INTRODUÇÃO: O melanoma primário da cavidade oral é uma neoplasia agressiva, rara e originada a partir da proliferação de melanócitos malignos da mucosa. Ele representa aproximadamente de 0,2 a 8% de todos os melanomas. Estudos recentes apontam algumas vias moleculares tem sido encontradas por estarem envolvidas na patogenia dos melanomas. Dentre essas vias destaca-se a via proliferativa da MAPK (mitogen activated protein kinase), esta cascata de sinalização está envolvida no controle do crescimento celular, proliferação e migração, e tem sido relacionada com um papel importante no desenvolvimento e progressão do melanoma cutâneo. OBJETIVOS: Analisar a expressão proteica e mutação pontual dos componentes da via MAPK e correlacionar com os dados clínicos-histológicos. MATERIAL E MÉTODOS: Através da imunoistoquímica avaliar a expressão proteica dos anticorpos RAS; BRAF; MEK1; MEK2; ERK1 e ERK2 em 35 casos de melanomas orais organizados em matriz (TMA: Tissue Microarray) e através de pirosequenciamento avaliar a mutação pontual dos genes BRAF; NRAS; KRAS em 14 casos de melanomas orais. RESULTADOS: Idade dos pacientes entre 9 e 91 anos, sem predileção por sexo, 75% caucasianos, 71,42% acometeram o palato, 80% com aspecto histológico grau III. A análise da expressão proteica foi: RAS (28,57%); BRAF (82,85%); MEK1 (0%); MEK2 (51,43%); ERK1 (20%)e ERK2 (74,28%). Na análise molecular observamos mutações para BRAF (9/14 casos) e NRAS (2/14 casos). CONCLUSÃO: Todos os aspectos da via MAPK necessita de outras elucidações em melanomas de áreas foto-protegidas e melanomas de mucosa e comparando diferentes populações. Entretanto, os resultados deste presente estudo apontam importante alterações na cascata RAS-RAF-MEK-ERK e estes são indicadores de prognóstico ruim em melanomas primários da mucosa oral, independente da exposição solar / BACKGROUND: Primary melanoma of the oral cavity is an aggressive and rare neoplasm and originated from the proliferation of malignant melanocytes of the mucosa. It represents approximately 0.2 to 8% of all melanomas. Recent studies indicate some molecular pathways have been found to be involved in the pathogenesis of melanomas. Among these means there is a proliferative MAPK pathway (\"mitogen activated protein kinase\"), this signaling pathway is involved in controlling cell growth, proliferation and migration, and it has been associated with a role in the development and progression of melanoma skin. OBJECTIVES: To analyze protein expression and mutation of components of the MAPK pathway and to correlate with the clinical, histological data. MATERIALS AND METHODS: Using immunohistochemistry to evaluate the protein expression of RAS, BRAF, MEK1, MEK2, ERK1 and ERK2 antibodies in 35 cases of oral melanomas organized array (TMA: Tissue Microarray) and using pyrosequencing to assess the mutation of the BRAF, NRAS, KRAS in 14 cases of oral melanomas. RESULTS: Age of patients between 9 and 91 years, regardless of gender, 75% Caucasian, 71.42% in palate, 80% with histologic grade III. Analysis of protein expression was: RAS (28.57%); BRAF (82.85%); MEK1 (0%), MEK2 (51.43%); ERK1 (20%) and ERK2 (74.28%). Molecular analysis we found BRAF mutations (9/14 cases) and NRAS (2/14 cases). CONCLUSION: All aspects of the MAPK pathway requires further elucidation in melanomas of photo-protected areas and mucosal melanomas and comparing different populations. However, the results of this study indicate important changes in the cascade RAS-RAF-MEK-ERK and these are indicators of poor prognosis in primary melanomas of the oral mucosa, regardless of sun exposure

Este estudo caracterizou e relacionou as leveduras do gênero Candida isoladas das mucosas oral e vaginal de mulheres com lesões causadas por HPV de alto risco para câncer do colo do útero. Foram examinadas 42 mulheres tratadas no ambulatório de Patologia do Trato Genital Inferior do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo sendo, 30 com lesões uterinas de alto grau (G1) com média de idade de 36,5 anos ± 11,1 e 12 com lesões uterinas de baixo grau (G2) com média de idade de 34,75 anos ± 15,5. Condições clínicas e dados laboratoriais sobre HPV foram coletados do prontuário médico das pacientes; os dados sócio-demográficos obtidos a partir de um questionário apropriado. Para o estudo de associação entre as variáveis foi utilizada a análise de razão de chance (Odds Ratio) a partir do programa STATA 13.1. Foram identificadas associação