Submitted by Claudia Rocha (claudia.rocha@udesc.br) on 2018-02-15T15:43:47Z No. of bitstreams: 1 PGCA16MA185.pdf: 387046 bytes, checksum: c4b42029e4e9bd31fb6f0967fb2fe202 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-15T15:43:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA16MA185.pdf: 387046 bytes, checksum: c4b42029e4e9bd31fb6f0967fb2fe202 (MD5) Previous issue date: 2016-02-22 / Capes / The inclusion of pasture in dairy feeding systems based on a total mixed ration (TMR) reduces feed costs, benefits herd health and reduces environmental impact. The present study aimed to evaluate the effect of ryegrass pasture (Lolium multiflorum Lam.) combined with a partial TMR or a TMR on the enteric methane emissions, dry matter intake (DMI), and performance of dairy cows from mid- to late lactation. The experimental treatments included 100% TMR (control), partial TMR + 6 h of continuous grazing (0900 – 1500 h) and partial TMR + 6 h of grazing that was divided into 2 periods of 3 h after milking (0900 – 1200 h; 1530 – 1830 h). Twelve F1 cows (Holstein × Jersey; 132 ± 44 days in milk) were divided into 6 lots and distributed in a 3 × 3 Latin square design with 3 periods of 21 d (15 d of adaptation and 6 d of evaluation). Ryegrass pasture was used, and the TMR was composed of 80% corn silage, 18% soybean meal, and 2% mineral and vitamins mixture, based on dry matter (DM). The same mixture was used for cows with access to pasture. The total DMI (average = 16.1 kg/d) and milk production ( average = 20.0 kg/d) were similar for all cows; however, the pasture DMI (7.4 vs. 6.0 kg/d) and grazing period (+ 40 min/d) were higher in cows that had access to pasture for 2 periods of 3 h compared to those that grazed for a continuous 6 h period. Methane emission was higher (656 vs. 547 g/d) in confined cows than in those receiving partial TMR + pasture. The inclusion of ryegrass pasture in the diet of dairy cows maintained animal performance and reduced enteric methane emissions. The percentage of grazed forage in the cow’s diet increased when access to pasture was provided in 2 periods after morning and afternoon milking / A inclusão da forragem em sistemas de produção de leite baseados em ração totalmente misturada (RTM) reduz os custos com a alimentação, traz benefícios à saúde do rebanho e reduz o impacto ambiental. O presente estudo objetivou avaliar o efeito do pastejo de azevém (Lolium multiflorum Lam.) combinado com o uso de RTM parcial em comparação à RTM sobre a emissão de metano, a ingestão de matéria seca (IMS) e o desempenho das vacas no terço médio de lactação. Os tratamentos experimentais foram 100% RTM (controle), RTM parcial + 6h de pastejo contínuo (09:00–15:00h) e RTM parcial + 6 h de pastejo divididos em dois períodos de três horas (09:00 – 12:00 h; 15:30 – 18:30h). Doze vacas F1 (Holandês × Jersey; 132 ± 44 DEL) foram divididas em seis lotes e distribuídas em um Quadrado latino com três períodos de 21 dias (15 dias de adaptação e 6 de dias avaliação). O pasto utilizado foi o azevém e a RTM foi composta de 80% de silagem de milho, 18% farelo de soja, e 2% de mistura mineral e vitaminas (na matéria seca, MS). A mesma mistura foi utilizada para as vacas com acesso ao pasto. A IMS total (média = 16,1 kg MS/dia) e a produção de leite (média = 20,0 kg leite/dia) foram similares entre os tratamentos, entretanto, a IMS de pasto (7,4 vs. 6,0 kg/d) e o tempo de pastejo (+ 40 min/d) foram superiores nas vacas com acesso ao pasto por dois períodos de 3h quando comparadas às vacas com acesso ao pasto por 6h contínuas. A emissão de metano foi maior (656 vs. 547 g/d) nas vacas confinadas do que nos animais recebendo RTM parcial + pasto. A inclusão de pasto de azevém na dieta de vacas leiteiras recebendo RTM manteve o desempenho animal e reduziu a emissão de metano entérico. A proporção de forragem pastejada aumentou nas vacas com acesso ao pasto quando o período de acesso foi dividido em dois períodos após a ordenha da manhã e a ordenha da tarde

Submitted by SÉRVIO TÚLIO JACINTO REIS (servio.reis@gmail.com) on 2018-06-04T14:06:41Z No. of bitstreams: 1 Tese Sérvio Túlio Reis.pdf: 4127745 bytes, checksum: 9e6f9289a637e59206224c44afeb408a (MD5) / Approved for entry into archive by Maria Lucia Martins Frederico null (mlucia@fca.unesp.br) on 2018-06-04T16:49:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 reis_stj_dr_botfca.pdf: 5253246 bytes, checksum: 87687054add716d5e1e2cb1d037aae42 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-04T16:49:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 reis_stj_dr_botfca.pdf: 5253246 bytes, checksum: 87687054add716d5e1e2cb1d037aae42 (MD5) Previous issue date: 2018-04-06 / Uma das principais demandas para peritos médicos veterinários é a investigação forense dos crimes contra a fauna. No Brasil, grande parte dos crimes contra a fauna está relacionada ao tráfico de animais silvestres, cujas condutas envolvem a captura, transporte e comércio ilegais de indivíduos. Todas essas atividades implicam também em diversas formas de maus-tratos aos animais. O presente trabalho foi desenvolvido com o objetivo de entender como os policiais ambientais percebem o combate a crimes contra animais silvestres, adequar e padronizar o exame de corpo de delito aplicado às aves da fauna silvestre nativa, e desenvolver um aplicativo móvel que facilite as coletas de dados dos exames realizados em campo. Como resultado, foi desenvolvido o Protocolo de Exame em Bem-estar Animal de Aves Silvestres (PEBEA – Aves Silvestres). O protocolo inclui um formulário de avaliação do bem-estar de aves silvestres composto por 26 indicadores, representando as Cinco Liberdades, subdivididos nas categorias nutricional, de conforto, de saúde e comportamental. Os resultados obtidos demonstram que o protocolo permite a identificação de pontos críticos e o auxílio nas ações de fiscalizações e investigações policiais de casos suspeitos de maus-tratos, contribuindo, assim, para a redução do sofrimento e o incremento da qualidade de vida dos animais envolvidos.

