Objetivo: Describir la morbimortalidad materna y fetal en gestantes transplantadas renales así como las condiciones previas al embarazo que aseguren buenos resultados para el feto, la madre y el injerto. Materiales y Métodos: El presente es un trabajo descriptivo, retrospectivo, transversal, la información se obtuvo de las historias clínicas maternas mediante la ficha de recolección de datos. Población: Se investigó 13 gestaciones en 12 pacientes transplantadas renales. Resultados: La edad materna tuvo un promedio de 29.38 años y un rango de 20 a 38 años. 10 pacientes presentaron glomerulonefritis (76.9%), 02 LES (15.4%) y 01 nefritis intersticial (7.7%) como causa de insuficiencia renal. La terapia inmunosupresora utilizada previo y durante el embarazo; 69.2% utilizó prednisona y ciclosporina, 15.4% utilizó prednisona y azatioprina, 7.7% utilizó prednisona, azatioprina y ciclosporina y 7.7% utilizó prednisona, ciclosporina y mofetilo de micofenolato, no existiendo cambios en la terapia durante la gestación. La patología materna más frecuente fue la infección de las vías urinarias que se presentó en el 69.2%, seguida de hipertensión arterial crónica que se presentó en el 38.5%. La vía del parto utilizada fue la cesárea, en los 12 partos (100%). Se describió que tanto la creatinina como la urea sérica no tuvieron variación estadísticamente significativa durante el embarazo con respecto a sus valores basales previos a la gestación, por el contrario, la hemoglobina tuvo variación estadísticamente significativa (p<0.005) teniendo en cuenta el valor del tercer trimestre con respecto a su basal previo al embarazo. Conclusión: El embarazo en pacientes con transplante renal debe ser considerado de alto riesgo y controlado por un equipo multidisciplinario que vigilen la función renal enfocado hacia la detección de signos de rechazo, presión arterial, condiciones maternas y fetales teniendo como propósito asegurar un buen embarazo evitando en lo posible complicaciones maternas y en el feto.

AIMS. To retrospectively review our liver transplant performance to identify factors that influenced late mortality and morbidity.METHODS. Clinical records from 279 patients with liver transplants performed in Hospital Vall d´Hebron between January 1991and December 2001 and one year of survival, were reviewed. Minimal outcome was two years (r:1yr-12yr). Medium outcome was 9 years. The data evaluated by univariate and multivariate analyses regarding clinical outcome.RESULTS. Recipients mean was 55±5years, with 11%>65 years and 65% was male. Main indication for transplantation was postnecrotic cirrhosis (60%), followed by CHC in addition to cirrhosis (28%), choleostatic cirrhosis (6%), fulminant hepatitis (2%), Budd-Chiari (1%) and metabolic cirrhosis (1%). Half of the recipients (54%) were infected by HCV. A great percentage of recipients (44%) were at Child-Pugh C stage. Concomitant diseases were: renal insufficiency in 11%, arterial hypertension in 9%, diabetes mellitus in 16% and portal thrombosis in 18%. Inmunosupression at last the first year of liver transplantation was with cyclosporina in 108 patients (39%) and tacrolimus in 169 patients (60%). Patient actuarial survival what live at least a year, was 94%, 89%, 79% and 60% at 2yr, 3yr, 5yr and 10yr respectively. Seventy-five patients died in the outcome. Causes of death were recurrence primary disease in 11%, medical complications in 7% and de novo tumors in 5%. Rate of retransplant was 10% (27 patients). From all the pre-operative variables that appeared significant in univariate analysis, the factors that showed independent predictive value of late mortality were: old recipient (OR 1,03) , renal disfunction in the first year postransplant (OR 2,1) and liver disfunction at last the first year postransplant (OR 2,2). Characteristics of the patients with the risk factor of mortality "renal disfunction", were: >60 years, renal disfunction pretransplant or in the first year postransplant and Cyclosporine in the induction. Characteristics of the patients with the risk factor of mortality "liver disfunction", were: HCV pretransplant, HCV recurrence in the first year, acute rejection in the first year and Cyclosporine in the induction. The mean long term complications in liver transplant were: arterial hypertension in 50%, renal disfunction in 49%, diabetes mellitus in 30%, hypercholesterolaemia in 19%, hypertriglyceridaemia in 18%, cardiovascular complications in 15% and de novo tumors in 14%. From all the preoperative variables that appeared significant in univariate analysis, the factors that showed independent predictive value of late morbidity were:1. Renal disfunction: old recipient, pretransplant cardiovascular complications and long stay in the hospital of the recipient.2. Arterial hypertension: pretransplant arterial hypertension and CHC pretransplant in the recipient, donor exitus by traffic accident.3. Diabetes Mellitus: pretransplant diabetes and HCV pretransplant in the recipient4. Hypercholesterolaemia: no risk factors. Tacrolimus in the first year postransplantation is protector factor.5. Hypertriglyceridaemia: cold ischaemia time>8h, donor male, intraoperative transfusion of platelets, long stay in ICU of the recipient.6. Cardiovascular complications: old recipient and pretransplant cardiovascular complications, long time since of transplantation.7. De novo tumors: old recipient.CONCLUSIONS. Old recipient, renal disfunction in the first year and liver disfunction at last the first year postTH are the most significant risk factor for late mortality. Arterial hypertension, renal disfunction and diabetes mellitus are the mean long term complications in liver transplantation, and the most significance risk factors are old recipient, HCV preTH, arterial hypertension and diabetes mellitus preTH, young donor and use Cyclosporine in the inmunosupression.