entre lesões uterinas de baixo grau com cultura positiva em mucosa oral (OR= 0,215) e com presença de doenças crônicas (OR = 0,167), sendo que pacientes com lesões uterinas de alto grau possuem maior prevalência para diabetes e os resultados indicaram 23% de prevalência de Candida spp. em mucosa oral e 27% em mucosa vaginal, em pacientes do G1,no G2 foi de 42% em mucosa oral e de 33% em mucosa vaginal. Entre as espécies encontradas em mucosa oral e vaginal das pacientes, Candida albicans foi a mais isolada com 88%, seguida de C. tropicalis (8%)e C. glabrata (4%). As cepas de C. albicans isoladas de ambas as mucosas apresentaram sensibilidade a todos os antifúngicos testados, ao contrário da cepa de C. tropicalis isolada no Grupo 2, em mucosa vaginal, que apresentou um perfil de resistência ao fluconazol. Assim, torna-se importante o acompanhamento e supervisão por meio de exames clínicos e laboratoriais das pacientes com HPV, reforçando a necessidade sobre cuidados, tratamento e prevenção de infecções relacionadas ao HPV e a Candida spp. / This study characterized and related yeasts of the genus Candida isolated from the oral and vaginal mucous membranes of women with lesions caused by high-risk HPV for cervical cancer. Forty-two women treated at the Lower Genital Tract Pathology Clinic of the University of São Paulo Medical School\'s Hospital of Clinics were examined, with 30 high-grade (G1) uterine lesions with a mean age of 36.5 years ± 11, 1 and 12 with low grade (G2) uterine lesions with a mean age of 34.75 years ± 15.5. Clinical conditions and laboratory data on HPV were collected from patients\' medical records; the socio-demographic data obtained from an appropriate questionnaire. For the study of association between the variables, Odds Ratio analysis was used from the STATA 13.1 program. An association between low grade uterine lesions with positive culture in oral mucosa (OR = 0.215) and presence of chronic diseases (OR = 0.167) was identified. Patients with high grade uterine lesions had a higher prevalence for diabetes and the results indicated 23% prevalence of Candida spp. In oral mucosa and 27% in vaginal mucosa, in G1 patients, in G2 it was 42% in oral mucosa and 33% in vaginal mucosa. Among the species found in oral and vaginal mucosa of patients, Candida albicans was the most isolated with 88%, followed by C. tropicalis (8%) and C. glabrata (4%). The strains of C. albicans isolated from both mucosa presented sensitivity to all tested antifungal agents, unlike the C. tropicalis strain isolated in Group 2, in vaginal mucosa, which presented a resistance profile to fluconazole. Thus, monitoring and supervision through clinical and laboratory testing of HPV patients is important, reinforcing the need for care, treatment and prevention of HPV-related infections and Candida spp.

A mucosite oral (MO) é uma consequência debilitante do tratamento quimioterápico, que pode ser aliviada com o uso de fototerapias. A terapia fotodinâmica (Photodynamic Therapy - PDT), pode ser usada para o tratamento da MO, quando esta se encontra infectada por microrganismos. No entanto, não há estudos que demonstrem se a PDT, quando aplicada sobre lesões em mucosa oral, pode interferir na reparação tecidual. Assim, este trabalho tem o objetivo de induzir a MO, em hamsters, através da confecção de ranhuras em animais que receberam o quimioterápico 5-Fluorouracil (5-FU), e avaliar, através de análises clínicas, bioquímicas e histológica, o efeito da PDT no reparo destas lesões. Os animais foram divididos em dois grupos, controle e experimental. O grupo controle é formado pelo grupo CN, o qual recebeu o veículo da quimioterapia e anestesia. O grupo experimental é formado pelos grupos CQ, o qual recebeu quimioterapia (QT), anestesia e indução da MO; CQC, o qual recebeu QT, anestesia, indução da MO e aplicação do corante azul de metileno (AM) 0,01%; CQL, o qual recebeu QT, anestesia, indução da MO e irradiação com laser de baixa potência (LBP - 660nm, 120J/cm2, 40mW, 4,4J por ponto); e PDT, o qual recebeu QT, anestesia, indução da MO, aplicação do AM 0,01% e irradiação com LBP (mesmo protocolo do grupo CQL). O 5-FU foi aplicado através de injeções intraperitoneais ao que se seguiu a indução da MO pela confecção de ranhuras com o auxílio de uma agulha de ponta fina. O experimento teve duração total de 10 dias sendo que a avaliação da severidade da MO foi realizada diariamente através da utilização das escalas