O objetivo deste trabalho foi investigar o possível efeito preventivo do piruvato e da creatina (substâncias energéticas e antioxidantes) sobre as alterações comportamentais e bioquímicas provocadas pela administração intra-hipocampal da fenilalanina (Phe) em ratos Wistar. Foi desenvolvido um modelo químico experimental de fenilcetonúria (PKU) pela administração intra-hipocampal de Phe a ratos Wistar adultos atingindo níveis semelhantes aos encontrados no cérebro dos pacientes afetados. Piruvato e creatina preveniram alterações de comportamento induzidas pela Phe nas tarefas de habituação no campo aberto. O piruvato e a creatina, isoladamente, não exerceram efeito sobre os animais nas tarefas de campo aberto, mas preveniram os efeitos da Phe sobre a atividade exploratória. A Phe, o piruvato e a creatina não tiveram efeito sobre a emocionalidade dos animais. Também foram investigados parâmetros de estresse oxidativo procurando evidências de um possível mecanismo pelo qual a alta concentração de Phe poderia resultar em prejuízo da habituação dos ratos ao campo aberto. A Phe provocou o aumento de TRAP, que é uma medida da concentração de substâncias antioxidantes não enzimáticas, principalmente GSH e tioredoxina, e de TAR, que é a medida da qualidade das substâncias antioxidantes não enzimáticas, bem como das sulfidrilas totais, que compreendem GSH, tioredoxina e grupos tióis de proteínas, as quais foram aumentadas no hipocampo de ratos que receberam Phe. TBARS, que é uma medida de lipoperoxidação, diminuiu pela administração de Phe. O piruvato e a creatina, isoladamente, não exerceram efeito sobre os parâmetros de estresses oxidativo, mas o aumento das defesas antioxidantes não enzimáticas induzido pela Phe no hipocampo foi totalmente prevenido pelo pré-tratamento com creatina ou piruvato, dois potentes antioxidantes, reforçando a hipótese de que o primeiro contato do hipocampo com Phe provoca a formação de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio, induzindo o aumento de defesas antioxidantes. Estes resultados também sugerem uma possível relação entre a inibição das atividades da piruvato quinase e da creatina quinase nas alterações de comportamento causadas por Phe. Em perspectiva, piruvato e creatina são suplementos dietéticos a serem considerados como agentes coadjuvantes para a atual terapia dos pacientes fenilcetonúricos baseada apenas em uma dieta restrita em Phe. / The objective of this work was to investigate the possible preventive effect of pyruvate and creatine (substances with energetic and antioxidant properties) on the behavioral and biochemical alterations caused by intrahippocampal administration of phenylalanine (Phe) in Wistar rats. It was developed a experimental chemical model of phenylketonuria(PKU) by injecting Phe into the hippocampus of adult Wistar rats, achieving similar levels than those verified in the brain of affected patients. Pyruvate and creatine prevented behavioral alterations induced by Phe in habituation in the open field task. Pyruvate and creatine did not cause effect on animal behaviour in the open field task, but they prevented the Phe effects on exploratory activity. Phe, pyruvate and creatine did not compromise emotionality of the animals in the open field task. Stress oxidative parameters were measured looking for evidences of a mechanism for which the high Phe concentration could result in the behavioral alterations. Phe provoked the increase of TRAP, which is a measure of the concentration of nonenzymatic antioxidant substances, mainly GSH and thioredoxin, and of TAR, which is a measure of the quality of nonenzymatic antioxidant substances, as well as of the Total sulfhydryl groups, which is a measure of GSH, thioredoxin and thiol-groups of proteins, in the hippocampus of the rats. TBARS, which is a measure of lipoperoxidation, was decreased by Phe administration. Pre-treatment with pyruvate and creatine did not altered stress oxidative parameters, but fully prevented the alterations induced by Phe administration, reinforcing the hypothesis that the first contact of the hippocampus with Phe provokes reactive oxygen and nitrogen species formation, inducing increase of antioxidant defenses. These results also suggest a possible relationship between the inhibition of piruvate kinase and creatine kinase activities in the behavioral alterations caused by Phe. In perspective, pyruvate and creatine are diet supplements to be considered as adjuvant agents to the present therapy of phenylketonuric pacients based only on Phe-restricted diet.