Actualmente, el trasplante hepático (TxH) es el tratamiento de numerosas enfermedades que abocan a una insuficiencia hepática aguda fulminante o, más frecuentemente, a una fase final de de una hepatopatía crónica irreversible. Los efectos secundarios asociados al empleo indiscriminado de drogas inmnunosupresoras y el hecho de que un 20% de los pacientes sometidos a TxH desarrollen tolerancia al injerto tras una retirada total de la inmunosupresión (tolerancia operacional) promueve una investigación orientada a la búsqueda de técnicas de laboratorio con carácter predictivo de evolución clínica.El objetivo de este estudio fue doble. Por una parte identificar, mediante un modelo de respuesta celular antígeno específico, aquellos pacientes candidatos a una retirada parcial o total de la inmunosupresión. Por otra parte estudiar el efecto del Tacrolimus (FK) sobre la capacidad madurativa de células dendríticas (DCs), como células presentadoras de antígeno. El estudio se realizó sobre un total de 10 pacientes (6 pacientes VHC+ y 4 pacientes VHC-) y en tres fases bien diferenciadas: a) fase previa al TxH (PreTx), b) durante el segundo mes del TxH (2M) y, c) durante el sexto mes del TxH (6M). Los resultados obtenidos en el modelo celular de respuesta linfoproliferativa sugieren que la pauta inmunosupresora administrada in vivo afecta a la respuesta celular in vitro. Este dato permitió obtener una variable (Índice de Estimulación; I.E.) con valor predictivo de evolución clínica. Además, la pauta inmunosupresora reduce los niveles de citocinas Th1, siendo los niveles de Th2 (IL-10) una variable con un posible valor predictivo de evolución clínica.En el grupo de pacientes VHC, los niveles de Th1 descendieron durante el tratamiento inmunosupresor en comparación con los niveles de Th1 obtenidos en el PreTx. El patrón de Th2 (IL-10) fue diferencial según los individuos presentaban o no recidiva viral; en el 100% de los pacientes con recidiva viral los niveles de IL-10 aumentaron durante el segundo y sexto mes en comparación con los niveles de IL-10 obtenidos durante el PreTx. Por el contrario, en el grupo de pacientes sin recidiva viral los niveles de IL-10 disminuyeron en un 66,6% de los casos. Estos resultados sugieren que una disminución de citocinas Th1 juntamente con un aumento de los niveles de IL-10 podría ser un mecanismo favorecedor de la progresión viral al quedar disminuida la presión ejercida por parte del sistema inmune del huésped frente al virus. Esta hipótesis se refuerza con los resultados obtenidos tras analizar el inmunofenotipo de las DCs; en el grupo de pacientes con recidiva viral se observa una disminuida expresión de las moléculas involucradas en la presentación antigénica (moléculas de adhesión y coestimulación).Los resultados obtenidos tras la estimulación de DCs con proteína no estructural (NS3) del VHC indicaron que ésta incrementó la expresión de moléculas de coestimulación y de adhesión (CD80, CD83, CD86 y CD54). Sin embargo, cuando las DCs se incubaban, previamente, con FK, éste reducía (p<0,05) la expresión de marcadores de maduración celular (CD1a, CD80, CD83) y los niveles de IL-12p70; un proceso que tiene lugar a través de la inhibición de la translocación del factor nuclear NF-K&#946;.Podemos concluir, por lo tanto, que el modelo celular ha permitido, mediante el empleo de técnicas no invasivas, identificar unos parámetros (I.E., probabilidad de rechazo, niveles de citocinas proinflamatoria y tolergénicas e inmunofenotipo de DCs) identificativos de un perfil de respuesta inmunológica del paciente trasplantado. La concordancia entre los resultados experimentales y la evolución clínica de cada uno de los pacientes sugiere que los parámetros indicados podrían ser una herramienta de considerable interés clínico en el momento de identificar aquellos pacientes candidatos a una retirada parcial o total de la pauta inmunosupresora. / Currently, liver transplantation (LT) is the treatment of many