Orientador: José Paes de Almeida Nogueira Pinto / Banca: Luciano dos Santos Bersot / Banca: Luís Augusto Nero / Banca: Maria Teresa Destro / Banca: Vera Lúcia Mores Rall / Resumo: O presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito do uso de aspersão de água como forma de higiene operacional em esteiras sanitárias condutoras de cortes de frango em quatro linhas de processamento. Em cada linha de processamento, foram coletadas amostras de dois tipos de esteiras (modular e lisa) higienizadas com água e não higienizadas, em quatro tempos distintos (T0, T1, T2 e T3). As amostras foram submetidas à contagem de mesófilos, enterobactérias e pesquisa de L. monocytogenes. Culturas de L. monocytogenes foram submetidas à sorotipagem e a PFGE. Foram realizadas dez repetições do experimento em cada linha de processamento. Com base nos resultados foi possível observar que o efeito da utilização da aspersão com água foi dependente de diversos fatores, tais como a linha de processamento, tipo de corte, design do equipamento e o tipo de esteira. A higienização por aspersão não foi o fator primordial para garantir a eliminação de L. monocytogenes, uma vez que o patógeno foi isolado independente da linha de processamento e tipo de esteira, além disso, os pulsotipos encontrados evidenciaram a disseminação do patógeno nas linhas de processamento avaliadas. Deste modo, a decisão de retirar a água do processo de higienização de esteiras condutoras deve ser precedida de um estudo criterioso para garantir que a sua ausência não venha influenciar na inocuidade dos produtos de origem animal / Abstract: This study aimed to evaluate the effect of the use of water spray on cleaning of conveyor belts in four broiler lines processing in Brazilian slaughterhouses. Surface samples were collected of two types of conveyor belt (modular and smooth) which passed through two processes (with and without water spray), in four times (T0, T1, T2 and T3). The samples were subjected to mesophilic and enterobacteria count, and research of L. monocytogenes. Cultures of L. monocytogenes were serotyped and submitted to PFGE. Ten replicates of the experiment were performed on each processing line. The results demonstrated that the effect of the use of spraying with water was dependent on several factors, such as the processing line, product type, equipment design and the type of conveyor belt. The cleaning spray is not the primary factor in ensuring the elimination of L. monocytogenes, because the pathogen was isolated independent of the type of conveyor belt and processing line, moreover, PFGE demonstrated the dissemination in the processing lines. Thus, the decision to remove the water from the cleaning of conveyor belts must be preceded by a study to ensure that the absence of this procedure does not influence the safety of products of animal origin / Doutor

Orientador: Ely Nahas / Banca: José Frederico Centurion / Banca: Marisa de Cássia Piccolo / Resumo: A cultura da cana-de-açúcar tem sido conduzida por cortes sucessivos e para isso é intensamente adubada e mecanizada. A influência sobre as bactérias totais, nitrificantes e desnitrificantes, os fungos, a biomassa microbiana-C, as atividades, respiratória, amonificante, nitrificante e solubilizadora e das enzimas desidrogenase, urease e fosfatase foram estudada em um solo após seis cortes da cultura de cana-de-açúcar. As amostras de solo foram coletadas na linha e entrelinha na profundidade do solo de 0-20 cm. Para a colheita, a palha da cana do 2º e 3º cortes foi queimada. As demais não foram queimadas. Reduções sucessivas foram encontradas nas contagens e atividades microbianas do solo após os sucessivos cortes. A não queima da palha no 4º corte acarretou aumento nas contagens dos fungos e das atividades amonificante, nitrificante, solubilizadora e das enzimas urease e fosfatase, que em seguida diminuíram. As contagens das bactérias totais, nitrificantes e desnitrificantes e dos fungos diminuíram de 55%, 22%, 17% e 77%, respectivamente, do primeiro corte ao sexto corte. Foram também observadas as seguintes reduções: biomassa microbiana-C 43%, atividades respiratória 39%, amonificante 35%, nitrificante 40% e solubilizadora 35%. A atividade das enzimas desidrogenase (58%) e urease (36%), mas não a da fosfatase. Redução significativa foi observada no conteúdo de umidade do solo (33%). Cortes sucessivos da cana-de-açúcar têm importante impacto nas populações e atividades microbianas, acarretando conseqüências negativas nos ciclos do C, N e P e diminuição da produtividade da cultura. Tendo em vista que a compactação é um dos fatores mais agravantes para a qualidade do solo, objetivou-se avaliar o efeito da compactação a comunidade e atividade enzimática microbiana de um solo sob cultura de milho. Seis níveis de compactação foram obtidos pela passagem... