Orientador: Sergio Roberto Peres Line / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-06T16:58:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Aidar_Marisi_M.pdf: 336669 bytes, checksum: 37140ca0e23c258906c1b710bfdb5687 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Células bucais são fontes convenientes de DNA para diagnóstico e estudos epidemiológicos. O presente estudo teve como objetivo desenvolver um método simples e prático para obter células epiteliais, através de bochechos, a fim de serem usadas como fonte de DNA, avaliar a estabilidade do DNA na solução de bochecho no decorrer do tempo e analisar a eficácia deste método na amplificação por PCR de fragmentos de diferentes comprimentos. Os procedimentos usados neste estudo evitam o uso de solventes orgânicos permitindo uma prática laboratorial mais segura. Isto é alcançado pela remoção das proteínas celulares por desidratação e precipitação com uma solução de acetato de amônio 8 M. Bochechos com 5 mL de dextrose 3% foram coletados de 65 indivíduos. Adicionados a cada amostra 3 mL de solução TNE [17 mM Tris-HCL (pH 8,0), 50 mM NaCl, 7 mM EDTA] diluído em etanol 66%. O conteúdo das amostras de bochechos de 20 indivíduos foi dividido em 4 tubos. Um tubo foi usado para extração imediata (igualmente às demais 45 amostras) e os três tubos restantes foram mantidos em temperatura ambiente por períodos de 2, 15 e 30 dias, seguidos pela extração do DNA. As células bucais foram centrifugadas e ressuspendidas em solução contendo 10 mM Tris (pH 8.0), 0.5% SDS, 5 mM EDTA e proteinase K (20 mg/mL). Após incubação a 55ºC durante toda a noite as proteínas foram removidas pela adição de acetato de amônio 8 M seguida por centrifugação. O DNA foi precipitado com isopropanol e ressuspendido em 10 mM Tris (pH 7.8) e 1 mM EDTA. Foram realizadas reações de PCR com primers específicos para fragmentos dos seguintes genes: PAX9 (202 pb); KLK (555 pb); MMP20 (1434 pb). Nossas análises fornecem evidências consistentes de que o produto de DNA extraído por esta metodologia é suficiente para diversas amplificações por PCR. Fragmentos grandes de DNA (1434 pb) puderam ser obtidos com sucesso. Além disso, com a adição de TNE/Etanol o DNA é eficientemente preservado na solução de bochecho, a qual pode ser estocada em temperatura ambiente por até trinta dias, o que possibilita a coleta em campo e contribui para o aumento da amostragem. Este protocolo permite a extração de maneira rápida, simples, econômica e garante o processamento de várias amostras ao mesmo tempo / Abstract: Buccal cells provide a convenient source of DNA for diagnosis and epidemiological studies. The goal of this study was to develop a convenient method to obtain buccal cells from mouthwash samples to be used as a source of DNA, and to evaluate the stability of the DNA in the mouthwash solution over time. Finally, we analysed if the methodology could be used for PCR amplification of high molecular mass fragments. The procedures used in this paper avoid the use of any organic solvent. This is achieved by salting out the cellular proteins by dehydration and precipitation with a 8 M ammonium acetate solution. A group of 65 consenting subjects undertook a mouthwash containing 5mL of 3% dextrose solution. Three mL of TNE solution [17 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM NaCl and 7 mM EDTA] diluted in 66% ethanol, was added to the tube. The mouthwash solution of 20 individuals was divided into 4 tubes. One tube was used for immediate extraction (equally to the others 45 samples) and the three remaining were kept at room temperature for periods of 2, 15 and 30 days, followed by DNA isolation. Buccal cells were pelleted and resuspended in a solution containing 10 mM Tris (pH 8.0), 0.5% SDS, 5 mM EDTA, and proteinase K (20 mg/mL). After overnight incubation at 55°C proteins were removed by adding 8 M ammonium acetate followed by centrifugation. DNA was precipitated with isopropanol and resuspended in 10 mM Tris (pH 7.8) and 1 mM EDTA. PCR amplifications were performed. Three pairs of primers were used: PAX9 (202 pb); KLK (555 pb); MMP20 (1434 pb). Our analyses provided consistent evidences that DNA yield extracted by this methodology is sufficient for several PCR amplifications. Large size products (1434 bp) could be successfully obtained. Additionally, dilution of the mouthwashes in TNE/ethanol prevented DNA degradation at room temperature for periods of up to 30 days, allowing safe storage and transport of field specimens collected in isolated communities, distant from the laboratory. On conclusion, the protocol described here is quick, simple to perform, sensitive, economical and several samples can be processed at the same time / Mestrado / Histologia e Embriologia / Mestre em Biologia Buco-Dental