diseases which lead to acute fulminant liver failure or, more commonly, to a final phase of irreversible chronic liver disease. Side effects associated with indiscriminate use of immunosuppressant drugs and the fact that 20% of patients develop tolerance to the transplanted graft after a complete withdrawal of immunosuppressant (operational tolerance) promotes research aimed at finding laboratory techniques with predictive of clinical outcome.The aim of this study was to identify, through a model of antigen-specific cellular response, which patients can be considered candidates for partial or total withdrawal of immunosuppressant and to study the effect of tacrolimus (FK) on the maturational capacity of dendritic cells (DCs) as antigen presenting cells.A total of 10 patients (6 HCV+ patients) were included in the study. Three sample-isolates were obtained from each patient: a) previously to LT (PreTx), b) during the second month of LT (2M) and c) during the sixth month of LT (6M). The lymphoproliferative response study suggests that the immunosuppressive regimen administered in vivo affects the in vitro cellular response. A variable (Stimulation Index, SI) was obtained that we suggest it can be used as a predictive value of clinical status. Moreover, the immunosuppressive regimen reduced the levels of Th1 cytokines suggesting that IL-10 can be used as a Th2 cytokine with a predictive value of clinical evolution. In the HCV patients group, Th1 levels decreased during immunosuppressive treatment compared with Th1 levels obtained in the PreTx. The pattern of Th2 (IL-10) depended on the severity of HCV liver disease. Levels of IL-10 increased during the second and sixth month compared with the levels of IL -10 obtained during PreTx in patients with HCV fast progression. By contrast, in the group of patients with lower HCV progression the levels of IL-10 decreased in 66.6% of cases. These results suggest that a decrease on the levels of Th1 cytokines together with an increase of IL-10 might be a mechanism that promotes the viral progression, probably caused by a reduction on the immune response pressure of the guest against the HCV. This hypothesis is reinforced by the results obtained after analysing the immunophenotype of DCs since, in the group of patients with viral progression, DCs showed a decrease in the expression of adhesion and costimulatory molecules.The stimulation of DCs with HCV nonstructural protein 3 (NS3) originated an increase in the expression of costimulatory and adhesion molecules (CD80, CD83, CD86 and CD54). However, when DCs were previously incubated with FK, this drug reduced (p <0.05) the expression of cell maturation markers (CD1a, CD80, CD83) and also the levels of IL-12p70 through inhibition of NF-k&#946; translocation to the nucleus. In conclusion, using a non-invasive cell model we have identified several parameters (ie, probability of rejection, proinflammatory cytokine levels and immunophenotype of DCs) that can be used to define the immune response profile of a LT patients. The agreement between our experimental results and the clinical outcome of each patient suggests that the parameters listed below may be used as a clinical tool to identify those candidate patients for a partial or total withdrawal of the immunosuppressive regimen.

La infección por el virus de la hepatitis C (VHC) tiene gran importancia a nivel del trasplante hepático (HC) por varias razones. Por lo tanto, resulta de una gran importancia establecer el pronóstico post-trasplante en dichos casos.El objetivo del presente proyecto de tesis fue, por un lado, definir la historia natural de la hepatitis C postrasplante en nuestro medio; y por otro, establecer los factores de riesgo de evolución desfavorable. Dicha información es fundamental para validar la idoneidad de un trasplante hepático, así como para considerar la posibilidad de un tratamiento antivírico precoz y mejorar el manejo de la inmunosupresión de los pacientes.