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Sugarcane culture has been cultivated by successive cuts and for that it is fertilized intensely and mechanized. The influence on the total bacteria, nitrifying and denitrifying, the fungi, the C of the biomass microbial, the activities, respiratory, amonifying, nitrifying and phosphates solubilizers and of enzymes dehydrogenase, urease and phosphatase it was studied in a soil after six cuts of the sugarcane culture. The soil samples were collected in the line and space between lines in the depth of the soil of 0-20 cm. For de harvest, the straw of the sugarcane of the 2º and 3º cuts it was burned. The others were not burned. Successive reductions were found in the counts and microbial activities of the soil after the successive cuts. It doesn't burn of the straw in the 4º cut caused increase in the counting of fungi and of the activities amonifying, nitrifying, solubilizers and of the enzymes urease and phosphatase that soon after decreased. The counting of the total bacteria, nitrifying and denitrifying and of the fungi they decreased of (55%), (22%), (17%) and (77%), respectively, of the first cut to the sixth cut. They were also observed the following reductions: C of the biomass microbial (43%), activities respiratory (39%), amonifying (35%), nitrifying (40%) and solubilizers (35%). The activity of enzymes dehydrogenase (58%) and urease (36%), but not it of phosphatase. Significant reduction was presented in the content of humidity of the soil (33%). Successive cuts of the sugarcane have important impact in the populations and microbial activities, causing negative consequences in the cycles of C, N and P and decrease of the productivity of the culture. Tends in view that the compaction is one of the most agravating factors for the soil quality, however the effect in the community and microbial enzymatic activity has not been studied sufficiently. Six compaction levels were... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Carlos Renato Corso / Banca: Sandra Mara Martins Franchetti / Banca: Sandra Regina Ceccato Antonini / Resumo: O uso de biodigestores anaeróbios é uma versátil alternativa para produção de biomassa microbiana a partir de resíduos orgânicos. O reaproveitamento das sobras alimentares, produzidas pelo Restaurante Universitário da Unesp Campus Rio Claro, foi o responsável pela produção de um Inóculo Líquido Residual (I.L.R.) utilizado como agente biodegradador e biossorvente para os corantes azóicos "Acid Yellow 25" e "Direct Violet 51" de importante destaque industrial. O projeto dividiu-se em duas etapas, a primeira contemplando a produção do inóculo em grande escala (biodigestor de fluxo contínuo) e a segunda em escala de laboratorial (biodigestor em batelada). Os resultados da análise microbiológica revelaram a presença predominante de bactérias acidogênicas e de leveduras em menor escala. Estes microrganismos foram aplicados como inóculo nas soluções dos dois corantes em condições variadas de pH (2,50; 4,50 e 6,50). A análise dos produtos formados a partir da interação com o I.L.R demonstraram as potencialidades biodegradativas e biossorventes do consórcio microbiano e sua ação diferenciada de acordo com a mudança de pH.As aminas aromáticas e sulfonadas, formadas após a redução da ligação azóica, foram estudada a partir do sobrenadante dos tratamentos dos corantes através do uso dos métodos difundidos do UV-Vis e do HPLC aliados às analises vanguardistas do FTIR. / Abstract: The use of anaerobic bioreactor is a versatile alternative for the production of microbial biomass from organic waste. The reuse of the leftovers from the University Restaurant of Unesp Rio Claro Campus, was responsible for producing a Residual Liquid Inoculum (R.L.I.) used as a biodegradator and biosorptive agent for two azo dyes Acid Yellow 25 and Direct Violet 51 with a major role in the industrial scenery. The project was divided in two steps, the first covering the production of the inoculum in large scale (continuous flow bioreactor) and the second in bench-scale (in-batch bioreactor) The results of the microbiological analysis revealed a predominant presence of acidogenic bacteria and a few yeasts. These microorganisms were used as inoculum in both dye solutions at different pH conditions (2.50, 4.50 and 6.50) The analysis of the resultant by-products demonstrated the biodegradation and biosorptive potential of the consortium and its differentiated pH-regulated action. The aromatic sulfonated amines, formed after the reduction of the azoic bounds, were studied through the spreaded analytic methods of UV-Vis and HPLC in conjunct with the vanguard of FTIR device. / Mestre

Orientador: Maria Aparecida Marin-Morales / Banca: Maria Luiza Silveira Mello / Banca: Cláudia Bueno dos Reis Martinez / Banca: Maria Angélica Maciel Martinho Ferreira / Banca: Edson Luis Maístro / Resumo: Os azocorantes são substâncias químicas extremamente utilizadas em indústrias têxteis que podem induzir mudanças no material genético de organismos expostos, mesmo que essas alterações no DNA não se expressem de imediato. Foram avaliadas as citotoxicidade, genotoxicidade e mutagenicidade de diferentes concentrações (1, 10, 100 e 1000 mg/L - na ausência dos microorganismos - e 50 e 200 mg/L - na presença dos microorganismos) do azocorante Black Dye Commercial Product (BDCP), antes e após tratamentos de biodegradação por diversos microrganismos (1. "Pool" de bactérias heterotróficas provenientes de uma estação de tratamento biológico de efluentes, 2. Levedura Candida viswanathii, e 3. Fungo Basidiomiceto Phanerochaete chrysosporium), por meio de diferentes técnicas citogenéticas (coloração