Orientador: Iveraldo dos Santos Dutra / Coorientador: Elerson Gaetti Jardim Junior / Banca: Ana Carolina Borsanelli / Banca: Luiz Augusto do Amaral / Resumo: As doenças periodontais provocam inflamações dos tecidos de proteção e sustentação dos dentes. Na gengivite e gengivite necrosante, que são percursores da periodontite, a inflamação está associada à formação do biofilme bacteriano e à resposta imune do hospedeiro. O objetivo geral do presente trabalho foi avaliar a eficácia da virginiamicina no controle da gengivite e gengivite necrosante em bezerros, com destaque para o monitoramento da microbiota subgengival associada à doença e da condição periodontal que caracterizam essas enfermidades. Dez bezerros, randomizados e distribuídos em dois grupos, foram mantidos sob o mesmo manejo em pastejo rotacionado em área recém-reformada de Panicum maximum var. Massai e Mombaça. Por 18 semanas consecutivas, um dos grupos (Grupo Virginiamicina, n=5) recebeu via top-dressing, diariamente, 340 mg de Virginiamicina, enquanto o Grupo Controle (n=5) não recebeu o produto. A avaliação clínica da cavidade bucal do Grupo Controle (n=5) e do Grupo Virginiamicina (n=5), foi realizada semanalmente, enquanto que a coleta de material para a avaliação microbiológica foi quinzenal. Na avaliação microbiológica, pela reação da cadeia da polimerase (PCR) utilizou-se os iniciadores de vinte e cinco microrganismos: Actinomyces israelii, Actinomyces naeslundii, Archae, Eikenella corrodens, Campylobacter spp., Fusobacterium nucleatum, Fusobacterium necrophorum, Mollicutes, Parvimonas micra, Porphyromonas asaccharolytica, Porphyromonas endodontalis, Porphyromo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Periodontal diseases cause inflammation of the protective and supporting tissues of the teeth. In gingivitis and necrotizing gingivitis, which are precursors of periodontitis, inflammation is associated with the formation of the bacterial biofilm and the immune response of the host. The general objective of the present study was to evaluate the efficacy of virginiamycin in the control of gingivitis and necrotizing gingivitis in calves, with emphasis on the monitoring of the subgengival microbiota associated with the disease and the periodontal condition that characterize these diseases. Ten calves, randomized and distributed in two groups, were kept under the same management in rotational grazing in a newly reformed area of Panicum maximum var. Massai and Mombasa. For 18 consecutive weeks, one of the groups (Virginiamycin group, n = 5) received topical dressing daily 340 mg of Virginiamycin, while the control group (n = 5) received no product. The clinical evaluation of the oral cavity of the Control Group (n = 5) and the Virginiamicina Group (n = 5) was performed weekly, while the material collection for the microbiological evaluation was biweekly. In the microbiological evaluation, primers of twenty-five microorganisms were used: Actinomyces israelii, Actinomyces naeslundii, Archae, Eikenella corrodens, Campylobacter spp., Fusobacterium nucleatum, Fusobacterium necrophorum, Mollicutes, Parvimonas micra, Porphyromonas asaccharolytica, Porphyromonas endodontalis, Porphyromona... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Johnny Rodrigues (johnnyrodrigues@ufcg.edu.br) on 2018-09-04T23:14:49Z No. of bitstreams: 1 EXPEDITO KENNEDY ALVES CAMBOIM - TESE PPGMV 2012..pdf: 1710872 bytes, checksum: c527311a481ea2baaf5080340bd08c0c (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-04T23:14:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EXPEDITO KENNEDY ALVES CAMBOIM - TESE PPGMV 2012..pdf: 1710872 bytes, checksum: c527311a481ea2baaf5080340bd08c0c (MD5) Previous issue date: 2012-11-09 / O objetivo deste trabalho foi isolar e identificar bactérias capazes de degradar fluoroacetato de sódio (FS) em amostras de solo e plantas, coletadas em áreas onde são encontradas plantas que contêm fluoroacetato tais como Mascagnia rigida e Palicourea aenofusca. As amostras foram cultivadas em meio mineral acrescido de 20 mmol L−1 de fluoroacetato de sódio. Através do sequenciamento do gene 16S rRNA os sete isolados foram identificados como Paenibacillus sp. (ECPB01), Burkholderia sp. (ECPB02), Cupriavidus sp. (ECPB03), Staphylococcus sp. (ECPB04), Ancylobacter sp. (ECPB05), Ralstonia sp. (ECPB06), e Stenotrophomonas sp. (ECPB07). Todos os sete isolados degradaram o FS contido no meio, alcançando uma taxa de degradação de 20 mmol L−1 de íon flúor. Dos isolados, seis são descritos pela primeira vez como capazes de degradar FS. No futuro, alguns destes microorganismos podem ser utilizados para estabelecer no rúmen uma população bacteriana capaz de degradar o fluoroacetato de sódio e proteger ruminantes de intoxicações por este composto.