El concepto de la inflamación sistémica aguda como respuesta a una enfermedad aguda y grave (SIRS) seguida de la respuesta antiinflamatoria compensadora fisiológica (CARS) de forma consecutiva ha sucumbido en los últimos años a la evidencia de ser fenómenos sincrónicos. El cambio de paradigma cobra mayor relevancia cuando de la relación entre la magnitud de ambas respuestas no solo depende la supervivencia del individuo sino su pronóstico y el tiempo que precisará para recuperar el equilibrio fisiológico. El fenotipo de enfermedad crítica crónica (ECC) es cada vez más frecuente en las UCI como consecuencia de la tecnificación del soporte artificial de órganos, y constituye un grupo de pacientes que tiene un pobre pronóstico funcional y vital, y que además consume gran cantidad de recursos. En estos enfermos podemos distinguir un grupo con las características de inflamación, inmunodepresión e hipercatabolismo persistentes, lo que se ha denominado (PIICS). PIICS se ha asociado al curso prolongado y complicado de los enfermos críticos, y podría ser una de las fases o trayectorias clínicas que derive en la ECC. Una caracterización operativa de PIICS, es decir con aplicabilidad clínica y utilidad diagnóstica y pronóstica, no ha sido aún definida. Son numerosas las publicaciones en las que se intenta definir el síndrome sin que haya de momento consenso, lo que indefectiblemente hace que los resultados no sean comparables. En el seno del Grupo de Trabajo de Metabolismo y Nutrición de la Sociedad Española de Medicina Intensiva y Unidades Coronarias se diseñó un constructo clínico-analítico de los determinantes de PIICS que se utilizó en el estudio “iPICSe” sobre estudio de la incidencia de PIICS en las UCI en España. El análisis de la cohorte del estudio iPICSe mostró la baja incidencia del síndrome, y ha mostrado que la definición propuesta de PIICS tiene capacidad pronóstica desde la primera semana de ingreso para el tiempo de estancia en la UCI y en el hospital, y el tiempo de ventilación mecánica. La definición propuesta de PIICS es por tanto un marcador válido de riesgo de EEC.

IntroducciónEn la actualidad se buscan marcadores para identificar pacientes trasplantados que alcancen cierto grado de tolerancia. El más estudiado recientemente se engloba como células T reguladoras (Tregs), capaces de controlar la respuesta alogénica in vitro y con capacidad tolerogénica en modelos animales. En este trabajo se ha estudiado el comportamiento de Tregs en trasplantados renales y la implicación de procesos inflamatorios y fármacos inmunosupresores más comunes en estos pacientes. Material y MétodosSe midieron las Tregs sanguíneas en los pacientes trasplantados renales mediante citometría de flujo y su función in vitro en cultivos mixtos linfocitarios cada 6 meses post-trasplante hasta los 2 años. Resultados y conclusionesLos pacientes con enfermedad renal terminal presentan un número similar de Tregs que donantes sanos. A los 6 meses del trasplante se observa un descenso de Tregs, recuperándose posteriormente. Se observó una mayor frecuencia de Tregs en los pacientes tratados durante un año con inhibidores de mTOR que los tratados con inhibidores de calcineurina (CNI). Así mismo se observó cómo los niveles sanguíneos de los CNI tenían un efecto deletéreo sobre la función de las Tregs. / IntroductionKidney transplantation has become a therapeutic option choice in patients with chronic renal failure. With the advance of new immunosuppressive agents has been a lower incidence of acute rejection, but still persist long-term problems, largely associated with chronic treatment with immunosuppressive agents. Currently, are looking for markers to identify patients who reach a certain degree of tolerance in order to reduce immunosuppressive load avoiding side effects long term. The most studied biomarker in the last decade includeswith the name of regulatory T cells (Tregs), these cells are able to control allogeneic response in vitro and has tolerogenic capacity demonstrated in many transplant models. Prior to validate this biomarker of transplant tolerance, this work has studied the behavior of Treg cells in renal transplant recipients and their coexistence in the most common inflammatory processes in these patients. In addition, we assess the role of drugs immunosuppressants on these cells.ObjectivesMonitor the levels of Tregs in renal transplant patients and consider the involvement of different events inflammatory on the number of Tregs and to determine the involvement of different immunosuppressive treatments on the number and Tregs function.Material and MethodsThere were two parallel studies, one prospective, in which Treg cells were measured in kidney transplants patients by flow cytometry and theirfunction in vitro by mixed lymphocyte cultures. The samples were collected every 6 months post-transplant until 2 years. In another retrospective study enrolled 64 patients transplantation with a follow-up exceeding one year, dividedin terms of maintenance therapy with calcineurin inhibitors (CNI) or mTOR inhibitors.Results and conclusions At the time prior to transplantation, patients with ESRD have a similar number of Treg cells circulating than healthy donors, excluding retransplantated patients. At 6 months after transplantation there is a dramatic decrease in Treg cell numbers, when the immunosuppressive load is higher. Later the levels of Tregs were recovered. Within the immunosuppressive used in maintenance treatment, there was a higher frequency of Tregs in patients treated for one year with mTOR inhibitors when compared with patients received in the same period calcineurin inhibitors (CNI). Also it was observed that blood levels of the CNI had a deleterious effect on the function of Treg cells.

