Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La asfixia fetal tiene como consecuencia una disminución de la oxigenación, lo que genera un descenso del aporte sanguíneo en los órganos que no son imperativos para la sobrevivencia inmediata, donde comienza a emplearse la glicólisis anaeróbica para producir energía. Esta vía metabólica es menos eficiente, debido a que la energía producida es reducida y las reservas de carbohidratos son rápidamente agotadas, desarrollándose finalmente una acidosis metabólica por la acumulación de acido láctico. Esta ha sido asociada con disminución de la absorción de inmunoglobulinas y falla en la transferencia de inmunidad pasiva. El objetivo de este estudio fue evaluar la relación entre la lactatemia de terneras neonatas, con la concentración de PST y la predisposición a enfermar durante su primer mes de vida. Se realizó entre mayo y agosto de 2014 en una lechería de la zona central e incluyó a 38 terneras Holstein-Friesian. Se tomaron muestras de sangre para medir el lactato sanguíneo con un analizador portátil y estimar las PST por refractometría. Además se registraron los eventos clínicos producidos durante el primer mes de vida. La comparación estadística entre las medias de los parámetros evaluados se realizó con la prueba t de Student. Se relacionó el lactato con las PST por medio de análisis de regresión y se evaluó la habilidad predictiva de la lactatemia en la morbilidad de las terneras con análisis de ROC. Terneras provenientes de distocias tenían mayores concentraciones de lactato sanguíneo (p<0,1) y menores niveles de PST (p<0,05), que terneras nacidas de partos eutócicos. Las terneras que enfermaron presentaron mayores concentraciones de lactato, en comparación con las terneras sanas (p<0,05). No hubo diferencias significativas entre las concentraciones de PST entre sanas y enfermas. Si bien el lactato sanguíneo y las PST evidenciaron una asociación negativa (p<0,1), no hubo una relación estadística entre ambos parámetros baja (r2=0,1). El análisis ROC demostró que la medición de la lactatemia posee cierto valor predictivo de enfermedades, con un punto de corte de 4,5 mmol/l para distinguir entre terneras sanas y aquellas que tienen más probabilidades de enfermar. Por lo tanto, el uso de analizadores portátiles de lactato sanguíneo, constituye una herramienta útil para ser usada en terreno en la detección temprana de terneras con una mayor susceptibilidad de enfermar

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La adquisición de inmunidad pasiva por el ternero es fundamental para su posterior desarrollo. Se han estudiado extensamente los efectos del nivel de inmunidad pasiva en la salud de terneros de lechería, pero es escasa la información que se tiene sobre cómo ésta afecta la salud y desempeño en terneros de carne. El objetivo de este estudio fue evaluar la influencia de los niveles de proteínas séricas totales (PST), adquiridos por terneros para producción de carne después del consumo de calostro, sobre parámetros sanitarios y productivos. Además, se evaluó la relación de los niveles de PST de los terneros con variables maternas. Se recolectó una muestra de sangre dentro de la primera semana de vida de cada ternero (n=159), para determinar la concentración de PST a través de refractometría. Los niveles de PST fueron de 9,2±1,09 g/dL (rango 5,6 a 11,6 g/dL). Además, se registró la CC de la madre al parto y su condición de primípara o multípara. Durante el periodo del nacimiento al destete, no se registró ningún ternero enfermo. Al destete (n=131), se calculó la ganancia diaria de peso (GDP) desde el nacimiento al destete. Al relacionar los niveles de PST con la GDP, el coeficiente de correlación fue de -0,11 y el de determinación de 0,01, por lo que el nivel de PST no influiría mayormente en la GDP al destete. Al evaluar la concentración de PST de los terneros con características maternas, el coeficiente de determinación fue de 0,002, por lo que se concluyó que la concentración de PST en los terneros estaría escasamente influenciada por las variables maternas estudiadas. Según estos resultados se puede indicar que los niveles de PST en los terneros de carne usados en este estudio, difieren en relación a los niveles medidos en general en terneros de lecherías. Además la tasa de morbilidad en este estudio fue cero, lo que se podría explicar, al menos parcialmente, por los altos niveles de inmunidad pasiva alcanzados por los terneros, situación que se contrapone con la observada en lecherías, donde las tasas de morbilidad y mortalidad son habitualmente mayores. / Passive transfer of immunity in calves is essential for their subsequent development. The effects of passive immunity levels on the health of dairy calves have been extensively studied, but little information is available on how it affects health and performance of beef calves. The aim of this study was to evaluate the influence of total serum protein levels (TSP), acquired by beef calves after consumption of colostrum, on health and production parameters. Furthermore, the relation between PST of calves with maternal variables was evaluated. Blood samples were collected within the first week of life of each calf (n=159), to determine TSP concentration by means of refractometry. TSP levels were 9.2±1.09 g/dL (range 5.6 to 11.6 g/dL). In addition, maternal body condition (BC) at calving and parity (primiparous or multiparous) were recorded. From birth to weaning, no sick calves were recorded. At weaning (n=131), the average daily gain (ADG) from birth to weaning was calculated. When correlating TSP levels with ADG, the correlation coefficient was -0.11 and the coefficient of determination was 0.01, so that the level of TSP did not influence the ADG at weaning. When evaluating the relation between TSP concentrations with maternal traits, the coefficient of determination was 0.002. It was concluded that TSP concentration in calves were only slightly influenced by the maternal traits studied. These results may indicate that TSP levels in beef calves differ with those measured generally in dairy calves. Besides, the morbidity rate in this study was zero, which could be explained, at least partially, by the high levels of passive immunity achieved by the calves. This situation contrasts with that observed in dairy farms, where morbidity and mortality are usually higher.

