CAPES / Objetivou-se avaliar o efeito da inclusão de diferentes níveis de óleos funcionais extraídos da mamona (Ricinus communis L.) e da casca da castanha do caju (Anacardium occidentale L.) sobre consumo e digestibilidade de nutrientes, parâmetros ruminais e síntese de proteína microbiana em ovinos. Foram utilizados quatro ovinos machos, castrados, sem raça definida, fistulados no rúmen, com peso vivo médio de 49,1 kg em um delineamento experimental quadrado latino 4 x 4, sendo os tratamentos a inclusão de 2, 4 e 6 g/animal/dia de óleos funcionais e o tratamento testemunha sem a inclusão do óleo. Após 21 dias para adaptação dos animais, o experimento foi conduzido em quatro períodos de 20 dias, sendo 15 para adaptação a dieta e cinco para coletas de amostras e dados. A digestibilidade aparente dos componentes da dieta, e os parâmetros ruminais: amônia, açúcares totais, peptídeos e aminoácidos não foram influenciados pelos tratamentos. O pH apresentou efeito cúbico com maiores valores observados com suplementação de 4,7g/dia e o menor valor com 1,4 g/dia de óleos funcionais. Ao longo do dia, a concentração de açúcares apresentou efeito quadrático aumentando nas primeiras horas após a alimentação. Houve efeito linear ao longo do tempo para as concentrações de peptídeos no fluido ruminal de ovinos recebendo 2g/dia de óleos funcionais, para as concentrações de aminoácidos nos ovinos não suplementados com óleos funcionais e para amônia, neste mesmo tratamento com variação de 9,85 mg/dL à 25,29mg/dL. Da mesma forma, o pH ruminal também variou em função do tempo de forma linear após alimentação para todos níveis de suplementação, com aumento nas duas horas após arraçoamento seguindo de decréscimo por pelo menos 6 horas, e evidenciando menor valor de pH de 5,78. Não foi verificado alterações no consumo e balanço de nitrogênio, com valores médios de nitrogênio retido de 24,5 g/dia, correspondendo a 65,07% do nitrogênio ingerido. Os derivados de purina excretados corresponderam a proporção de 51% de alantoína e 48% de ácido úrico, xantina e hipoxantina e não evidenciaram alterações na síntese microbiana. / The objective of this study was to evaluate the effect of the inclusion of different levels of functional oils extracted from castor bean (Ricinus communis L.) and cashew nuts (Anacardium occidentale L.) on nutrient intake and digestibility, ruminal parameters and microbial protein synthesis in sheep. Four male, castrated, undefined, rumen fistulated sheep were used, with a mean live weight of 49,1 kg in a 4 x 4 Latin square experimental design, with treatments being included of 2, 4 and 6 g/animal/day of functional oils and the control treatment without the addition of the oil. After 21 days for adaptation of the animals, the experiment was conducted in four periods of 20 days, 15 for adaptation to diet and five for collection of samples and data. The apparent digestibility of dietary components and ruminal parameters: ammonia, total sugars, peptides and amino acids were not influenced by the treatments. The pH had a cubic effect with higher values observed with supplementation of 4,7 g/day and the lowest value with 1,4g/day of functional oils. Throughout the day, the concentration of sugars presented quadratic effect increasing in the first hours after the feeding. There was a linear effect over time for the concentrations of peptides in the ruminal fluid of sheep receiving 2g/day of functional oils, for amino acid concentrations in sheep not supplemented with functional oils and for ammonia, in this same treatment with a variation of 9,85mg/dL to 25,29mg/dL. In the same way, the ruminal pH also varied as a function of time in a linear way after feeding for all levels of supplementation, with increase in the two hours after feeding, followed by decreasing for at least 6 hours, and evidencing a lower pH value of 5,78. No changes were observed in nitrogen consumption and nitrogen balance, with mean values of nitrogen retained of 24,5g/day, corresponding to 65,07% of the ingested nitrogen. Excreted purine derivatives corresponded to the proportion of 51% allantoin and 48% uric acid, xanthine and hypoxanthine and did not show changes in microbial synthesis.

