Orientador : PhD. Rafael F. Costa Vieira / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 08/12/2017 / Inclui referências / Resumo: Anaplasma marginale é uma bactéria intraeritrocítica obrigatória do gênero Anaplasma, conhecida por causar anaplasmose bovina. Encontra-se distribuída em todo o mundo e causa grandes perdas econômicas nas indústrias de carne bovina e láctea. A. marginale foi descrita em muitas espécies. No entanto, os estudos envolvendo o diagnóstico sorológico de A. marginale em pequenos ruminantes são escassos. Até o presente momento, esta bactéria nunca foi detectada molecularmente em caprinos (Capra hircus). Assim, este estudo teve como objetivo estimar a prevalência de A. marginale e fatores associados à infecção em caprinos do Estado da Paraíba, no Nordeste do Brasil. O DNA de amostras de sangue de caprinos foi extraído e avaliado por uma reação em cadeia da polimerase convencional (cPCR) para a detecção da proteína de superfície 4 (major surface protein 4, msp4) de A. marginale. As amostras positivas foram posteriormente submetidas a cPCR para os genes msp5 e msp1? de A. marginale e sequenciados pelo método de Sanger. Onze de 403 cabras (2,73%; IC 95%: 1,53- 4,82%) foram positivas para o gene msp4 de Anaplasma. O sequenciamento do gene msp5 revelou a presença de A. marginale sensu stricto. Os caprinos infestados por carrapatos foram seis vezes mais propensos a estarem infectados com A. marginale (P = 0,02788). Amblyomma parvum (49/52, 94,23%) e Rhipicephalus microplus (3/52, 5,77%) foram as espécies de carrapatos identificadas parasitando os animais. Todas os caprinos positivos para A. marginale foram encontrados em fazendas com pastagem de múltiplas espécies (P = 0,04). O gene msp1? foi sequenciado encontrando o genótipo F nos animais estudados. Este é o primeiro relato molecular de infecção por A. marginale em caprinos. Além disso, descrevemos pela primeira vez o genótipo F no Brasil. Este estudo fornece a primeira informação sobre a infecção por A. marginale em cabras do Estado da Paraíba, no Nordeste do Brasil. Também demonstra que os caprinos podem desempenhar um papel na epidemiologia desta bactéria como um reservatório ainda não reconhecido. Carrapatos competentes que se alimentam de caprinos e bovinos podem transferir o patógeno entre as duas espécies de ruminantes. PALAVRAS-CHAVE: anaplasmose bovina, cabras, genotipagem, pequenos ruminantes, PCR / Abstract: Anaplasma marginale é uma bactéria intraeritrocítica obrigatória do gênero Anaplasma, conhecida por causar anaplasmose bovina. Encontra-se distribuída em todo o mundo e causa grandes perdas econômicas nas indústrias de carne bovina e láctea. A. marginale foi descrita em muitas espécies. No entanto, os estudos envolvendo o diagnóstico sorológico de A. marginale em pequenos ruminantes são escassos. Até o presente momento, esta bactéria nunca foi detectada molecularmente em caprinos (Capra hircus). Assim, este estudo teve como objetivo estimar a prevalência de A. marginale e fatores associados à infecção em caprinos do Estado da Paraíba, no Nordeste do Brasil. O DNA de amostras de sangue de caprinos foi extraído e avaliado por uma reação em cadeia da polimerase convencional (cPCR) para a detecção da proteína de superfície 4 (major surface protein 4, msp4) de A. marginale. As amostras positivas foram posteriormente submetidas a cPCR para os genes msp5 e msp1? de A. marginale e sequenciados pelo método de Sanger. Onze de 403 cabras (2,73%; IC 95%: 1,53- 4,82%) foram positivas para o gene msp4 de Anaplasma. O sequenciamento do gene msp5 revelou a presença de A. marginale sensu stricto. Os caprinos infestados por carrapatos foram seis vezes mais propensos a estarem infectados com A. marginale (P = 0,02788). Amblyomma parvum (49/52, 94,23%) e Rhipicephalus microplus (3/52, 5,77%) foram as espécies de carrapatos identificadas parasitando os animais. Todas os caprinos positivos para A. marginale foram encontrados em fazendas com pastagem de múltiplas espécies (P = 0,04). O gene msp1? foi sequenciado encontrando o genótipo F nos animais estudados. Este é o primeiro relato molecular de infecção por A. marginale em caprinos. Além disso, descrevemos pela primeira vez o genótipo F no Brasil. Este estudo fornece a primeira informação sobre a infecção por A. marginale em cabras do Estado da Paraíba, no Nordeste do Brasil. Também demonstra que os caprinos podem desempenhar um papel na epidemiologia desta bactéria como um reservatório ainda não reconhecido. Carrapatos competentes que se alimentam de caprinos e bovinos podem transferir o patógeno entre as duas espécies de ruminantes. PALAVRAS-CHAVE: anaplasmose bovina, cabras, genotipagem, pequenos ruminantes, PCR / Abstract: Anaplasma marginale is an obligate intraerythrocytic bacterium in the genus Anaplasma, known for causing bovine anaplasmosis. It is distributed worldwide and causes extensive economic losses in the beef and dairy industries. A. marginale has been described in many species; however, studies involving the diagnosis of A. marginale in small ruminants are scarce. To date, this bacterium has never been molecularly detected in goats (Capra hircus). Thus, this study aimed to estimate the prevalence of A. marginale and factors associated with the infection in goats from the State of Paraíba, northeastern Brazil. DNA from goat blood samples were extracted and screened by a conventional PCR (cPCR) assay for the detection of A. marginale major surface protein 4 (msp4). Positive samples were further submitted to cPCR assays for A. marginale msp5 and msp1? genes, and sequenced by Sanger method. Eleven out of 403 goats (2.73%; CI 95%: 1.53-4.82%) were positive for the Anaplasma msp4 gene. Sequencing of the msp5 gene revealed the presence of A. marginale sensu stricto. Tick-infested goats were six times more likely to be infected with A. marginale (P = 0.02788). Amblyomma parvum (49/52, 94.23%) and Rhipicephalus microplus (3/52, 5.77%) were the tick species identified feeding on the goats. All A. marginale-positive goats were found on farms with multispecies grazing (P= 0.04). The msp1? gene was sequenced and found the A. marginale genotype F in studied infected goats. This is the first molecular report of A. marginale infection in goats. Additionally, we describe for the first time the genotype F in Brazil. This study gives the first insight into A. marginale infection in goats from Paraíba State, northeastern Brazil and demonstrates that goats may play a role in the epidemiology of this bacterium as a yet unrecognized reservoir. Competent ticks feeding on goats and cattle may transfer the pathogen between the two livestock species. KEY WORDS: bovine anaplasmosis, goats, genotyping, small ruminants, PCR

Orientador : Prof. Dr. Paulo Rossi Junior / Co-orientadores : Prof. Dr. Rodrigo de Almeida e Profª Drª Alda Lúcia Gomes Monteiro / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 28/03/2014 / Inclui referências / Área de concentração: Ciências Veterinárias / Resumo: A eficiência alimentar de bovinos de corte tem sido avaliada com base no consumo alimentar residual (CAR), característica que permite a identificação de animais que consomem pouco alimento, mas mantém o mesmo nível de produção (ganho médio diário - GMD, tamanho e peso corporal) do rebanho. A melhoria da eficiência para CAR pode influenciar outras características de eficiência alimentar, o metabolismo, o comportamento alimentar e a composição corporal dos animais. Além do CAR, o consumo e ganho residual (CGR), que é um índice composto pelo CAR e pelo ganho de peso residual (GR), foi proposto recentemente como uma nova alternativa para avaliar a eficiência de bovinos de corte. O CGR permite a identificação de animais que apresentam baixo consumo de alimento e que, simultaneamente, expressam alto ganho de peso. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação do CAR com as características de desempenho, consumo e de eficiência alimentar (Capítulo I); com os metabólitos sanguíneos relacionados com o metabolismo proteico, energético e enzimático, a nível muscular e hepático (Capítulo II); e com o padrão de seleção da dieta fornecida em confinamento e as características de carcaça de touros Purunã em crescimento (Capítulo III). Avaliou-se, também, a relação do CGR com as características de desempenho, consumo e de eficiência alimentar, e as característi-cas de carcaça desses animais (Capítulo IV). Foram avaliados 110 tourinhos Purunã que apresentavam 10 meses de idade, em média, no início do experimento. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em baias individuais em confinamento e alimentados à vontade por 112 dias. A dieta foi composta por 580 g/kg de silagem de milho e 420 g/kg de concentrado, e apresentou 130 g/kg de proteína bruta (PB) e 767 g/kg de nutrientes digestíveis totais (NDT), em base de matéria seca (MS). O consumo de MS (CMS) foi mensurado diariamente e o GMD foi mensurado a cada 28 dias. O CAR e o GR foram calculados a partir do CMS, GMD e do peso médio metabólico (PMM). Para o cálculo do CGR, o CAR e o GR foram padronizados para variância 1 e, posteriormente, os valores de CAR foram multiplicados por -1 e somados aos valores de GR. As concentrações séricas dos metabólitos sanguíneos foram determinadas a cada 28 dias. O padrão de seleção da dieta foi avaliado pela distribuição das partículas das sobras da dieta no Separador de Partículas Penn State (SPPS). As características de carcaça foram avaliadas por ultrassonografia no início e no final do experimento. Os animais foram divididos em três classes de eficiência para CAR e CGR: eficiente, intermediária e ineficiente. O peso corporal (PC) inicial e final, e o GMD foram semelhantes entre as classes de eficiência para CAR, apresentando média de 233 kg, 360 kg e 1,14 kg/dia. O CMS, o CMS em relação ao PC (CMSPC), e o CMS para atender as necessidades de mantença (CMSMANT) e de crescimento (CMSGANHO) aumentaram da classe eficiente para a ineficiente para CAR. A diminuição do CAR levou à redução da conversão alimentar (CA) em 12,2% e ao aumento da eficiência alimentar bruta (EAB) e da eficiência parcial de crescimento (EPC) em 13,3% e 15,5%, respectivamente. A creatinina sérica foi maior na classe eficiente, indicando que os tourinhos eficientes apresentaram maior massa muscular que os ineficientes para CAR. A glicose sérica diminuiu da classe ineficiente para a eficiente, o que pode estar relacionado com a maior eficiência do metabolismo mitocondrial em tourinhos eficientes para CAR. O colesterol sérico foi maior na classe eficiente, o que sugere a menor utilização de triglicerídeos transportados por lipoproteínas de alta densidade (HDL) para suprir a demanda energética de tourinhos eficientes para CAR. As sobras da dieta de tourinhos eficientes para CAR apresentaram maior proporção de partículas maiores que 19 mm e de partículas maiores que 7,8 mm, menor proporção de partículas entre 1,7 e 7,8 mm e maior tamanho médio de partícula que as sobras de tourinhos ineficientes, indicando que os primeiros selecionaram dieta com maior proporção de concentrado. A relação entre largura e profundidade (L:P) do olho de lombo no músculo Longissimus dorsi foi menor em tourinhos eficientes para CAR. A área de olho de lombo (AOL) inicial foi ligeiramente superior em tourinhos eficientes, porém a AOL final não diferiu entre as classes de eficiência para CAR. As espessuras de gordura subcutânea (EGS) inicial e final, e o ganho em EGS foram semelhantes entre as classes de eficiência para CAR. Conforme observado entre as classes de eficiência para CAR, o PC inicial e final não diferiu entre as classes de eficiência para CGR. Entretanto, o GMD na classe ineficiente (1,02 kg/dia) foi menor que nas classes intermediária e eficiente (média de 1,19 kg/dia). O CMSPC e o CMSMANT aumentaram da classe eficiente para a ineficiente. O aumento do CGR diminuiu a CA em 23% e aumentou a EAB em 28%, a eficiência de mantença (EMant) em 37%, a EPC em 21%, a taxa de crescimento relativo (TCR) em 20% e a taxa de Kleiber (TK) em 21%. Entre as características de carcaça, a relação L:P do olho de lombo também foi menor na classe eficiente para CGR, enquanto as medidas iniciais e finais, e os ganhos em AOL e EGS não diferiram entre as classes de eficiência para CGR. Conclui-se que touros Purunã em crescimento classificados como eficientes para CAR consomem menos alimento, mas mantêm o mesmo nível de produção dos ineficientes. A melhoria da eficiência para CAR nesses animais está relacionada com aumento da musculosidade, o metabolismo energético mais eficiente e o consumo de dietas com maior proporção de concentrado. A melhoria da eficiência para CGR diminui a exigência de mantença, o que determina a diminuição do consumo de alimento em relação ao PC e o aumento do ganho de peso diário de touros Purunã em crescimento. A composição da carcaça desses animais não se altera com a melhoria da eficiência para CAR e para CGR, mas a forma arredondada do músculo Longissimus dorsi indica um maior potencial de desenvolvimento muscular aos tourinhos eficientes para essas duas características de eficiência alimentar. Palavras-chave: concentrado, consumo alimentar residual, consumo e ganho residual, desenvolvimento muscular, exigência de mantença, metabolismo energético / Abstract: The feed efficiency of beef cattle has been evaluated by residual feed intake (RFI), which is a measure that allows the identification of animals with low feed intake and same production level (average daily gain – ADG, size and body weight) of the herd. The improvement of efficiency for RFI can affect other feed efficiency traits, the metabolism, the feeding behavior and body composition of the animals. In addition to the RFI, the residual intake and body weight gain (RIG), which is an index composed by RFI and residual body weight gain (RG), was recently proposed as a new option to evaluate the efficiency of beef cattle. The RIG allows the identification of animals with low feed intake and, simultaneously, with high weight gain. The purpose of this study was to evaluate the RFI relationship with performance, feed intake and feed efficiency traits (Chapter I); with blood metabolites related to the protein and energy metabolism, and enzymatic metabolism in muscle and liver (Chapter II); and with the pattern of diet selection in feedlot and carcass traits of Purunã growing bulls (Chapter III). Moreover, there was evaluated the RIG relationship with performance, feed intake and feed efficiency traits, and with the carcass traits of these animals (Chapter IV). There were used 110 Purunã growing bulls with average of 10 months of age at the beginning of trial. Animals were randomly allocated in individual feedlot pens and fed ad libitum for 112 days. The diet was composed by 580 g/kg of corn silage and 420 g/kg of concentrate, and contained 130 g/kg of crude protein (CP) and 767 g/kg of total digestible nutrients (TDN) on dry matter (DM) basis. Dry matter intake (DMI) was measured daily and ADG was measured every 28 days. DMI, ADG and mean metabolic weight (MMW) were used to calculate RFI and RG. RIG was calculated multiplying the RFI values by -1 and adding to RG values, both previously standardized to variance 1. Serum concentrations of blood metabolites were determined every 28 days. The pattern of diet selection was assessed by the particle distribution of diet leftovers in the Penn State Particle Separator (PSPS). Carcass traits were assessed by ultrasonography at the beginning and at the end of the trial. The growing bulls were divided into three efficiency groups based on RFI and RIG: efficient, intermediary and inefficient. Initial and final body weight (BW) and ADG did not differed among efficiency groups for RFI and showed mean values of 233 kg, 360 kg and 1.14 kg/d. DMI, DMI relative to BW (DMIBW) and DMI to supply the requirements for maintenance (DMIM) and growth (DMIG) increased from efficient to inefficient groups for RFI. The reduction in RFI decreased the feed conversion ratio (FCR) in 12.2% and increased