Orientador: Daniela Ponzoni / Banca: Mariza Akemi Matsumoto / Banca: André Luís da Silva Fabris / Resumo: Objetivo: Avaliar por meio da análise histomorfométrica e histológica o potencial osteocondutor dos biomateriais Bio-Oss® (Geistilich, Suécia), GenOx Inorgânico® (Baumer S.A, São Paulo, Brasil) e GenOx Inorgânico 700 (Baumer S.A, São Paulo, Brasil) no reparo ósseo de defeitos críticos em calvária de ratos. Métodos: Foram utilizados 48 ratos divididos em quatro grupos de acordo com o material de preenchimento. Grupo controle (GC) com o defeito preenchido somente com coágulo sanguíneo (n=12), GBO preenchido com Bio-Oss® (n=12), G300 preenchido com GenOx Inorgânico® (n=12) e o G700 com GenOx Inorgânico 700 (n=12). Na calvária de cada animal foi utilizada uma broca trefina de 5 mm de diâmetro interno para confecção de defeito central com 6 mm de diâmetro e a após a inserção dos biomateriais correspondentes. Sobre todos os defeitos foi sobreposta a membrana bovina Gen Derm®. Posteriormente, submetidos à eutanásia aos 30 dias e 60 dias pós-cirúrgicos. Após 30 e 60 dias, tais defeitos foram encaminhados para análise histológica e análise histométrica para avaliação das seguintes variáveis: neoformação óssea, presença de biomaterial, leucócitos mononucleares e polimorfonucleares e outros tecidos encontrados (de granulação e medular). Resultados: O grupo mais representativo para neoformação óssea foi GC. Aos 30 dias apresentou maior média de tecido ósseo maduro (75,8). Aos 60 dias não houve diferença estatística entre os grupos GC (64,9), GBO (32,9), G300 (45,3) e G700 (26,6). O GBO a... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Abstract :Objective:The aim of this study was to evaluate the osteoconductive potential of Bio-Oss® (Geistilich, Sweden), GenOx Inorganic® (Baumer SA, São Paulo, Brazil) and GenOx Inorganic 700 (Baumer SA, São Paulo, Brazil) in the bone repair of critical defects in rat calvaria. Methods: 48 rats were divided into four groups, submitted to euthanasia at 30 days and 60 postoperative days: the control group (CG) with the defect filled only with blood clot (n = 12), GBO filled with Bio-Oss® (n = 12), G300 filled with GenOx Inorganic® (n = 12) and G700 with GenOx Inorganic 700 (n = 12). In the calvaria of each animal a 5mm trephine drill was used to make a central defect with 6 mm diameter and after the insertion of the corresponding biomaterials. Gen Derm® membrane was superimposed over all defects. Subsequently, these cavities were sent to histological and histometric analysis to evaluate the following variables: bone neoformation, presence of biomaterial, mononuclear and polymorphonuclear leukocytes and other tissues found (granulation and medullary). Results:The most representative group for bone neoformation was GC. At 30 days presented a higher mean of mature bone tissue (75.8). At 60 days there was no statistical difference between the GC (64.9), GBO (32.9), G300 (45.3) and G700 (26.6) groups. GBO had a higher amount of biomaterial after 30 days (115.9) and 60 days (118.5). Conclusion:All bovine biomaterials tested showed to be biocompatible and osteoconductive,Among the b... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Juliano Milanezi de Almeida / Resumo: O propósito do presente estudo foi avaliar a remodelação óssea de implantes ósseointegrados instalados em tíbias de ratos modificados ou não sistemicamente pelo tamoxifeno. Foram utilizadas 72 ratas, os animais receberam ovariectomia bilateral, instalação dos implantes em tíbia bilateralmente e após 6 semanas,foram aleatoriamente distribuídas em dois grupos experimentais(n=36), Grupo SS: administração de solução salina e Grupo TAM: administração de citrato de tamoxifeno, via gavagem por todo o período experimenta. Doze animais de cada grupo foram eutanasiados aos 30, 60 e 90 dias após a administração da primeira dose das soluções, as tíbias direita e esquerda foram coletadas, e aleatóriamente processadas com desmineralização para as análises histológicas, imunoistoquímicas e para a análise de porcentagem de tecido ósseo neoformado(PTON) e sem desmineralização para análise do contato osso/implante(BIC) e para as análises de Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) e de Espectroscopia Dispersiva de Raio-x (EDS). Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística (p<0,05) em programa computacional especializado. Com relação ao contato osso implante, o grupo TAM, apresentou maior BIC em todos os períodos experimentais quando comparado com o grupo SS. O grupo TAM apresentou também maior PTON em todos os períodos experimentais quando comparado com o grupo SS. A análise histológica dos tecidos periimplantares mostrou que o grupo TAM apresentou características histológicas que ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The purpose of the present study was to evaluate the bone remodeling of osseointegrated implants installed in tibias of rats modified or not systemically modified by tamoxifen. Seventy-two female rats were used, the animals received bilateral ovariectomy, tibial implant placement bilaterally and after 6 weeks were randomly assigned to two experimental groups (n = 36). Group SS: received saline administration and Group TAM: received administration of tamoxifen citrate via gavage throughout the experimental period. Twelve animals from each group were euthanized at 30, 60 and 90 days after administration of the first dose of the solutions. The right and left tibias were collected, processed with demineralization for histológical, immunohistochemical and percentage analysis of neoformed bone tissue. (PTON) and without demineralization for bone / implant contact analysis (BIC) and for Scanning Electron Microscopy (SEM) and Xray Dispersive Spectroscopy (EDS). The data obtained were submitted to statistical analysis (p <0.05) in a specialized computer program. With regard to implant bone contact, the TAM group presented higher BIC in all experimental periods when compared to the SS group. The TAM group also presented higher PTON in all experimental periods when compared to the SS group. Histológical analysis of periimplant tissues showed that the TAM group presented histológical characteristics that were similar to the control group, however, with a larger amount of peri-implant bon... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Mestre -- Sao Paulo (Estado). Secretaria da Saude. Coordenacao dos Institutos de Pesquisa. Programa de Pos-Graduacao em Ciencias, Sao Paulo, 2003.

Síndrome da apnéia obstrutiva do sono (SAOS) é uma doença crônica comum com importantes consequências cardiovasculares e neuropsiquiátricas. Repetidos eventos de apnéia causam hipóxia intermitente (HI) com alteração de função em diferentes sistemas. Na SAOS ocorre períodos de isquemia e de reperfusão, com isso a formação de radicais livres e estresse oxidativo (EO). Diferentes estudos experimentais na SAOS descrevem o envolvimento do EO e como conseqüência dano hepático entre outros, porem não há relatos de tempo de hipóxia intermitente necessários aos animais de experimentação para simular a apnéia e suas complicações. Assim esse trabalho investiga o tempo de hipóxia intermitente, simulando apnéia do sono, necessário para o desenvolvimento de dano oxidativo e tecidual hepático. Foram utilizados camundongos CF-1(n=36) divididos em três grupos: Sham operated (SO); Hipóxia Intermitente durante 21 dias (HI-21) e Hipóxia Intermitente durante 35 dias (HI-35). Ao termino do experimento os animais foram anestesiados e sangue foi coletado para avaliação de enzimas hepáticas: aspartato amino transferase (AST), alanina aminotransferase (ALT) e fosfatase alcalína (FA) que se apresentaram aumentadas no grupo HI-35 e sem diferença significativa no grupo HI-21. Após a morte dos animais, foi retirado o fígado para avaliações bioquímicas e histológicas. O dano hepático foi avaliado pela técnica de TBARS, no qual foi verificado aumento significativo da lipoperoxidação (LPO) no grupo HI-35 em relação ao SO e sem diferença estatística no HI-21. O dano oxidativo ao DNA avaliado por ensaio cometa mostrou aumento significativo de dano no grupo HI-35. A avaliação das enzimas antioxidantes (AOX): Superóxido dismutase (SOD), Catalase (CAT) e Glutationa Peroxidase (GPx), apresentaram-se diminuídos significativamente no grupo HI-35. A atividade AOX não enzimático avaliada pela glutationa total foi diminuída no grupo HI-35 em comparação ao SO. A avaliação dos metabólitos do óxido nítrico (NO) nitritos e nitratos apresentaram-se aumentados no grupo HI-35. A análise histológica realizada pela coloração de hematoxilina e eosina (HE), mostrou lesão no tecido hepático no grupo HI-35. Desta forma sugerimos que o tempo necessário de hipóxia intermitente, que simula apnéia do sono, para a lesão hepática e estresse oxidativo seja entre 21 e 35 dias.