convencional, bandamento C, bandamento RON, bandamento por fluorocromos base-específicos CMA/DAPI e hibridação in situ fluorescente - FISH) aplicadas sobre o organismo teste Allium cepa. Pela técnica citogenética de coloração convencional, foi possível verificar que o corante, com e sem ação microbiana, induziu apoptose, necrose, células micronucleadas, aberrações cromossômicas e alterações nucleares. As aberrações cromossômicas e alterações nucleares foram visualizadas em todos os estágios do ciclo celular: na intérfase foram observados brotos nucleares e células poliplóides; na prófase, perdas de material genético; na metáfase, aderências cromossômicas, perdas cromossômicas, C-metáfases e poliploidias; na anáfase e telófase, multipolaridades, pontes e perdas cromossômicas. Os brotos nucleares apareceram com maior freqüência nas células submetidas aos testes do azocorante tratado com microorganismos, sendo que esse tipo de alteração deve estar associado à presença dos metabólitos do corante. As freqüências de micronúcleos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Azo dyes are chemical substances extremely used by textile industries that may induce changes in the genetic material of exposed organisms, even if these changes in the DNA do not express themselves immediately. Cytotoxicity, genotoxicity and mutagenicity evaluations of the different azo dye (BDCP) concentrations were performed (1, 10, 100 e 1000 mg/L - without microorganisms - and 50 and 200 mg/L - with microorganisms), before and after biodegradation tests, using different microorganisms (1. Heterotrofic bacteria "pool" proceeding from an effluent biological treatment station, 2. Candida viswanathii - Yeast, and 3. Phanerochaete chrysosporium - Basidiomicet Fungi), by means the different cytogenetical assays (conventional staining, C-banding, RON-banding, CMA/DAPI banding and fluorescent in situ fluorescent hybridization), using Allium cepa as test organism. By the conventional staining cytogenetic assay, it was possible to verify that the azo dye induced apoptosis, necrosis, micronuclei, chromosome aberrations and nuclear alterations. The chromosome aberrations and nuclear alterations were visualized in all phases of the cell cycle: in the interphase were observed nuclear buds and polyploidizated cells; in the prophase were observed genetic material losses; in the metaphase were observed chromosome adherences, chromosome losses, C-metaphases and polyploid cells; and in the anaphase and telophase were observed multipolar cells, chromosome bridges and chromosome losses. The frequencies of nuclear buds were the higher when the cells had been submitted to the azodye treated with microorganisms, suggesting that this kind of alteration must be associated to the presence of the azodye metabolites. The micronuclei and chromosome breaks frequencies... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Capes / Uma superfície mal higienizada em um ambiente produtivo, somada à capacidade de adesão de um microrganismo, pode se tornar uma fonte potencial de contaminação e levar à formação de biofilmes. Estes, uma vez formados, são de difícil remoção e podem proliferar para a contaminação de alimentos. A preocupação com a segurança dos alimentos é um desafio, visto que problemas a ela relacionados podem comprometer a saúde do consumidor. O objetivo deste trabalho foi isolar microrganismos patogênicos potenciais produtores de biofilme microbiano presentes no processamento industrial de um frigorífico bovino. O desenvolvimento do trabalho se resume em três fases: entrevista com o coordenador de qualidade de um frigorífico da região dos Campos Gerais; diagnóstico de pontos críticos no controle de qualidade do processamento industrial desse frigorífico, por meio de um diagrama decisório e coleta de amostras durante o processo industrial através de swabs, utilizados no isolamento por microbiologia. Em seguida, foi identificado o perfil genético das amostras, por meio do isolamento de DNA, seguida de amplificação por Reação em Cadeia da Polimerase com os primers universais rD1 e fD1. Os dados gerados na primeira fase indicam os programas de controle de qualidade aplicados na indústria frigorífica em estudo. A entrevistada, responsável pelo controle de qualidade da indústria, salientou o uso de Boas Práticas de Fabricação (BPF), Análise de Perigo e Pontos Críticos de Controle (APPCC), Procedimento Padrão de Higiene Operacional (PPHO), Monitoramento de Pragas (MIP) e Folha de Verificação (FV). A partir do diagrama decisório, foram identificados 25 pontos para a coleta de amostras para a identificação de microrganismos patogênicos. Dentre esses, dez pontos amostrais foram isolados por microbiologia convencional com meio de cultura EMB, indicando contaminação de conteúdo gastrointestinal por coliformes fecais. Em dez pontos, nem sempre distintos, houve crescimento em meio de cultura SS – Salmonella Shigella, indicando contaminação durante o abate a partir da manipulação da carne pelos funcionários, uma vez que esses podem ser portadores sadios de microrganismos patogênicos. Para identificação genotípica das amostras sequenciadas, os resultados chegaram a nível de gênero, sendo Escherichia, Proteus, Hafnia e Bacillus, todos pertencentes ao