the gross feed efficiency (GFE) and partial efficiency of growth (PEG) in 13.3% and 15.5%, respectively. Serum creatinine was higher in the efficient group, indicating that efficient growing bulls showed greater muscle mass than the inefficient ones for RFI. Serum glucose decreased from the inefficient to the efficient group, which can be related to the higher efficiency of mitochondrial metabolism in growing bulls efficient for RFI. Serum cholesterol was higher in the efficient group, which suggests the lower utilization of triglycerides transported by high density lipoproteins (HDL) to supply the energy demand of the growing bulls efficient for RFI. The diet leftovers of efficient growing bulls had higher proportion of particles bigger than 19 mm and particles bigger than 7.8 mm, lower proportion of particles between 1.7 and 7.8 mm and greater average particle size than the leftovers of the inefficient growing bulls for RFI, which indicates that the first ones selected diet with higher proportion of concentrate. The width:depth ratio of rib eye in Longissimus dorsi muscle was lower in the efficient growing bulls for RFI. Initial rib eye area (REA) was slightly greater in efficient growing bulls, but final REA did not differed among the efficiency groups for RFI. Initial and final backfat thickness (BFT), and BFT gain were similar among the efficiency groups for RFI. As noted among the efficiency groups for RFI, initial and final BW did not differed among the efficiency groups for RIG. However, ADG was lower in the inefficient group (1.02 kg/d) compared to the intermediary and efficient groups (1.19 kg/d on average). DMIBW and DMIM increased from the efficient to the inefficient groups for RIG. The increment in RIG decreased FCR in 23% and increased GFE in 28%, the maintenance efficiency (MEffic) in 37%, PEG in 21%, the relative growth rate (RGR) in 20% and the Kleiber ratio (KR) in 21%. For the carcass traits, the width:depth (W:D) ratio of rib eye also was lower in the efficient group for RIG, while the initial and final measures, and the gains in REA and BFT did not differed among the efficiency groups for RIG. It was conclude that growing bulls efficient for RFI has lower feed intake but keep the same production level of the inefficient ones. The improvement of efficiency for RFI in these animals is related to increase of muscularity, high efficiency of energy metabolism and intake of diets with higher proportion of concentrate feed. The improvement of efficiency for RIG decreases the maintenance requirements, which determines the decrease of feed intake relative to BW and the increase of daily BW gain of Purunã growing bulls. The carcass composition of these animals is not influenced by the improvement of efficiency for RFI and RIG, but the rounded shape of Longissimus dorsi muscle indicates a high potential of muscular development in growing bulls efficient for these feed efficiency traits. Keywords: concentrate, energy metabolism, maintenance requirements, muscle development, residual feed intake, residual intake and body weight gain

Orientador : Profª. Drª. Carla Forte Maiolino Molento / Co-orientador : Prof. Dr. Ricardo Vilani e Profª. Drª. Elizabeth Santin / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 27/03/2015 / Inclui referências : f. 18-20;47-56;70-75;92-96 / Área de concentração : Nutrição e alimentação animal / Resumo: No Brasil, em 2011 foram produzidas 544.490 toneladas de peixes provenientes da aquicultura. A preocupação com o grau de bem-estar dos animais destinados à produção de alimentos é crescente no mundo ocidental. No entanto, os métodos tradicionais de abate de peixes causam um alto grau de sofrimento e estudos de métodos de abate humanitário em espécies nativas ainda são escassos. Além disso, as regulamentações de abate de animais de produção não incluem peixes. Desta forma, este trabalho teve como objetivo estudar parâmetros para eletronarcose de duas espécies, assim como conhecer a percepção de cidadãos da América Latina em relação à senciência, bem-estar e abate humanitário de peixes. Este estudo divide-se em cinco capítulos: (1) Apresentação; (2) Percepção sobre senciência, bem-estar e abate humanitário de peixes por cidadãos da América Latina; (3) Eletronarcose em pacu (Piaractus mesopotamicus); (4) Eletronarcose em jundiá (Rhamdia quelen) e (5) Considerações finais. O capítulo sobre a percepção dos cidadãos mostrou que os respondentes consideram os peixes como seres sencientes. A classificação da percepção de senciência entre os diferentes grupos taxonômicos parece estar em concordância com a proximidade filogenética, sugerindo uma maior sensibilidade com os mamíferos. Os cidadãos perceberam um alto grau de sofrimento em cenários de pesca esportiva, feira do peixe vivo e peixes usados em laboratórios. Além disso, os respondentes concordaram com a inclusão dos peixes nas normativas de abate humanitário. Os capítulos sobre electronarcose permitiram entender parâmetros de insensibilização elétrica com tempos de inconsciência maior que 1 min, sem alterações significativas no pH muscular e rigor mortis das carcaças. Ainda, os parâmetros foram seguros em termos de evitar fraturas, hemorragias ou petéquias nas carcaças. Os resultados obtidos apontam para a necessidade de desenvolvimento de pesquisa visando melhorar as atuais práticas de abate de peixes no Brasil, assim como a relevância de incluir os peixes na regulamentação de abate humanitário. Novos estudos são necessários para fornecer ferramentas aplicáveis na indústria, de modo de instaurar práticas de abate humanitário em peixes que diminuam o sofrimento de um grande número de indivíduos. Palavras-chave: Abate humanitário. Bem-estar animal. Eletronarcose. Inconsciência. Percepção. Sofrimento. Termonarcose. / Abstract: In Brazil, in 2011 it was produced 544,490 tons of fish from aquaculture. The concern with the level of welfare of animals for food production is increasing in the Western world. However, traditional methods of killing fish cause a high degree of suffering and studies of humane slaughter methods in native species are still scarce. Furthermore, the most regulations slaughter of farm animals include do not include fish. Thus, this work aimed to study parameters for electrical stunning in two species and to study the perception on fish sentience, welfare and slaughter by citizens from Bogotá, Colombia, and Curitiba, Brazil. This study is divided into five chapters: (1) Presentation; (2) Perception on fish sentience, welfare and humane slaughter by Latin American citizens; (3) Electrical stunning in pacu (Piaractus mesopotamicus); (4) Electrical stunning in South American catfish (Rhamdia quelen) and (5) Final considerations. The chapter on the perception of citizens showed that respondents consider the fish as sentient beings. The classification of sentience perception among taxonomic groups seems in accordance with the phylogenetic proximity to humans, suggesting greater sensitivity towards mammals. Citizens perceived a high degree of suffering in recreational angling, fair live fish and fish used in laboratories. In addition, respondents agreed with the inclusion of fish in humane slaughter regulations. The chapters on electrical stunning allowed identified parameters of electrical stunning to unconsciousness times greater than 1 min and no significant changes in muscle pH and rigor mortis of carcasses. Further, parameters used were safe in terms of avoiding fractures, bleeding or petechial in the carcasses. The results point to the need for research development to improve the current fish slaughtering practices in Brazil, as well as the importance of including fish in the regulation of humane slaughter. Further studies are needed to provide tools applicable in the industry in order to establish humane slaughter practices in fish reduce the suffering of a large number of individuals. Keywords: Animal welfare. Electrical stunning. Humane slaughter. Hypothermia. Perception. Suffering. Unconsciousness.