Situações de estresse metabólico e térmico deflagram a expressão celular e liberação para o plasma, de proteínas de choque térmico da família de 70 kDa (HSP70) para desempenhar função de defesa-chave em um processo conhecido como resposta ao choque térmico ou ao estresse, que as caracterizam como proteína citoprotetora. Estudos indicam a ocorrência de HSP70 extracelular (eHSP70) na circulação por até 24 h após desafios como o exercício físico, cuja liberação dá-se por tecidos do território hepatoesplâncnico, em uma resposta mediada por receptores α-adrenérgicos. Esta liberação de HSP70 para o plasma é atenuada pela ingestão de glicose. Estas evidências levaram-nos a supor que a liberação de eHSP70 em resposta ao estresse possa ter um papel fisiológico na regulação da glicemia, a qual é afetada por estímulo simpático. Neste trabalho, os resultados dos experimentos in silico indicaram a possibilidade de ancoragem e interação estável entre a HSP70 e a molécula de insulina. Ensaios de imunoprecipitação de insulina com amostras de plasma de animais submetidos ao tratamento de insulina Regular e Detemir revelaram HSP70 coimunoprecipitada especialmente em situação de jejum severo. Parte destas amostras foi submetida à quantificação de glicemia, insulinemia e HSP72 circulante, cujos resultados evidenciam elevada concentração desta proteína de choque térmico por ocasião de hipoglicemia induzida por insulina. Parte dos estudos in vivo deste trabalho foram desenvolvidos com ratos submetidos ao choque térmico agudo (uma sessão de 15 minutos) com hipertermia induzida (41,5 °C) ou com injeção de HSP70 (HSPA1A) exógena, com grupos experimentais organizados em grupos Controle (C) e Choque Térmico (HS) e, em tempos experimentais: imediatamente (tempo zero), 6, 12 e 24 h pós-choque. Foi observada a ocorrência das formas constitutiva e induzível de eHSP70 no plasma de animais submetidos ao choque térmico com valor maior nos períodos de 12 e 24 h pós-choque. Nossos estudos mostram que, in vivo, a eHSP70 plasmática produz alteração na tolerância à glicose, com maior hiperglicemia, quando o teste é realizado 12 h após o choque térmico. Este efeito foi bloqueado pela administração (i.p.) de anticorpo anti-HSP70 e se mostrou independente da síntese de novo de HSP70. Ainda, a presença de eHSP70 plasmática (induzida por choque térmico ou administrada via endovenosa) causa menor captação de glicose pelo músculo esquelético. Ensaios com músculo isolado indicam que o efeito inibidor da eHSP70 sobre a captação de glicose é dependente de insulina. Apesar das evidências de que a ligação HSP70-insulina no plasma tenha implicação sobre a oferta de glicose, não se pode descartar também a possibilidade de que as ações da eHSP70 estejam ocorrendo pela sua ligação a receptores específicos, e/ou de que sejam parte de uma resposta ao estresse na qual estejam implicados os hormônios contrarregulatórios. Em suma, os resultados indicam que a eHSP70 plasmática é capaz de se ligar- à insulina, provocar tolerância alterada à glicose e diminuir a captação de glicose pelo músculo esquelético, aumentando a disponibilidade de glicose circulante. / Metabolically stressful situations trigger the expression and release of the 70 kDa (HSP70) as an essential protective response, in a process known as heat shock (HS) response or stress response. HSP70 is characterized as cytoprotector entities. Previous studies indicate the occurrence of extracellular HSP70 (eHSP70) in the circulation up to 24 h after stressful challenges, such as physical exercise, and that such eHSP70 liberation comes from hepatosplancnic tissues, in an 1-adrenergic dependent response, which is attenuated by glucose ingestion. The above findings led us to suppose that stress-elicited eHSP70 release could play a physiological role on glycemic control, which are affected by sympathetic stimuli. In this work, in silico experiments indicated the possibility of docking and stable interaction between HSP70 and the insulin molecule. Immunoprecipitation of plasma samples revealed that HSP70 co-immunoprecipitates with insulin, especially under severe