Orientador: Kleber Gomes Franchini / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T09:40:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_AnaPaulaDalla_M.pdf: 3504258 bytes, checksum: c5455cd7943b5dcb62c07cb63be2f681 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Mudancas dinamicas que ocorrem no intersticio do coracao contribuem diretamente para o remodelamento miocardico decorrente de doencas cardiacas tais como infarto do miocardio, cardiopatia hipertensiva e cardiomiopatias. As metaloproteinases de matriz extracelular (MMPs) sao importantes no remodelamento destas doencas. Estimulos mecanicos e neuro-humoral regulam a expressao e atividade de MMPs atraves de multiplos processos. Em estudos previos verificamos que o silenciamento da FAK no VE de camundongos inibe a fibrose e reduz a atividade de MMP2. Objetivamos avaliar o papel da FAK no controle da ativacao de fibroblastos cardiacos de ratos(FCRNs), induzidos por estiramento mecanico. Os FCRNs foram cultivados em placas Bioflex e submetidos a estiramento ciclico (10%) por ate 8 horas, exceto os controles. A expressao e atividade da FAK foram avaliadas por imunoblottings com anticorpos especificos para FAK ou pFAK Tyr397, respectivamente. A expressao das MMPs 2 e 9 foi avaliada em imunoblottings e a atividade por zimografia ambas no sobrenadante da cultura. O estiramento provocou aumento de 2.4 vezes da quantidade de FAK fosforilada em Tyr397, alem da expressao e a atividade de MMP 2 e 9. Alem disto, modificou os parametros de proliferacao dos FCRNs, mostrando aumento de celulas positivas para Ki67 e BrdU. Do mesmo modo, a diferenciacao em miofibroblastos foi ativada(celulas positivas para a-actina de musculo liso (a-SMA). A inibicao genica da FAK atraves da tecnica de interferencia de RNA (siRNAFAK), nos FCRNs, inibiu a expressao de a-SMA, a atividade e a expressao das MMPs 2 e 9. Alem disso, a deplecao da FAK em FCRNs promoveu a diminuicao da fosforilacao em AKT Ser473, TSC-2 Thr1462, e S6 quinase Thr389 em resposta ao estiramento mecanico. A ativacao dos FCRNs foi impedida pelo pre-tratamento com o inibidor do complexo mTOR, rapamicina. Assim mostramos que a FAK medeia a ativacao de FCRNs invocado pelo estresse mecanico, possivelmente atraves da coordenacao da via de sinalizacao mTOR. Os resultados do presente estudo indicam a ativacao da FAK pode ter um papel critico na proliferacao e diferenciacao, e na ativacao de MMPs em FCRNs quando submetidos a estiramento, e ainda o knockdown da FAK apresenta efeitos contrarios, logo, infere-se o papel da FAK na ativacao de fibroblastos cardiacos. / Abstract: Dynamic changes that occur in the heart interstitium contribute directly to the myocardial remodeling due to heart disease such as myocardial infarction, hypertensive heart disease and cardiomyopathies. The extracellular matrixmetalloproteinases (MMPs) play an important role in remodeling in these diseases. Mechanical and neuro-humoral stimuli regulate the MMPs expression/activity through several processes which include the control of expression, activation by cascades of own MMPs and endogenous inhibitors. In recent studies from our laboratory showed that the FAK silencing in the left ventricle of mice inhibits the fibrosis development, and in parallel reduced the MMP2.activity and expression. The purpose of this study was to evaluate the role of FAK in controlling the MMP 2 and 9 expression and activity in rat cardiac fibroblasts. Cardiac fibroblasts from neonatal rat (FCRNs) were grown on silicon plates and then subjected to cyclic stretch (10%) for up to 8 hours, except the controls. The FAK expression and activity were assessed for imunoblottings through with specific antibodies to FAK or phospho -FAK Tyr397, respectively. The expression of MMP 2 and 9 was evaluated with specific antibodies in imunoblottings and activity through zimography both in the supernatant culture. Furthermore, FCRNs depleted of FAK was defective in AKT Ser473, TSC-2 Thr1462, and S6 kinase Thr389 phosphorylation in response to cyclic stretch. The activation of CF-P3/80 invoked by cyclic stretch was prevented by pre-treatment with the mTOR complex inhibitor rapamycin. These findings demonstrate that FAK signaling plays a critical role in mediating the activation of cardiac fibroblasts invoked by mechanical stress possibly by coordinating the downstream mTOR signaling pathway. The results of this study indicate that the activation of FAK can have a critical role to MMPs activation in cardiac fibroblasts, as well as, the proliferation and differentiation of these cells when subjected to stretching, and the FAK knockdown presents contrary effects, therefore, to corroborate infer the FAK role in differentiation and proliferation cell, and the MMPs balance in cardiac fibroblasts. / Mestrado / Biologia Estrutural, Celular e do Desenvolvimento / Mestre em Fisiopatologia Médica

Introdução: A dermatite atópica (DA) é uma doença cutânea inflamatória de caráter crônico, recidivante, em que o prurido intenso e a xerose cutânea são frequentes. A etiopatogenia da DA é multifatorial, envolvendo fatores genéticos, ambientais e imunológicos. Eosinófilos são leucócitos polimorfonucleares multifuncionais que estão implicados na patogênese de diversos processos inflamatórios, incluindo a DA. Além da produção e secreção de diversas proteínas presentes nos grânulos citoplasmáticos, os eosinófilos também apresentam potencial para secretar metaloproteinases, enzimas proteolíticas que degradam vários componentes da matriz extracelular, e estão presentes em diversos processos fisiológicos e patológicos. Objetivo: Avaliar: 1) o perfil fenotípico dos eosinófilos na dermatite atópica do adulto, através da expressão das moléculas CCR3, CD23, CD38, CD69 e CD62L; 2) o perfil funcional, a partir da secreção de metaloproteinases, inibidores teciduais de metaloproteinases e RANTES por eosinófilos purificados. Métodos: Foram incluídos 41 adultos diagnosticados com DA, de acordo com os critérios de Hanifin & Rajka e 45 controles adultos sadios. A gravidade