Orientadora : Profª Drª Simone Tostes de Oliveira Stedile / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 24/03/2014 / Inclui referências / Área de concentração : Ciências veterinárias / Resumo: Diarréia é uma das queixas mais comuns apresentadas aos veterinários diariamente, onde muitas vezes o manejo e diagnóstico definitivo da mesma é um grande desafio, devido a sua variedade de patógenos, ausência de sinais clínicos específicos e presença concomitante de co-infecções por vírus, bactérias e protozoários. Como as doenças infecciosas e parasitárias estão entre as causas mais comuns de diarreia e os testes diagnósticos, assim como os respectivos tratamentos frequentemente variam de acordo com a etiologia da mesma, fazer esta caracterização inicial é importante. Raramente a realização de vários testes diagnósticos são realizados para identificar todas as possíveis causas da diarreia em cães. Isso pode ser em parte porque os métodos tradicionais para a identificação de infecções gastrointestinais são caros, de baixa sensibilidade diagnóstica ou lentos para produzir resultados. A falta de um diagnóstico definitivo, a falha no tratamento com diarréia persistente ou recorrente e a despesa com medicamentos ineficazes, podem levar à insatisfação do cliente, resistência medicamentosa, bem como colocar em risco a saúde do animal. O objetivo deste estudo foi o uso de um painel de PCR em tempo-real e do parasitológico de fezes para pesquisa da prevalência de patógenos e co-infecções em uma população de cães com e sem diarreia atendidos em um hospital veterinário particular. Para tanto, o trabalho foi dividido em dois capítulos, sendo o primeiro um artigo de revisão preparado para a revista Clínica Veterinária, sobre o uso do PCR em tempo-real no diagnóstico de doenças infecciosas em cães e gatos e comparação desta com outras técnicas de diagnóstico. O segundo capítulo compreende a tabulação dos resultados obtidos com as análises realizadas e confecção de um artigo submetido e aceito pelo jornal BMC Veterinary Research. As amostras de fezes foram testadas para o vírus da cinomose canina, coronavírus canino, parvovírus canino tipo 2 (CPV-2), Clostridium perfringens alfa toxina (CPA), Cryptosporidium spp., Giardia spp. e Salmonella spp. através de técnicas moleculares e a pesquisa de larvas, ovos, cistos e trofozoítos por meio do parasitológico de fezes. Do total das 104 amostras de fezes diarreicas e 43 controles, 71/104 (68.3%) dos cães com diarreia foram positivos para pelo menos um patógeno, onde destes, infecção única foi observada em 39/71 (54,9%) e coinfecção em 32/71 (45,1%), incluindo 21/32 (65,6%) dos cães com duas, 5/32 (15,6%) com três e 6/32 (18,8%) com quatro infecções. No grupo controle, 13/43 (30,2%) dos cães foram positivos, todos com infecção única. Os patógenos mais prevalentes nos cães com diarreia foram CPA (40/104 cães, 38.5%), CPV-2 (36/104 cães, 34.6%), e Giardia spp. (14/104 Cães, 13.5%). O CPV-2 foi o patógeno mais prevalentemente associado a co-infecções, principalmente com os agentes CPA, Cryptosporidium spp. e Giardia spp. Palavras-chave: Cães, Co-infecção, Prevalência, Diarreia, Painel, PCR em temporeal / Abstract: Diarrhea is one of the most common reasons pets are taken to the veterinary clinician daily. Definitive diagnosis and management often pose great challenges due to its variety of pathogens, absence of specific clinical signs and concomitant presence of co-infections with viruses, bacteria and protozoa. Since infectious and parasitic diseases are among the most common causes of diarrhea and diagnostic tests, as well as their treatments, often vary according to the etiology of the disease, prompt characterization is important. Rarely various diagnostic tests are performed to identify all possible causes of diarrhea in dogs. This may be partly because traditional methods for identification of gastrointestinal infections are expensive, have low diagnostic sensitivity and are time-consuming. The lack of a definitive diagnosis, failing to treat persistent or recurrent diarrhea and spending on ineffective drugs, can lead to customer dissatisfaction, drug resistance, as well as put the animal's health at risk. The aim of this study was the use of a Real-Time PCR panel and parasitological stool examination to survey prevalence of pathogens and co-infections in a population of dogs with and without diarrhea seen at a private veterinary hospital, as well as frequency in different countries. Therefore, the work was divided in two chapters, the first a review article prepared for the Clínica Veterinária journal on the use of Real-Time PCR for diagnosis of infectious diseases in dogs and cats and comparison with other diagnostic techniques. The second chapter contains a tabulation of the results obtained from the analyses, and the preparation of a paper submitted and accepted by the BMC Veterinary Research journal. Stool samples were tested for canine distemper virus, canine coronavirus, canine parvovirus type 2 (CPV-2), Clostridium perfringens alpha toxin (CPA), Cryptosporidium spp., Giardia spp. and Salmonella spp. through molecular techniques and examined for larvae, eggs, cysts and trophozoites by parasitological stool examination. Of the total of 104 samples of diarrheal stools and 43 controls, 71/104 (68.3 %) of the dogs with diarrhea were positive for at least one pathogen. For positive samples, single infection was observed in 39/71 (54.9%) and co-infection in 32/ 71 (45.1 %), including 21/32 (65.6%) dogs with two, 5/32 (15.6%) dogs with three and 6/32 (18.8%) dogs with four infections. In the control group, 13/43 (30.2 %) dogs were positive, all with single infections. The most prevalent pathogens observed in dogs with diarrhea were CPA (40/104 dogs, 38.5 %), CPV-2 (36/104 dogs, 34.6 %) and Giardia spp. (14/104 dogs, 13.5 %). CPV - 2 was the pathogen most prevalently associated with co- infections, especially associatd with CPA, Cryptosporidium spp. and Giardia spp. Keywords: Dogs, Co-infection, Prevalence, Diarrhea, Panel, Real-Time PCR.

Orientador : Prof. Dr. Marson Bruck Warpechowski / Orientador : Prof. Dr. Antonio João Scandolera / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 24/03/2014 / Inclui referências / Área de concentração : Ciências veterinárias / Resumo: No Brasil, o abate industrial de suínos ocorre normalmente com peso vivo entre 90 e 120 kg. O aumento do peso de abate tem sido estudado em alguns sistemas de produção industriais da região Sul do Brasil para aumentar a produtividade e a qualidade do produto processado e para diminuir o custo de produção. Os primeiros resultados publicados sugerem que, sem outras alterações no sistema, o abate com 135 kg de peso vivo propicia o menor custo/kg ao produtor. Porém ainda são escassas as pesquisas brasileiras sobre suínos pesados, e não foram encontradas referências envolvendo estudo da digestibilidade das frações nutricionais e da produção e composição do efluente dessa categoria animal. Quaisquer alterações no sistema produtivo podem influenciar o desempenho zootécnico, a composição de carcaça, a retenção e a excreção de nutrientes. Em 2006, foi publicada na França, a primeira versão oficial do InraPorc®, um sistema integrado de modelos, dinâmico e não linear, proposto como ferramenta de auxílio para a avaliação e desenvolvimento de estratégias nutricionais para porcas e suínos em crescimento. Para essa última categoria, o sistema simula o consumo e a retenção de nutrientes, o metabolismo energético e proteico, o crescimento e algumas medidas da composição da carcaça. Por meio da quantificação dinâmica e acumulada do fluxo de nutrientes em cada cenário, é possível simular a excreção de nutrientes, a partir do que se pode calcular a composição dos dejetos e efluentes. Entretanto, até o momento e muito recentemente, esse modelo tem sido utilizado no sistema suinícola brasileiro apenas para avaliação econômica de estratégias alimentares. O objetivo da realização deste trabalho foi avaliar desempenho zootécnico, consumo hídrico, produção de efluente, digestibilidade aparente e excreção de fósforo em suínos com pesos de abate de 100, 135 e 145 kg, sob manejo alimentar à vontade ou restrito, e avaliar a capacidade do modelo InraPorc® para a predição da excreção de nutrientes, utilizando o fósforo como nutriente de referência. Constatou-se que os suínos podem ser abatidos com peso mais elevado (até 145 kg) sem alterar a produção de efluente e o consumo hídrico diários nem a produção anual de peso vivo. Além disso, quando se mantém o mesmo número de animais alojados por lote abatido aos 100 kg, não há comprometimento da capacidade total anual de armazenamento dos efluentes na esterqueira. De maneira geral, a restrição alimentar proporcionou melhores coeficientes de digestibilidade em machos castrados, e a elevação do peso de abate proporcionou melhor digestibilidade da matéria seca, matéria orgânica, energia bruta e resíduo mineral. Com calibração adequada, a ferramenta InraPorc® foi eficiente para simular o sistema de produção estudado, obtendo-se alta precisão e aceitável exatidão na estimativa de peso vivo e de excreção de fósforo por suínos em terminação até 145 kg de peso vivo, sob alimentação à vontade e restrita. / Abstract: In Brazil, industrial pig slaughtering occurs currently with the live weight among 100 and 120 kg. Increase in the slaughter weight has been studied in a industrial pig production in the South Brazil to increase productivity and product quality, and to decrease the production cost. The first results published suggest that, without other changes in the system, the slaughter with 135 kg live weight provides the lower cost by kg at the farm level. However, there is still little research on Brazilian heavy pigs, and there were no references found involving study on the digestibility of nutritional fractions and on the manure production and composition for this animal category. Every change in the productive system could affect zootechnical performance, carcass composition and the nutrient retention and excretion. In 2006 was published in France the first official version of the InraPorc®, an integrated models system, dynamic and nonlinear, proposed as a tool for help to evaluate and develop nutritional strategies for sows and growing pigs. To this latter category, the system simulates the intake and nutrient retention, the energy and protein metabolism, the growing and some carcass composition measures. Starting from the dynamic quantification of the nutrient flux in each scenario, it is possible to simulate the nutrient excretion, which could be used to calculate the manure and effluent composition. However, until this moment and very recently, this tool has been studied in the Brazilian pig production system only for economical evaluation of feeding strategies. The objective with this work was to evaluate production performance, water intake, effluent production, digestibility and phosphorus excretion in finished pigs with slaughter weights of 100, 135 and 145 kg, feed ad libitum or restricted, and to evaluate the ability the InraPorc® for predicting nutrient excretion, using the phosphorus as the reference. There was observed that the pigs could be slaughtered with heavier weights (until 145 kg), without change neither on the daily effluent production and water consumption, nor on the total live weight produced by year. After that, when the same number of pigs logged by lot on the 100 kg is kept, there was no implication on the total of effluent stockage by year. In a general way, dietary restriction provided better digestibility in castrated males, and the elevation of body weight provided better digestibility of dry matter, organic matter, gross energy and mineral residue. With proper calibration, the InraPorc® was an efficient tool to simulate the production system studied, obtaining high precision and acceptable accuracy in the estimation of live weight and phosphorus excretion by finishing pigs up to 145 kg live weight under ad libitum feeding and restricted.