Submitted by Gustavo Caixeta (gucaixeta@gmail.com) on 2017-03-02T14:53:17Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1647737 bytes, checksum: c03cc156a7f3fea7cedd1183ca98a1e2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-02T14:53:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1647737 bytes, checksum: c03cc156a7f3fea7cedd1183ca98a1e2 (MD5) Previous issue date: 2015-07-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES, Brasil / A mastite é uma doença que causa muitos prejuízos aos rebanhos leiteiros gerando inúmeras perdas econômicas. No Brasil, é a doença de maior impacto para a bovinocultura, pois reduz a produção e qualidade de leite e compromete o animal, podendo causar sua morte precoce. O seu controle é realizado com o uso de antimicrobianos comercias aos quais as bactérias podem desenvolver resistência. Ao mesmo tempo, tem-se buscado alternativas de controle e dentre estas, o uso de compostos naturais com propriedades antimicrobianas. Das sementes do fruto da espécie Carpotroche brasiliensis é extraído um óleo com propriedades antimicrobianas. Neste sentido, este trabalho constituiu-se no isolamento do ácido graxo ciclopentênico majoritário (ácido hidnocárpico) que constitui o óleo fixo do extrato hexânico das sementes e obtenção de derivados semissintéticos potencialmente ativos. Foram obtidos onze derivados, dos quais quatro ésteres e sete amidas a partir do ácido hidnocárpico, sendo seis inéditos estruturalmente, ainda não relatados na literatura. Todos os derivados e o composto isolado foram caracterizados a partir de técnicas espectroscópicas e 13 espectrométricas (IV, RMN de H e de C e CG-EM). Tanto o ácido hidnocárpico como seus derivados foram submetidos a ensaios de atividade antimicrobiana sobre as bactérias S. agalactiae e E. coli, dois patógenos que causam mastite contagiosa e ambiental, respectivamente. O éster metílico do ácido hidnocárpico (derivado éster 1) apresentou inibição de S. agalactiae na concentração de 1 mg mL -1 . Para a E. coli, os compostos não apresentaram atividade. Este estudo serve de base para o conhecimento da composição química das sementes de C. brasiliensis e seu uso potencial como material de partida para a preparação de novos derivados bioativos e uma possível aplicação destes compostos como antibacterianos. / Mastitis is a disease that causes a lot of damage on the dairy herds, producing innumerable economic losses. In Brazil, it is the disease of greatest impact on the cattle, which reduces production and quality of milk and compromises the animal health, probably causing his untimely death. The control is performed using antibiotics that the bacteria developed resistance. Consequently, it has been sought alternative control, as the use of fixed oil with antimicrobial properties. Oil with antimicrobial properties is extracted from the seed of the fruit Carpotroche brasiliensis species. Therefore, this study has proposed to isolate the majority cyclopentenyl fatty acid which is the oil, and obtain derived bioactive of hexane extract from the seeds. Were obtained eleven derivatives of which four ester derivatives and seven amide derivatives from isolated cyclopentenyl fatty acid, including six structurally unpublished, and not reported in the literature. All the derivatives and isolated compound were characterized from spectroscopic and spectrometric techniques (IR, 1 H and 13 C NMR and CG-MS). Both derivatives and the substance isolated (hydnocarpic acid) were submitted to antimicrobial activity tests on the bacteria S. agalactiae and E. coli, two infectious pathogens that are responsible to cause contagious mastitis and environmental mastitis respectively. The hydnocarpic acid methyl ester (ester derivative 1) showed inhibition on the S. agalactiae at a concentration of 1 mg mL -1 . For E. coli, the compounds have not showed activity. This study provides information on the phytochemicals present in C. brasiliensis as starting material for the preparation of bioactive derivatives and a possible application of these compounds as antibacterials.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-03-14T18:51:10Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 943385 bytes, checksum: 8adee72c3a2e9d49512f689910c76c69 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-14T18:51:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 943385 bytes, checksum: 8adee72c3a2e9d49512f689910c76c69 (MD5) Previous issue date: 2016-12-09 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Mastite causada por Escherichia coli tem a capacidade de estimular intensamente o sistema imunológico e desencadear rapida inflamação na glândula mamária. Em contraste, Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP), agente etiológico da paratuberculose, caracterizada por enterite granulomatosa crônica, pode infectar a glândula mamária sem estimular intensamente a resposta inflamatória. A interação dessas duas bactérias na glândula mamária ainda é desconhecida. Em alguns casos, tanto a eliminação de MAP pelo leite como pelas fezes podem ocorrer de forma passiva, após a infecção ascendente da glândula mamária ou após ingestão de MAP, respectivamente. Estes animais, chamados passive-shedders, são importantes como uma fonte de infecção a animais suscetíveis no rebanho. O objetivo deste estudo foi investigar a relação entre MAP e E. coli em células de glândula mamária sob condições experimentais e verificar a presença de animais passive-shedders. A relação entre uma cepa K-10 de MAP e E. coli isolada de leite mastítico em linhagem de células epiteliais mamárias (MAC-T) foi avaliada. As células previamente infectadas com MAP diminuíram a invasão de E. coli durante 120 min de experimentação. Contudo, a eficiência da translocação de E. coli e a viabilidade das células MAC-T não foram comprometidas. Ao contrário, células previamente infectadas por E. coli aumentaram a capacidade de translocação baso-apical de MAP até os 30 min e diminuiu aos 120min pós-infecção. A