Thesis (M.S.)--University of North Carolina at Wilmington, 2005. / Includes bibliographical references (leaves: 53-55)

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2017-08-03T15:48:21Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marielle Garcia Silva - 2014.pdf: 4245927 bytes, checksum: 01ba5c62c3b90ad1f08e7f5fd48439e6 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-08-07T15:38:38Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marielle Garcia Silva - 2014.pdf: 4245927 bytes, checksum: 01ba5c62c3b90ad1f08e7f5fd48439e6 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-07T15:38:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Marielle Garcia Silva - 2014.pdf: 4245927 bytes, checksum: 01ba5c62c3b90ad1f08e7f5fd48439e6 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2014-08-04 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Paracoccidioides spp. are pathogenic fungi that causes paracoccidioidomycosis, an important systemic mycosis in Latin American countries. The success of infection depends on the pathogen ability to obtain essential micronutrients (metals) from the host. This process of nutrient uptake occurs through membrane associated transporters. The membranes are constituted of a lipid bilayer with associated proteins and are involved in different processes during the establishment of infection, such as transport of nutrients and homeostatic regulation. As zinc is a metal that plays an important role in the regulation of host-pathogen interaction and changes in this micronutrient homeostasis are implicated in the pathogenesis of infectious diseases, the aim of this study was to identify the membrane proteins expressed under conditions of zinc deprivation. NanoUPLC-MSE technique was employed in order to identify membrane proteins of yeast cells (Pb01) grown in chemically defined media in the presence and absence of zinc. Transmission electron microscopy was performed to confirm the sample enrichment with membranes. Subsequently, the samples were digested and analyzed by NanoUPLC-MSE. In silico analysis was performed to determine the location of 460 proteins identified in extracts of Pb01 grown in + Zn (control) and TPEN (treated) medium. Among the identified proteins, 141 were classified as belonging to membranes and of those, 120 proteins were repressed and 21 were induced during zinc deprivation. Among the 141 membrane proteins, 81 showed transmembrane domains and 9 were classified as membranes proteins with post-transcriptional modification. A total of 15 membrane proteins showed signal peptide. Analysis of the function of membrane proteins, allowed the description that phospholipid metabolism and cell integrity maintenance pathways were affected by zinc deprivation. / Paracoccidioides spp. são fungos patogênicos, causadores da paracoccidioidomicose, uma importante micose sistêmica nos países latino-americanos. O sucesso da infecção depende da capacidade do patógeno obter micronutrientes essenciais (metais) a partir do hospedeiro. Este processo de captação de nutrientes ocorre através de transportadores associados às membranas. As membranas são constituídas por uma bicamada lipídica com proteínas associadas e estão envolvidas em diferentes processos durante o estabelecimento da infecção, como transporte de nutrientes e regulação homeostática da célula. Como o zinco é um metal que desempenha um papel importante na regulação da interação patógeno-hospedeiro e distúrbios na homeostase deste micronutriente estão implicados na patogênese de doenças infecciosas, o objetivo deste estudo foi identificar as proteínas de membranas expressas em condições de privação de zinco. A técnica NanoUPLC-MSE foi empregada para identificar proteínas de membranas de células de levedura (Pb01) cultivadas em meio quimicamente definido na presença e ausência de zinco. Microscopia eletrônica de transmissão foi realizada para confirmar o enriquecimento da amostra com membranas. Posteriormente, as amostras foram digeridas e analisadas por NanoUPLC-MSE. Análises in silico foram realizadas para determinação da localização de 460 proteínas obtidas do extrato proteico de Pb01 cultivado em meio com zinco (controle) e TPEN (tratado). Do total de proteínas identificadas, 141 proteínas foram classificadas como pertencentes a membranas e destas, 120 proteínas foram reprimidas e 21 foram induzidas durante privação de zinco. Dentre as 141 proteínas de membranas, 81 apresentaram domínio transmembrana e 9 foram classificadas como sendo de membrana, em decorrência de modificação pós-traducional. Um total de 15 proteínas de membrana apresentou peptídeo sinal. Análises da função das proteínas de membranas permitiu a descrição de que o metabolismo de fosfolipídeos e a integridade celular foram afetados pela privação de zinco.

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