grupo de Enterobactérias, com exceção de Bacillus. Verificou-se através da identificação genotípica, relacionada com os locais de coleta das amostras no fluxograma, que há contaminação cruzada no ambiente produtivo do presente frigorífico, na maioria dos pontos, relacionadas com o manipulador. / An unhygienic surface in a productive environment, added to the adhesion capacity of a microorganism, can become a potential source of contamination and lead to the formation of biofilms. These, once formed, are difficult to remove and can proliferate for food contamination. Concern about food safety is a challenge, as related problems can compromise consumer health. The objective of this work is to select potential pathogenic microorganisms producing microbial biofilms present in the industrial processing of a beef cattle. The development of the work is summarized in three phases: interview with the quality coordinator of a refrigerator in the Campos Gerais region; diagnosis of critical points in the quality control of the industrial processing of this refrigerator, through a decision diagram and sample collection during the industrial process through swabs, used in the isolation by microbiology. Then, the genetic profile of the samples was identified through DNA isolation, followed by amplification by Polymerase Chain Reaction with the universal primers rD1 and fD1. The data generated in the first phase indicated the quality control programs in the refrigeration industry under study. The interviewee, responsible for the quality control of the industry, emphasized the use of Good Manufacturing Practices (GMP), Hazard Analysis and Critical Control Points (HACCP), Standard Operating Procedures (PPHO), Pest Monitoring (IPM) And Verification Sheet (FV). From the decision diagram, 25 points were identified for the collection of samples for the identification of pathogenic microorganisms. Among these, ten sample points were isolated by conventional microbiology with EMB culture, indicating contamination of gastrointestinal contents by fecal coliforms. At ten points, not always distinct, there was growth in the SS - Salmonella Shigella culture, indicating contamination during slaughter from the handling of the meat by the employees, since they may be healthy carriers of pathogenic microorganisms. For genotypic identification of the sequenced samples, the results reached the species level, being Escherichia, Proteus, Hafnia and Bacillus, all belonging to the group of Enterobacteria, except for Bacillus. It was verified through the genotypic identification, related to the sample collection sites in the flowchart, that there is cross contamination in the productive environment of the present refrigerator, in most of the points, related to the manipulator.

Tendo em vista fazer uma verificação de algumas das características de microorganismos com potencial probiótico, esse trabalho tem por objetivo identificar, avaliar e comparar o potencial probiótico de Enterococcus faecium isolados de queijo artesanal da cidade de Londrina. Primeiramente foram identificadas por técnica molecular as cepas já isoladas de Enterococcus. O restante dos testes foram feitos somente com os isolados de Enterococcus faecium. Fez-se então, um antibiograma frente à eritromicina 15 µg, tetraciclina 30 µg e vancomicina 30 µg, verificando-se a resistência ou sensibilidade de cada isolado frente a estes antibióticos. Em seguida foram realizados testes de simulação in vitro do trato gastro-intestinal e comparados com a cepa comercial de Lactobacillus acidophilus. Para simular as condições na boca foi realizado o teste de resistência à lisozima, verificando assim a sua viabilidade. Já para simular as condições no estômago realizou-se o teste de tolerância em meio ácido, em cultivo. Foram avaliadas as condições de sobrevivência simulando o intestino delgado, determinando-se a viabilidade destes micro-organismos frente à pancreatina em pH 8,0. No estudo de auto-agregação, cada isolado de E. faecium e a cepa comercial de L. acidophilus, foram colocados separadamente e verificados em densidade óptica de 540 nm. Os resultados demonstraram que dos 98 isolados de Enterococcus, 54,0 % eram E. faecium, 39,8% eram E. faecalis e 6,2% eram Enterococcus spp. Em relação à susceptibilidade à antimicrobianos foram pouco resistentes aos antibióticos testados, sendo que 24,5% apresentaram resistência à eritromicina e 1,9% apresentaram resistência à tetraciclina e vancomicina. Já no teste de resistência à lisozima após 120 min obteve-se 15 isolados que não apresentaram diferença significativa ao nível de 5% quando comparados ao L. acidophilus e 7 isolados que foram mais resistentes que o mesmo. No resultado frente ao estresse ácido após 3 h, 3 isolados não apresentaram diferença significativa ao nível de 5 % quando comparados com L. acidophilus e 2 isolados apresentaram maior resistência que o Lactobacillus. Em relação ao teste sobrevivência ao intestino delgado, em comparação a cepa comercial de L. acidophilus, apresentaram-se com taxas de sobrevivência sem diferença significativa, 21 isolados de E. faecium, e ainda pode-se destacar 7 isolados, onde encontrou-se uma taxa de sobrevivência maior que o controle. Dos 53 isolados analisados 60 % apresentaram