quantificação de citocinas relevou que a expressão de IL-1β aos 120min foi significativa (P<0.05) para células infectadas por MAP + E. coli e E. coli apenas. As expressões de MAPKp 38 e IL-10 não foram significativas, independente do tempo pós-infecção. Para detectar a ocorrência de animais passive-shedders, 10 propriedades foram previamente investigadas para a presença de MAP. Treze cabras foram positivas por cultura de fezes e/ou PCR de leite. Dentre os animais positivos, quatro (4/13) foram adquiridas e avaliados por IS900-PCR, cultura de fezes, de leite e de tecido, e sorologia (ELISA). Todos os resultados foram negativos no período de um ano, demonstrando que os animais realizaram o fenômeno pass-through e a contaminação ascendente da glândula mamária, sem tornarem-se infectados. No geral, esses resultados indicam que a presença de MAP nas células mamárias pode dificultar a capacidade de invasão de E. coli, mas quando no interior da célula mamária, translocam-se mais eficientemente. No entanto, quando as células são previamente infectadas por E. coli, MAP é rapidamente atraído da região subepitelial para a superfície celular. A produção de IL-1β intensifica a atração de macrófagos para o sítio de infecção, onde MAP se beneficia, infectando-os. / Mastitis caused by Escherichia coli can intensely stimulate the immune system and rapidly trigger inflammation in the mammary gland. In contrast, Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (MAP), the etiological agent of paratuberculosis, characterized by chronic granulomatous enteritis, can infect the mammary gland without intensely stimulating the inflammatory response. The interaction of these two species in the mammary gland is still unknown. In some cases, both the elimination of MAP by milk and faeces may occur passively, either through ascending infection of the mammary gland or through ingestion of MAP, respectively. These animals are called passive- shedders and are important as a source of infection to susceptible animals in the herd. The aim of this study was to investigate the relationship between MAP and E. coli in mammary gland cells under experimental conditions and verify the presence of passive- shedder animals. The relationship between a K-10 strain of MAP and E. coli isolated from mastitic milk in mammary epithelial cell lines was evaluated. Cells previously infected by MAP decreased E. coli invasiveness during 120min experimentation. However, the efficiency of E. coli translocation was not compromised, nor was the viability of the MAC-T cells. In contrast, cells previously infected by E. coli showed increased basal-apical translocation capacity of MAP up to 30 min and decreased at 120 min postinfection. Quantification of cytokines showed that IL-1β expression at 120 min was significantly increased in cells infected by MAP + E. coli and E. coli only. Expression of MAPKp 38 and IL-10 were not significant, regardless of time postinfection. To determine the occurrence of passive-shedders, 10 properties were previously investigated for MAP detection. Thirteen goats were positive by faeces culture and/or milk PCR. Among the positive animals, four (4/13) were evaluated by IS900-PCR, feces culture, milk and tissue culture and serology (ELISA). All the results were negative over a one-year period, demonstrating that the animals performed pass- through phenomenon and upward contamination of the mammary gland without becoming infected. Together, these results indicate that the presence of MAP in mammary cells may hamper capacity of E. coli invasion, but when within the mammary cell, the bacteria evade more efficiently. However, when the cells are pre-infected by E. coli, MAP is rapidly attracted from the subepithelial region to the cell surface. IL-1β production enhances the attraction of macrophages to the site of infection, where MAP benefits by infecting them.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-03-16T11:36:37Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1129168 bytes, checksum: bd7fe00d19a030146a8ff280ce2feafd (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-16T11:36:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1129168 bytes, checksum: bd7fe00d19a030146a8ff280ce2feafd (MD5) Previous issue date: 2016-08-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A mastite bovina é uma enfermidade de grande ocorrência em rebanhos leiteiros de todo o mundo, constituindo assim, um cenário preocupante, devido aos impactos na saúde pública e também na economia dos países, principalmente o Brasil, pois é um dos maiores produtores de leite. Concomitantemente à ocorrência da mastite, é crescente o número de isolados bacterianos causadores desta doença que têm apresentado resistência antimicrobiana às mais diversas substâncias farmacológicas, principalmente, devido à utilização indiscriminada destas drogas. A investigação de novas moléculas com potencial antimicrobiano, assim como o uso de associações com as drogas tradicionais, tornou-se de grande necessidade. Este trabalho teve como objetivo, investigar a ação antimicrobiana de duas substâncias bioativas, a gutiferona-A (M11) e 7- epiclusianona (M6), sobre isolados de campo, Streptococcus uberis (Su959) e Streptococcus agalactiae (Sa4605) obtidos de leite de animais com mastite. Realizaram-se testes para definição da Concentração Inibitória Mínima (CIM) dos antimicrobianos sintéticos e das substâncias bioativas, as quais variaram a de 0,6 a 125 μg/mL. Foi confirmado o potencial antimicrobiano destes últimos, além da ineficácia da ampicilina e gentamicina no controle da multiplicação de ambos