Los resultados del trasplante renal a largo plazo están limitados por la pérdida a largo plazo del injerto y la muerte con injerto funcionante. Los inmunosupresores tienen gran importancia por su efecto sobre el injerto (control de la respuesta inmunológica y nefrotoxicidad) y sobre los factores de riesgo cardiovascular y el desarrollo de neoplasias. Los nuevos inmunosupresores apuntan a un mejor perfil en este sentido para reducir estos dos tipos de complicaciones y prolongar la supervivencia del injerto y del paciente, siendo los fármacos del grupo mTOR los más prometedores en este sentido. La presente tesis doctoral analiza los efectos de este grupo de fármacos inmunosupresores (Sirolimus y Everolimus) en pacientes trasplantados renales.Se analizan los efectos del uso de inhibidores de mTOR en pacientes trasplantados renales sobre el daño crónico del injerto en biopsias de protocolo, sobre la aparición de proteinuria como complicación de su uso en pacientes estables y sobre la formación de células T reguladoras circulantes en sangre periférica. / Long-term results of kidney transplantation are limited by the chronic graft failure and the death of the patient with a functioning kidney. Immunosuppressive drugs have an important role due to its effects on the graft (control of immune response and nephrotoxicity) and on vascular risk factors and the development of neoplasms. New immunosuppressive drugs, specially mTOR inhibitors have a better profile and are able to reduce both types of complications, increasing graft and patient survival. The present doctoral thesis analyzes the effects of this group of immunosuppressive drugs (Sirolimus and Everolimus) in renal transplant recipients.The effects of mTOR inhibitors over chronic graft damage in protocol kidney biopsies, on the appearance of proteinuria as a complication of its use in stable patients and on the formation of circulating regulatory T-cells in renal transplant patients are analyzed

El inmunosupresor FK506 (Tacrolimus, Prograf) ha incrementado la tasa de supervivencia del trasplante de órganos. FK506 ejerce su acción inmunosupresora mediante la inhibición de la fosfatasa calcineurina en células T activadas. Desgraciadamente, la terapia con FK506 está asociada con efectos no terapéuticos indeseados, entre los que destaca la diabetes, que implican otras dianas distintas de calcineurina. Para identificar estas dianas hemos estudiado la toxicidad celular de FK506 en la levadura de gemación Saccharomyces cerevisiae. FK506 aumentó la sensibilidad de la levadura a estrés osmótico de un modo independiente de calcineurina y las proteínas de unión a FK506. FK506 también indujo un fuerte ayuno de aminoácidos y la activación de la ruta de control general de nutrientes (GCN). La prototrofía de triptófano o el exceso de triptófano eliminó la toxicidad de FK506, lo que muestra que el ayuno de triptófano media este efecto. La mutación de los genes GCN3 y 4 alivió parcialmente la toxicidad de FK506, lo que sugiere que la activación de la ruta GCN por FK506 también está implicada en la tolerancia osmótica. FK506 reforzó la fosforilación de la kinasa Hog1p dependiente de estrés osmótico pero sin inducción de un reportero dependiente de Hog1p. Interesantemente, la interrupción del gen GCN2 suprimió la hiperfosforilación de Hog1p dependiente de FK506 y restauró la actividad del reportero dependiente de Hog1p. A la inversa, la interrupción del gen HOG1 afectó a la activación de Gcn2p y traducción de un reportero GCN4-lacZ dependientes de FK506. Esto pone de manifiesto la existencia de una interacción funcional entre las kinasas Gcn2p y Hog1p. En conjunto estos datos demuestran que tanto el ayuno de aminoácidos como la activación de la ruta GCN inducidos por FK506 contribuyen a la sensibilidad celular a estrés osmótico y revelan un bucle regulador positivo entre las rutas GCN y HOG. Dada la naturaleza conservada de estas rutas, este mecanismo de toxicidad de FK506 / Rodríguez Hernández, CJ. (2006). Identificación de nuevos mecanismos moleculares del inmunosupresor FK506 en Saccharomyces cervisiae [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/1849 / Palancia