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / Se evaluó un producto elaborado a partir de inmunoglobulinas específicas de huevo en la prevención de la diarrea neonatal del ternero, Protimax®, Trow Nutrition International. Se asignaron aleatoriamente 68 terneras Holstein manejadas en un sistema de crianza artificial a dos grupos equivalentes de 34 animales cada uno. Al grupo tratado se agregó el producto en estudio en el sustituto lácteo en dosis de cinco gramos diarios por animal, desde el primer y hasta los 21 días de vida, en el grupo control no se agregó el producto. Se evaluaron los indicadores medico-productivos: incidencia, mortalidad, duración de los signos clínicos y severidad de la diarrea, además del peso a los 30 días. No se evidenciaron diferencias en ninguno de los parámetros analizados a excepción de la intensidad de los signos clínicos, en el que el grupo tratado presentó diarreas menos severas que el grupo control. Durante el transcurso del estudio se presento un brote de diarrea con anormalmente alta incidencia y mortalidad de animales, lo cual puede haber influido en los resultados obtenidos, lo anterior sugiere realizar nuevos estudios en condiciones epidemiológicas mas controladas

Tesis por compendio / [ES] La producción en acuicultura se ha visto menguada por aparición de enfermedades en los sistemas de cría de peces. En concreto, en la dorada (Sparus aurata), hay dos parásitos destacados: Enteromyxum leei (Myxozoa) y Enterospora nucleophila (Microsporidia). Hasta la fecha, para ninguno de los dos se ha establecido un cultivo in vitro, y solo para E. leei se ha conseguido establecer un modelo de mantenimiento de la infección in vivo. La presente tesis pretende incrementar el conocimiento sobre estos parásitos y sus relaciones con el hospedador, sentando las bases para generar soluciones que puedan ser aplicadas en la acuicultura. El objetivo con E. leei fue estudiar la inmunidad adquirida inducida en la dorada y la posibilidad de generar herramientas de diagnóstico y vacunas frente a esta enfermedad. Para ello, primero se demostró la resistencia del pez al parásito tras una segunda exposición, la cual duró hasta 16 meses. Además, la resistencia parece estar correlacionada con altos niveles de inmunoglobulina (Ig) M específica en sangre, y una alta expresión de Igs, incluso antes de la re-exposición al parásito. El siguiente paso fue afinar el protocolo de infección con E. leei. Los resultados mostraron que una semana es suficiente para transmitir la infección de E. leei por efluente, independientemente de la temperatura. Tras la demostración de la respuesta adaptativa eficaz frente a E. leei, y al disponer de un modelo de infección refinado, se realizó un ensayo de inmunización pasiva. Aquí, los resultados mostraron que los anticuerpos especi'ficos efectivamente consigue ralentizar la invasión del intestino por el parásito y disminuir los síntomas de la enfermedad. Paralelamente, el resultado del análisis del repertorio de las regiones variables de la IgM e IgT del intestino peces resistentes mostró la inducción de una respuesta policlonal en las ce'lulas B. En base a estos resultados, se realizó una búsqueda de antígenos de E. leei que pudieran ser utilizados como candidatos para la producción de vacunas (análisis proteómico) o herramientas de diagnóstico (análisis in silico). Para ello, se ensambló un transcriptoma de novo utilizando una muestra mixta de intestino de dorada y parásito. Los resultados dieron lugar a 7 y 12 candidatos en la búsqueda in silico y proteómica, respectivamente. En los estudios de E. nucleophila, debido a que fue descrita muy recientemente, el punto de partida fue más básico. Las muestras de este parásito solo se pueden obtener de brotes naturales en piscifactorias. Por ello, primero se realizó un estudio de caracterización de la patología de la infección a partir de peces infectados naturalmente. En etapas tempranas de la infección, el parásito se localiza principalmente en el intestino, pero meses después, la prevalencia en intestino baja e incrementa en los órganos hematopoyéticos y el esto'mago. Los signos clínicos de la infección consistieron en una reducción significativa del crecimiento, emaciación, y palidez de las paredes intestinales. A nivel celular, en los casos ma's graves se observó hipercelularidad en el epitelio intestinal y proliferación de ce'lulas rodlet, un elevado número de linfocitos en la base del epitelio e infiltración de granulocitos acidófilos en el epitelio intestinal. Finalmente se probaron varias formas de transmisión horizontal de E. nucleophila (cohabitación, efluente, intubación oral y anal) con para desarrollar un modelo de mantenimiento in vivo. Se consiguió la transmisión el parásito por todas las vías, pero con una disminución de prevalencia