da doença foi mensurada através do escore de gravidade EASI (Eczema Area and Severity Index). Eosinófilos (LIN 1- CCR3+) do sangue periférico foram analisados para os marcadores CCR3, CD38, CD69, CD23 e CD62L através da citometria de fluxo (LSRFortessa, BD Biosciences) a análise foi realizada com o FlowJo 7.5.6 software. Eosinófilos purificados de indivíduos com DA e indivíduos controles foram estimulados com enterotoxina de Staphylococcus aureus B (SEB) e FSL-1 (agonista de receptores Toll-like 2 e 6), e os sobrenadantes foram coletados para dosagem de metaloproteinases (MMPs), inibidores teciduais de metaloproteinases 1 e 2 (TIMP-1 e TIMP-2) e RANTES por ELISA e por Cytometric bead array. Resultados: Indivíduos com DA apresentaram maior frequência de eosinófilos (LIN1- CCR3+), relacionada à gravidade da doença. Observou-se também, que a frequência de CD62L (L-selectina) e de CD23 (receptor de baixa afinidade para IgE) em eosinófilos (LIN1- CCR3+) diminui em pacientes com DA. Os receptores de ativação precoce (CD69) e tardio (CD38) não mostraram diferença estatística entre os grupos analisados. Os níveis séricos de MMPs e de TIMPs foram similares entre os controles e pacientes. Ao analisarmos a secreção de MMPs e de (TIMPs), a partir de eosinófilos purificados de pacientes com dermatite atópica, observamos diminuição dos níveis basais de TIMP-1 e TIMP-2 e de RANTES. Conclusões: Na DA do adulto, o perfil fenotípico e funcional dos eosinófilos mostrou: perfil de ativação da fase aguda, com expressão aumentada de CCR3; potencial de migração elevado, em decorrência da diminuição da expressão de CD62L; falhas no processo de ativação dos eosinófilos via CD23, bem como, no remodelamento tecidual mediado por TIMP-1 e TIMP-2 e na quimotaxia mediada por RANTES / Introduction: Atopic dermatitis (AD) is an inflammatory, chronic and recurrent skin disease characterized by intense pruritus and xerosis. AD has a complex etiopathogenesis, which involves the influence of genetics, environment, and immunological disorders, among others. Eosinophils are multifunctional polymorphonuclear leukocytes that contribute to the pathogenesis of several inflammatory processes, such as AD. In addition to the production and secretion of diverse proteins of the cytoplasmic granules, eosinophils have also the potential to secrete metalloproteinases (MMPs), proteolytic enzymes with a primary role for degrading several extracellular matrix components, present in distinct physiological and pathological processes. Objective: To evaluate:1) the phenotypic profile of eosinophils in adults with atopic dermatitis through the expression of CCR3, CD23, CD38, CD69 and CD62L molecules; 2) the functional profile through secretion of MMPs, tissue inhibitors of metalloproteinases 1 and 2 ( TIMP-1 and TIMP-2) and RANTES by purified eosinophils. Methods: This work enrolled 41 patients with AD, diagnosed according to Hanifin & Rajka\'s criteria) and 45 healthy controls. Severity of the disease was established utilizing EASI (Eczema Area and Severity Index). Eosinophils (Lineage cocktail 1- CCR3+) from peripheral blood were analyzed for CCR3, CD38, CD69, CD23 and CD62L by flow cytometry (LSRFortessa, BD Biosciences), and analysis was performed using the FlowJo 7.5.6 software. Purified eosinophils were stimulated with Staphylococcus aureus enterotoxin B (SEB) FSL-1 (Toll-like receptor 2/6 agonist), and supernatants were collected for MMPs, TIMPs and RANTES secretion, evaluated by ELISA and cytometric bead array (CBA). Results: Patients with AD have a higher frequency of eosinophils (LIN1- CCR3+), related to disease severity. Moreover, the frequency of CD62L (L-selectin) and CD23 (low-affinity receptor for IgE) in (LIN1- CCR3+) eosinophils was reduced in individuals with AD. CD69 and CD38 (early and late activation receptors) did not show significant difference in the studied groups. Serum levels of MMPs and of TIMP-1 and TIMP-2 were similar in healthy controls and AD patients. When analyzing secretion of MMPs and TIMPs by purified eosinophils from AD individuals, we detected a decrease in baseline levels of TIMP-1, TIMP-2, and reduced RANTES-mediated chemotaxis. Conclusions: Eosinophils in AD exhibit an activation profile of acute phase, with enhanced CCR3 expression, high potential for migration due to reduced expression of CD62, defective activation mechanisms via CD23, altered tissue remodeling process mediated by TIMP-1 and TIMP-2 and reduced RANTES-mediated chemotaxis

Introdução: O Carcinoma Urotelial de Bexiga (CUB) é o segundo tumor urológico mais prevalente no Brasil. Devido ao elevado custo médico no processo que envolve seu diagnóstico, tratamento e seguimento, o CUB é um dos tipos de tumores mais caros para os sistemas de saúde. Embora existam fatores prognósticos definidos, como o estadiamento patológico, a diferenciação histológica e a presença de invasão angiolinfática (IAL), os mesmos demonstram-se insuficientes para uma acurada definição de comportamento da doença. Com a evolução da pesquisa molecular um grande número de potenciais novos marcadores de agressividade tem surgido. As Metaloproteinases da matriz (MMP) sao proteínas teciduais, pertencentes à família das endoproteinases, que degradam vários componentes da matriz extracelular. A expressão de diversas MMPs, especialmente MMP-2 e MMP-9 (gelatinases), bem como seus ativadores e inibidores, tem sido estudada como potencial marcador de comportamento tumoral em várias neoplasias. Objetivos: Avaliarmos os níveis de expressão dos genes das gelatinases MMP-2 e MMP-9 no CUB, assim como proteínas envolvidas em suas vias de ativação e inibição (MMP-14, IL-8, TIMP-1, TIMP-2, RECK e TGF-! ). Material e Método: Estudamos pela técnica de qRT-PCR a expressão dos 8 genes em amostras de CUB de 40 pacientes submetidos a RTUb, tendo como grupo controle amostras de urotélio sem câncer de 6 pacientes submetidos a prostatectomia aberta por HPB, bem como sua relação com marcadores prognósticos clássicos (estádio, grau e IAL). Resultados: Houve uma superexpressão