os isolados. Após esta constatação, foi investigada a presença de interações sinérgicas, utilizando o método Checkerboard a partir de combinações de M11 e M6 com ampicilina e gentamicina. Dentre oito associações determinadas, seis apresentaram interação sinérgica positiva, evidenciando a recuperação e potencialização da ação dos antimicrobianos sintéticos frente aos isolados bacterianos estudados, antes resistentes à ação individual dos mesmos. Usando a metodologia do teste do MTT ((3-[-4,5- dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difenil tetrazolium brometo), avaliou-se a viabilidade celular quando da exposição individual de cada antimicrobiano (sintético e bioativo), a fim de conhecer o caráter citotóxico destas sobre as células MAC-T (células epiteliais da glândula mamaria de bovinos). O resultado obtido mostrou que somente a M11 foi citotóxica nas concentrações 2xCIM e 1xCIM determinada previamente na presença de Su959 e 2xCIM determinada previamente na presença de Sa4605. Porém, as concentrações necessárias para potenciar ação dos antimicrobianos sintéticos são doses iguais ou abaixo de 0,5xCIM, não indicadas como tóxicas no teste in vitro. Assim, pode-se afirmar que a gutiferona- A e 7-epiclusianona apresentaram eficaz ação antimicrobiana individual sobre os isolados de campo de Streptococcus uberis e Streptococcus agalactiae, além de se mostrarem promissoras candidatas para serem utilizadas em associações com os antimicrobianos sintéticos ampicilina e gentamicina, a fim de recuperar e otimizar a ação antimicrobiana dos mesmos. / Bovine mastitis is a disease of high occurrence and widespread in herds around the world, making it a worrying scenario due to the impacts on public health and also on the countries’ economies, especially Brazil, due its large produce of milk. In meanwhile, the number of resistant bacterial isolates has been increased against a variety of pharmacological medicines, mostly because of drug-indiscriminate use. The investigation of new molecules with antimicrobial potential, as well as the association with traditional drugs, became a great necessity nowadays. The aim of this study was to investigate the antimicrobial action of two bioactive substances, gutiferone-A (M11) and 7-epiclusianone (M6), on wild isolates Streptococcus uberis (Su959) and Streptococcus agalactiae (Sa4605) obtained from animals infected with mastitis. Analysis were conducted to define the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of synthetic antimicrobials and bioactive molecules, ranging from 0.6 to 125 g/mL. The antimicrobial potential of the latter was confirmed, besides the inefficacy of ampicillin and gentamicin in control of the multiplication of both isolates. Later, the presence of synergistic interactions was investigated, using the Checkerboard method from combinations of M11 and M6 with ampicillin and gentamicin. Among the eight selected associations, six showed positive synergic interaction showing a recovery and powering the action of the synthetic antimicrobials against the bacterial isolates studied, previously resistant to their individual action. To assess the cell viability, we performed the method MTT (3 - [- 4,5-dimethyl-thiazol-2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide), with individual exposure of each antimicrobial (synthetic and bioactive) targeting the MAC-T cells (bovine mammary gland epithelial cells). The results showed that only M11 was cytotoxic at 2xCIM and 1xCIM concentrations previously determined by Su959 presence. However, concentrations doses equal to or lower than 0.5x MIC are need to potentiate the action of synthetic antimicrobials, not indicated as toxic in the in vitro test. Thus, the gutiferone-A and 7- epiclusianone showed an effective antimicrobial action on the wild isolates of Streptococcus uberis and Streptococcus agalactiae, in addition to being promising candidates for use in combinations with the synthetic antimicrobials ampicillin and gentamicin, in order to recover and optimize their antimicrobial action.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-07-06T18:04:49Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 909533 bytes, checksum: 6baed208f90f67624120c4e48d7b27aa (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-06T18:04:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 909533 bytes, checksum: 6baed208f90f67624120c4e48d7b27aa (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Inúmeras biotécnicas visam obter melhores índices de viabilidade espermática pós-descongelamento. Diferenças de características bioquímicas e funcionais entre espécies, ejaculados, estações do ano, animais, e outros, não possibilitaram o desenvolvimento de um protocolo definitivo. O presente estudo objetivou avaliar os efeitos da inclusão de colesterol na criopreservação do sêmen asinino sobre a viabilidade espermática in vitro pós-descongelamento. Vinte e cinco ejaculados de cinco jumentos foram divididos em dois tratamentos experimentais: T1: controle sem adição de ciclodextrina carregada com colesterol – (CCC); e T2 com adição de CCC. As avaliações seminais pós- descongelamento foram divididas em duas fases (1 e 2). Na fase 1 avaliou-se os efeitos da incorporação ou não de 1,5 mg de CCC aos espermatozoides, avaliando a cinética espermática dos espermatozoides no pós- descongelamento. As amostras descongeladas dos dois tratamentos foram submetidas ao Computer Assisted Sperm Analyser (CASA) e obteve-se as variáveis motilidade total (MT, %), motilidade progressiva (MP, %), velocidade curvilinear (VCL, μm/s), velocidade progressiva (VSL, μm/s), velocidade de trajeto (VAP, μm/s), linearidade (LIN, %), retilinearidade (STR, %), amplitude de deslocamento lateral da cabeça (ALH, μm) e frequência de batimentos (BCF, Hz). Na fase 2 as amostras dos dois tratamentos foram submetidas à incubação com diferentes sondas e posterior análise por citometria de fluxo para avaliação: da integridade da membrana plasmática e acrossomal (FITC-PSA), do estresse oxidativo citoplasmático (DHE), da peroxidação dos lipídios de membrana (BODIPY 581/591 ), da organização da bicamada lipídica (M540), do potencial de membrana mitocondrial (JC-1) e da apoptose celular (Yo-Pro). Os resultados relativos à avaliação da cinética espermática dos tratamentos experimentais mostraram que os parâmetros MT, MP, VCL, VSL, VAP, ALH, e BCF apresentaram maiores valores (p<0,05) no T1 (29,92 ± 13,82; 12,44 ± 6,03; 64,45 ± 9,65; 43,50 ± 7,30; 52,02 ± 8,17; 2,65 ± 0,48; 7,67 ± 0,76) em relação ao T2 xiv (17,33 ± 7,18; 5,33 ± 2,69; 46,16 ± 8,16; 31,83 ± 6,73,; 38,76 ± 7,63; 1,63 ± 0,43; 6,51 ± 1,76). Não foram observadas diferenças nos ejaculados (p>0,05) entre o T1 e T2 para as variáveis LIN (67,60 ± 1,28 e 68,74 ± 1,61) e STR (83,55 ± 0,81 e 81,91 ± 1,05). Na fase 2, a incorporação de colesterol resultou em maior (p<0,05) porcentagem de células com integridade de membrana acrossomal e plasmática dos espermatozoides (21,42 ± 12,94), bem como maior (p<0,05) potencial de sua membrana mitocondrial (15,49 ± 12,36). Não houve diferença (p>0,05) entre o T1 e T2 em relação à peroxidação dos lipídeos de membrana (669,81 ± 337,87 e 743,42 ± 417,26) e quanto à desorganização da membrana plasmática (8163,07 ± 1929,75 e 7068,01 ± 3680,08). A incorporação de colesterol resultou em maior (p<0,05) produção de espécies reativas de oxigênio citoplasmático (%) no T2 (3,73 ± 1,64) em relação ao T1 (2,10 ± 1,20). Além disso, a incorporação do colesterol se mostrou eficaz em aumentar (p<0,05) a porcentagem de células vivas pós descongelamento (23,67 ± 12,46) em relação ao grupo que não recebeu o tratamento (12,69 ± 8,84). Não houve diferença (p>0,05) entre T1 e T2 em relação à prevenção dos eventos semelhantes a apoptose nos espermatozoides (23,28 ± 9,81 e 22,08 ± 12,24). A incorporação de colesterol ao sêmen melhora os parâmetros seminais in vitro do sêmen descongelado de jumentos da raça Pêga. / Many biotechniques are directed to obtain better rates of sperm viability after thawing. Differences in biochemical and functional characteristics between species, ejaculates, seasons of the year, among animals, and others, preclude a definitive protocol. The objective of this study was to evaluate the effects of cholesterol inclusion on cryopreserved Pêga donkey spermatozoa and sperm viability in vitro post-thawing. Twenty five ejaculates of five donkeys were divided in two experimental treatments, T1: control, without addition of cyclodextrin loaded cholesterol – (CCC) and T2: treated with addition of CCC. Post-thawing seminal evaluations were divided into two phases (1 and 2). The effects of incorporation (T2) or not (T1) of 1.5 mg of CCC to the semen on sperm kinetics of post-thawing spermatozoa were evaluated. In phase 1, samples of the two treatments were submitted to the Computer Assisted Sperm Analyzer (CASA) and the kinetic characteristics: total motility (MT, %), progressive motility (MP, %), curvilinear velocity (VCL, μm/s), progressive velocity (VSL, μm/s), trajectory velocity (VAP, μm/s), linearity (LIN, %), rectilinearity (STR, %), amplitude of lateral head displacement (ALH, μm) and beating frequency (BCF, Hz) were obtained. In phase 2, samples of the two treatments were submitted to incubation with different probes and later analysed by flow cytometry to evaluate the plasma and acrosomal membrane integrity (FITC-PSA), cytoplasmic oxidative stress (DHE), plasma membrane lipid peroxidation (BODIPY 581/591 ), lipid bilayer organization (M540), mitochondrial membrane potential (JC-1) and cellular apoptosis (Yo-Pro). Results regarding the evaluation of spermatic kinetics of the experimental treatments showed the parameters MT, MP, VCL, VSL, VAP, ALH and BCF were higher (p<0,05) in T1 (29,92 ± 13,82; 12,44 ± 6,03; 64,45 ± 9,65; 43,50 ± 7,30; 52,02 ± 8,17; 2,65 ± 0,48; 7,67 ± 0,76) in relation to T2 (17,33 ± 7,18; 5,33 ± 2,69; 46,16 ± 8,16; 31,83 ± 6,73; 38,76 ± 7,63; 1,63 ± 0,43; 6,51 ± 1,76). No differences were shown (p> 0.05) between T1 e T2 for the LIN (67,60 ± 1,28 e 68,74 ± 1,61) and STR (83,55 ± 0,81 e 81,91 ± 1,05) variables. In phase xvi 2, the incorporation of cholesterol resulted in greater (p <0.05) percentage of integrity on the spermatozoa acrosomal and plasma membrane (21,42 ± 12,94), as well as higher (p<0.05) potential of its mitochondrial membrane (15,49 ± 12,36). No difference was detected (p>0.05) between T1 e T2 in relation to membrane lipid peroxidation (669,81 ± 337,87 e 743,42 ± 417,26) and plasma membrane disorganization (8163,07 ± 1929,75 e 7068,01 ± 3680,08). Cholesterol incorporation resulted in higher (p<0.05) production of reactive cytoplasmic oxygen species % in T2 (3,73 ± 1,64) in relation to the T1 (2,10 ± 1,20) spermatozoa. In addition, cholesterol incorporation was effective in increasing (p<0.05) the percentage of post-thaw live cells (23,67 ± 12,46) in relation to T1 (12,69 ± 8,84). No difference was detected (p>0.05) between T1 e T2 regarding the prevention of apoptosis-like events in spermatozoa (23,28 ± 9,81 e 22,08 ± 12,24). The incorporation of cholesterol to the semen improves seminal parameters of in vitro of post-thawing donkey semen.