a lo largo del tiempo. Variables como la temperatura, la dosis, y el estado de los peces donantes parecen ser más determinantes que la ruta seleccionada para la transmisión. Entre las rutas probadas, la intubación anal parece ser la más prometedora, pero ninguna de ellas fue capaz de reproducir los signos clínicos observados en las infecciones naturales. / [CA] La producció en aqüicultura s'ha vist minvada per aparició de malalties en els sistemes de cria de peixos. En concret, en l'orada (Sparus aurata), hi ha dos paràsits destacats: Enteromyxum leei (Myxozoa) i Enterospora nucleophila (Microsporidia). Fins avui, per a cap dels dos s'ha establert un cultiu in vitro, i només per a E. leei s'ha aconseguit establir un model de manteniment de la infecció in vivo. La present tesi pretén incrementar el coneixement sobre aquests paràsits i les seves relacions amb l'hoste, establint les bases per a generar solucions que puguin ser aplicades en l'aqüicultura. L'objectiu amb E. leei va ser estudiar la immunitat adquirida induïda en l'orada i la possibilitat de generar eines de diagnòstic i vacunes enfront d'aquesta malaltia. Per a això, primer es va demostrar la resistència del peix al paràsit després d'una segona exposició, la qual va durar fins a 16 mesos. A més, la resistència sembla estar correlacionada amb alts nivells d'immunoglobulina (Ig) M específica en sang, i una alta expressió de Igs, fins i tot abans de la re-exposició al paràsit. El següent pas va ser afinar el protocol d'infecció amb E. leei. Els resultats van mostrar que una setmana és suficient per a transmetre la infecció de E. leei per efluent, independentment de la temperatura. Després de la demostració de la resposta adaptativa eficaç enfront de E. leei, i en disposar d'un model d'infecció refinat, es va realitzar un assaig d'immunització passiva. Aquí, els resultats van mostrar que els anticossos específics efectivament aconsegueix alentir la invasió de l'intestí pel paràsit i disminuir els símptomes de la malaltia. Paral·lelament, el resultat de l'anàlisi del repertori de les regions variables de la IgM i IgT de l'intestí peixos resistents va mostrar la inducció d'una resposta policlonal en les cèl·lules B. Sobre la base d'aquests resultats, es va realitzar una cerca d'antígens de E. leei que poguessin ser utilitzats com a candidats per a la producció de vacunes (anàlisis proteómico) o eines de diagnòstic (anàlisi in silico). Per a això, es va assemblar un transcriptoma de novo utilitzant una mostra mixta d'intestí d'orada i paràsit. Els resultats van donar lloc a 7 i 12 candidats en la cerca in silico i proteòmica, respectivament. En els estudis de E. nucleophila, pel fet que va ser descrita molt recentment, el punt de partida va ser més bàsic. Les mostres d'aquest paràsit només es poden obtenir de brots naturals en piscifactorias. Per això, primer es va realitzar un estudi de caracterització de la patologia de la infecció a partir de peixos infectats naturalment. En etapes primerenques de la infecció, el paràsit es localitza principalment en l'intestí, però mesos després, la prevalença en intestí baixa i incrementa en els òrgans hematopoètics i l'estómac. Els signes clínics de la infecció van consistir en una reducció significativa del creixement, emaciació, i pal·lidesa de les parets intestinals. A nivell cel·lular, en els casos més greus es va observar hipercelularidad en l'epiteli intestinal i proliferació de cèl·lules rodlet, un elevat nombre de limfòcits en la base de l'epiteli i infiltració de granulòcits acidòfils en l'epiteli intestinal. Finalment es van provar diverses formes de transmissió horitzontal de E. nucleophila (cohabitació, efluent, intubació oral i anal) amb per a desenvolupar un model de manteniment in vivo. Es va aconseguir la transmissió el paràsit per totes les vies, però amb una disminució de prevalença al llarg del temps. Variables com la temperatura, la dosi, i l'estat dels peixos donants semblen ser més determinants que la ruta seleccionada per a la transmissió. Entre les rutes provades, la intubació anal sembla ser la més prometedora, però cap d'elles va ser capaç de reproduir els signes clínics observats en les infeccions naturals. / [EN] Aquaculture production is hampered by the emergence of parasite diseases in fish farming systems. Among them, in Sparus aurata, there are two important enteric parasites described: Enteromyxum leei (Myxozoa) Enterospora nucleophila (Microsporidia). To date, no in vitro culture has been established for either parasite, and only for E. leei was it possible to establish a model for maintaining the infection in vivo. The aim of this thesis is to gain new knowledge about these parasites and their relationship with the host, also the basic foundations for generating solutions that can be applied in