Tesis por compendio / [ES] La producción en acuicultura se ha visto menguada por aparición de enfermedades en los sistemas de cría de peces. En concreto, en la dorada (Sparus aurata), hay dos parásitos destacados: Enteromyxum leei (Myxozoa) y Enterospora nucleophila (Microsporidia). Hasta la fecha, para ninguno de los dos se ha establecido un cultivo in vitro, y solo para E. leei se ha conseguido establecer un modelo de mantenimiento de la infección in vivo. La presente tesis pretende incrementar el conocimiento sobre estos parásitos y sus relaciones con el hospedador, sentando las bases para generar soluciones que puedan ser aplicadas en la acuicultura. El objetivo con E. leei fue estudiar la inmunidad adquirida inducida en la dorada y la posibilidad de generar herramientas de diagnóstico y vacunas frente a esta enfermedad. Para ello, primero se demostró la resistencia del pez al parásito tras una segunda exposición, la cual duró hasta 16 meses. Además, la resistencia parece estar correlacionada con altos niveles de inmunoglobulina (Ig) M específica en sangre, y una alta expresión de Igs, incluso antes de la re-exposición al parásito. El siguiente paso fue afinar el protocolo de infección con E. leei. Los resultados mostraron que una semana es suficiente para transmitir la infección de E. leei por efluente, independientemente de la temperatura. Tras la demostración de la respuesta adaptativa eficaz frente a E. leei, y al disponer de un modelo de infección refinado, se realizó un ensayo de inmunización pasiva. Aquí, los resultados mostraron que los anticuerpos especi'ficos efectivamente consigue ralentizar la invasión del intestino por el parásito y disminuir los síntomas de la enfermedad. Paralelamente, el resultado del análisis del repertorio de las regiones variables de la IgM e IgT del intestino peces resistentes mostró la inducción de una respuesta policlonal en las ce'lulas B. En base a estos resultados, se realizó una búsqueda de antígenos de E. leei que pudieran ser utilizados como candidatos para la producción de vacunas (análisis proteómico) o herramientas de diagnóstico (análisis in silico). Para ello, se ensambló un transcriptoma de novo utilizando una muestra mixta de intestino de dorada y parásito. Los resultados dieron lugar a 7 y 12 candidatos en la búsqueda in silico y proteómica, respectivamente. En los estudios de E. nucleophila, debido a que fue descrita muy recientemente, el punto de partida fue más básico. Las muestras de este parásito solo se pueden obtener de brotes naturales en piscifactorias. Por ello, primero se realizó un estudio de caracterización de la patología de la infección a partir de peces infectados naturalmente. En etapas tempranas de la infección, el parásito se localiza principalmente en el intestino, pero meses después, la prevalencia en intestino baja e incrementa en los órganos hematopoyéticos y el esto'mago. Los signos clínicos de la infección consistieron en una reducción significativa del crecimiento, emaciación, y palidez de las paredes intestinales. A nivel celular, en los casos ma's graves se observó hipercelularidad en el epitelio intestinal y proliferación de ce'lulas rodlet, un elevado número de linfocitos en la base del epitelio e infiltración de granulocitos acidófilos en el epitelio intestinal. Finalmente se probaron varias formas de transmisión horizontal de E. nucleophila (cohabitación, efluente, intubación oral y anal) con para desarrollar un modelo de mantenimiento in vivo. Se consiguió la transmisión el parásito por todas las vías, pero con una disminución de prevalencia a lo largo del tiempo. Variables como la temperatura, la dosis, y el estado de los peces donantes parecen ser más determinantes que la ruta seleccionada para la transmisión. Entre las rutas probadas, la intubación anal parece ser la más prometedora, pero ninguna de ellas fue capaz de reproducir los signos clínicos observados en las infecciones naturales. / [CA] La producció en aqüicultura s'ha vist minvada per aparició de malalties en els sistemes de cria de peixos. En concret, en l'orada (Sparus aurata), hi ha dos paràsits destacats: Enteromyxum leei (Myxozoa) i Enterospora nucleophila (Microsporidia). Fins avui, per a cap dels dos s'ha establert un cultiu in vitro, i només per a E. leei s'ha aconseguit establir un model de manteniment de la infecció in vivo. La present tesi pretén incrementar el coneixement sobre aquests paràsits i les seves relacions amb l'hoste, establint les bases per a generar solucions que