A aplicação de biossólidos em solos agrícolas e/ou florestais é uma prática aceitável, tanto como forma de disposição destes materiais, quanto de melhorar as características físicas, químicas e biológicas do solo. No entanto, pouco se sabe dos impactos decorrentes desta utilização e dos seus efeitos sobre a estrutura das comunidades microbianas dos solos e sua capacidade metabólica. Assim, o objetivo deste trabalho foi determinar alterações quanti-qualitativas na diversidade metabólica dos microrganismos do solo após a adição de biossólidos e identificar possíveis indicadores de alteração de qualidade do solo. O delineamento experimental constituiu-se de 4 doses de biossólidos da ETE-Franca, equivalentes à 6, 12, 24 e 48 Mg ha-1, mantendo-se um controle sem adição de biossólido. Foram utilizadas 4 repetições por tratamento, compreendendo 20 sub-parcelas. Estas sub-parcelas foram incubadas por 1, 2, 4, 8 e 16 semanas, perfazendo um total de 120 parcelas. Após o período de incubação, amostras de solo foram coletadas para as determinações de pH, C-biomassa, Respiração Basal (RB), Respiração Induzida pelo Substrato (RIS), Quociente Metabólico (qCO2) e Diversidade Metabólica. Houve um aumento transiente do pH nos tratamentos com as maiores doses de biossólido, em relação ao controle. Após 16 semanas de incubação os solos com biossólidos apresentaram pH mais baixo do que o controle sem biossólido. O C-biomassa apresentou comportamento semelhante, com os valores decrescendo e tendendo a estabilização, em relação ao controle sem biossólido. A atividade metabólica com base na RB, RIS e MHM indicou uma indução transiente no metabolismo da microbiota do solo nos tratamentos com as maiores doses de biossólido, tanto no início quanto no final do período de incubação. Os maiores valores de qCO2 nos solos com as maiores quantidades de biossólidos sugerem a ocorrência de condições estressantes para a microbiota e sucessão de populações microbianas. A utilização de substratos de C pela comunidade microbiana foi substancialmente influenciada pela quantidade de biossólido adicionado ao solo e pelo período de incubação. Os maiores valores de Riqueza de Substratos (S) e Diversidade Metabólica (H) observados nos tratamentos que receberam as maiores quantidades de biossólido, no início do período de incubação, são indicativos de um estímulo da microbiota nativa e da contribuição de novas células microbianas decorrentes da adição do biossólido. As similaridades entre os perfis de utilização de substratos C diminuíram com o aumento da concentração de biossólido no solo, em relação ao controle sem biossólido, e aumentaram em função do período de incubação, sugerindo uma indução transiente na diversidade metabólica do solo em função da aplicação de biossólido da ETE-Franca. Solos que receberam altas doses de biossólidos apresentaram atividades metabólicas não observadas no solo sem biossólidos, no início do período de incubação, e perderam algumas atividades no final do período de incubação, em relação ao controle sem biossólido. No geral, os resultados sugerem que a aplicação de biossólidos da ETE-Franca no solo argiloso utilizado provoca um distúrbio na fisiologia da microbiota do solo e que aplicações sucessivas de altas doses de biossólido podem ocasionar alterações significativas na capacidade metabólica dos solos. / The use of biosolids in agricultural and/or forestry soils has been an acceptable practice to dispose as well as to improve physical, chemical and biological soil properties. However, the impacts of biosolids application on microbial community structures and metabolic diversity in agricultural soils are relatively unknown. The aim of this work was to determine quantitative and qualitative alterations in the metabolic diversity of a clay soil upon treatment with biosolids. A clay soil was amended with the equivalent to 6, 12, 24 and 48 Mg ha-1 of biosolids from the City of Franca (SP) Sewage Treatment Plant. A control without biosolids was also used. Four repetitions per treatment were used, totalizing 20 sub-parcels. Sub-parcels were incubated for 1, 2, 4, 8 and 16 weeks, after incorporating the biosolids, totaling 120 microcosms. After the incubation period, soil samples were collected to determine pH, Basal Respiration (BR), Substrate Induced Respiration (SIR), C-biomass, Metabolic Quotient (qCO2) and Metabolic Diversity. A transient increase in soil pH was observed in the treatments with the higher concentrations of biosolids, compared to the control without biosolids. After 16 weeks of incubation, the pH of soils with biosolids was lower than in the control without biosolids. The C-biomass also showed a transient increase in soils with biosolids at early time points, and did not statistically differ from the control at late time points. Transient increases in metabolic activities, based on BR, SIR and AWCD (Average Well Color Development), were observed in soils with the higher concentrations of biosolids at early time points. Higher values of qCO2 in soils with higher concentrations of biosolids at the earliest and latest time points suggests stressing conditions to the microbial community and alterations in microbial community structure. The utilization of C-substrates by the soil microbial community was greatly affected by the concentration of biosolids added and by the incubation time. Higher values of Substrate Richness (S) and Metabolic Diversity (H) in the soils with the higher concentrations of biosolids at early time points indicate that biosolids stimulate the activity of soil microorganisms and contribute with new activities. The similarities between the C-sources utilization profiles in the soil amended with biosolids and the control were lower in soils with the higher concentrations of biosolids. The similarities of C-source utilization profiles in the soils with biosolids and the control increased during the incubation time. Soils amended with the higher concentrations of biosolids showed metabolic activities not observed in the control soil at the early time points. The ability to use several C-sources was lost at the latest time point. In general, the results suggest that the incorporation of biosolids to the clay soil disturbs soil microbial physiology and that the successive application of biosolids to the soil may significantly alter the soil metabolic activities.