aquaculture. The general objective for E. leei was to study the acquired immunity induced in gilthead bream and the possibility of generating diagnostic tools and vaccines against this disease. To this end, resistance against the parasite was assessed with a second exposure against the parasite, which showed a resistance for at least 16 months. Besides resistance seemed to be correlated with high levels of specific immunoglobulin (Ig) M in blood, and a high expression of Igs, in particular, the soluble forms, even before re-exposure to the parasite. The next step was refining the protocol for effluent infection with E. leei by studying infection at different exposure time points, temperatures and population densities. The results showed that one week of exposure is sufficient to spread E. leei infection by effluent, regardless of temperature. After demonstrating the resistance against E. leei, and with a refined infection model, a passive immunization assay was performed. The results showed that the serum with specific antibodies effectively slows down the invasion of the gut by the parasite and reduces the symptoms of the disease. At the same time, the analysis of the repertoire of the variable regions of intestinal IgM and IgT showed an induction of a polyclonal response in B cells. On the basis of these results, a research was carried out for E. leei antigens that could have use as candidates for the production of vaccines (proteomic study) or diagnostic tools (in silico study) using the parasite transcriptomic data. To do this, a de novo transcriptome was assembled using a mixed sample of gilthead sea bream and parasite, with a posterior filtrate of the sequences. The In silico and proteomic analysis search resulted in 7 and 12 transcripts, respectively, which are being used for diagnostic and vaccine production. The starting point was more basic in E. nucleophila studies, since this is a recently described disease. The samples of this parasite can only be obtained from natural outbreaks in fish farms. Therefore, first study was carried out to characterize the pathology of the infection of naturally infected fish. In the early stages of the infection, the parasite is mainly located in the intestine, but months later, the prevalence is lower in the intestine and increases in the hematopoietic organs and the stomach. Clinical signs of infection were significant reduction in growth, wasting, and intestinal walls paleness. At the cellular level, in the most severe cases hypercellularity in the intestinal epithelium, proliferation of rodlet cells, high number of lymphocytes at the base of the epithelium and infiltration of acidophilic granulocytes in the intestinal epithelium were observed. Finally, horizontal transmission of E. nucleophila was tried using different transmission methods: cohabitation, effluent, and oral and anal intubation. Transmission of the parasite was achieved with all routes, but there was a decrease in prevalence over time in all cases except for the anal route. Variables such as temperature, dose, and the status of the donor fish appear to be more important than the selected route. Among the routes tested, anal intubation seemed to be the most promising, as it was sustained over a longer period of time, but none of them was able to reproduce the same clinical signs of infection observed in natural infections. / The authors kindly acknowledge the collaboration of anonymous fish farming companies allowing access to the animals during the disease outbreaks. We thank J. Monfort and L. Rodríguez (IATS-CSIC) for the technical assistance on histological processing.This work has been carried out with financial support from the European Union and the Spanish Ministry of Economy and Competitiveness (MINECO) under grant projects ParaFishControl (H2020-634429) and AGL2013-R-48560-C2-2-R, respectively. APS was contracted under ParaFishControl project. Primer sequences and access to the gilthead sea bream transcriptomic database were kindly provided by Prof. J. Pérez-Sánchez of the IATS- Nutrigenomics group. The authors thank I. Vicente for fish maintenance and technical assistance during samplings. The authors thank P. Boudinot (INRAE) for his help in designing and interpreting the immunoglobulin repertoire study and results, J. Pérez-Sánchez (IATS-CSIC) for providing access to the gilthead sea bream genome sequences to perform the repertoire analysis.This work was funded by the European Research Council (ERC Consolidator Grant 2016 725061 TEMUBLYM). / Picard Sánchez, MA. (2021). Control of enteric parasitic diseases of farmed gilthead sea bream: New insights into Enteromyxum leei (Myxozoa) and Enterospora nucleophila (Microsporidia) infections [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/167035 / TESIS / Compendio