puguin ser aplicades en l'aqüicultura. L'objectiu amb E. leei va ser estudiar la immunitat adquirida induïda en l'orada i la possibilitat de generar eines de diagnòstic i vacunes enfront d'aquesta malaltia. Per a això, primer es va demostrar la resistència del peix al paràsit després d'una segona exposició, la qual va durar fins a 16 mesos. A més, la resistència sembla estar correlacionada amb alts nivells d'immunoglobulina (Ig) M específica en sang, i una alta expressió de Igs, fins i tot abans de la re-exposició al paràsit. El següent pas va ser afinar el protocol d'infecció amb E. leei. Els resultats van mostrar que una setmana és suficient per a transmetre la infecció de E. leei per efluent, independentment de la temperatura. Després de la demostració de la resposta adaptativa eficaç enfront de E. leei, i en disposar d'un model d'infecció refinat, es va realitzar un assaig d'immunització passiva. Aquí, els resultats van mostrar que els anticossos específics efectivament aconsegueix alentir la invasió de l'intestí pel paràsit i disminuir els símptomes de la malaltia. Paral·lelament, el resultat de l'anàlisi del repertori de les regions variables de la IgM i IgT de l'intestí peixos resistents va mostrar la inducció d'una resposta policlonal en les cèl·lules B. Sobre la base d'aquests resultats, es va realitzar una cerca d'antígens de E. leei que poguessin ser utilitzats com a candidats per a la producció de vacunes (anàlisis proteómico) o eines de diagnòstic (anàlisi in silico). Per a això, es va assemblar un transcriptoma de novo utilitzant una mostra mixta d'intestí d'orada i paràsit. Els resultats van donar lloc a 7 i 12 candidats en la cerca in silico i proteòmica, respectivament. En els estudis de E. nucleophila, pel fet que va ser descrita molt recentment, el punt de partida va ser més bàsic. Les mostres d'aquest paràsit només es poden obtenir de brots naturals en piscifactorias. Per això, primer es va realitzar un estudi de caracterització de la patologia de la infecció a partir de peixos infectats naturalment. En etapes primerenques de la infecció, el paràsit es localitza principalment en l'intestí, però mesos després, la prevalença en intestí baixa i incrementa en els òrgans hematopoètics i l'estómac. Els signes clínics de la infecció van consistir en una reducció significativa del creixement, emaciació, i pal·lidesa de les parets intestinals. A nivell cel·lular, en els casos més greus es va observar hipercelularidad en l'epiteli intestinal i proliferació de cèl·lules rodlet, un elevat nombre de limfòcits en la base de l'epiteli i infiltració de granulòcits acidòfils en l'epiteli intestinal. Finalment es van provar diverses formes de transmissió horitzontal de E. nucleophila (cohabitació, efluent, intubació oral i anal) amb per a desenvolupar un model de manteniment in vivo. Es va aconseguir la transmissió el paràsit per totes les vies, però amb una disminució de prevalença al llarg del temps. Variables com la temperatura, la dosi, i l'estat dels peixos donants semblen ser més determinants que la ruta seleccionada per a la transmissió. Entre les rutes provades, la intubació anal sembla ser la més prometedora, però cap d'elles va ser capaç de reproduir els signes clínics observats en les infeccions naturals. / [EN] Aquaculture production is hampered by the emergence of parasite diseases in fish farming systems. Among them, in Sparus aurata, there are two important enteric parasites described: Enteromyxum leei (Myxozoa) Enterospora nucleophila (Microsporidia). To date, no in vitro culture has been established for either parasite, and only for E. leei was it possible to establish a model for maintaining the infection in vivo. The aim of this thesis is to gain new knowledge about these parasites and their relationship with the host, also the basic foundations for generating solutions that can be applied in aquaculture. The general objective for E. leei was to study the acquired immunity induced in gilthead bream and the possibility of generating diagnostic tools and vaccines against this disease. To this end, resistance against the parasite was assessed with a second exposure against the parasite, which showed a resistance for at least 16 months. Besides resistance seemed to be correlated with high levels of specific immunoglobulin (Ig) M in blood, and a high expression