Introdução: A síndrome de Cowden é um distúrbio multissistêmico de predisposição a diversos tipos de câncer e padrão de herança autossômica dominante. As lesões cutâneas e viscerais são consideradas proliferações hamartomatosas ou tumores malignos. As lesões mucocutâneas estão presentes em quase 100% dos indivíduos afetados. No entanto, alguns autores consideram que as manifestações mucocutâneas da síndrome de Cowden são, na realidade, verrugas virais em diferentes estágios de evolução. Há poucos estudos sobre manifestações orais da síndrome de Cowden. Objetivos: Estudar as manifestações orais da síndrome de Cowden em 9 pacientes, clínica e histopatologicamente. Métodos: As lesões orais presentes em 9 pacientes com diagnóstico de síndrome de Cowden foram estudadas através de revisão de prontuário, fotografias e biopsias em seus distintos aspectos. Resultados: Todas as lesões biopsiadas mostraram aspectos histopatológicos característico de verrugas virais em diferentes estágios de evolução. Conclusão: Nossos achados parecem reforçar a hipótese de que as manifestações mucocutâneas da síndrome de Cowden representam, na realidade, verrugas virais. Estudos adicionais são necessários para explicar porque esta síndrome, causada por uma mutação de um gene supressor tumoral, poderia causar propensão a verrugas / Background: Cowden disease is a multisystemic cancer predisposition disorder, inherited in a autosomal dominant pattern. Cutaneous and visceral lesions are either malignant tumors or are believed to represent hamartomatous growths. Mucocutaneos lesions are present on almost 100% of affected individuals. Nonetheless, some authors consider that the mucocutaneous manifestations of Cowden disease are, in reality, viral warts at distinct steps of evolution. There are only a few studies regarding the oral manifestation of Cowden disease. Objectives: To study the oral manifestation of Cowden disease in nine patients clinically and histopathologically. Methods: The oral mucosal aspects of nine patients with clinical diagnosis of Cowden disease were studied by reviewing medical charts, photographs and biopsies in their different aspects. Results: All biopsied lesions depicted histopathological aspects suggestive of viral warts at distinct steps of development. Conclusion: Our findings seem to reinforce the poorly understood hypothesis that the mucocutaneous manifestations of Cowden disease are in reality viral warts. Additional studies are needed to explain why a syndrome caused by the mutation of a tumor suppression gene may cause propensity to warts

Cumulative clinical and experimental evidence indicates that volatile sulphur compounds (VSC) the principal components of oral malodour, may play an important role in the pathogenesis of periodontal disease. As their (H₂S and CH₃SH) concentrations in gingival sulci increase with the severity of periodontal involvement, the objective of this investigation is to ascertain if they exert an effect on the permeability of oral mucosa. Permeability determinations were performed on excised porcine sublingual mucosal specimens which consisted of non-keratinized epithelium, basal membrane and connective tissue layers mounted in a two compartment perfusion apparatus. Using radioactive and fluorescent-labelled penetrants, it was found that exposure of the epithelial surface to an atmosphere containing physiological concentrations of both thiols (15 ng H₂S or CH₃SH / ml of 95% air - 5% C0₂) increased the permeability of the mucosa to (³⁵S)-S0₄⁻², (³H)-prostaglandin E₂ (PGE₂) and fluorescein isothiocyanate labelled E. coli lipopolysaccharide (F-LPS). A three hour exposure of the mucosa to H₂S and CH₃SH resulted in a 75% and 103% increase respectively in permeability to (³⁵S)-labelled sulphate ion. Similarly, the mercaptan induced up to a 70% increase in permeability of the mucosa to (³H)-prostaglandin E₂. The magnitude of changes in the permeability were found to depend on duration of exposure to the thiols and to