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-07-07T19:08:23Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 867144 bytes, checksum: b1dfb9c08a4b085feda6d150ced1327c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-07T19:08:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 867144 bytes, checksum: b1dfb9c08a4b085feda6d150ced1327c (MD5) Previous issue date: 2017-03-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Mycobacterium bovis e Brucella abortus são os agentes etiológicos da tuberculose e da brucelose bovinas, doenças infectocontagiosas de ocorrência mundial que geram grandes prejuízos econômicos e podem ser transmitidas aos humanos principalmente através do contato direto com animais contaminados e da ingestão de leite cru e derivados. No Brasil existe o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose, criado pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, que estabelece a realização do diagnóstico e normatiza as medidas de controle dessas zoonoses. Os métodos oficiais para diagnóstico de brucelose e tuberculose no animal vivo possuem sensibilidade e especificidade variáveis, são laboriosos e demandam tempo. Para aumentar a eficácia do controle destas doenças são necessários métodos rápidos e acurados, que atuem como ferramenta auxiliar no diagnóstico in vivo dessas enfermidades sem a necessidade de procedimentos invasivos. Para garantir a credibilidade e confiabilidade de novos métodos de diagnóstico é necessário que os mesmos sejam validados. No presente estudo foram realizados ensaios para a validação de uma reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) para a detecção do DNA de M. bovis e B. abortus em amostras de leite cru artificialmente contaminados, usando como critério o desempenho analítico (sensibilidade e especificidade analítica), repetibilidade, reprodutibilidade interna e robustez. Inicialmente cinco metodologias de extração de DNA foram testadas e as que apresentaram melhores resultados foram os kits comerciais DNeasy mericon Food Kit – Qiagen e Maxwell® 16 Tissue DNA Purification Kit – Promega. Os limites de detecção obtidos na qPCR validada nesse estudo foram de 2,3 pg de DNA de M. bovis e 20,7 fg de DNA de B. abortus. As repetibilidades eviii reprodutibilidades aliadas à robustez apresentadas nesse trabalho indicam que os métodos avaliados podem ser utilizados de forma auxiliar ao diagnóstico in vivo oficial de tuberculose e brucelose bovinas, após ser testada em animais naturalmente infectados. / Mycobacterium bovis and Brucella abortus are the etiological agents of bovine tuberculosis and brucellosis, infectious diseases globally disseminated that cause substantial economic losses and can be transmitted to humans mainly through direct contact with contaminated animals and the intake of raw milk and milk products. In Brazil there is the National Program for the Control and Eradication of Brucellosis and Tuberculosis, created by the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply, which establishes the diagnosis and regulates the control measures of these zoonosis. The official methods for diagnosis of brucellosis and tuberculosis in the living animal have variable sensitivity and specificity, are laborious and time consuming. In order to increase the efficacy of brucellosis and tuberculosis control, rapid and accurate methods are necessary to act as an auxiliary tool in the in vivo diagnosis of these diseases without the need of invasive procedures. To ensure the credibility and reliability of new diagnostic methods, they must be validated. In the present study, the validation of a real-time polymerase chain reaction (qPCR) for the detection of M. bovis and B. abortus in artificially contaminated raw milk samples was performed using analytical performance (analytical sensitivity and specificity), repeatability, internal reproducibility and robustness. Initially five DNA extraction methodologies were tested and the ones that presented the best results were the commercial kits “DNeasy Mericon Food Kit – Qiagen” and “Maxwell® 16 Tissue DNA Purification Kit – Promega”. The limits of detection obtained in the qPCR validated in this study were 2.3 pg of M. bovis DNA and 20.7 fg of B. abortus DNA. The repeatability and reproducibility associated with the robustness presented in this study indicate that the evaluated methods can be used as an auxiliaryx tool to the in vivo official diagnosis of bovine tuberculosis and brucellosis, after being tested in naturally infected animals. / Nos dois impressos faltaram as últimas 12 páginas com referência bibliográfica.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-11-14T11:47:05Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1408671 bytes, checksum: 7703568ae2fd819b712c172d5c3330f8 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-14T11:47:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1408671 bytes, checksum: 7703568ae2fd819b712c172d5c3330f8 (MD5) Previous issue date: 2017-07-28 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Objetivou-se verificar se a endometrite é a principal causa da retirada de éguas receptoras do programa de transferência de embriões, além de comparar métodos e técnicas de diagnóstico. Quarenta éguas receptoras mestiças oriundas de sete propriedades e que não ficaram gestantes ao final da estação reprodutiva, adicionado ao histórico de subfertilidade, foram selecionadas para exame ginecológico. O exame foi realizado através de (i) coleta de dados do animal, idade, escore de condição corporal (ECC) e histórico reprodutivo; (ii) exame clínico reprodutivo, conformação do períneo, palpação e ultrassonografia