propostas pela Organização Mundial de Saúde (OMS) e por W-Smith modificadas para animais. Os animais foram sacrificados após 5, 7 e 10 dias de experimento e suas mucosas jugais (direita e esquerda) foram removidas para a realização das análises bioquímicas (através da determinação da concentração total de proteína e da avaliação de parâmetros do sistema antioxidante, como a atividade enzimática da Superóxido Dismutase - SOD e da Catalase) e histológica (por microscopia de luz). Após análises estatísticas, os resultados clínicos, bioquímicos e histológico mostraram que a PDT diminuiu a severidade da MO no décimo dia do experimento (p<0,05) e mostrou maior queratinização do epitélio com deposição de fibras colágenas organizadas na lâmina própria. Com base no protocolo experimental desenvolvido neste estudo e nos resultados obtidos podemos concluir que a PDT pode ser utilizada de maneira segura em lesões infectadas de MO, pois a mesma não interferirá na reparação destas lesões. / Oral mucositis (OM) is a debilitating side effect of chemotherapy, which can be relieved with the use of phototherapy. Photodynamic therapy (PDT) may be used for the treatment of OM, when infection is present. However, there are no studies that demonstrate PDTs interference on tissue repair processes when applied on lesions of the oral mucosa. In this sense, this work aims to induce OM in hamsters, by grooving the oral mucosa of animals receiving 5-fluorouracil (5-FU) chemotherapy, and evaluate through clinical, biochemical and histological parameters the effect of PDT in repairing these lesions. The animals were divided into two groups, experimental and control. The control group is formed by the C group, which received the vehicle of chemotherapy and anesthesia. The experimental group is formed by the Ch group, which received chemotherapy, anesthesia and induction of OM; ChP, which received chemotherapy, anesthesia, induction of OM and application of methylene blue (MB) 0.01%; ChL, which received chemotherapy, anesthesia, induction of OM and irradiation with low-power laser (LPL - 660nm, 120J/cm2, 40 mW, 4.4 J per point); and PDT, which received chemotherapy, anesthesia, induction of OM, application of MB 0.01% and LPL irradiation (same protocol as ChL group). 5-FU was administered by intraperitoneal injection, which was followed by the induction of OM by making mucosal grooves. The experimental period was of 10 days and the assessment of the severity of OM was performed on a daily basis using the scales proposed by the World Health Organization (WHO) and by W-Smith modified for animals. The animals were sacrificed after 5, 7 and 10 days of the experiment and their cheek pouch mucosa (left and right) were removed for carrying out the biochemical (by measuring the total protein concentration and by evaluating the antioxidant system parameters, such as enzymatic activity of Superoxide Dismutase - SOD and catalase) and histological (by light optical microscopy) analyzes. After statistical analysis, the clinical, biochemical and histological results showed that PDT reduced the severity of OM on the tenth day of the experiment, when compared to the initial mucositis score (p<0.05) and showed greater keratinization with organized collagen deposition in the lamina propria. Based on the experimental protocol developed in this study and the results obtained we can conclude that PDT can be used safely in infected OM injuries because it does not interfere with the repair of these lesions.

Estudo das superfícies dorsal e ventral da língua e da superfície de interface epitélio-tecido conjuntivo de Bradypus torquatus, foi realizado empregando-se os métodos de microscopia de luz e microscopia eletrônica de varredura. As línguas de Bradypus torquatus foram removidas, dissecadas e seccionadas em 3 partes: rostral, média e caudal e tratadas pelos métodos de microscopia de luz e eletrônica de varredura. Os resultados revelaram que a língua apresenta um ápice arredondado, um corpo e uma raiz. A mucosa dorsal mostra três tipos de papilas linguais: filiformes, fungiformes e vaIadas e uma superfície inferior lisa. Histologicamente, observou-se que a superfície dorsal da língua contém as papilas filiformes, fungiformes e vaIadas, distribuídas nas regiões rostral, média e caudal. A camada epitelial é de espessura variável e possui os estratos basal, espinhosa, granular e córnea, mostrando as células epiteliais. A lâmina própria é caracterizada