capacidade de auto-agregação. / The purpose of this work was to identify, assess and compare some Enterococcus faecium potential probiotic micro-organisms isolated from artisanal cheese in Londrina. First, identified by molecular techniques already isolated strains of Enterococcus. The rest of the tests were made only with isolates of Enterococcus faecium. There was then a antibiogram forward to erythromycin 15 mg, 30 mg tetracycline and vancomycin 30 mg, checking the resistance or sensitivity of each isolate against these antibiotics. It was then performed simulation tests in vitro gastro-intestinal tract and compared with the commercial Lactobacillus acidophilus strain. To simulate the conditions in the mouth was performed to test for resistance to lysozyme, thus verifying its viability. Have to simulate conditions in the stomach was performed tolerance test in acid medium in cultivation. We evaluated the survival conditions simulating the small intestine, determining the viability of these micro-organisms against the pancreatin at pH 8.0. In the study of auto-aggregation, either isolated from E. faecium and a strain of commercial L.acidophilus were separately placed and the optical density verified of 540 nm. The results showed that the 98 Enterococcus, isolated from cheese, was 54.0% E. faecium, 39.8% E. faecalis and 6.2% Enterococcus spp. Regarding antimicrobial susceptibility were slightly resistant to the antibiotics tested, and 24.5% were resistant to erythromycin and 1.9% to tetracycline and vancomycin. Already in lysozyme resistance test after 120 min showed 15 isolates that had no significant difference at 5% when compared to L. acidophilus and 7 isolates were more resistant than the same. In result against acid stress after 3 h, 3 isolates showed no significant difference at 5% when compared with L. acidophilus and 2 isolates had greater resistance than Lactobacillus. Regarding testing survival to the small intestine, compared to commercial strain of L. acidophilus, presented with survival rates without significant difference, 21 isolates of E. faecium, and still can highlight the isolates 7 isolates, which found a higher survival rate than the control. 32 of the 53 isolates tested showed the ability to auto-aggregation, or 60%.

Orientador: Ione Corrêa / Resumo: Introdução: Estima-se que mais de quatro milhões de pacientes na Europa e 1,7 milhões nos Estados Unidos desenvolvam uma infecção a cada ano, com maior prevalência nos países em desenvolvimento. A taxa de incidência de letalidade devida às infecções hospitalares foi de 27,88% no Brasil. A propagação de micro-organismos de um paciente para outro, por meio das mãos dos profissionais de saúde, contaminados pode ser interrompida com a higienização das mãos, com água e sabão, ou a higiene das mãos à base de álcool etílico a 70% e pelo uso de luvas. O uso de paramentação diminui a transmissão de micro-organismos veiculados nos uniformes dos trabalhadores de saúde. O sistema de precaução padrão e/ou baseada nas vias de transmissão de micro-organismos tem sido adotado em todo o mundo, com atualizações periódicas desde sua primeira publicação. Sendo necessário transmitir o conhecimento sobre os mecanismos de disseminação e o uso das precauções de isolamento preconizadas pelo Centers for Disease Control. Objetivo: Avaliar a efetividade de diferentes intervenções para aumentar a adesão ao uso das medidas de precauções padrão e/ou baseado na via de transmissão de micro-organismos no cuidado ao paciente. Método: Revisão sistemática de ensaios clínicos randomizados e não randomizados, séries temporais e estudos controlados antes e depois avaliando a efetividade de diferentes intervenções para aumentar a adesão ao uso das medidas de precauções padrão e/ou baseado na via de transmissão de mi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Introduction: It is estimated that more than four million patients in Europe and 1.7 million in the United States develop an infection each year, with a higher prevalence in developing countries. The case fatality rate due to the incidence of nosocomial infections was 27.88% in Brazil. The spread of microorganisms from one patient to another via the hands of healthcare workers, contaminated may be interrupted with hand hygiene with soap and water, or hand hygiene to ethyl alcohol based 70% and when using gloves. The use of scrub decreases the transmission of microorganisms served in the uniforms of health workers. The standard precaution system and / or based on microorganisms routes of transmission have been adopted worldwide, with periodic updates from its first publication. It is necessary to transmit knowledge of the dissemination mechanisms and the use of isolation precautions recommended by the Centers for Disease Control. Objective: To evaluate the effectiveness of different interventions to improve adherence to the use of standard precautions and / or based on the route of transmission of microorganisms in patient care. Methods: Systematic review of randomized controlled trials and non-randomized, time series and controlled studies before and after evaluating the effectiveness of different interventions to improve adherence to the use of standard precautions and / or based on the path of microorganisms transmission in patient care. Relevant studies were identified thr... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Capes / Uma superfície mal higienizada em um ambiente produtivo, somada à capacidade de adesão de um microrganismo, pode se tornar uma fonte potencial de contaminação e levar à formação de biofilmes. Estes, uma vez formados, são de difícil remoção e podem proliferar para a contaminação de alimentos. A preocupação com a segurança dos alimentos é um desafio, visto que problemas a ela relacionados podem comprometer a saúde do consumidor. O objetivo deste trabalho foi isolar microrganismos patogênicos potenciais produtores de biofilme microbiano presentes no processamento industrial de um frigorífico bovino. O desenvolvimento do trabalho se resume em três fases: entrevista com o coordenador de qualidade de um frigorífico da região dos Campos Gerais; diagnóstico de pontos críticos no controle de qualidade do processamento industrial desse frigorífico, por meio de um diagrama decisório e coleta de amostras durante o processo industrial através de swabs, utilizados no isolamento por microbiologia. Em seguida, foi identificado o perfil genético das amostras, por meio do isolamento de DNA, seguida de amplificação por Reação em Cadeia da Polimerase com os primers universais rD1 e fD1. Os dados gerados na primeira fase indicam os programas de controle de qualidade aplicados na indústria frigorífica em estudo. A entrevistada, responsável pelo controle de qualidade da indústria, salientou o uso de Boas Práticas de Fabricação (BPF), Análise de Perigo e Pontos Críticos de Controle (APPCC), Procedimento Padrão de Higiene Operacional (PPHO), Monitoramento de Pragas (MIP) e Folha de Verificação (FV). A partir do diagrama decisório, foram identificados 25 pontos para a coleta de amostras para a identificação de microrganismos patogênicos. Dentre esses, dez pontos amostrais foram isolados por microbiologia convencional com meio de cultura EMB, indicando contaminação de conteúdo gastrointestinal por coliformes fecais. Em dez pontos, nem sempre distintos, houve crescimento em meio de cultura SS – Salmonella Shigella, indicando contaminação durante o abate a partir da manipulação da carne pelos funcionários, uma vez que esses podem ser portadores sadios de microrganismos patogênicos. Para identificação genotípica das amostras sequenciadas, os resultados chegaram a nível de gênero, sendo Escherichia, Proteus, Hafnia e Bacillus, todos pertencentes ao grupo de Enterobactérias, com exceção de Bacillus. Verificou-se através da identificação genotípica, relacionada com os locais de coleta das amostras no fluxograma, que há contaminação cruzada no ambiente produtivo do presente frigorífico, na maioria dos pontos, relacionadas com o manipulador. / An unhygienic surface in a productive environment, added to the adhesion capacity of a microorganism, can become a potential source of contamination and lead to the formation of biofilms. These, once formed, are difficult to remove and can proliferate for food contamination. Concern about food safety is a challenge, as related problems can compromise consumer health. The objective of this work is to select potential pathogenic microorganisms producing microbial biofilms present in the industrial processing of a beef cattle. The development of the work is summarized in three phases: interview with the quality coordinator of a refrigerator in the Campos Gerais region; diagnosis of critical points in the quality control of the industrial processing of this refrigerator, through a decision diagram and sample collection during the industrial process through swabs, used in the isolation by microbiology. Then, the genetic profile of the samples was identified through DNA isolation, followed by amplification by Polymerase Chain Reaction with the universal primers rD1 and fD1. The data generated in the first phase indicated the quality control programs in the refrigeration industry under study. The interviewee, responsible for the quality control of the industry, emphasized the use of Good Manufacturing Practices (GMP), Hazard Analysis and Critical Control Points (HACCP), Standard Operating Procedures (PPHO), Pest Monitoring (IPM) And Verification Sheet (FV). From the decision diagram, 25 points were identified for the collection of samples for the identification of pathogenic microorganisms. Among these, ten sample points were isolated by conventional microbiology with EMB culture, indicating contamination of gastrointestinal contents by fecal coliforms. At ten points, not always distinct, there was growth in the SS - Salmonella Shigella culture, indicating contamination during slaughter from the handling of the meat by the employees, since they may be healthy carriers of pathogenic microorganisms. For genotypic identification of the sequenced samples, the results reached the species level, being Escherichia, Proteus, Hafnia and Bacillus, all belonging to the group of Enterobacteria, except for Bacillus. It was verified through the genotypic identification, related to the sample collection sites in the flowchart, that there is cross contamination in the productive environment of the present refrigerator, in most of the points, related to the manipulator.