A aplicação de biossólidos em solos agrícolas e/ou florestais é uma prática aceitável, tanto como forma de disposição destes materiais, quanto de melhorar as características físicas, químicas e biológicas do solo. No entanto, pouco se sabe dos impactos decorrentes desta utilização e dos seus efeitos sobre a estrutura das comunidades microbianas dos solos e sua capacidade metabólica. Assim, o objetivo deste trabalho foi determinar alterações quanti-qualitativas na diversidade metabólica dos microrganismos do solo após a adição de biossólidos e identificar possíveis indicadores de alteração de qualidade do solo. O delineamento experimental constituiu-se de 4 doses de biossólidos da ETE-Franca, equivalentes à 6, 12, 24 e 48 Mg ha-1, mantendo-se um controle sem adição de biossólido. Foram utilizadas 4 repetições por tratamento, compreendendo 20 sub-parcelas. Estas sub-parcelas foram incubadas por 1, 2, 4, 8 e 16 semanas, perfazendo um total de 120 parcelas. Após o período de incubação, amostras de solo foram coletadas para as determinações de pH, C-biomassa, Respiração Basal (RB), Respiração Induzida pelo Substrato (RIS), Quociente Metabólico (qCO2) e Diversidade Metabólica. Houve um aumento transiente do pH nos tratamentos com as maiores doses de biossólido, em relação ao controle. Após 16 semanas de incubação os solos com biossólidos apresentaram pH mais baixo do que o controle sem biossólido. O C-biomassa apresentou comportamento semelhante, com os valores decrescendo e tendendo a estabilização, em relação ao controle sem biossólido. A atividade metabólica com base na RB, RIS e MHM indicou uma indução transiente no metabolismo da microbiota do solo nos tratamentos com as maiores doses de biossólido, tanto no início quanto no final do período de incubação. Os maiores valores de qCO2 nos solos com as maiores quantidades de biossólidos sugerem a ocorrência de condições estressantes para a microbiota e sucessão de populações microbianas. A utilização de substratos de C pela comunidade microbiana foi substancialmente influenciada pela quantidade de biossólido adicionado ao solo e pelo período de incubação. Os maiores valores de Riqueza de Substratos (S) e Diversidade Metabólica (H) observados nos tratamentos que receberam as maiores quantidades de biossólido, no início do período de incubação, são indicativos de um estímulo da microbiota nativa e da contribuição de novas células microbianas decorrentes da adição do biossólido. As similaridades entre os perfis de utilização de substratos C diminuíram com o aumento da concentração de biossólido no solo, em relação ao controle sem biossólido, e aumentaram em função do período de incubação, sugerindo uma indução transiente na diversidade metabólica do solo em função da aplicação de biossólido da ETE-Franca. Solos que receberam altas doses de biossólidos apresentaram atividades metabólicas não observadas no solo sem biossólidos, no início do período de incubação, e perderam algumas atividades no final do período de incubação, em relação ao controle sem biossólido. No geral, os resultados sugerem que a aplicação de biossólidos da ETE-Franca no solo argiloso utilizado provoca um distúrbio na fisiologia da microbiota do solo e que aplicações sucessivas de altas doses de biossólido podem ocasionar alterações significativas na capacidade metabólica dos solos. / The use of biosolids in agricultural and/or forestry soils has been an acceptable practice to dispose as well as to improve physical, chemical and biological soil properties. However, the impacts of biosolids application on microbial community structures and metabolic diversity in agricultural soils are relatively unknown. The aim of this work was to determine quantitative and qualitative alterations in the metabolic diversity of a clay soil upon treatment with biosolids. A clay soil was amended with the equivalent to 6, 12, 24 and 48 Mg ha-1 of biosolids from the City of Franca (SP) Sewage Treatment Plant. A control without biosolids was also used. Four repetitions per treatment were used, totalizing 20 sub-parcels. Sub-parcels were incubated for 1, 2, 4, 8 and 16 weeks, after incorporating the biosolids, totaling 120 microcosms. After the incubation period, soil samples were collected to determine pH, Basal Respiration (BR), Substrate Induced Respiration (SIR), C-biomass, Metabolic Quotient (qCO2) and Metabolic Diversity. A transient increase in soil pH was observed in the treatments with the higher concentrations of biosolids, compared to the control