por um tecido conjuntivo denso formando as projeções papilares longas, curtas e arredondadas. As imagens tridimensionais obtidas pela microscopia eletrônica de varredura, mostraram numerosas papilas filiformes localizadas essencialmente nas regiões rostral e média. Poucas papilas fungiformes estão presentes na superfície dorsal da língua, tendo na maioria localizada nas margens da extremidade rostral da língua, exibindo as formas arredondadas e baixas. Elas são cobertas de células epiteliais queratinizadas. Na região caudal notou-se duas papilas vaIadas, contendo valas profundas e a superfície coberta de epitélio escamoso estratificado onde pode ser identificados poros gustativos. Nas papilas fungiformes identificou-se vários poros gustativos na superfície. As amostras tratadas com a solução de hidróxido de sódio e examinado ao microscópio eletrônico de varredura, revelaram após a remoção total da camada epitelial, o tecido conjuntivo denso em disposição original apresentando papilas conjuntivas de diferentes formas e tamanhos. As regiões rostral e média evidenciaram numerosas papilas correspondentes às filiformes e fungiformes e na região caudal, a papila conjuntiva da papila vaIada apresentou uma forma alongada. Na superfície foram notadas pequenos forames de ductos de glândulas salivares e projeções papilares maiores e menores em aspectos tridimensionais. Na superfície de interface epitélio-tecido conjuntivo, foram notados espessos feixes de fibras colágenas. Cortes corados por Picro-sírius e analisados por meio de microscopia de luz polarizada evidenciaram a coloração de papilas conjuntivas em aspecto vermelho indicando a presença de fibras colágenas do tipo I e fibras colágenas de coloração esverdeada, tipo III. / The study of the dorsal and lingual surfaces and the surface of interface epithelium-connective tissue of Bradypus torquatus\'tongue was performed employing the light and scanning electron microscopy techniques. The tongue of Bradypus torquatus were removed, dissected and sectioned in three parts: rostral, medium and caudal regions and prepared by light and scanning electron microscopy methods. The results revealed that the tongue present a round apex, dorsum and a root. The dorsal mucosae showed three lingual papillae: filiforms, fungiforms and vallate and a ventral smooth surface. Histologically, it was observed that the dorsal surface of tongue contains the filiform, fungiform and vallate papillae located in the rostral, medium and caudal regions.The epitheliallayer is variable in thickness and possess the basal, spinosum, granular and queratinized layers, showing the epithelial cells. The lamina propria is characterized by a dense connective tis sue forming the long, short and rounded papilar projections. The three-dimensional images obtained by scanning electron microscopy, showed numerous filiform papillae located essentially in the rostral and medium regions. Few fungiform papillae are present in the dorsal surface of tongue, usually located in the border of rostral apex of tongue exhibiting the rounded and low in formo They are covered by queratinized epithelial cells. In the caudal region was noted two vallate papillae containing a deep vala and the surface was covered by stratified squamous epithelial cells. The superior third of surface of vallate papillae was covered by stratified squamous epithelial cells where may be identified the gustatory taste pores. In the fungiform papillae, several taste pores are located on the surface. The samples treated with NaOH solution and examined by scanning electron microscopy revealed afier removal of epitheliallayer, the dense connective tissue- in original disposition, presenting different sizes and shapes of conjuntive papillae. The rostral and medium regions envidentiated numerous papillae corresponding to the filiform and fungiform papillae and in the caudal region, the connective tissue papillae of vallate papillae presented a round formo On the surface were noted small foraminae of lingual salivary gland ducts and small and great papillary projections in three-dimensional images. AIso, on the surface of interface epithelium-connective tissue, were noted thick bundles of collagen fibers. The specimens stained with Picrosirius and examined by po larized light microscopy revealed the connective tissue stained in red colour indicating the collagen fibers type I and the type III, those stained in green colour collagen fibers.