their concentration. Studies using (³⁵S)-H₂S suggest that the observed changes in the tissue permeability are related to the reaction of the thiols with tissue components. In addition, the (³⁵S)-H₂S is capable of perfusing through all three layers of the mucosa at 12.3 ng / cm². In contrast to H₂S , the CH₃SH effect was irreversible in control air / C0₂ environment. This infers that CH₃SH is potentially a more deleterious agent to the tissue barrier. However, its effect can also be reversed by treatment of tissues with 0.22% ZnCl₂ either prior to or after exposure to mercaptan. This suggests that Zn⁺² ion may be useful in preventing the potentially harmful effects of VSC. Fluorescent studies with F-LPS indicate that thiols can also potentiate the penetration of endotoxin. Whereas the fluorescence of the F-LPS in control systems was confined to the superficial epithelial layer in contact with the endotoxin, the CH₃SH- exposed mucosa exhibited fluorescence throughout the epithelial and connective tissue layers. Fluorescent staining of the mucosal specimens with fluorescein diacetate followed by counter staining with ethidium bromide provides evidence of membrane impairment to some cells by CH₃SH. Collectively these observations provide strong experimental evidence that the VSC, products of putrefaction produced in the gingival sulcus by oral microflora, may adversely affect the integrity of the crevicular barrier to deleterious agents and thus contribute to the etiology of periodontal disease. / Dentistry, Faculty of / Graduate

Objetivo: Verificar a presença da expressão imunoistoquímica das Citoqueratinas (CKs) 7 e 8 nas células do Carcinoma epidermóide localizado em assoalho bucal (CEAB), estabelecendo a especulação de que essa neoplasia tem origem no epitélio de transição entre o ducto excretor da glândula salivar e a mucosa oral de superfície. Métodos: Noventa e dois casos de CEAB foram avaliados através da técnica imunoistoquímica da streptavidina/biotina, utilizando-se anticorpos monoclonais anti-CKs 7 e 8. Resultados: Setenta e oito casos (84,78%) mostraram positividade para as CKs estudadas. Quarenta e cinco casos (48,9%) mostraram positividade para CK7 e Sessenta seis casos (71,7%) para CK8. Conclusão: Houve uma intensa marcação celular das CKs estudadas. Os resultados encontrados indicam a participação do epitélio de transição entre os ductos excretores das glândulas salivares e a mucosa bucal de revestimento, na gênese dos carcinomas epidermóides nessa localização. Objetivo: Verificar a presença da expressão imunoistoquímica das Citoqueratinas (CKs) 7 e 8 nas células do Carcinoma epidermóide localizado em assoalho bucal (CEAB), estabelecendo a especulação de que essa neoplasia tem origem no epitélio de transição entre o ducto excretor da glândula salivar e a mucosa oral de superfície. Métodos: Noventa e dois casos de CEAB foram avaliados através da técnica imunoistoquímica da streptavidina/biotina, utilizando-se anticorpos monoclonais anti-CKs 7 e 8. Resultados: Setenta e oito casos (84,78%) mostraram positividade para as CKs estudadas. Quarenta e cinco casos (48,9%) mostraram positividade para CK7 e Sessenta seis casos (71,7%) para CK8. Conclusão: Houve uma intensa marcação celular das CKs estudadas. Os resultados encontrados indicam a participação do epitélio de transição entre os ductos excretores das glândulas salivares e a mucosa bucal de revestimento, na gênese dos carcinomas epidermóides nessa localização. / Objetive: The aim of this study is to verify the presence of Citokeratin7 (CK7) and Citokeratin 8 (CK8) positive cells of OSCC of the floor of the mouth establishing a speculation if this neoplasia has origin in excretory salivary duct epithelia transition to floor of the mouth mucosa. Methods: Ninety two cases of OSCC of the floor of the mouth were evaluated by straptavidin/biotin complex immunohistochemical technique and anti-CK7 and anti-CK8 monoclonal antibodies were used. Results: Seventy eight cases (84,78%) showed positive for one of the CKs; Forty five cases (48,9%) showed positive for CK7 and Sixty six cases (71,7%) showed positive for CK8. Conclusions: There is a high and significantly incidence of the immunoexpression of this citokeratins. These results suggest that the excretory salivary duct epithelia transition to floor of the mouth mucosa participates on the genesis of the OSCC in this location.