de MMP-9 na maioria das amostras de CUB, bem como subexpressão de MMP-2, TIMP-1, TIMP-2, MMP-14, IL-8, TGF-! e RECK. Comparando os níveis de expressão dos genes com o estádio patológico, houve uma superexpressão de MMP-9 nos tumores pT1-2, quando comparados com pTa (p=0,026), bem como maior expressão de IL-8 nos tumores pT1 e pT2 (p=0,015 e p=0,048, respectivamente). Embora estatisticamente nao significativa, houve uma superexpressão de MMP-14 nos tumores pT2, quando comparados aos demais (p=0,087). Com relação ao grau histológico, também identificamos superexpressão de MMP-9 nos tumores de alto grau, quando comparados aos de baixo grau (p=0,012), assim como maior expressão de IL-8 nos tumores de alto grau (p=0,003). Conclusão: Houve uma superexpressão de MMP-9 e uma subexpressão de MMP-2, TIMP-1, TIMP-2, MMP-14, RECK, IL-8 e TGF-! no CUB, quando comparado com o grupo controle. Também identificamos uma superexpressão de MMP-9 e IL-8 em tumores pT1-2 quando comparados com pTa e de alto grau quando comparados com baixo grau. A subexpressão dos principais inibidores da MMP-9 (TIMP-1 e RECK) pode explicar sua superexpressão no CUB, assim como a superexpressão de IL-8 nos tumores invasivos e de alto grau pode agir como fator ativador da MMP-9 nestes mesmos tumores / Introduction: Bladder cancer (BC) is the second most common urological tumor in Brazil. Because its high cost on diagnosis, treatment and follow-up, BC is one of the most expensive malignancies for health care providers. Although we have well-known prognostic factors, like pathological stage, histologic grade and lymphovascular invasion, they are insufficient to figure more accurate tumor aggressiveness. Recent molecular biology helped us to discover a huge amount of potential markers. Matrix metalloproteinases (MMP) are tissue endopeptidases that degrade components of extracellular matrix. Expression of several MMP, specially MMP-2 and MMP-9 (gelatinases), and their activators and inhibitors, are investigated as potential behavior markers in many neoplasms. Objectives: The aim of this study was to evaluate expression levels of gelatinases MMP-2 and MMP-9 genes by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) in BC, as well as other proteins evolved in the activation and inhibition pathways (MMP-14, IL-8, TIMP-1, TIMP-2, RECK e TGF-b). Material and Method: Present study analyzed tissue expression of 8 genes in BC samples of transutethral resection of 40 patients by qRT-PCR, as well as their relation with current prognostic factors (stage, grade and LVI). The control group was composed of utothelial tissue from 6 patients with benign prostatic hyperplasia (BPH) treated surgically with retropubic prostatectomy. Results: In the tumor samples, MMP-9 presented an overexpression and MMP-2, TIMP-1, TIMP-2, MMP-14, RECK, IL-8, and TGF-b were underexpressed in BC tissue compared to control. Comparing gene level expression to pathologic stage, there was MMP-9 overexpression in pT1-2 tumors compared to pTa (p=0.026), as wall as IL-8 overexpression in pT1 and pT2 tumors (p=0.015 e p=0.048, respectively). Although not statiscally significant, there was MMP-14 overexpression in pT2 tumors in comparison to pTa-1 (p=0.087). About grade, there was MMP-9 overexpression in high-grade tumors compared to low-grade (p=0.012), as well as IL-8 overexpression in high-grade tumors (p=0.003). There was not relation of any gene expression to LVI. Conclusions: We found overexpression of MMP-9 and underexpression of MMP-2, TIMP-1, TIMP-2, MMP-14, RECK, TGF-b and IL-8 in BC compared with the control group. According to the prognostic factors we found increased levels of MMP-9 and IL-8 gene expression in pT1-2 compared to pTa tumors and high-grade compared to low-grade tumors. Underexpression of major MMP-9 inhibitors (TIMP-1 and RECK) could explain MMP-9 overexpression in BC, as well as IL-8 overexpression in high-grade and stage tumors could act as activation factor of MMP-9 in these tumors

Orientador: José Eduardo Tanus dos Santos / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T14:39:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Goncalves_FlaviaMagazoni_D.pdf: 13094273 bytes, checksum: b37b538d1e8c37ba2a2ec5c8c99a5a30 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A migrânea é uma cefaleia primária comum e altamente incapacitante que atinge cerca de 10% da população mundial, especialmente as mulheres. Apesar dos esforços, a fisiopatologia da migrânea não está completamente elucidada. No entanto, acredita-se que as metaloproteinases da matriz (MMPs) estejam envolvidas no rompimento da barreira-hematoencefálica durante uma crise de migrânea. O objetivo do presente trabalho é avaliar se polimorfismos funcionais nos genes da MMP-2 (C-1306T e C-735T) e da MMP-9 (C-1562T, -90(CA)n e R(279)Q) e haplótipos estão associados com a migrânea e se eles podem modificar os níveis circulantes de MMPs na migrânea. Para avaliar o efeito de polimorfismos da MMP-9, foram estudadas 102 mulheres sem migrânea (grupo controle) e 187 mulheres com migrânea (141 com migrânea sem aura; MSA e 46 com migrânea com aura; MA). As genotipagens para os polimorfismos C-1562T, -90(CA)n e R(279)Q da MMP-9 foram realizadas por PCR-RFLP, PCR convencional seguida de eletroforese em gel de poliacrilamida e PCR em Tempo Real, utilizando-se o sistema Taqman® para discriminação de alelo, respectivamente. As concentrações plasmáticas de MMP-9 e TIMP-1 foram determinadas por ELISA. Os genótipos para os polimorfismos da MMP-2 foram determinados por PCR em Tempo Real, utilizando-se o sistema Taqman® para discriminação de alelo em 148 mulheres sem migrânea e em 204 mulheres com migrânea (153 MSA e 51 MA). As concentrações plasmáticas da MMP-2 e do TIMP-2 foram avaliadas, respectivamente, por zimografia e por ELISA. Os haplótipos foram inferidos utilizando o programa PHASE. Este estudo é o primeiro a mostrar que polimorfismos funcionais e haplótipos nos genes da MMP-2 e da MMP-9 podem afetar os níveis circulantes das MMPs em pacientes com migrânea. Enquanto