without biosolids. After 16 weeks of incubation, the pH of soils with biosolids was lower than in the control without biosolids. The C-biomass also showed a transient increase in soils with biosolids at early time points, and did not statistically differ from the control at late time points. Transient increases in metabolic activities, based on BR, SIR and AWCD (Average Well Color Development), were observed in soils with the higher concentrations of biosolids at early time points. Higher values of qCO2 in soils with higher concentrations of biosolids at the earliest and latest time points suggests stressing conditions to the microbial community and alterations in microbial community structure. The utilization of C-substrates by the soil microbial community was greatly affected by the concentration of biosolids added and by the incubation time. Higher values of Substrate Richness (S) and Metabolic Diversity (H) in the soils with the higher concentrations of biosolids at early time points indicate that biosolids stimulate the activity of soil microorganisms and contribute with new activities. The similarities between the C-sources utilization profiles in the soil amended with biosolids and the control were lower in soils with the higher concentrations of biosolids. The similarities of C-source utilization profiles in the soils with biosolids and the control increased during the incubation time. Soils amended with the higher concentrations of biosolids showed metabolic activities not observed in the control soil at the early time points. The ability to use several C-sources was lost at the latest time point. In general, the results suggest that the incorporation of biosolids to the clay soil disturbs soil microbial physiology and that the successive application of biosolids to the soil may significantly alter the soil metabolic activities.

Orientador: Denise Madalena Palomari Spolidorio / Banca: Elisa Maria Aparecida Giro / Banca: Marcia Pinto Alves Mayer / Resumo: O objetivo geral deste trabalho, dividido em dois estudos, foi avaliar in vitro o efeito do óleo de Melaleuca alternifolia (TTO) sobre as bactérias Streptococcus mutans (S.mutans) e Lactobacillus acidophilus (L.acidophillus) e seu possível efeito citotóxico sobre cultura de queratinócitos (HaCat). Materiais e Métodos: No estudo 1, a análise antimicrobiana foi avaliada em 3 fases: 1. Identificação da CIM e CBM do TTO nas concentrações de 0.25% a 2% sobre os microrganismos na forma planctônica, utilizando-se a técnica de microdiluição em caldo; 2. Análise do metabolismo celular dos microrganismos em SSB (biofilme monoespécie) e DSB (biofilme multiespécie), formados em placa de cultura celular, tratados com diferentes concentrações de TTO, por meio de ensaio de XTT; 3. Análise do metabolismo celular dos microrganismos em DSB formado sobre blocos de esmalte e dentina e submetidos às seguintes soluções: TTO 2%, clorexidina 0.12% (controle positivo) ou PBS (controle negativo) pelo tempo de 60 s, por meio de ensaio de XTT e análise das imagens obtidas por microscopia confocal de varredura a laser (MCVL). No estudo 2, a análise citotóxica de diferentes concentrações de TTO foi realizada sobre células HaCat usando diferentes tempos de contato (60 s, 2 h e 60 s, com recuperação de 24 h), por meio do ensaio de MTT para avaliação da atividade metabólica. Os dados obtidos apresentaram distribuição não normal e, portanto, 19 foram utilizados os testes não-paramétricos de Kruskal-Wallis e de Mann-Whitney. Todos os testes estatisticos foram considerados em nível de significância de 5%. Resultados: Na análise antimicrobiana, para ambos, S.mutans e L.acidophillus, os valores de CIM e CBM foram 0.5% e 1 %, respectivamente. Os valores de densidade óptica (DO) referentes ao metabolismo bacteriano... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this research, divided in two studies was to evaluate in vitro the effect of oil of Melaleuca alternifolia (TTO) against bacteria Streptococcus mutans (S. mutans) and Lactobacillus acidophilus (L.acidophillus) and its cytotoxic effect on keratinocyte cells (HaCat). Materials and Methods: In study 1, the antibacterial analysis was evaluated in 3 phases: 1. Identification of MIC and MBC of TTO (0.25% to 2%) on the microorganisms in the planktonic form using the broth microdilution technique; 2. Analysis of cellular metabolism of microorganisms in SSB (monospecie biofilm) and DSB (multispecies biofilm) formed in cell culture plate and treated with different