fast. Part of these samples was subjected to quantification of glucose, insulin and circulating HSP72, whose results show high concentration of heat shock protein during severe hypoglycemia induced by insulin. Part of the in vivo studies from this work were also carried out in healthy rats submitted to an acute (15 min) HS (41.5 °C) session or in HSP70 (HSPA1A)-injected rats, assigned into control (C) and HS groups which were observed immediately and after 6, 12 and 24 h post-shock. Both the constitutive (predominantly) and the inducible forms of eHSP70 were observed in the plasma of heat shocked animals, being the times 12 and 24 h those in which the highest concentrations were noted. Our studies suggest that in vivo produces eHSP70 change in plasma glucose tolerance, greater hyperglycemia when glucose tolerance test is performed 12 h after heat shock, and this effect was abrogated by anti-HSP70 antibody administration (i.p.) and independent of de novo synthesis of HSP70. Moreover, the presence of eHSP70 (HS-induced or injected) in the plasma or in soleus muscle incubations elicits lower glucose uptake from the skeletal muscle. Isolated muscle studies indicate that eHSP70 inhibiting effect over glucose uptake is insulin-dependent. However, although evidence suggests a role for HSP70 binding to insulin over glucose offering, it cannot be discarded the possibility that eHSP70 actions are due to their binding to specific HSP70 membrane receptors within the muscle cell, and/or that are part of a stress response in which the counter-regulatory hormone are involved. In short, the results indicate that eHSP70 plasma is able to bind to insulin, causing impaired glucose tolerance and decrease glucose uptake by skeletal muscle, increasing blood glucose availability.

O pré-condicionamento (PC) é um fenômeno biológico decorrente da exposição de um tecido ou órgão a um estímulo sub-letal capaz de promover adaptações teciduais que levam a uma proteção a um evento subsequente similar. Alguns estímulos, no entanto podem levar a uma proteção mesmo quando a lesão subsequente é de natureza distinta, isto é chamado de tolerância cruzada. Estudos experimentais vêm utilizando esta estratégia para reduzir o dano provocado pelo acidente vascular encefálico. Com o objetivo de testar a possível tolerância cruzada que o evento isquêmico produziria sobre a lesão causada pela hemorragia, testamos um modelo de pré-condicionamento cruzado induzido por 10 ou 20 minutos de oclusão bilateral das artérias carótidas comuns sobre a hemorragia intracerebral (HIC) induzida por colagenase tipo IV-S no estriado dorsolateral. Para tanto, utilizamos 60 ratos Wistar machos adultos que foram divididos em 6 grupos: sham, PC10, PC20, HIC, PC10+HIC e PC20+HIC. De acordo com o grupo, os animais receberam 10 ou 20 minutos de pré-condicionamento isquêmico (exceto os grupos sham e HIC) e 24 horas após foram submetidos à hemorragia intracerebral ou a cirurgia sham, onde os animais receberam apenas salina. Os animais foram avaliados quanto ao seu desempenho motor através do teste do cilindro e teste da escada horizontal durante o período do experimento. Vinte dias após a indução da HIC, os animais foram perfundidos e foram obtidas amostras do tecido encefálico para a avaliação do volume da lesão e densidade óptica regional de astrócitos (GFAP+) e microglia (CD11b). Em nossos resultados detectamos que 10 ou 20 minutos de PC foram capazes de proteger o tecido da lesão promovida pela HIC (p<0,05) e de reduzir a densidade de GFAP+ (p<0,05). No entanto, não houve diferenças quanto ao desempenho funcional avaliado por nossos testes, tampouco sobre a ativação microglial no período estudado. Conjuntamente nossos resultados evidenciam que a tolerância tecidual induzida pelo pré-condicionamento isquêmico foi capaz de promover algum grau de proteção no modelo de hemorragia intracerebral induzido por colagenase do tipo IV-S, mesmo que isso não tenha sido evidenciado no desfecho funcional avaliado por nossos testes comportamentais. Além disso, os diferentes tempos de PC estudados não mostraram diferentes graus de proteção.