o haplótipo H6 (CLQ) da MMP-9 foi associado aos maiores níveis plasmáticos de MMP-9 nas pacientes com migrânea (359,8±69,53ng/ml versus 195,8±9,70ng/ml para o CLR; 201,5±18,67ng/ml para o CHR e 200,2±17,02ng/ml para o CHQ), as maiores concentrações de MMP-2 foram encontradas nas pacientes com migrânea com aura com o genótipo CC para o polimorfismo C-735T (1,29±0,07U.A. versus 0,96±0,06U.A. para os genótipos CT ou TT) e com o haplótipo H1 (CC) (1,24±0,05U.A. versus 0,94±0,05U.A. para o haplótipo CT) no gene da MMP-2. Apesar de não investigarmos os mecanismos moleculares que explicam esses resultados, podemos sugerir que o aumento dos níveis das MMPs associados a genótipos e haplótipos específicos podem predispor essas pacientes a um aumento da permeabilidade vascular da barreira hematoencefálica, promovendo assim o desenvolvimento de um ambiente neuroinflamatório no sistema nervoso central, contribuindo para uma crise de migrânea / Abstract: Migraine is a common primary headache and highly disabling, affecting approximately 10% of the population worldwide, especially women. Despite the efforts, the pathophysiology of migraine is not completely understood. However, it is believed that the matrix metalloproteinases (MMPs) are involved in the disruption of blood-brain barrier (BBB) during migraine attacks. The aim of this study was to evaluate whether functional polymorphisms in MMP-2 (C-1306T and C-735T) and MMP-9 (C-1562T, -90(CA)n and R(279)Q) genes and haplotypes are associated with migraine and whether they modify circulating MMPs levels in migraine. To evaluate the effect of MMP-9 polymorphisms, we studied 102 healthy women (controls) and 187 women with migraine (141 migraine without aura; MWA, and 46 migraine with aura; MA). Genotypes for C-1562T, -90(CA)n e R(279)Q MMP-9 polymorphisms were determined by PCR-RFLP, by conventional PCR followed by electrophoresis in polyacrylamide gels and by real time-PCR using Taqman® allele discrimination assays, respectively. The plasma MMP-9 and TIMP-1 concentrations were measured by ELISA. Genotypes for MMP-2 polymorphisms were determined by real time-PCR using Taqman® allele discrimination assays in 148 healthy women without history of migraine and in 204 women with migraine (153 MWA and 51 MA). The plasma concentrations of MMP-2 and TIMP-2 were evaluated by gelatin zymography and ELISA, respectively. Haplotypes were inferred using the PHASE program. This is the first study to show that functional MMP-2 and MMP-9 polymorphisms and haplotypes can affect the circulating MMPs levels in patients with migraine. While the MMP-9 H6 (CLQ) haplotyple is associated with high MMP-9 concentrations in patients with migraine (359,8±69,53ng/ml versus 195,8±9,70ng/ml for CLR; 201,5±18,67ng/ml for CHR and 200,2±17,02ng/ml for CHQ) , the highest concentrations of MMP-2 were found in patients with migraine with aura carrying the CC genotype for C-735T polymorphism (1,29±0,07A.U. versus 0,96±0,06A.U. for CT or TT genotypes) and the H1 (CC) haplotype (1,24±0,05A.U. versus 0,94±0,05A.U. for CT haplotype) in the MMP-2 gene. Although we have not investigated the molecular mechanisms explaining these results, we can suggest that an increase of the MMPs levels associated with these genotypes and haplotypes may predispose these patients to increased vascular BBB permeability, thus promoting the development of an inflammatory environment in their central nervous systems, which contributes to migraine attacks / Doutorado / Farmacologia / Doutora em Farmacologia

Introdução: O Carcinoma Urotelial de Bexiga (CUB) é o segundo tumor urológico mais prevalente no Brasil. Devido ao elevado custo médico no processo que envolve seu diagnóstico, tratamento e seguimento, o CUB é um dos tipos de tumores mais caros para os sistemas de saúde. Embora existam fatores prognósticos definidos, como o estadiamento patológico, a diferenciação histológica e a presença de invasão angiolinfática (IAL), os mesmos demonstram-se insuficientes para uma acurada definição de comportamento da doença. Com a evolução da pesquisa molecular um grande número de potenciais novos marcadores de agressividade tem surgido. As Metaloproteinases da matriz (MMP) sao proteínas teciduais, pertencentes à família das endoproteinases, que degradam vários componentes da matriz extracelular. A expressão de diversas MMPs, especialmente MMP-2 e MMP-9 (gelatinases), bem como seus ativadores e inibidores, tem sido estudada como potencial marcador de comportamento tumoral em várias neoplasias. Objetivos: Avaliarmos os níveis de expressão dos genes das gelatinases MMP-2 e MMP-9 no CUB, assim como proteínas envolvidas em suas vias de ativação e inibição (MMP-14, IL-8, TIMP-1, TIMP-2, RECK e TGF-! ). Material e Método: Estudamos pela técnica de qRT-PCR a expressão dos 8 genes em amostras de CUB de 40 pacientes submetidos a RTUb, tendo como grupo controle amostras de urotélio sem câncer de 6 pacientes submetidos a prostatectomia aberta por HPB, bem como sua relação com marcadores prognósticos clássicos (estádio, grau e IAL). Resultados: Houve uma superexpressão de MMP-9 na maioria das amostras de CUB, bem como subexpressão de MMP-2, TIMP-1, TIMP-2, MMP-14, IL-8, TGF-! e RECK. Comparando os níveis de expressão dos genes com o estádio patológico, houve uma superexpressão de MMP-9 nos tumores pT1-2, quando comparados com pTa (p=0,026), bem como maior expressão de IL-8 nos tumores pT1 e pT2 (p=0,015 e p=0,048, respectivamente). Embora estatisticamente nao significativa, houve uma superexpressão de MMP-14 nos tumores pT2, quando comparados aos demais (p=0,087). Com relação ao grau histológico, também identificamos superexpressão de MMP-9 nos tumores de alto grau, quando comparados aos de baixo grau (p=0,012), assim como maior expressão de IL-8 nos tumores de alto grau (p=0,003). Conclusão: Houve uma superexpressão de MMP-9 e uma subexpressão de MMP-2, TIMP-1, TIMP-2, MMP-14, RECK, IL-8 e TGF-! no CUB, quando comparado com o grupo controle. Também identificamos uma superexpressão de MMP-9 e IL-8 em tumores pT1-2 quando