Tendo em vista fazer uma verificação de algumas das características de microorganismos com potencial probiótico, esse trabalho tem por objetivo identificar, avaliar e comparar o potencial probiótico de Enterococcus faecium isolados de queijo artesanal da cidade de Londrina. Primeiramente foram identificadas por técnica molecular as cepas já isoladas de Enterococcus. O restante dos testes foram feitos somente com os isolados de Enterococcus faecium. Fez-se então, um antibiograma frente à eritromicina 15 µg, tetraciclina 30 µg e vancomicina 30 µg, verificando-se a resistência ou sensibilidade de cada isolado frente a estes antibióticos. Em seguida foram realizados testes de simulação in vitro do trato gastro-intestinal e comparados com a cepa comercial de Lactobacillus acidophilus. Para simular as condições na boca foi realizado o teste de resistência à lisozima, verificando assim a sua viabilidade. Já para simular as condições no estômago realizou-se o teste de tolerância em meio ácido, em cultivo. Foram avaliadas as condições de sobrevivência simulando o intestino delgado, determinando-se a viabilidade destes micro-organismos frente à pancreatina em pH 8,0. No estudo de auto-agregação, cada isolado de E. faecium e a cepa comercial de L. acidophilus, foram colocados separadamente e verificados em densidade óptica de 540 nm. Os resultados demonstraram que dos 98 isolados de Enterococcus, 54,0 % eram E. faecium, 39,8% eram E. faecalis e 6,2% eram Enterococcus spp. Em relação à susceptibilidade à antimicrobianos foram pouco resistentes aos antibióticos testados, sendo que 24,5% apresentaram resistência à eritromicina e 1,9% apresentaram resistência à tetraciclina e vancomicina. Já no teste de resistência à lisozima após 120 min obteve-se 15 isolados que não apresentaram diferença significativa ao nível de 5% quando comparados ao L. acidophilus e 7 isolados que foram mais resistentes que o mesmo. No resultado frente ao estresse ácido após 3 h, 3 isolados não apresentaram diferença significativa ao nível de 5 % quando comparados com L. acidophilus e 2 isolados apresentaram maior resistência que o Lactobacillus. Em relação ao teste sobrevivência ao intestino delgado, em comparação a cepa comercial de L. acidophilus, apresentaram-se com taxas de sobrevivência sem diferença significativa, 21 isolados de E. faecium, e ainda pode-se destacar 7 isolados, onde encontrou-se uma taxa de sobrevivência maior que o controle. Dos 53 isolados analisados 60 % apresentaram capacidade de auto-agregação. / The purpose of this work was to identify, assess and compare some Enterococcus faecium potential probiotic micro-organisms isolated from artisanal cheese in Londrina. First, identified by molecular techniques already isolated strains of Enterococcus. The rest of the tests were made only with isolates of Enterococcus faecium. There was then a antibiogram forward to erythromycin 15 mg, 30 mg tetracycline and vancomycin 30 mg, checking the resistance or sensitivity of each isolate against these antibiotics. It was then performed simulation tests in vitro gastro-intestinal tract and compared with the commercial Lactobacillus acidophilus strain. To simulate the conditions in the mouth was performed to test for resistance to lysozyme, thus verifying its viability. Have to simulate conditions in the stomach was performed tolerance test in acid medium in cultivation. We evaluated the survival conditions simulating the small intestine, determining the viability of these micro-organisms against the pancreatin at pH 8.0. In the study of auto-aggregation, either isolated from E. faecium and a strain of commercial L.acidophilus were separately placed and the optical density verified of 540 nm. The results showed that the 98 Enterococcus, isolated from cheese, was 54.0% E. faecium, 39.8% E. faecalis and 6.2% Enterococcus spp. Regarding antimicrobial susceptibility were slightly resistant to the antibiotics tested, and 24.5% were resistant to erythromycin and 1.9% to tetracycline and vancomycin. Already in lysozyme resistance test after 120 min showed 15 isolates that had no significant difference at 5% when compared to L. acidophilus and 7 isolates were more resistant than the same. In result against acid stress after 3 h, 3 isolates showed no significant difference at 5% when compared with L. acidophilus and 2 isolates had greater resistance than Lactobacillus. Regarding testing survival to the small intestine, compared to commercial strain of L. acidophilus, presented with survival rates without significant difference, 21 isolates of E. faecium, and still can highlight the isolates 7 isolates, which found a higher survival rate than the control. 32 of the 53 isolates tested showed the ability to auto-aggregation, or 60%.