Resumo não disponível

O conhecimento dos riscos e conseqüências da lesão pulmonar induzida pela ventilação mecânica mudou a filosofia da terapia respiratória e tem influenciado nas recomendações e padronizações de seu uso. A influência dos diferentes modos ventilatórios não tem sido estudada em transplante de pulmão. O presente estudo teve como objetivo comparar a influência da ventilação controlada a volume (VCV) com a ventilação controlada a pressão (PCV) no desempenho funcional dos enxertos pulmonares, em modelo canino de transplante pulmonar unilateral utilizando-se doadores após três horas de parada cardiocirculatória. Quinze cães foram randomizados em dois grupos: oito cães foram alocados para o Grupo VCV e sete cães para o Grupo PCV. Cinco cães não completaram o período de avaliação pós-transplante, os dez animais restantes, grupo VCV (n= 5) e grupo PCV (n=5), foram avaliados durante 360 min após o término do transplante pulmonar. O desempenho funcional dos enxertos foi estudado através da avaliação da mecânica respiratória, trocas gasosas e das alterações histopatológicas. Não foram encontradas diferenças significativas em nenhuma das variáveis da mecânica respiratória estudadas (pressões de pico inspiratória- PPI; pressões de platô- PPLAT ; pressões médias de vias aéreas – Pmédia; complacências dinâmica- Cdyn e estática- Cst); da oxigenação, pressão parcial de oxigênio no sangue arterial e venoso misto (PaO2, PvO2); a diferença entre a saturação da hemoglobina no sangue arterial e no sangue venoso misto (ΔSO2); a pressão parcial de dióxido de carbono no sangue arterial e no sangue venoso misto (PaCO2, PvO2). As alterações histopatológicas encontradas nos pulmões dos animais foram compatíveis com o padrão de lesão pulmonar aguda. As alterações histológicas de padrão inespecífico não tiveram nenhuma correlação com o modo ventilatório. Este estudo demonstra que os modos ventilatórios estudados não influenciam as respostas dos enxertos pulmonares à lesão de isquemia reperfusão que se estabelece precocemente neste modelo experimental até 6 horas de reperfusão pulmonar pós-transplante unilateral. / The awareness of the risks and consequences involved in mechanical ventilation induced lung injury has yielded to the introduction of new standards and recommendations for its use. The influence of different ventilatory modes after lung transplantation has not been studied to date. This study compared two different ventilatory modes (pressure controlled-PCV versus volume controlled-VCV) and its effects on the functional outcome of lung grafts in a canine model of unilateral lung transplantation in which the donor lungs were harvested following 3 hours of cardio circulatory arrest. Fifteen size matched mongrel dogs were randomized into 2 groups: 8 dogs were allocated into the VCV group and 7 in the PCV group. Five animals did not finish the 6-hour post-transplant assessment. The remaining 10 animals (VCV and PCV groups respectively, n=5 each) were evaluated during 360 minutes after lung transplantation. The post-transplant performance of the grafts was evaluated by means of respiratory mechanics, gas exchange and lung graft histology. There were no significant differences in the respiratory mechanics variables studied, as well as in the gas exchange parameters over time. The histology features were representative of non-specific acute lung injury and similarly to the other parameters, were not different between the groups and did not correlate with the ventilatory mode utilized. The present study demonstrated that the ventilatory mode utilized in the post-transplant assessment in this animal model did not influence the post-reperfusion graft performance up to 6 hours following unilateral lung transplantation.

Resumo não disponível.