Objetivo: Verificar a presença da expressão imunoistoquímica das Citoqueratinas (CKs) 7 e 8 nas células do Carcinoma epidermóide localizado em assoalho bucal (CEAB), estabelecendo a especulação de que essa neoplasia tem origem no epitélio de transição entre o ducto excretor da glândula salivar e a mucosa oral de superfície. Métodos: Noventa e dois casos de CEAB foram avaliados através da técnica imunoistoquímica da streptavidina/biotina, utilizando-se anticorpos monoclonais anti-CKs 7 e 8. Resultados: Setenta e oito casos (84,78%) mostraram positividade para as CKs estudadas. Quarenta e cinco casos (48,9%) mostraram positividade para CK7 e Sessenta seis casos (71,7%) para CK8. Conclusão: Houve uma intensa marcação celular das CKs estudadas. Os resultados encontrados indicam a participação do epitélio de transição entre os ductos excretores das glândulas salivares e a mucosa bucal de revestimento, na gênese dos carcinomas epidermóides nessa localização. Objetivo: Verificar a presença da expressão imunoistoquímica das Citoqueratinas (CKs) 7 e 8 nas células do Carcinoma epidermóide localizado em assoalho bucal (CEAB), estabelecendo a especulação de que essa neoplasia tem origem no epitélio de transição entre o ducto excretor da glândula salivar e a mucosa oral de superfície. Métodos: Noventa e dois casos de CEAB foram avaliados através da técnica imunoistoquímica da streptavidina/biotina, utilizando-se anticorpos monoclonais anti-CKs 7 e 8. Resultados: Setenta e oito casos (84,78%) mostraram positividade para as CKs estudadas. Quarenta e cinco casos (48,9%) mostraram positividade para CK7 e Sessenta seis casos (71,7%) para CK8. Conclusão: Houve uma intensa marcação celular das CKs estudadas. Os resultados encontrados indicam a participação do epitélio de transição entre os ductos excretores das glândulas salivares e a mucosa bucal de revestimento, na gênese dos carcinomas epidermóides nessa localização. / Objetive: The aim of this study is to verify the presence of Citokeratin7 (CK7) and Citokeratin 8 (CK8) positive cells of OSCC of the floor of the mouth establishing a speculation if this neoplasia has origin in excretory salivary duct epithelia transition to floor of the mouth mucosa. Methods: Ninety two cases of OSCC of the floor of the mouth were evaluated by straptavidin/biotin complex immunohistochemical technique and anti-CK7 and anti-CK8 monoclonal antibodies were used. Results: Seventy eight cases (84,78%) showed positive for one of the CKs; Forty five cases (48,9%) showed positive for CK7 and Sixty six cases (71,7%) showed positive for CK8. Conclusions: There is a high and significantly incidence of the immunoexpression of this citokeratins. These results suggest that the excretory salivary duct epithelia transition to floor of the mouth mucosa participates on the genesis of the OSCC in this location.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-01-18Bitstream added on 2014-06-13T20:18:40Z : No. of bitstreams: 1 barao_var_me_araca.pdf: 2925422 bytes, checksum: 91ac65727dd1aa72a0e59c81f8a2faa1 (MD5) / Os implantes osseointegrados quando submetidos a cargas funcionais transmitem as tensões geradas diretamente ao osso. Dessa forma, muitas falhas na osseointegração estão ligadas ao excesso de carga sobre o implante. No caso de próteses implanto-retidas e muco-suportadas, outro importante fator que pode contribuir para uma maior ou menor incidência de tensões ao nível do implante reside na diferença de resiliência entre a fibromucosa e o implante. No tratamento com overdentures, este mecanismo de transmissão e distribuição não está bem documentado. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi analisar, através do Método de Elementos Finitos bidimensional, a influência dos sistemas de retenção para overdentures implanto-retidas e da espessura e resiliência da fibromucosa na distribuição interna de tensões. Foram construídos em computador, através do programa Auto CAD, modelos matemáticos representativos de cortes frontais da mandíbula, sendo modelo A (controle), mandíbula edêntula suporte de prótese total convencional; modelo B, mandíbula edêntula suporte de overdenture com dois implantes ferulizados por meio de barra e clipe plástico; modelo C, mandíbula edêntula suporte de overdenture com dois attachments esféricos do tipo o’ring em dois implantes independentes e modelo D, mandíbula edêntula suporte de overdenture com dois implantes ferulizados por meio de barra e clipe plástico associados a dois attachments esféricos distais do tipo o’ring. Em todos os modelos, a fibromucosa assumiu três características de espessura (1, 3 e 5mm) nas resiliências dura, resiliente e flácida, respectivamente, através da variação do módulo de elasticidade da fibromucosa. Para análise, simulada no programa Ansys, os modelos foram fixados nas laterais direita e esquerda, permitindo deflexão da mandíbula. Foi aplicada... / Implants overload is the main factor responsible for osseointegration loss since functional loads are distributed directly to the bone. In addition, the difference between mucosa and implant mobility influence stress level, mainly in prosthesis supported by implant and mucosa. In overdenture treatments, the mechanisms of stress transmission and distribution induced by attachments system are not completely understood as literature concerning the influence of several biomechanical factors remains inconclusive. Thus, the aim of this study was to evaluate the effect of different mucosa thickness and resilience on stress distribution of implant-retained overdentures with different attachment systems using a two-dimensional Finite Element Analysis (FEA-2D). Representative models of edentulous mandible were constructed on AutoCAD software; Group A (control), a model of edentulous mandible supporting a complete denture; Group B, a model of edentulous mandible supporting an overdenture retained by two splinted implants connected with bar-clip system; Group C, a model of edentulous mandible supporting an overdenture retained by two unsplinted implants with o’ring system; Group D, a model of edentulous mandible supporting an overdenture retained by two splinted implants connected with bar-clip system associated with two distally o’ring system. In each group, mucosa assumed three characteristics of thickness (1, 3 and 5mm) in the resiliences hard, resilient and soft, respectively, through different mucosa’s Young modulus. Evaluation was performed on Ansys software, with both right and left sides of models fasttened to allow mandibular bending. A vertical load of 100N was applied on lower central incisive teeth, and the principal stress was used as analysis criteria. Overall, group A showed the lowest stress values followed by groups C, D and B both in general stress maps as in the evaluation of... (Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Adriana Ávila de Almeida null (celdrica2003@yahoo.com.br) on 2018-03-23T16:45:45Z No. of bitstreams: 1 Tese Final - Adriana Ávila de Almeida.pdf: 2506211 bytes, checksum: e38a3f026d55d541be0fd2ec9142a2a2 (MD5) / Approved for entry into archive by Silvana Alvarez null (silvana@ict.unesp.br) on 2018-04-03T21:06:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 almeida_aa_dr.sjc.pdf: 2506211 bytes, checksum: e38a3f026d55d541be0fd2ec9142a2a2 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-03T21:06:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 almeida_aa_dr.sjc.pdf: 2506211 bytes, checksum: e38a3f026d55d541be0fd2ec9142a2a2 (MD5) Previous issue date: 2018-02-05 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os carcinógenos do tabaco estão relacionados a diversos tipos de câncer incluindo o carcinoma de células escamosas (CCE) bucal. Aliado ao álcool, o tabaco contribui para o desfecho desfavorável destes casos. A susceptibilidade