of Igs, in particular, the soluble forms, even before re-exposure to the parasite. The next step was refining the protocol for effluent infection with E. leei by studying infection at different exposure time points, temperatures and population densities. The results showed that one week of exposure is sufficient to spread E. leei infection by effluent, regardless of temperature. After demonstrating the resistance against E. leei, and with a refined infection model, a passive immunization assay was performed. The results showed that the serum with specific antibodies effectively slows down the invasion of the gut by the parasite and reduces the symptoms of the disease. At the same time, the analysis of the repertoire of the variable regions of intestinal IgM and IgT showed an induction of a polyclonal response in B cells. On the basis of these results, a research was carried out for E. leei antigens that could have use as candidates for the production of vaccines (proteomic study) or diagnostic tools (in silico study) using the parasite transcriptomic data. To do this, a de novo transcriptome was assembled using a mixed sample of gilthead sea bream and parasite, with a posterior filtrate of the sequences. The In silico and proteomic analysis search resulted in 7 and 12 transcripts, respectively, which are being used for diagnostic and vaccine production. The starting point was more basic in E. nucleophila studies, since this is a recently described disease. The samples of this parasite can only be obtained from natural outbreaks in fish farms. Therefore, first study was carried out to characterize the pathology of the infection of naturally infected fish. In the early stages of the infection, the parasite is mainly located in the intestine, but months later, the prevalence is lower in the intestine and increases in the hematopoietic organs and the stomach. Clinical signs of infection were significant reduction in growth, wasting, and intestinal walls paleness. At the cellular level, in the most severe cases hypercellularity in the intestinal epithelium, proliferation of rodlet cells, high number of lymphocytes at the base of the epithelium and infiltration of acidophilic granulocytes in the intestinal epithelium were observed. Finally, horizontal transmission of E. nucleophila was tried using different transmission methods: cohabitation, effluent, and oral and anal intubation. Transmission of the parasite was achieved with all routes, but there was a decrease in prevalence over time in all cases except for the anal route. Variables such as temperature, dose, and the status of the donor fish appear to be more important than the selected route. Among the routes tested, anal intubation seemed to be the most promising, as it was sustained over a longer period of time, but none of them was able to reproduce the same clinical signs of infection observed in natural infections. / The authors kindly acknowledge the collaboration of anonymous fish farming companies allowing access to the animals during the disease outbreaks. We thank J. Monfort and L. Rodríguez (IATS-CSIC) for the technical assistance on histological processing.This work has been carried out with financial support from the European Union and the Spanish Ministry of Economy and Competitiveness (MINECO) under grant projects ParaFishControl (H2020-634429) and AGL2013-R-48560-C2-2-R, respectively. APS was contracted under ParaFishControl project. Primer sequences and access to the gilthead sea bream transcriptomic database were kindly provided by Prof. J. Pérez-Sánchez of the IATS- Nutrigenomics group. The authors thank I. Vicente for fish maintenance and technical assistance during samplings. The authors thank P. Boudinot (INRAE) for his help in designing and interpreting the immunoglobulin repertoire study and results, J. Pérez-Sánchez (IATS-CSIC) for providing access to the gilthead sea bream genome sequences to perform the repertoire analysis.This work was funded by the European Research Council (ERC Consolidator Grant 2016 725061 TEMUBLYM). / Picard Sánchez, MA. (2021). Control of enteric parasitic diseases of farmed gilthead sea bream: New insights into Enteromyxum leei (Myxozoa) and Enterospora nucleophila (Microsporidia) infections [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/167035 / TESIS / Compendio