comparados com pTa e de alto grau quando comparados com baixo grau. A subexpressão dos principais inibidores da MMP-9 (TIMP-1 e RECK) pode explicar sua superexpressão no CUB, assim como a superexpressão de IL-8 nos tumores invasivos e de alto grau pode agir como fator ativador da MMP-9 nestes mesmos tumores / Introduction: Bladder cancer (BC) is the second most common urological tumor in Brazil. Because its high cost on diagnosis, treatment and follow-up, BC is one of the most expensive malignancies for health care providers. Although we have well-known prognostic factors, like pathological stage, histologic grade and lymphovascular invasion, they are insufficient to figure more accurate tumor aggressiveness. Recent molecular biology helped us to discover a huge amount of potential markers. Matrix metalloproteinases (MMP) are tissue endopeptidases that degrade components of extracellular matrix. Expression of several MMP, specially MMP-2 and MMP-9 (gelatinases), and their activators and inhibitors, are investigated as potential behavior markers in many neoplasms. Objectives: The aim of this study was to evaluate expression levels of gelatinases MMP-2 and MMP-9 genes by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) in BC, as well as other proteins evolved in the activation and inhibition pathways (MMP-14, IL-8, TIMP-1, TIMP-2, RECK e TGF-b). Material and Method: Present study analyzed tissue expression of 8 genes in BC samples of transutethral resection of 40 patients by qRT-PCR, as well as their relation with current prognostic factors (stage, grade and LVI). The control group was composed of utothelial tissue from 6 patients with benign prostatic hyperplasia (BPH) treated surgically with retropubic prostatectomy. Results: In the tumor samples, MMP-9 presented an overexpression and MMP-2, TIMP-1, TIMP-2, MMP-14, RECK, IL-8, and TGF-b were underexpressed in BC tissue compared to control. Comparing gene level expression to pathologic stage, there was MMP-9 overexpression in pT1-2 tumors compared to pTa (p=0.026), as wall as IL-8 overexpression in pT1 and pT2 tumors (p=0.015 e p=0.048, respectively). Although not statiscally significant, there was MMP-14 overexpression in pT2 tumors in comparison to pTa-1 (p=0.087). About grade, there was MMP-9 overexpression in high-grade tumors compared to low-grade (p=0.012), as well as IL-8 overexpression in high-grade tumors (p=0.003). There was not relation of any gene expression to LVI. Conclusions: We found overexpression of MMP-9 and underexpression of MMP-2, TIMP-1, TIMP-2, MMP-14, RECK, TGF-b and IL-8 in BC compared with the control group. According to the prognostic factors we found increased levels of MMP-9 and IL-8 gene expression in pT1-2 compared to pTa tumors and high-grade compared to low-grade tumors. Underexpression of major MMP-9 inhibitors (TIMP-1 and RECK) could explain MMP-9 overexpression in BC, as well as IL-8 overexpression in high-grade and stage tumors could act as activation factor of MMP-9 in these tumors

INTRODUÇÃO: Recidivas locais e loco-regionais são as principais causas de falha do tratamento em pacientes portadores de carcinomas epidermóides de boca e orofaringe. A cirurgia de resgate é geralmente a melhor opção terapêutica para esses pacientes. Esse estudo tem por objetivo avaliar a importância prognóstica da expressão das proteínas EGFR, MMP-2, MMP-9 e VEGF em pacientes com recidiva local submetidos à cirurgia de resgate. CASUÍSTICA E MÉTODOS: Os prontuários de 111 pacientes portadores de recorrência local de carcinomas epidermóides de boca e orofaringe foram analisados de forma retrospectiva. A localização do tumor primário foi o lábio em 10 casos (9%), a cavidade oral em 68 (61%) e a orofaringe em 33 (30%). O tratamento prévio foi cirurgia em 33 casos (30%), radioterapia associada ou não à quimioterapia baseada em cisplatina em 46 (41%) e cirurgia com radioterapia adjuvante em 32 (29%). A expressão das proteínas EGFR, MMP-2, MMP-9 and VEGF foi avaliada com a técnica do Tissue Microarray. RESULTADOS: O intervalo livre de doença variou de 0,89 a 140,9 meses, com uma mediana de 6,87 meses. As recidivas foram diagnosticadas em intervalo de tempo inferior a 1 ano em 69 pacientes (62,2%) e após 1 ano em 42 (37,8%). Os pacientes com intervalo livre de doença inferior a 1 ano apresentaram pior resultado de sobrevida (p=0,01). O estádio clínico da recidiva (rEC) foi I ou II em 31 casos (27,9%) e III ou IV em 80 (72,1%). Pacientes com doença em estádio clínico mais avançado (rEC III ou IV) apresentaram piores taxas de sobrevida específica por câncer (p=0,04). Hiper-expressão do EGFR foi associada a pior resultado do tratamento. Os casos com EGFR positivo obtiveram sobrevida específica por câncer em 3 anos de 27,2%, enquanto pacientes com EGFR negativo alcançaram 64,3% de sobrevida em 3 anos (p=0,001). A expressão das proteínas MMP-2, MMP-9 e VEGF não se mostrou significativa para o prognóstico (p=0,83, p=0,15 e p=0,86, respectivamente). Na análise multivariada, apenas o intervalo livre de doença e a expressão do EGFR foram associadas à maior risco de morte. CONCLUSÕES: Recidivas locais de carcinomas epidermóides de boca e orofaringe são associadas a mau prognóstico. Intervalo livre de doença superior a 1 ano e ausência de expressão do EGFR foram os principais fatores associados a melhores resultados de sobrevida específica por câncer em pacientes submetidos à cirurgia de resgate. / INTRODUCTION: Local and regional relapses are the main sites of treatment failure in patients with oral and oropharyngeal squamous cell carcinoma. In these instances, salvage surgery is the most widely used treatment approach. The aim of this study is to analyze the prognostic effect of the expression of EGFR, MMP-2, MMP-9 and VEGF in patients with recurrent cancer sumitted to salvage surgery. METHODS: The charts of 111 patients with local recurrence of oral or oropharyngeal squamous cell carcinomas were retrospectively analyzed. The tumor sites were: the lip in 11 cases (9%), the oral cavity in 68 (61%) and the