concentrations of TTO, using XTT assay; 3. Analysis of cellular metabolism of microorganisms in DSB formed on blocks of enamel and dentin and submitted to the following solutions: 2% TTO, 0.12% chlorhexidine (positive control) or PBS (negative control) for 60 s, using XTT assay. Images obtained by confocal laser scanning microscopy (CLSM) were analyzed, too.. In study 2, the cytotoxic analysis of different concentrations of TTO was performed on HaCat cells at different contact times (60 s, 2 h, 60 s, with recovery of 24 h) was using the MTT assay to evaluate metabolic activity. The data showed non-normal distribution and therefore were used the nonparametric tests Kruskal-Wallis and Mann-Whitney. All statistical tests were considered at a significance level of 5%. 23 Results: In the antibacterial analysis, for both S. mutans and L. acidophillus, the values of MIC and MBC were 0.5% and 1% respectively. The values of optical density (OD) for the bacterial metabolism, obtained by the XTT assay showed statistically significant for S. mutans SSB, at concentrations of TTO 0.25 to 2%, and for L. acidophillus SSB, at concentration of TTO 2% (p <0.05). However, there was ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-10-13Bitstream added on 2014-06-13T19:15:17Z : No. of bitstreams: 1 fontana_a_me_arafo.pdf: 741833 bytes, checksum: 2d49c1585d8b888e9a11b16364dea7ad (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo geral deste trabalho, dividido em dois estudos, foi avaliar in vitro o efeito do óleo de Melaleuca alternifolia (TTO) sobre as bactérias Streptococcus mutans (S.mutans) e Lactobacillus acidophilus (L.acidophillus) e seu possível efeito citotóxico sobre cultura de queratinócitos (HaCat). Materiais e Métodos: No estudo 1, a análise antimicrobiana foi avaliada em 3 fases: 1. Identificação da CIM e CBM do TTO nas concentrações de 0.25% a 2% sobre os microrganismos na forma planctônica, utilizando-se a técnica de microdiluição em caldo; 2. Análise do metabolismo celular dos microrganismos em SSB (biofilme monoespécie) e DSB (biofilme multiespécie), formados em placa de cultura celular, tratados com diferentes concentrações de TTO, por meio de ensaio de XTT; 3. Análise do metabolismo celular dos microrganismos em DSB formado sobre blocos de esmalte e dentina e submetidos às seguintes soluções: TTO 2%, clorexidina 0.12% (controle positivo) ou PBS (controle negativo) pelo tempo de 60 s, por meio de ensaio de XTT e análise das imagens obtidas por microscopia confocal de varredura a laser (MCVL). No estudo 2, a análise citotóxica de diferentes concentrações de TTO foi realizada sobre células HaCat usando diferentes tempos de contato (60 s, 2 h e 60 s, com recuperação de 24 h), por meio do ensaio de MTT para avaliação da atividade metabólica. Os dados obtidos apresentaram distribuição não normal e, portanto, 19 foram utilizados os testes não-paramétricos de Kruskal-Wallis e de Mann-Whitney. Todos os testes estatisticos foram considerados em nível de significância de 5%. Resultados: Na análise antimicrobiana, para ambos, S.mutans e L.acidophillus, os valores de CIM e CBM foram 0.5% e 1 %, respectivamente. Os valores de densidade óptica (DO) referentes ao metabolismo bacteriano... / The aim of this research, divided in two studies was to evaluate in vitro the effect of oil of Melaleuca alternifolia (TTO) against bacteria Streptococcus mutans (S. mutans) and Lactobacillus acidophilus (L.acidophillus) and its cytotoxic effect on keratinocyte cells (HaCat). Materials and Methods: In study 1, the antibacterial analysis was evaluated in 3 phases: 1. Identification of MIC and MBC of TTO (0.25% to 2%) on the microorganisms in the planktonic form using the broth microdilution technique; 2. Analysis of cellular metabolism of microorganisms in SSB (monospecie biofilm) and DSB (multispecies biofilm) formed in cell culture plate and treated with different concentrations of TTO, using XTT assay; 3. Analysis of cellular metabolism of microorganisms in DSB formed on blocks of enamel and dentin and submitted to the following solutions: 2% TTO, 0.12% chlorhexidine (positive control) or PBS (negative control) for 60 s, using XTT assay. Images obtained by confocal laser scanning microscopy (CLSM) were analyzed, too.. In study 2, the cytotoxic analysis of different concentrations of TTO was performed on HaCat cells at different contact times (60 s, 2 h, 60 s, with recovery of 24 h) was using the MTT assay to evaluate metabolic activity. The data showed non-normal distribution and therefore were used the nonparametric tests Kruskal-Wallis and Mann-Whitney. All statistical tests were considered at a significance level of 5%. 