Orientador : Prof. Dr. José Luciano Andriguetto / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 14/01/2000 / Inclui referências / Área de concentração : Produção animal / Resumo: Uma das maiores limitações da produção de carne ovina no Brasil é a baixa eficiência de produção de cordeiros, tanto para o abate como para reposição do rebanho traduzida em alta mortalidade dos cordeiros e baixa fertilidade das ovelhas. Este experimento foi realizado com o objetivo de avaliar o efeito da alimentação privativa (creep feeding), oferecida até a desmama, sobre o desenvolvimento de cordeiros machos até o abate e de borregas até a primeira cobertura. Foram utilizados 106 cordeiros mestiços Suffolk, os quais foram divididos em dois grupos homogêneos quanto à idade, peso ao nascer, sexo e tipo de parto (simples e gemelar). Os cordeiros do primeiro grupo (T1) tiveram acesso à alimentação privativa na fase de aleitamento enquanto que os do segundo grupo (T2) receberam apenas o leite materno de desmama. A ração utilizada para a AP (alimentação privativa) apresentava 20% de PB (proteína bruta) e 75% de NDT (nutrientes digestíveis totais). A AP ficou à disposição dos cordeiros 22 horas/dia e seu consumo foi medido diariamente, por 50 dias e a média de consumo do mesmo foi de 249,53g/cordeiro/dia. Os cordeiros foram desmamados quando apresentavam 18 kg de PV (peso vivo) ou 60 dias ou mais de idade. Por ocasião do desmame todos os cordeiros machos dos dois tratamentos foram confinados recebendo a mesma formulação de concentrado do creep feeding e feno de alfafa na 1ª semana, o qual foi gradativamente substituído por silagem de milho, para serem terminados com uma dieta de 500g de concentrado por dia e silagem de milho à vontade. Ao atingirem uma média de peso de 35 kg ou 128 dias de idade, todos os cordeiros foram abatidos e suas carcaças foram pesadas e avaliadas quanto ao rendimento de carcaça. As borregas desmamadas foram incorporadas ao rebanho de ovinos da Fazenda da Universidade e receberam o mesmo manejo que as demais fêmeas do rebanho, com suplementação conforme suas necessidades. Estas borregas foram avaliadas quanto ao seu desenvolvimento até a estação de monta seguinte em termos de ganho de peso diário, peso à cobertura e taxa de prenhez. Houve diferença significativa entre o peso e a idade de desmame e no ganho de peso médio diário para os cordeiros que receberam a suplementação na fase de aleitamento. Esta diferença afetou o peso final e o peso da carcaça dos cordeiros machos confinados, os quais apresentaram-se estatisticamente superiores aos que não receberam a alimentação privativa (T2), apesar do sistema de confinamento após a desmama ter sido igual para todos. Entretanto, para as borregas do T2 que não tiveram acesso a alimentação privativa, observou-se um maior ganho de peso médio diário (ganho compensatório) após a desmama, minimizando as diferenças encontradas entre os dois tratamentos na fase do creep feeding, fazendo com que não se encontrasse diferença no peso à cobertura e nem na porcentagem de prenhez dos mesmos. Considerando-se os resultados obtidos, conclui-se que a alimentação privativa para os cordeiros é benéfica para cordeiros em aleitamento, influenciando o peso de abate e das carcaças dos cordeiros machos abatidos precocemente, porém não tendo reflexos na performance reprodutiva das borregas que foram suplementadas após este período. Palavras-chave: Cordeiros. Desmama. Creep feeding. Peso. / Abstract: A major limitation of lamb production in Brazil is the low efficiency in producing lambs for slaughter as well as for replacement, due to the high mortality of lambs and low fertility of ewes. This experiment performed with the objective of evaluating the effects of creep feeding offered to animals up to weaning, on male lambs grow until slaughter and on ewe lambs until first breeding. In this study, 106 Suffolk cross lambs were used divided into two groups, according to age, birth weight, sex and type parturition (single or twin). The (T1) group had access to the creep feeding in the nursing phase while the (T2) group received only maternal milk until weaning. The ration used for the creep feeding had 20% CP (crude protein) and 75% TDN (total digestible nutrients). Creep feeding was available for the lambs for 22 hours / day and the consumption was measured daily for 50 days and the average was 249.53 g / lamb / day. The lambs were weaned when reached 18 kg or 60 days or older. After weaning, all the male lambs were confined, receiving the same ration formulation the creep feeding and alfalfa hay in the first week, which was gradually substituted for corn silage, to be finished with a diet of 500g of concentrate and corn silage ad libitum. When the lambs reached 35kg or 128 days of age, all them were slaughtered and their carcasses were weighed and valued for carcass yield. The ewe lambs were added to the breeding herd and managed accordingly receiving concentrate according to their needs. Their development was evaluated until the next breeding season. There was significative difference affected the final weight and age of weaning and in the daily weight gain for the lambs that received supplement in the nursing phase. That difference affected the final weight and the carcass weight of the confined male lambs, that showed superior performance than those which did not have access to the creep feeding (T2) in the same confinement system. However, for the T2 ewe lambs that did not have access to the creep feeding, there was a higher daily weight gain after weaning, decreasing the differences between the two treatments in the creep feeding phase. Considering the results seen in this study, we can conclude that creep feeding is beneficial for weaning lambs, influencing the slaughter weight and the carcass yild of male lambs but has no effect in the reproductive performance of the ewe lambs that were supplemented after this period. Keywords: Lambs. Weaning. Ration. Weight.