oropharynx in 33 (30%). The previous treatment was: Surgery in 33 patients (30%), radiotherapy with or without cisplatin based chemotherapy in 46 (41%) and surgery with adjuvant radiotherapy in 32 (29%). EGFR, MMP-2, MMP-9 and VEGF expressions were analyzed with tissue microarray immunohistochemical technique. RESULTS: The disease-free interval ranged from 0.89 to 140.9 months with a median of 6.87 months. The patients were categorized into two groups: Those with recurrence in less than 1 year (69 patients - 62.2%) and those with recurrence after 1 year (42 - 37.8%). The group with the shorter disease-free interval presented a worse prognosis (p=0.01). The clinical stage of recurrence (rCS) was I/II in 31 cases (27.9%) and III/IV in 80 cases (72.1%). Patients with more advanced diseases (rCS III/IV) had worse rates of cancer specific survival (CSS) than patients with rCS I/II (p=0.04). An over-expression of EGFR was associated with worse treatment results. Positive EGFR cases had a 3 year CSS of 27.2%, while EGFR negative patients had 64.3% (p=0.001). The MMP-2 and MMP-9 over-expression were also associated with a worse prognosis but without statistical significance (p=0.83 and p=0.15). VEGF expression did not show prognostic significance in this group of patients. In a multivariate analysis only the disease-free interval and over-expression of EGFR were associated with a higher risk of death. CONCLUSION: Local recurrence in oral and oropharyngeal squamous cell carcinomas usually indicates an unfavorable prognosis. A disease-free interval greater than 1 year and a negative EGFR expression are the main prognostic factors which indicate a better cancer specific survival rate in patients submitted to salvage surgery.

INTRODUÇÃO: O câncer de vulva representa entre 3 a 5% dos cânceres do trato genital feminino e aproximadamente 0,6% dos cânceres da mulher. Existem poucos estudos na literatura sobre fatores prognósticos incluindo avaliação molecular, relacionados a esta doença. Este estudo foi realizado para avaliar fatores prognósticos clínicos, epidemiológicos, patológicos e moleculares de pacientes portadores de câncer de vulva submetidos a tratamento cirúrgico. Avaliamos também uma classificação de prognóstico com base na pontuação do risco relativo dos fatores encontrados. MÉTODOS: Foram selecionadas as pacientes portadoras de carcinoma escamocelular de vulva, submetidas a tratamento cirúrgico no Departamento de Cirurgia Pélvica e Serviço de Ginecologia do Hospital Aristides Maltez entre o período de Junho de 1993 e Junho de 2011. Avaliamos as características clínicas, epidemiológicas, de anatomia patológica e molecular, em relação ao prognóstico das pacientes. A avaliação molecular estudou a expressão da proteína p53 e metaloproteinase 2 de matriz por exame de imunohistoquímica pela técnica de arranjo em matriz de amostras teciduais (TMA). Com base no banco de dados realizado através de consulta aos prontuários e com os resultados de anatomia patológica e testes imunohistoquímicos realizamos análise estatística em relação à sobrevida global das pacientes.RESULTADOS: Setenta e cinco pacientes foram elegíveis para o estudo. A análise univariada mostra como fatores relacionados à sobrevida foram a presença de linfonodo suspeito de metástase ao exame clínico (p=0,004), o tamanho maior de 4 centímetros (p=0,001), a presença de linfonodo com metástase (p=0,026), o estadiamento por grupos (p=0,001), a localização mediana (p=0,011), a profundidade de infiltração maior de 2 milímetros (p=0,012), a expressão da MMP 2 em mais de 50% das células (p=0,009). Na análise multivariada os fatores relacionados à sobrevida foram o tamanho maior de 4 centímetros (p=0,014), a profundidade de invasão maior de 2 milímetros (p=0,023) e a expressão de MMP2 em mais de 50% das células (p=0,046). De acordo ao risco relativo dos fatores identificados como relacionados ao prognóstico pela análise multivariada, foi elaborada a contagem de pontos para uma classificação prognóstica. Essa pontuação classifica em três categorias conforme a presença ou ausência dos fatores identificados na análise multivariada e pode corresponder a três expectativas de sobrevida. CONCLUSÕES: Os fatores tamanho maior de 4 centímetros, profundidade de invasão maior de 2 milímetros e expressão em mais de 50% das células tumorais de metaloproteinase 2 parecem estar relacionados a menor taxa de sobrevida global de pacientes portadores de câncer de vulva submetidas a tratamento cirúrgico. Pode ser realizada uma classificação para o prognóstico de acordo com uma contagem de pontos atribuídos ao risco relativo destes fatores / INTRODUCTION: Vulvar cancer accounts for 3-5% of all cancers of the female genital tract and approximately 0.6% of women\'s cancers. There are few studies on prognostic factors including molecular evaluation related to this disease. This study was conducted to evaluate clinical, epidemiological, pathological and molecular prognostic factors of patients with vulvar cancer, undergoing surgical treatment. A classification based on prognostic risk score related to the factors found was also evaluated. METHODS: Patients were selected with squamous cell carcinoma of the vulva who underwent surgical treatment at the Department of Pelvic Surgery and Department of Gynecology, Hospital Aristides Maltez between the period of June 1993 and June 2011. Clinical, epidemiological, and molecular and pathological anatomy characteristics were evaluated in relation to the prognosis of patients. Molecular assessment studied the expression of p53 protein and metalloproteinase 2 by immunohistochemical examination through the technical arrangement on matrix tissue samples (TMA). Based on the database performed on medical records held and the results of pathological anatomy and immunohistochemical tests, the statistical analysis was performed with respect to overall survival of patients. RESULTS: Seventy-five patients were eligible for the study. Univariate analysis shows how factors related to survival were the presence of lymph node