23 Results: In the antibacterial analysis, for both S. mutans and L. acidophillus, the values of MIC and MBC were 0.5% and 1% respectively. The values of optical density (OD) for the bacterial metabolism, obtained by the XTT assay showed statistically significant for S. mutans SSB, at concentrations of TTO 0.25 to 2%, and for L. acidophillus SSB, at concentration of TTO 2% (p <0.05). However, there was ... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-03-20T14:42:39Z No. of bitstreams: 2 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-03-20T14:43:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-20T14:43:36Z (GMT). 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This work had as objectives, to isolate, purify and morphologically characterize cheeses and yoghurt bacteria commercialized in the city of Manaus, Amazonas, as well as to test their crude extracts capable of degrading lactose and gluten, aiming as an alternative to minimize or solve the problem of lactose intolerance and Celiac disease that affect part of the world population. Seventy-five bacteria were isolated from the 10 types of cheese and 10 types of yogurts used for the tests. All 75 bacteria showed high growth in the first 24 hours of evaluation in both culture media tested (gluten or lactose). Of the 75 bacteria tested, 61 presented halo formation of degradation in medium containing gluten. For the Gluten Degradation Index (GDI), of the 61 bacteria evaluated, 22 did not present GID during the test, 30 had GIDs considered low, 9 GIDs were considered medium and none had GID considered high. The carbon source of the culture medium (gluten or lactose) influenced the morphological characteristics of the colonies of the 20 selected bacteria as the best ones. In the Gram staining test, 16 bacteria were Gram Negative and four Gram positive. Of the 13 bacteria used in the genetic characterization, it was possible to identify only four at the species level. Four isolates are of the genus Pseudomonas, four of the genus Bacillus, two of the genus Stenotrophomonas, one of the genus Brevibacillus, one of the genus Achromobacter and one of the genus Burkholderia. In order to evaluate twelve bacteria selected from previous tests, laboratory experiments were performed in a liquid medium containing lactose or gluten as a source of carbon at pH of 2.3 (similar to that of the stomach) and 8.0 (similar to that of the intestines) at temperatures of 37 ° C and 55 ° C. The bacteria BLG01 (Pseudomonas sp.), BLG02 (Bacillus sp.), BLG06 (Pseudomonas sp.), BLG16 (Stenotrophomonas maltophilia), BLG25 (Stenotrophomonas sp.), BLG28), BLG38 (Bacillus sp.), BLG45 (Burkholderia sp.), BLG52 (Brevibacillus parabrevis), BLG56 (Achromobacter sp.) and BLG73 (Bacillus sp.). showed potential to be used as probiotics after future confirmation of non-pathogenicity or as suppliers of enzymes capable of degrading lactose and gluten. All bacteria showed sensitivity to acidity and alkalinity equivalent to those of the human stomach and intestines, indicating that this acidity/alkalinity bipolarity can be a defense mechanism of the human organism against the action of pathogenic or undesirable bacteria. For desirable bacteria to be used as probiotics, they need to be ingested at high concentrations, above 106 células.mL-1. From the 12 bacteria tested, those with the highest potential for use as probiotics, if not pathogenics, are BLG28 (Bacillus sp.), BLG38 (Bacillus sp.), BLG45 (Burkholderia sp.), BLG52 (Brevibacillus parabrevis), BLG56 (Achromobacter sp.) and BLG73 (Bacillus sp.), since they are part of genera with little possibility of pathogenicity and because they present positive growth in the first two hours at pH 2.3, similar to that of the stomach. However, they need to colonize and participate of the intestinal flora, and to help to the lactose and gluten metabolism ingested as food. To evaluate if the carbon source and the growth phase of the bacteria affect the production and quality of proteases capable of degrading gluten, experiments were carried out on the crude extracts of nine bacteria, BLG02, BLG25, BLG28, BLG33, BLG38, BLG45, BLG52, BLG56 and BLG73. The extracts were obtained from culture of these bacteria in two culture media (gluten and lactose as carbon sources) and collected with 6, 12 and 24 hours of incubation. Dilutions of the