Orientadora : Profª. Drª. Carla Forte Maiolino Molento / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 25/11/2014. / Inclui referências / Abstract: Laboratory animals are frequently used in many countries, despite the existence of validated alternative methods (VAM). The objective of this thesis was to collaborate to the implementation of VAM for rabies diagnosis in Brazil, contributing to the reduction of harmful laboratory animal use. The thesis was organized in six chapters: Chapter I is an introduction; II presents alternatives to the use of laboratory animals in Brazil and current opportunities to the development and use of alternative methods; III describes perceived barriers to the adoption of alternatives to laboratory animal use for rabies diagnosis, focusing on current rabies diagnosis methods performed in Brazil and other countries and barriers associated with replacing mice; IV presents a cost comparative study of the Mouse Inoculation Test (MIT) and the Virus Isolation in Cell Culture (VICC) for rabies diagnosis in Brazil, aiming to compare the costs to perform both test; V describes a decision tree (DT) to assist the replacement of laboratory animals in Brazil using rabies diagnosis as a model, focusing on the development of a framework applied to the Brazilian scenario; and VI adresses final considerations regarding all chapters. Chapter II shows that the Brazilian government is putting forward important initiatives, as the approval of the Law 11,794, which regulates the breeding and use of laboratory animals in the country, and the creation of organizations such as the Brazilian Centre for the Validation of Alternative Methods (BraCVAM) and the National Network of Alternative Methods (RENAMA); these initiatives indicate that Brazil is improving in the field of laboratory animal welfare. Chapter III is a result of a survey involving 12 Brazilians and 43 non-Brazilian respondents that performed rabies diagnosis. Many laboratories continue to use mice for rabies diagnosis and this proportion appears to be especially high in Brazil, despite animal protection laws and technical guidelines that favor the use of alternatives; the most frequently reported constraints associated with the use of alternatives were lack of laboratory facilities, equipment and materials and lack of financial resources. For chapter IV, considering that 200 MIT tests are equivalent to 350 VICC tests in terms of facilities and staff hours needed per month, we calculated the average total cost per sample tested and the costs of implementation of laboratory structure and routine use for both tests. In this sense, one sample analyzed by MIT costs around 205.2% more than by VICC; MIT costs 74.4% and 406.3% more than VICC considering implementation and routine use per month, respectively. For chapter V, we addressed barriers that hinder the replacement of animals described in chapter III and organized suggestions in a DT framework. The DT seems to have high resolution potential, provides guidance to address each obstacle and leads to the implementation or development of VAM. Our results collaborate to the implementation of VAM for rabies diagnosis in Brazil, contributing to the reduction of harmful laboratory animal use. Besides, results may be applied in other scenarios and by any person interested in implementing alternatives to animal use. Key words: Animal welfare. Barriers. Cell culture. Economic analysis. Ethics on the use of animals. Framework. Laboratory animals. Mouse inoculation test. Regulation. Replacement. Survey. Three Rs. / Resumo: Animais de laboratório são frequentemente utilizados em vários países, apesar da existência de métodos alternativos validados (Validated Alternative Methods- VAM). O objetivo desta tese foi colaborar para a implantação de VAM para o diagnóstico da raiva no Brasil, contribuindo para a redução do uso prejudicial de animais de laboratório. A tese foi organizada em seis capítulos: o Capítulo I é uma introdução; o II apresenta alternativas ao uso de animais de laboratório no Brasil e oportunidades para o desenvolvimento e uso de métodos alternativos; o III descreve barreiras percebidas à adoção de alternativas ao uso de animais de laboratório para o diagnóstico da raiva, focando em métodos diagnósticos realizados atualmente no Brasil e em outros países e barreiras associadas à substituição de camundongos; o IV apresenta um estudo comparativo de custos do teste de inoculação viral em camundongos (Mouse Inoculation Test- MIT) e do isolamento viral em cultivo celular (Virus Isolation in Cell Culture- VICC) para o diagnóstico da raiva no Brasil, e objetiva comparar os custos para realização de ambos os testes; o V descreve uma árvore de decisão (Decision Tree- DT) para auxiliar a substituição de animais de laboratório no Brasil usando o diagnóstico da raiva como modelo, focando no desenvolvimento de uma estrutura aplicada ao cenário brasileiro; e o VI apresenta considerações finais relacionadas a todos os capítulos. O Capítulo II mostra que o governo brasileiro está criando iniciativas importantes, tais como a aprovação da Lei 11.794, que regulamenta a criação e o uso de animais de laboratório no país, e a criação de organizações como o Centro Brasileiro de Validação de Métodos Alternativos (Brazilian Centre for the Validation of Alternative Methods- BraCVAM) e a Rede Nacional de Métodos Alternativos (National Network of Alternative Methods- RENAMA); tais iniciativas indicam que o Brasil está avançando no campo do bem-estar de animais de laboratório. O Capítulo III é o resultado de uma pesquisa envolvendo 12 respondentes brasileiros e 43 não brasileiros que realizavam o diagnóstico da raiva. Muitos laboratórios continuam utilizando camundongos para o diagnóstico da raiva e esta proporção parece ser especialmente alta no Brasil, apesar de leis de proteção animal e diretrizes técnicas que favorecem o uso de alternativas; as barreiras associadas ao uso de alternativas citadas com maior frequência foram falta de estrutura laboratorial, equipamentos e materiais, e falta de recursos financeiros. Para o Capítulo IV, considerando que 200 testes utilizando MIT são equivalentes a 350 utilizando VICC em termos de estrutura e horas de trabalho dos funcionários necessárias por mês, calculamos o custo total médio por amostra testada, além do custo para a implantação da estrutura laboratorial e do uso rotineiro de ambos os testes. Neste sentido, uma amostra analisada pelo MIT custa em torno de 205,2% mais que pelo VICC; o MIT custa 74.4% e 406.3% mais que o VICC considerando implantação e uso rotineiro por mês, respectivamente. Para o Capítulo V, descrevemos barreiras que impedem a substituição de animais descritos no Capítulo III e organizamos sugestões em uma estrutura em DT. A DT parece ter um alto potencial de resolução de barreiras, provê orientação para abordar cada obstáculo e leva à implantação ou ao desenvolvimento de VAM. Nossos resultados colaboram para a implantação de VAM para o diagnóstico da raiva no Brasil, contribuindo para a redução do uso prejudicial de animais de laboratório. Também, os resultados podem ser aplicados em outros cenários e por qualquer pessoa interessada em implantar alternativas ao uso de animais. Palavras-chave: Análise econômica. Animais de laboratório. Barreiras. Bem-estar animal. Cultivo celular. Estrutura. Ética no uso de animais. Inoculação viral em camundongos. Pesquisa. Regulamentação. Substituição. Três Rs.

Orientador : Prof. Dr. Rafael Felipe da Costa Vieira / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 21/10/2016 / Inclui referências : f. 20-23;34-36;47-51 / Área de concentração : Ciências Veterinárias / Resumo: Micoplasmas hemotropicos (hemoplasmas) sao bacterias Gram-negativas, pleomorficas e que se aderem a membrana de eritrocitos de uma grande variedade de especies animais. Estao distribuidos mundialmente e diferentes especies destas bacterias ja foram descritas em animais domesticos, silvestres e seres humanos. Entretanto, estudos envolvendo a deteccao de hemoplasmas em caprinos sao escassos e ainda nao haviam sido realizados no Brasil. Assim, objetivou-se determinar a prevalencia e os fatores associados a infeccao por Mycoplasma sp. em caprinos do estado da Paraiba, Nordeste do Brasil. Um total de 158/402 (39,3%) animais foram positivos para o gene 16S rRNA de Mycoplasma sp. pela PCR. O sequenciamento genetico de 10% das amostras positivas demonstrou .99% de identidade com varias sequencias de Mycoplasma ovis depositadas no GenBank. Caprinos leiteiros (OR = 2.15; 95% IC: 1.40-3.32%; p = 0.0004) e anemicos (OR = 2.39; 95% IC: 1.54-3.71%; p = 0.00007) apresentaram maior chance de estarem infectados por M. ovis do que caprinos de corte nao anemicos. Amblyomma parvum (49/52, 94.23%) e Rhipicephalus (Boophilus) microplus (3/52, 5.77%) foram as especies de carrapatos encontradas nos animais. Este e o primeiro relato de deteccao molecular de M. ovis em caprinos na America do Sul. Palavras-chave: Hemoplasmas; Micoplasmose hemotropica; pequenos ruminantes; PCR / Abstract: Hemotropic mycoplasmas (haemoplasmas) are gram-negative pleomorphic bacterias that infect the erythrocites membrane of a wide range of animal hosts. This pathogen is worldwide distributed and different species were described infecting domestic and wild animals and also humans. However, studies involving the diagnosis of haemoplasmas in goats are scarce and had not yet been conducted in Brazil. Thus, the present work aimed to detect the prevalence and risk factors associated with the infection of Mycoplasma sp. in goats from Paraíba State, Northeastern Brazil. A total of 158/402 (39.3%) animals were positive for the 16S rRNA gene from Mycoplasma sp. by PCR. The sequencing of 10% of positive samples demonstrated a ?99% of similarity with multiple Mycoplasma ovis sequences deposited on GenBank. Dairy (OR = 2.15; 95% IC: 1.40-3.32%; p = 0.0004) and anemic goats (OR = 2.39; 95% IC: 1.54-3.71%; p = 0.00007) showed higher chances to be infected by M. ovis than non-anemic beef goats. Amblyomma parvum (49/52, 94.23%) and Rhipicephalus (Boophilus) microplus (3/52, 5.77%) were the tick species found in these animals. This is the first report of molecular detection of M. ovis in goats from South America. Keywords: Hemoplasmas; Hemotropic mycoplasmosis; small ruminants; PCR.