transretal dos órgãos reprodutivos, vaginoscopia e exame digital da cérvix; e (iii) exames laboratoriais, cultura e citologia, a partir de um coletor comercial (CC) duplamente protegidos, lavado intrauterino de baixo volume (LBV) e do lavado do fragmento resultante da biópsia endometrial (LFBE), e a avaliação histológica. A presença de polimorfonucleados (PMNs) no estrato compacto durante a avaliação histológica serviu de referência para o diagnóstico da endometrite e base para comparação entre os métodos de diagnóstico. A endometrite foi diagnosticada em 65% dos animais avaliados, sendo caracterizada pela presença de PMNs, distribuição das glândulas endometriais em aglomerações e a presença de fibrose no tecido endometrial e periglandular durante a avaliação histológica. No exame clínico reprodutivo, foram positivos 32,5% dos animais para a avaliação da conformação do períneo; 52,5% para exame de palpação e ultrassonografia; 25% para o exame de vaginoscopia; e 37,5% para o exame da cérvix. Nos exames laboratoriais, foram positivos 17,5% para avaliação do efluxo do LBV; 52,5% para o exame citológico uterino; e 62,5% para exame de cultura uterina, sendo a bactéria mais isolada a Staphylococcus spp., seguida de Escherichia coli, Enterobacter spp. e Citrobacter spp., todas susceptíveis a sulfa/trimetoprim, enrofloxacina e florfenicol. Comparando os exames para o diagnóstico da endometrite, a palpação e ultrassonografia apresentaram os melhores resultados entre os exames clínicos, entretanto, foi inferior aos exames laboratoriais de citologia e cultura uterina, sendo este último com maior sensibilidade e especificidade para endometrite. A utilização de múltiplos resultados de diferentes exames também se mostrou uma alternativa eficaz para o diagnóstico da endometrite. Nas condições em que o estudo foi realizado, a técnica de coleta de amostras mais prática e ao mesmo tempo eficaz para os exames de cultura e citologia uterina foi a do CC. A técnica de LFBE não demonstrou ser tão eficiente quanto às demais. Concluiu-se que a endometrite é a principal causa de éguas receptoras com problemas reprodutivos, e que o exame ginecológico é essencial para o diagnóstico destes animais, utilizando-se o maior número de exames possíveis ou o exame de palpação e ultrassonografia como triagem para a realização de exames laboratoriais, além disto, que o coletor comercial foi o método mais prático e eficaz para a coleta de amostras para os exames de cultura e citologia endometriais. / The objective was to verify if endometritis is the main cause of the withdrawal of recipient mares from the embryo transfer program, in addition to comparing methods and diagnostic techniques. Forty crossbred recipient mares from seven farms that did not become pregnant at the end of the reproductive season, added to the history of subfertility, were selected for gynecological examination. The examination was performed through (i) collection of animal data, age, body condition score (ECC) and examination, conformation reproductive of the history; perineum, (ii) reproductive palpation and clinical transrectal ultrasonography of the reproductive organs, vaginoscopy and digital examination of the cervix; and (iii) laboratory tests, culture and cytology, from a double-shielded commercial collector (CC), low-volume intrauterine flush (LBV) and wash of the fragment resulting from endometrial biopsy (LFBE), and histological evaluation. The presence of polymorphonucleate (PMNs) in the compact stratum during the histological evaluation served as a reference for the diagnosis of endometritis and basis for comparison between diagnostic methods. Endometritis was diagnosed in 65% of the evaluated animals, being characterized by the presence of PMNs, distribution of the endometrial glands in agglomerations and the presence of fibrosis in endometrial and periglandular tissue during the histological evaluation. In the reproductive clinical examination, 32.5% of the animals were positive for evaluation of the perineum conformation; 52.5% for examination of palpation and ultrasonography; 25% for vaginoscopy examination; and 37.5% for the examination of the cervix. In the laboratory tests, 17.5% were positive for evaluation of the efflux of the LGV; 52.5% for uterine cytology examination; and 62.5% for uterine culture, with Staphylococcus spp. being the most isolated bacteria, followed by Escherichia coli, Enterobacter spp. and Citrobacter spp., all susceptible to sulfa / trimethoprim, enrofloxacin and florfenicol. Comparing the exams for the diagnosis of endometritis, palpation and ultrasonography showed the best results among the clinical exams, however, it was inferior to the laboratory exams of cytology and uterine culture, the latter being with greater sensitivity and specificity for endometritis. The use of multiple results from different exams has also proved to be an effective alternative for the diagnosis of endometritis. Under the conditions under which the study was carried out, the most practical and efficient sampling technique for culture and uterine cytology examinations was CC. The LFBE technique did not prove to be as efficient as the others. It was concluded that endometritis is the main cause of recipient mares with reproductive problems, and that gynecological examination is essential for the diagnosis of these animals, using as many tests as possible or palpation and ultrasonography as screening for besides the fact that the commercial collector was the most practical and efficient method for the collection of samples for endometrial culture and cytology exams.