Submitted by Natalia de Souza Gonçalves (natalia.goncalves@ufpe.br) on 2016-09-23T13:38:34Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese - Paulo Geovani Silva Martins - 2016.pdf: 11199647 bytes, checksum: e9d2a3a59d3656debcafdd36c106889f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-23T13:38:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Tese - Paulo Geovani Silva Martins - 2016.pdf: 11199647 bytes, checksum: e9d2a3a59d3656debcafdd36c106889f (MD5) Previous issue date: 2016-03-11 / CAPES / A cultura da cana-de-açúcar possui importância econômica para o Brasil pela produção de açúcar e etanol. No entanto, parte da produção é ameaçada pelo ataque de insetos-praga, destacando-se a broca da cana-de-açúcar (Diatraea saccharalis), que causa graves perdas econômicas. O controle biológico é alternativo ao controle químico e consiste no emprego de inimigos naturais como patógenos, que regulam a população de insetos-praga em níveis nãoprejudiciais. Dentre os patógenos destaca-se a bactéria Bacillus thuringiensis (Bt) que produz toxinas, codificadas pelos genes cry, no formato de cristais proteicos com atividade entomotóxica para diversas ordens de insetos. O presente trabalho teve como objetivo o isolamento e caracterização de novas estirpes de Bt com potencial entomotóxico para controle biológico da D. saccharalis em cana-de-açúcar. Amostras de solo coletadas possibilitaram o isolamento de 97 colônias bacterianas com características fenotípicas compatíveis para Bt. O DNA extraído foi amplificado com primers para os genes cry1, cry2 e cry9, ativos contra dípteros e lepidópteros. Em 11,4% e 12,4% dos isolados foram constatados os genes cry2 e cry9, respectivamente, e 10 destes patogenicidade variando entre 3,47% a 20,05% para D.saccharalis. Após comparação dos perfis proteômicos dos isolados Bt.Pri 4.7, Bt.Pri 4.29, Bt.CDi 1.3 e Bt.CDi 1.11, de maior e menor potencial patogênico de cada classe gênica, foram identificadas proteínas como a shikimato quinase, envolvida na produção de toxinas em Bt, e que auxiliam o entendimento da patogênese deste microorganismo. / Sugarcane production has economical importance to Brazil, especially due to production of sugar and ethanol. However, a proportion of the production is lost owing to damage of pest insects, including sugarcane borer (Diatraea saccharalis), which cause severe economical lost in the sugar/ethanol industry. Biological control, alternatively to chemical control, which cause damage to human health and environment, is based on use of natural enemies such as pathogens that regulated pest insects population to a non-prejudicial level. Among pathogens, especially bacteria Bacillus thuringiensis (Bt) that produce toxins, encoding by cry genes, which are protein crystal with entomotoxicity activity for diverse insect orders. The present work aims to isolate and characterize new strains of Bt with potential entomotoxicity to biological control of D. saccharalis in sugarcane. Soil samples collected allowed the isolation of 97 bacterial colonies phenotypically compatible to Bt. DNA extracted was used in PCR reaction using primers to amplify cry1, cry2 and cry9 genes, with activity against Lepidoptera and Diptera. In 11.4 and 12.4% of the strains was observed fragments with pattern expected for cry2 and cry9 genes, respectively, and ten isolated shown pathogenicity ranging from 3.47% to 15.62% for D.saccharalis. After comparing the proteomic profiles of the isolates Bt.Pri 4.7 Bt.Pri 4.29, Bt.CDi 1.3 and Bt.CDi 1.11 of major and minor pathogenic potential of every gene class proteins were identified as shikimate kinase, involved in the production of Bt toxins, and assist the understanding of the pathogenesis of this microorganism.