineffective doses of etoricoxib were coadministered with hemin or DMDC and an effective dose of etoricoxib with ZnPP-IX. Four hours after the acetic acid injection, bilirubin levels (product of BVD conversion by the BVD reductase enzyme) were diagnosed in the peritoneal lavage. Protocol 2: In the hot-plate model, mice were pretreated with hemin (0.3, 1 or 3mg/Kg; s.c), DMDC (0.00025, 0.025 or 2.5ÂMol/Kg; s.c) or ZnPP-IX (1, 3 or 9mg/Kg; s.c) and, after 30, 60 and 90 min, the animalsâ response latency on the hot plate (55ÂC) was measured. Protocol 3: In the paw edema model induced by carrageenin (Cg), rats were pretreated with etoricoxib (0.1, 1 or 10mg/Kg; i.p) 30 min before receiving the subplantar injection of Cg in the right back paw, or 60 min before receiving injections with Hemin (0.3, 1 or 3mg/Kg; s.c), DMDC (0.25, 2.5 or 25ÂMol/Kg; s.c) or ZnPP-IX (1, 3 or 9mg/Kg; s.c). In the same model, ineffective doses of etoricoxib were coadministered with hemin or DMDC and an effective dose of etoricoxib with ZnPP-IX. Next, the paw edema was measured with a plethysmometer 1, 2, 3 and 4 h at 60 min after the Cg injection. Four hours after the Cg injection, paw tissue samples were collected for immunohistochemical analysis with anti-COX-2 and anti-HO-1 antibodies. Results: Hemin or DMDC reduced (p<0.05) the number of writhes and the paw edema in the 3rd h, while ZnPP-IX potentiated (p<0.05) the effect of acetic acid by increasing (p<0.05) the number of writhes and the paw edema in the 3rd h, intensifying Cg action. The coadministration of etoricoxib with hemin or DMDC reduced (p<0.05) the number of writhes. Coadministration of etoricoxib with DMDC reduced (p<0.05) the paw edema in the 3rd h, which was not significantly observed (p>0.05) when etoricoxib was coadministered with hemin. When etoricoxib was coadministered with ZnPP-IX, it was observed that ZnPP-IX reduced the analgesic and antiedematogenic effects of etoricoxib. In the hot-plate model, hemin, DMDC or ZnPP-IX administration did not affect the miceâs response latency on the plate. Conclusion: The HO-1/BVD/CO pathway is activated in the abdominal writhe model induced by acetic acid and paw edema by Cg, but does not seem to participate in the central mediation of nociception. The analgesic and antiedematogenic effect of etoricoxib at least partially depends on the participation of the HO-1/BVD/CO pathway.