extracts were also tested for their ability to degrade gluten. All bacteria produced extracts with the ability to break down gluten. The source of carbon (lactose or gluten) has affected the ability of these bacteria to produce extracts capable of degrading gluten. The majority of them produced more proteases when growing in the medium with this proteic complex. The time of collection of bacterial extracts also influenced their ability to degrade gluten, with the 24 hour extracts from most of these bacteria showing the highest degradability when comparing with those produced with 6 and 12 hours. The highest percentage of gluten degradation was 87.3% using the extract obtained with 24 hours of growth of bacterium BLG56 (Achromobacter sp.) grown in culture medium containing gluten. Based on the degradability, collection times of bacterial extracts and culture media, it can be concluded that the nine bacteria present different proteases capable of degrading gluten. This ability to degrade gluten varied with their concentrations in the solution in different ways and this feature may serve as an additional test to differentiate one from the other. More detailed studies, such as the purification of the extracts components of these bacteria, are needed to evaluate each of these proteases individually to choose the best with biotechnological potential. / Os microrganismos são fundamentais para a manutenção do equilíbrio dos organismos vivos e dos elementos químicos do nosso planeta. Eles ocorrem em todos os ambientes da natureza, inclusive em alimentos. Diversas pesquisas têm mostrado que microrganismos encontrados na cavidade bucal e intestinos apresentam habilidade de degradar componentes encontrados no leite e em alguns cereais, podendo degradar a lactose e o glúten. Esse trabalho teve como objetivo, isolar, purificar e caracterizar morfologicamente bactérias de queijos e iogurtes comercializados no município de Manaus, Amazonas, bem como testar seus extratos brutos capazes de degradar lactose e glúten visando uma alternativa para minimizar ou solucionar o problema de intolerância à lactose e doença Celíaca que afetam parte da população mundial. Foram isoladas 75 bactérias dos 10 tipos de queijo e 10 tipos de iogurtes usados para os testes. Todas as 75 bactérias apresentaram elevado crescimento nas primeiras 24 horas de avaliação em ambos os meios de cultura testados (glúten ou lactose). Das 75 bactérias testadas, 61 apresentaram formação de halo de degradação em meio contendo glúten. Pelo Índice de Degradação de Glúten (IDG), das 61 bactérias avaliadas, 30 apresentaram baixos IDG’s, 9 IDG’s médios e nenhuma apresentou IDG alto. O uso do glúten ou lactose nos meios de cultura influenciou as características morfológicas das colônias das 20 bactérias selecionadas como as melhores. Das 13 bactérias usadas na caracterização genética, foi possível identificar somente quatro ao nível de espécie. Quatro isolados são do gênero Pseudomonas sp., quatro do gênero Bacillus sp., duas do gênero Stenotrophomonas sp., uma do gênero Brevibacillus sp., uma do gênero Achromobacter sp. e uma do gênero Burkholderia sp. Foram realizados também, experimentos de laboratório em meio líquido contendo lactose ou glúten como fonte de carbono em pH’s de 2,3 (semelhante ao do estômago) e 8,0 (semelhante ao dos intestinos) nas temperaturas de 37 °C e 55 °C. As bactérias BLG01 (Pseudomonas sp.), BLG02 (Bacillus sp.), BLG06 (Pseudomonas sp.), BLG16 (Stenotrophomonas maltophilia), BLG25 (Stenotrophomonas sp.), BLG28 (Bacillus sp.), BLG33 (Pseudomonas aeruginosa), BLG38 (Bacillus sp.), BLG45 (Burkholderia sp.), BLG52 (Brevibacillus parabrevis), BLG56 (Achromobacter sp.) e BLG73 (Bacillus sp.). mostraram potencial para serem usadas como probióticas, desde que não sejam patogênicas em testes futuros e/ou como supridoras de enzimas capazes de degradarem a lactose e o glúten. Todas mostraram sensibilidade à acidez e à alcalinidade equivalentes às do estômago e às dos intestinos humanos, indicando que essa bipolaridade acidez/alcalinidade pode ser um mecanismo de defesa do organismo humano contra a ação de bactérias patogênicas ou indesejáveis. Para que bactérias desejáveis sejam utilizadas como probióticas, elas precisam ser ingeridas em altas concentrações, acima de 106 células.mL-1. Das doze bactérias testadas, as com maiores potenciais de utilização como probióticas, desde que comprovadamente não sejam patogênicas, são as BLG28 (Bacillus sp.), BLG38 (Bacillus sp.), BLG45 (Burkholderia