Orientador : Prof. Dr. Ivan Roque de Barros Filho / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 03/12/2014 / Inclui referências : f. 23;33-39;48-52;72-76;99-104;106-121 / Área de concentração: Medicina veterinária / Resumo: Enfermidades do trato respiratório podem acometer cavalos com finalidades e manejo distintos. Esta tese está dividida em quatro capítulos: o primeiro trata de uma contextualização sobre as principais doenças do trato respiratório equino; o segundo é um estudo retrospectivo de alterações endoscópicas em 464 cavalos de corrida; o terceiro capítulo é uma avaliação do trato respiratório em 10 cavalos de corrida em fase inicial de treinamento; e o quarto capítulo é um estudo em 31 cavalos carroceiros. No estudo retrospectivo, encontrou-se alguma alteração endoscópica em 325/464 (70,0%) dos animais. Hemorragia pulmonar induzida por exercício (HPIE) foi encontrada em 181/464 (39,0%) endoscopias, sendo 33/181 (18,2%) grau I; 65/181 (35,9%) grau II; 57/181 (31,5%) grau III e 26/181(14,4%) grau IV. Deslocamento dorsal de palato mole (DDPM) foi observado em 35/464 (7,5%); secreção (S) em 119/464(25,6%); neuropatia laríngea (NL) em 17/464 (3,7%); hiperplasia folicular linfoide (HFL) em 28/464 (6,0%) e envelopamento de epiglote (EE) em 10/464 (2,1%). Podem estar associadas à ocorrência de HPIE o DDPM (p= 0,01) e EE (p=0,04) em cavalos de corrida. Para a avaliação do trato respiratório de cavalos puro sangue inglês e carroceiros utilizaram-se: endoscopia, aspirado traqueal (AT), lavado broncoalveolar (LBA) e painel de reação em cadeia da polimerase (PCR). Nos cavalos de corrida, observou-se: S em 10 animais (100,0%); NL em um animal (10,0%); HFL em 10 animais (100,0%); edema na bifurcação traqueal (BT) em um animal (10,0%). A média da contagem diferencial observada no AT foi de: 175,7 ±67,7 (43,9%) macrófagos; 81,1 ±87,6 (20,2%) neutrófilos; 94,1 ±48,0 (23,5%) linfócitos; 3,5 ±4,4 (0,8%) eosinófilos; 3,9 ± 10,9 (0,1%) células epiteliais caliciformes; 45,4 ±59,9 (10,9%) células epiteliais ciliadas; 3,6 ±3,3 (0,9%) mastócitos. Alterações observadas no AT: 2 (20,0%) aumento no número de neutrófilos; 8 (80,0%) número aumentado de linfócitos, 9(90,0%) aumento no número de mastócitos. As médias da contagem diferencial do LBA foram: 252,9 ± 43,6 (63,2%) macrófagos; 44,4 ± 39,7(11,1%) neutrófilos; 90,7 ± 22,6 (22,6%) linfócitos; 3,6 ± 5,1 (0,9%) eosinófilos; 7,1 ±4,5 (1,7%) células epiteliais; 5,7 ±5,2 (1,4%) mastócitos. Alterações encontradas no LBA: 8(80%) aumento no número de macrófagos; 8 (80%) aumento no número de neutrófilos; 3 (30%) aumento no número de eosinófilos; 3 (30%) aumento no número de mastócitos. O escore total de hemossiderina (THS) médio foi de 9,7 ±11,7. Dois animais foram positivos para HPIE. Com a PCR, dois cavalos foram positivos para herpes vírus equino tipo 5 (EHV 5) e um animal para EHV 2 e 5. Nos cavalos carroceiros, observaram-se as seguintes alterações endoscópicas: S em 28 (90,3%) dos animais; NL em 6 (19,3%); HFL em 10 (32,2%); DDPM em 1 (3,2%); edema em BT em 3 (9,7%) A contagem diferencial média no AT foi: 163,6±95,9 (40,9%) macrófagos; 35,0 ±32,0 (8,8%) neutrófilos; 25,0 ±18,2 (6,1%) linfócitos; 23,3 ±36,7 (5,8%) eosinófilos; 142,5 ±117,7 (36,7%) células epiteliais ciliadas; 2,4 ±2,5 (0,6%) mastócitos. Tipos celulares aumentados no AT: 11 (40,7%) macrófagos; 4 (14,8%) neutrófilos; 12 (44,4%) eosinófilos; 20 (74,0%) mastócitos; 3 espirais de Curshmann (11,1%). A contagem diferencial média do LBA foi: 205,6 ± 60,8 (60,8%) macrófagos; 56,0 ±31,0 (13,1%) neutrófilos; 78,0 ±43,0 (20,3%) linfócitos; 17,0 ±13,0 (3,9%) eosinófilos; 30,0 ±29,0 (3,6%) células epiteliais ciliadas; 2,0 ±4,0 (0,5%) mastócitos. THS médio: 10,2 ±15,5. Tipos celulares em número elevado no LBA: 6 (27,3%) macrófagos; 14 (63,3%) neutrófilos; 19 (86,4%) eosinófilos; 4 (18,2%) mastócitos; 22 (100%) células. Três animais foram positivos para HPIE. Quatro cavalos foram positivos para EHV 5 na PCR. Este estudo é o primeiro relato da detecção in vivo de EHV 5 e EHV 2 em cavalos no Brasil e representa uma alerta para a circulação desses tipos virais no país e sua associação a alterações do trato respiratório, especialmente com HFL e aumento no número de mastócitos no LBA. A associação de diferentes técnicas diagnósticas é recomendada para uma boa avaliação do trato respiratório. Cavalos carroceiros podem apresentar HPIE assim como potros PSI ainda em fase de treinamento. Palavras - chave: eqüinos, doenças respiratórias, diagnóstico molecular / Abstract: Respiratory tract diseases in horses can occur in horses with different purposes and management. This thesis is divided in four chapters: the first is a contextualization about the main diseases in equine respiratory tract; the second one is a retrospective study of endoscopic changes in 464 race horses; the third chapter is a respiratory tract evaluation in 10 race horses in training beginning; the fourth is a respiratory tract evaluation in 31 cart horses. In the retrospective study some endoscopic alteration was found in 325/464 (70.0%) of horses. Exercise induced pulmonary hemorrhage (EIPH) was found in 181/464 (39.0%) endoscopies, and 33/181 (18.2%) grade I; 65/181 (35.9%) grade II; 57/181 (31.5%) grade III and 26/181 (14.4%) grade IV. Dorsal displacement of soft palate (DDSP) was observed in 35/464 (7.5%); secretion (S) in 119/464 (25.6%); laryngeal neuropathy (LN) in 17/464 (3.7%); follicular hyperplasia lymphoid (FHL) in 28/464 (6.0%) and enveloping epiglottis (EE) in 10/464 (2.1%). Can be associated to EIPH: DDSP (p=0.01) and EE (0.04) in race horses. Respiratory evaluation in race horses and cart horses was performed using endoscopy, tracheal aspirate (TA), bronchoalveolar lavage (BAL) and polymerase chain reaction panel (PCR). In race horses we observed: S in 10 (100%); LN in 1 horse (10%); FHL in 10 animals (100%); tracheal bifurcation edema (TB) in 1 (10%).The median differential count in TA was: 175.7 ±67.7 (43.9%) macrophages; 81.1 ±87.6 (20.2%) neutrophils; 94.1 ±48.0 (23.5%) lymphocytes; 3.5 ±4.4 (0.8%) eosinophils; 3.9 ± 10.9 (0.1%) epithelial caliciforme; 45.4 ±59.9 (10.9%) epithelial cells ciliated; 3.6 ±3.3 (0.9%) mast cell. Cell types in high quantity in TA: 2 (20.0%) neutrophils; 8 (80.0%) limphocytes; 9 (90.0%) mast cells. Cell types in high quantity in TA: 2 (20.0%) neutrophils; 8 (80.0%) limphocytes; 9 (90.0%) mast cells. The median differential count in BAL was: 252.9 ± 43.6 (63,2%) macrofages; 44.4 ± 39.7(11.1%) neutrophils; 90.7 ± 22.6 (22.6%) lymphocytes; 3.6 ± 5.1 (0.9%) eosinophils; 7.1 ±4.5 (1.7%) epithelial cells; 5.7 ±5.2 (1.4%) mast cells. Cell types in high quantity in BAL: 8(80.0%) macrophages; 8(80.0%) neutrophils; 3(30.0%) eosiniphils; 3 (30.0%) mast cells. Two animals were positive to EIPH. About PCR, two horses were positive to equine herpes virus type 5 (EHV 5) and