metastasis suspected on clinical examination (p = 0.004), the larger size of 4 cm (p = 0.001), presence of lymph node metastasis (p = 0.026), staging groups (p = 0.001), the location median (p = 0.011), the depth of infiltration larger than 2 millimeters (p = 0.012), the expression of MMP 2 in more than 50% of the cells (p = 0.009). In multivariate analysis, factors related to survival were larger size than 4 cm (p = 0.014), depth of invasion greater than 2 mm (p = 0.023) and MMP2 expression in more than 50% of cells (p = 0.046). According to the relative risk of factors identified as related to prognosis by multivariate analysis, a score was developed for a prognostic classification. This score classifies into three categories, according to the presence or absence of the factors identified in the multivariate analysis and may correspond to three survival expectations. CONCLUSIONS: Prognostic factors as the size larger than 4 centimeters, depth of invasion greater than 2 mm and expression in more than 50% of tumor cells of metalloproteinase 2 may be related to lower overall survival rate of patients with cancer of the vulva undergoing surgery. Classification may be performed for the prognostic according to a count point attributed to the relative risk of these factors

INTRODUÇÃO: Recidivas locais e loco-regionais são as principais causas de falha do tratamento em pacientes portadores de carcinomas epidermóides de boca e orofaringe. A cirurgia de resgate é geralmente a melhor opção terapêutica para esses pacientes. Esse estudo tem por objetivo avaliar a importância prognóstica da expressão das proteínas EGFR, MMP-2, MMP-9 e VEGF em pacientes com recidiva local submetidos à cirurgia de resgate. CASUÍSTICA E MÉTODOS: Os prontuários de 111 pacientes portadores de recorrência local de carcinomas epidermóides de boca e orofaringe foram analisados de forma retrospectiva. A localização do tumor primário foi o lábio em 10 casos (9%), a cavidade oral em 68 (61%) e a orofaringe em 33 (30%). O tratamento prévio foi cirurgia em 33 casos (30%), radioterapia associada ou não à quimioterapia baseada em cisplatina em 46 (41%) e cirurgia com radioterapia adjuvante em 32 (29%). A expressão das proteínas EGFR, MMP-2, MMP-9 and VEGF foi avaliada com a técnica do Tissue Microarray. RESULTADOS: O intervalo livre de doença variou de 0,89 a 140,9 meses, com uma mediana de 6,87 meses. As recidivas foram diagnosticadas em intervalo de tempo inferior a 1 ano em 69 pacientes (62,2%) e após 1 ano em 42 (37,8%). Os pacientes com intervalo livre de doença inferior a 1 ano apresentaram pior resultado de sobrevida (p=0,01). O estádio clínico da recidiva (rEC) foi I ou II em 31 casos (27,9%) e III ou IV em 80 (72,1%). Pacientes com doença em estádio clínico mais avançado (rEC III ou IV) apresentaram piores taxas de sobrevida específica por câncer (p=0,04). Hiper-expressão do EGFR foi associada a pior resultado do tratamento. Os casos com EGFR positivo obtiveram sobrevida específica por câncer em 3 anos de 27,2%, enquanto pacientes com EGFR negativo alcançaram 64,3% de sobrevida em 3 anos (p=0,001). A expressão das proteínas MMP-2, MMP-9 e VEGF não se mostrou significativa para o prognóstico (p=0,83, p=0,15 e p=0,86, respectivamente). Na análise multivariada, apenas o intervalo livre de doença e a expressão do EGFR foram associadas à maior risco de morte. CONCLUSÕES: Recidivas locais de carcinomas epidermóides de boca e orofaringe são associadas a mau prognóstico. Intervalo livre de doença superior a 1 ano e ausência de expressão do EGFR foram os principais fatores associados a melhores resultados de sobrevida específica por câncer em pacientes submetidos à cirurgia de resgate. / INTRODUCTION: Local and regional relapses are the main sites of treatment failure in patients with oral and oropharyngeal squamous cell carcinoma. In these instances, salvage surgery is the most widely used treatment approach. The aim of this study is to analyze the prognostic effect of the expression of EGFR, MMP-2, MMP-9 and VEGF in patients with recurrent cancer sumitted to salvage surgery. METHODS: The charts of 111 patients with local recurrence of oral or oropharyngeal squamous cell carcinomas were retrospectively analyzed. The tumor sites were: the lip in 11 cases (9%), the oral cavity in 68 (61%) and the oropharynx in 33 (30%). The previous treatment was: Surgery in 33 patients (30%), radiotherapy with or without cisplatin based chemotherapy in 46 (41%) and surgery with adjuvant radiotherapy in 32 (29%). EGFR, MMP-2, MMP-9 and VEGF expressions were analyzed with tissue microarray immunohistochemical technique. RESULTS: The disease-free interval ranged from 0.89 to 140.9 months with a median of 6.87 months. The patients were categorized into two groups: Those with recurrence in less than 1 year (69 patients - 62.2%) and those with recurrence after 1 year (42 - 37.8%). The group with the shorter disease-free interval presented a worse prognosis (p=0.01). The clinical stage of recurrence (rCS) was I/II in 31 cases (27.9%) and III/IV in 80 cases (72.1%). Patients with more advanced diseases (rCS III/IV) had worse rates of cancer specific survival (CSS) than patients with rCS I/II (p=0.04). An over-expression of EGFR was associated with worse treatment results. Positive EGFR cases had a 3 year CSS of 27.2%, while EGFR negative patients had 64.3% (p=0.001). The MMP-2 and MMP-9 over-expression were also associated with a worse prognosis but without statistical significance (p=0.83 and p=0.15). VEGF expression did not show prognostic significance in this group of patients. In a multivariate analysis only the disease-free interval and over-expression of EGFR were associated with a higher risk of death. CONCLUSION: Local recurrence in oral and oropharyngeal squamous cell carcinomas usually indicates an unfavorable prognosis. A disease-free interval greater than 1 year and a negative EGFR expression are the main prognostic factors which indicate a better cancer specific survival rate in patients submitted to salvage surgery.