individual ao câncer pode estar relacionada a expressão das enzimas que metabolizam tais carcinógenos. O objetivo deste trabalho é avaliar a expressão dos genes CYP1A1, CYP1B1, CYP2A6 e CYP2E1 no CCE bucal por meio de qPCR. Foram coletadas amostras de 32 indivíduos com CCE e de 15 controles submetidos a cirurgias bucais por lesões benignas. Foram constituídos quatro grupos: Grupo CCE fumante (n=26), Grupo CCE não fumante (n=6), Grupo controle fumante (n=9) e Grupo controle não fumante (n=6). O Teste de Fagerström para Dependência a Cigarros (TFDC) foi usado para avaliar a dependência nicotínica (DN) e AUDIT para avaliação do consumo de etílicos. Houve diminuição da expressão do gene CYP1B1 nos casos de CCE comparados aos controles. Foram encontradas diferenças estaticamente significativas de expressão gênica de CYP1B1 entre os Grupos CCE fumante e controle fumante (p=0,0018), Grupo CCE não fumante e controle não fumante (p=0,0079) e CCE fumante com CCE não fumante (p=0,0385) e entre os quatro grupos (p<0,0001). Houve diminuição da expressão do CYP2A6 no Grupo CCE fumante em relação ao Grupo controle, mas apenas um paciente do Grupo controle expressou este gene. Houve aumento da expressão de CYP2E1 entre os Grupos CCE fumante e controle fumante (p=0,0424). Concluindo, foi encontrada grande variabilidade interindividual no estudo da expressão dos genes estudados. Houve maior expressão de CYP1A1 e CYP2E1 em amostras de indivíduos fumantes com CCE. Os genes CYP1B1 e CYP2A6 estavam menos expressos no Grupo CCE fumante em relação ao Grupo controle. Para os genes CYP1B1 e CYP2E1 foram encontrados valores significativos na correlação entre a expressão gênica e parâmetros demográficos e de perfil tabágico no Grupo controle fumante, e do AUDIT no Grupo CCE não fumante. O gene CYP2E1, além de estar relacionado ao metabolismo do álcool, também deve ser considerado importante marcador do metabolismo dos carcinógenos derivados do tabaco. / Tobacco carcinogens are related to various types of cancer, including oral squamous cell carcinoma (OSCC). Allied to alcohol, tobacco contributes to the unfavorable outcome of the cases. Individual cancer susceptibility may be related to an expression of the enzymes that metabolize such carcinogens. The aim of this work is to evaluate the expression of the genes CYP1A1, CYP1B1, CYP2A6 and CYP2E1 on OSCC by qPCR. Samples were collected from 32 individuals with OSCC and 15 controls submitted to oral surgeries due to benign lesions. There were four groups: Smoker SCC group (n = 26), nonsmoker SCC group (n = 6), Smoker control group (n = 9) and nonsmoker control group (n = 6). The Fagerström Test for Cigarette Dependence (TFCD) was used to evaluate nicotinic dependence (ND) and AUDIT for the evaluation of alcohol consumption. There was a decrease in CYP1B1 gene expression in cases of SCC compared to controls. (P = 0.0018); smoker CCE and non-smoker control (p = 0.0079); smoker SCC with nonsmoker SCC (p = 0.0385) and between the four groups (p <0.0001). There was a decreased expression in CYP2A6 in the smoker SCC Group compared to the control group, but only one control group patient expressed this gene. There was an increased expression of CYP2E1 between the smoking and nonsmoking SCC groups (p = 0.0424). In conclusion, large interindividual variability was found in the study of the expression of the genes studied. There was greater expression of CYP1A1 and CYP2E1 in samples from smokers with SCC. The CYP1B1 and CYP2A6 genes were less expressed in the smoker SCC Group. Significant values were found for the CYP1B1 and CYP2E1 genes in the correlation between a gene expression and a parameter and a non-smoker control group, non-smoker control group and AUDIT. The CYP2E1 gene, besides being related to alcohol metabolism, should also be considered an important marker of the metabolism of the carcinogens derived from tobacco. / 2016/08633-0