one to EHV 2 and 5. In cart horses, the endoscopic alterations found were: S in 28 (90.3%) horses; LN in 6 (19.3%); LHF in 10(32.2%); DDSP in 1 (3.2%); TB edema in 3 (9.7%). The median count in TA was: 163,6±95,9 (40,9%) macrophages; 35,0 ±32,0 (8,8%) neutrophils; 25,0 ±18,2 (6,1%) lymphocytes; 23,3 ±36,7 (5,8%) eosinophils; 142,5 ±117,7 (36,7%) epithelial ciliated cells; 2,4 ±2,5 (0,6%) mast cells. Cell types in high quantity in TA: 11 (40.7%) macrophages; 4 (14.8%) neutrophils; 12 (44.4%) eosinophils; 20 (74.0%) mast cells; 3 (11.1%) Curshmann 'spirals. The median count in BAL was: 205,6 ± 60,8 (60,8%) macrophages; 56,0 ±31,0 (13,1%) neutrophils; 78,0 ±43,0 (20,3%) lymphocytes; 17,0 ±13,0 (3,9%) eosinophils; 30,0 ±29,0 (3,6%) epithelial ciliated cells; 2,0 ±4,0 (0,5%) mast cells. Median THS : 10,2 ±15,5. Cell types in high quantity in BAL: 6 (27.3%) macrophages; 14 (63.3%) neutrophils; 19 (86.4%) eosinophils; 4 (18.2%) mast cells; 22 (100%) epithelial cells. Three horses were positive to EIPH. Four horses were positive to EHV 5 in PCR. This study is the first in life case of EHV 5 e EHV 2 detection in horses in Brazil and represents an alert to those viral types circulation in our country and their association with respiratory tract alterations, especially with FHL and high number of mast cells in BAL. Association among different diagnostic techniques is recommended to a better respiratory tract evaluation. Cart horses can have EIPH even though young race horses in training step. Key-words: equine, respiratory diseases, molecular diagnosis

Orientadora : Drª Rosângela Locatelli Dittrich / Co-orientador : Dr. Alexandre Welker Biondo / Comitê de Orientação : Profª Drª Simone Tostes de Oliveira Stedile; Prof. Dr. Fabiano Montiani Ferreira / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias. Defesa: Curitiba, 24/02/2014 / Inclui referências / Área de concentração : Ciências veterinárias / Resumo: A anemia por doença infecciosa em gatos é causada principalmente por retrovírus, hemoparasitas, ou por sua associação. No Brasil, os hemoparasitas de gatos domésticos são pouco relatados e coinfecções foram descritas apenas em alguns estados, devido à baixa sensibilidade e especificidade da hematoscopia e ao alto custo na utilização da biologia molecular para o diagnóstico individual de cada agente. As infecções pelos retrovírus FIV (vírus da imunodeficiência felina) e FeLV (vírus da leucemia felina) são responsáveis por alta morbidade e mortalidade em gatos domésticos no mundo todo. Os hemoparasitas comumente são agentes oportunistas em uma infecção retroviral, devido à imunodeficiência causada pelo vírus, podendo agravar o quadro clínico do paciente. Os principais fatores de risco para infecção por retrovírus já foram estabelecidos, no entanto, o papel de artrópodes sugadores de sangue e o contato entre gatos na disseminação desses agentes são desconhecidos. Os fatores de risco relacionados à infecção pelos hemoparasitas não estão completamente elucidados. Os objetivos deste estudo foram: determinar a prevalência de infecções e coinfecções entre retrovírus e hemoparasitas em gatos domésticos anêmicos e não anêmicos; avaliar a correlação entre grau de regeneração da anemia e a presença de coinfecções; a taxa de óbito em relação aos gatos coinfectados; avaliar a ocorrência de outras doenças que não envolvam anemia na presença de infecções e coinfecções; e estabelecer os fatores de risco envolvidos em infecções e coinfecções por hemoparasitas e retrovírus a fim de estabelecer medidas de prevenção. Foram avaliadas 142 amostras de sangue de gatos domésticos, sendo 40 doentes anêmicos (grupo I), 50 doentes não anêmicos (grupo II) e 52 saudáveis (grupo III). Realizou-se um painel de detecção de patógenos pela técnica do PCR em tempo real para os seguintes agentes: Anaplasma spp., Bartonella spp., Cytauxzoon felis, Ehrlichia spp., Mycoplasma haemofelis, 'Candidatus Mycoplasma haemominutum', 'Candidatus Mycoplasma turicensis', FIV e FeLV; e sorologia para detecção de anticorpos contra FIV e antígeno (proteína nuclear p27) da FeLV. Do total de amostras, 29% (59/142) foram positivas para pelo menos um agente etiológico, sendo que destas, 38/59 (64,4%) apresentaram infecção única e 35,6% (21/59) coinfecção. Gatos machos, na faixa etária entre um e oito anos, e com acesso à rua são mais predispostos a infecções por hemoparasitas e pelos retrovírus FIV e FeLV. Palavras-chave: anemia, gatos, hemoparasitas, retrovírus, coinfecções / Abstract: Anemia due to infectious disease in cats is mainly caused by retroviruses, hemoparasites, or by their association. In Brazil, hemoparasites of domestic cats are rarely reported and coinfections were described only in some states, due to low sensitivity and specificity of hematoscopy and high costs in the use of molecular biology to the diagnosis of each individual agent. Infections by retroviruses FIV (feline immunodeficiency virus) and FeLV (feline leukemia virus) are responsible for high morbidity and mortality in domestic cats worldwide. Hemoparasites commonly are opportunistic agents in a retroviral infection due to immunodeficiency caused by virus, and may worsen the patient's condition. The main risk factors for infection by retroviruses have been established, however, the role of blood-sucking arthropods and contact between cats in the spread of these agents is unknown. Risk factors related to infection by hemoparasites are not fully elucidated. The objectives of this study were to determine the prevalence of infections and coinfections between retroviruses and hemoparasites in anemic and non-anemic domestic cats; evaluate the correlation between the degree the anemia regeneration and the presence of coinfections; the rate of death compared to coinfected cats; review the occurrence of other diseases not involving anemia in the presence of infections and coinfections; and establish the risk factors involved in infections and coinfections by retroviruses hemoparasites to establish preventive measures. One hundred and forty two blood samples from domestic cats, 40 anemic patients (group I), 50 non-anemic patients (group II) and 52 healthy cats (group III) were evaluated. A real time PCR panel was performed for the following agents: Anaplasma spp, Bartonella spp, Cytauxzoon felis, Ehrlichia spp, Mycoplasma haemofelis, 'Candidatus Mycoplasma haemominutum', 'Candidatus Mycoplasma turicensis', FIV and FeLV, and serology for detection of FIV antibodies and antigen (p27 core protein) of FeLV. Of the total sample, 29% (59/142) were positive for at least one agent, and of these, 38/59 (64.4%) had single infection and 35.6% (21/59) coinfection. Male cats aged between one and eight years, with access to the street are more susceptible to hemoparasites and FIV and FeLV infections. Key words: anemia, cats, hemoparasites, retrovirus, coinfections