sp.), BLG52 (Brevibacillus parabrevis), BLG56 (Achromobacter sp.) e BLG73 (Bacillus sp.), por fazerem parte de gêneros com pouca possibilidade de patogenicidade e por apresentarem crescimento positivo nas duas primeiras horas em pH 2,3, semelhante ao do estômago. No entanto, elas precisam colonizar e fazer parte da flora intestinal, além de ajudarem no metabolismo da lactose e do glúten ingeridos como alimentos. Para avaliar se a fonte de carbono e a fase de crescimento das bactérias afeta a produção e qualidade de proteases capazes de degradar o glúten, foram realizados experimentos com os extratos brutos de nove dessas bactérias, BLG02, BLG25, BLG28, BLG33, BLG38, BLG45, BLG52, BLG56 e BLG73. Os extratos foram obtidos do cultivo dessas bactérias em dois meios de cultura (glúten e lactose como fontes de carbono) e coletados com 6, 12 e 24 horas de incubação. Diluições dos extratos também foram testadas quanto às suas capacidades de degradar o glúten. Todas as bactérias produziram extratos com capacidade de degradação do glúten. A fonte de carbono (lactose ou glúten) afetou a capacidade dessas bactérias em produzirem extratos capazes de degradarem o glúten. A maioria delas produziu mais proteases quando crescidas em meio contendo esse complexo proteico. O tempo de coleta dos extratos bacterianos também influenciou nas suas capacidades de degradarem o glúten, com os produzidos com 24 horas de crescimento sendo melhores para a maioria dessas bactérias quando comparados pelos produzidos com 6 e 12 horas. O maior percentual de degradação de glúten foi de 87,3 % usando o extrato obtido com 24 horas de crescimento da bactéria BLG56 (Achromobacter sp.) cultivada em meio de cultura contendo glúten. Com base na capacidade de degradação, nos tempos de coletas dos extratos bacterianos e meios de cultura, pode-se concluir que as nove bactérias apresentam diferentes proteases capazes de degradarem o glúten. Essa capacidade de degradarem o glúten variou com suas concentrações na solução de formas diferentes e essa característica pode servir como um teste a mais para diferenciar uma da outra. São necessários estudos mais detalhados, como o de purificação dos componentes dos extratos dessas bactérias, para avaliar cada uma dessas proteases individualmente, para escolher as de melhores potenciais biotecnológicos.

El inmunosupresor FK506 (Tacrolimus, Prograf) ha incrementado la tasa de supervivencia del trasplante de órganos. FK506 ejerce su acción inmunosupresora mediante la inhibición de la fosfatasa calcineurina en células T activadas. Desgraciadamente, la terapia con FK506 está asociada con efectos no terapéuticos indeseados, entre los que destaca la diabetes, que implican otras dianas distintas de calcineurina. Para identificar estas dianas hemos estudiado la toxicidad celular de FK506 en la levadura de gemación Saccharomyces cerevisiae. FK506 aumentó la sensibilidad de la levadura a estrés osmótico de un modo independiente de calcineurina y las proteínas de unión a FK506. FK506 también indujo un fuerte ayuno de aminoácidos y la activación de la ruta de control general de nutrientes (GCN). La prototrofía de triptófano o el exceso de triptófano eliminó la toxicidad de FK506, lo que muestra que el ayuno de triptófano media este efecto. La mutación de los genes GCN3 y 4 alivió parcialmente la toxicidad de FK506, lo que sugiere que la activación de la ruta GCN por FK506 también está implicada en la tolerancia osmótica. FK506 reforzó la fosforilación de la kinasa Hog1p dependiente de estrés osmótico pero sin inducción de un reportero dependiente de Hog1p. Interesantemente, la interrupción del gen GCN2 suprimió la hiperfosforilación de Hog1p dependiente de FK506 y restauró la actividad del reportero dependiente de Hog1p. A la inversa, la interrupción del gen HOG1 afectó a la activación de Gcn2p y traducción de un reportero GCN4-lacZ dependientes de FK506. Esto pone de manifiesto la existencia de una interacción funcional entre las kinasas Gcn2p y Hog1p. En conjunto estos datos demuestran que tanto el ayuno de aminoácidos como la activación de la ruta GCN inducidos por FK506 contribuyen a la sensibilidad celular a estrés osmótico y revelan un bucle regulador positivo entre las rutas GCN y HOG. Dada la naturaleza conservada de estas rutas, este mecanismo de toxicidad de FK506 / Rodríguez Hernández, CJ. (2006). Identificación de nuevos mecanismos moleculares del inmunosupresor FK506 en Saccharomyces cervisiae [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/1849