INTRODUÇÃO: O câncer de vulva representa entre 3 a 5% dos cânceres do trato genital feminino e aproximadamente 0,6% dos cânceres da mulher. Existem poucos estudos na literatura sobre fatores prognósticos incluindo avaliação molecular, relacionados a esta doença. Este estudo foi realizado para avaliar fatores prognósticos clínicos, epidemiológicos, patológicos e moleculares de pacientes portadores de câncer de vulva submetidos a tratamento cirúrgico. Avaliamos também uma classificação de prognóstico com base na pontuação do risco relativo dos fatores encontrados. MÉTODOS: Foram selecionadas as pacientes portadoras de carcinoma escamocelular de vulva, submetidas a tratamento cirúrgico no Departamento de Cirurgia Pélvica e Serviço de Ginecologia do Hospital Aristides Maltez entre o período de Junho de 1993 e Junho de 2011. Avaliamos as características clínicas, epidemiológicas, de anatomia patológica e molecular, em relação ao prognóstico das pacientes. A avaliação molecular estudou a expressão da proteína p53 e metaloproteinase 2 de matriz por exame de imunohistoquímica pela técnica de arranjo em matriz de amostras teciduais (TMA). Com base no banco de dados realizado através de consulta aos prontuários e com os resultados de anatomia patológica e testes imunohistoquímicos realizamos análise estatística em relação à sobrevida global das pacientes.RESULTADOS: Setenta e cinco pacientes foram elegíveis para o estudo. A análise univariada mostra como fatores relacionados à sobrevida foram a presença de linfonodo suspeito de metástase ao exame clínico (p=0,004), o tamanho maior de 4 centímetros (p=0,001), a presença de linfonodo com metástase (p=0,026), o estadiamento por grupos (p=0,001), a localização mediana (p=0,011), a profundidade de infiltração maior de 2 milímetros (p=0,012), a expressão da MMP 2 em mais de 50% das células (p=0,009). Na análise multivariada os fatores relacionados à sobrevida foram o tamanho maior de 4 centímetros (p=0,014), a profundidade de invasão maior de 2 milímetros (p=0,023) e a expressão de MMP2 em mais de 50% das células (p=0,046). De acordo ao risco relativo dos fatores identificados como relacionados ao prognóstico pela análise multivariada, foi elaborada a contagem de pontos para uma classificação prognóstica. Essa pontuação classifica em três categorias conforme a presença ou ausência dos fatores identificados na análise multivariada e pode corresponder a três expectativas de sobrevida. CONCLUSÕES: Os fatores tamanho maior de 4 centímetros, profundidade de invasão maior de 2 milímetros e expressão em mais de 50% das células tumorais de metaloproteinase 2 parecem estar relacionados a menor taxa de sobrevida global de pacientes portadores de câncer de vulva submetidas a tratamento cirúrgico. Pode ser realizada uma classificação para o prognóstico de acordo com uma contagem de pontos atribuídos ao risco relativo destes fatores / INTRODUCTION: Vulvar cancer accounts for 3-5% of all cancers of the female genital tract and approximately 0.6% of women\'s cancers. There are few studies on prognostic factors including molecular evaluation related to this disease. This study was conducted to evaluate clinical, epidemiological, pathological and molecular prognostic factors of patients with vulvar cancer, undergoing surgical treatment. A classification based on prognostic risk score related to the factors found was also evaluated. METHODS: Patients were selected with squamous cell carcinoma of the vulva who underwent surgical treatment at the Department of Pelvic Surgery and Department of Gynecology, Hospital Aristides Maltez between the period of June 1993 and June 2011. Clinical, epidemiological, and molecular and pathological anatomy characteristics were evaluated in relation to the prognosis of patients. Molecular assessment studied the expression of p53 protein and metalloproteinase 2 by immunohistochemical examination through the technical arrangement on matrix tissue samples (TMA). Based on the database performed on medical records held and the results of pathological anatomy and immunohistochemical tests, the statistical analysis was performed with respect to overall survival of patients. RESULTS: Seventy-five patients were eligible for the study. Univariate analysis shows how factors related to survival were the presence of lymph node metastasis suspected on clinical examination (p = 0.004), the larger size of 4 cm (p = 0.001), presence of lymph node metastasis (p = 0.026), staging groups (p = 0.001), the location median (p = 0.011), the depth of infiltration larger than 2 millimeters (p = 0.012), the expression of MMP 2 in more than 50% of the cells (p = 0.009). In multivariate analysis, factors related to survival were larger size than 4 cm (p = 0.014), depth of invasion greater than 2 mm (p = 0.023) and MMP2 expression in more than 50% of cells (p = 0.046). According to the relative risk of factors identified as related to prognosis by multivariate analysis, a score was developed for a prognostic classification. This score classifies into three categories, according to the presence or absence of the factors identified in the multivariate analysis and may correspond to three survival expectations. CONCLUSIONS: Prognostic factors as the size larger than 4 centimeters, depth of invasion greater than 2 mm and expression in more than 50% of tumor cells of metalloproteinase 2 may be related to lower overall survival rate of patients with cancer of the vulva undergoing surgery. Classification may be performed for the prognostic according to a count point attributed to the relative risk of these factors