O Papilomavírus Humano (HPV) é uma prevalente infecção do mundo atual, sendo o comportamento sexual um fator determinante para a o acometimento da infecção. O objetivo deste trabalho foi estudar o HPV em diferentes sítios de infecção, buscando um maior entendimento do seu mecanismo de disseminação. Foram analisadas amostras das mucosas cervical, oral e do sangue de 50 pacientes do sexo feminino. Foram identificados o HPV-16, HPV-18, HPV-31 e HPV-33. Nenhuma paciente foi negativa para os quatro tipos nos três sítios. O HPV-16 foi o mais detectado e o mais prevalente nos três sítios, simultaneamente, 32 pacientes apresentaram esse perfil. Todos os tipos virais presentes no sangue, também estavam presentes na mucosa cervical, na mucosa oral ou em ambas. Foram identificados seis achados citológicos, sugestivos da infecção pelo HPV. Foi realizada a detecção dos transcritos virais de E6, E6/E7 e L1 nos três sítios. Os resultados do nosso trabalho demonstram a alta prevalência do HPV, a atividade viral nos três sítios analisados e a provável disseminação do vírus. / Human papillomavirus (HPV) is one of the most prevalent infections of the current world, with sexual behavior being one determining fator of infection. The objective of this study was to study HPV in different sites of infection, seeking a better understanding of its mechanism and spreading. Cervical, oral and blood mucosa samples from 50 female patients were analyzed. HPV-16, HPV-18, HPV-31 and HPV-33 were identified. No patient was negative in the four types at all three sites. HPV-16 was the most detected and the most prevalent in the three sites, simultaneously, 32 patients presented this profile. All viral types present in the blood were also present in the cervical mucosa, oral mucosa, or both. Six cytological findings were identified, suggestive of infection by HPV. Detection of viral transcripts of E6, E6 / E7 and L1 was performed at the three sites. The results of our study demonstrate the high prevalence of HPV, viral activity in the three sites analyzed and the probable virus spreading.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:32:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ManoelAGN_tese.pdf: 5283581 bytes, checksum: 65511a1dd2487deff44e8db44d2a0cf5 (MD5) Previous issue date: 2006-08-18 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / The objective of this study was perform by the streptoavidin-biotin technique an immunohistochemical analysis of ?2?1, ?3?1e ?5?1 integrins in 11 normal oral mucosa (NOM), 16 oral inflammatory fibroepithelial hyperplasia (OIFH) and 25 oral epithelial dysplasia (OED) (16 mild, 2 moderates and 7 severe), to determine if exists qualitative alteration in the expression of these integrins and if this guard relation with the oral epithelial modifications. It was observed that for the ?2?1 integrin the majority of the sample showed a predominantly intense labeling diffusely distributed in the intercellular contacts and the cytoplasm of cells of the basal and suprabasal layers, without difference of this profile between the different types of specimens, however with a trend to weak or loss of expression in 21.1% of the OEDs, being all the specimens that had not expressed this heterodimer, severe OEDs. For the ?3?1 integrin the majority of the sample showed a weak or absent labeling in basal layer. The ?5?1 integrin showed a predominant strong diffuse labeling in the intercellular contacts and cytoplasm in the suprabasal layer, with difference only in the labeling intensity between the types of specimens, inhabiting this difference in the OEDs, where 12 (48%) specimens had shown a weak labeling. It was concluded that the evaluated integrins can be involved in the cell-cell, cell-ECM interactions modulating the cellular differentiation and maintenance of the epithelial structural arrangement. The variable expression of the ?5?1 integrin in the OEDs, could suggest, respectively, a role of this molecule in the cellular survival, with intention to perpetuate the modified phenotype in these lesions, or a suppressor role on the modified phenotype due to lack of interaction of this molecule with the fibronectina of the MEC / Este estudo se prop?s analisar atrav?s da t?cnica da estreptoavidina-biotina a express?o imuno-histoqu?mica das integrinas ?2?1, ?3?1e ?5?1 em 11 esp?cimes de mucosa oral normal (MON), 16 de hiperplasia fibroepitelial inflamat?ria oral (HFIO) e 25 de displasia epitelial oral (DEO) (16 leves, 2 moderadas e 7 graves), procurando determinar se existe altera??o qualitativa na express?o destas integrinas e se a mesma guarda rela??o com as modifica??es sofridas pelo epit?lio oral. Para a integrina ?2?1 a maioria dos esp?cimes exibiu uma marca??o predominantemente intensa e difusa nos contatos intercelulares e no citoplasma celular das camadas basal e suprabasal, sem diferen?a desse perfil entre os diferentes tipos de esp?cimes, por?m com uma tend?ncia a fraca ou perda da express?o em 21.1% das DEOs, sendo todos os esp?cimes que n?o expressaram marca??o para este heterod?mero DEOs graves. Para a integrina ?3?1 a maioria da amostra exibiu uma marca??o fraca ou ausente predominantemente em camada basal. A integrina ?5?1 exibiu uma forte marca??o difusa nos contatos intercelulares e citoplasm?tica na camada suprabasal, com diferen?a apenas na intensidade de marca??o entre os tipos de esp?cimes, residindo essa diferen?a nas DEOs, onde 12 (48%) esp?cimes exibiram uma fraca marca??o. Concluiu-se que as integrinas avaliadas podem estar envolvidas nas intera??es c?lula-c?lula e c?lula-MEC que garantem a diferencia??o celular e manuten??o do arranjo estrutural tecidual. A vari?vel express?o da integrina ?5?1 nas DEOs, poderia sugerir, respectivamente, um papel dessa mol?cula na sobrevida celular, com o intuito de perpetuar o fen?tipo alterado nessas les?es, ou uma a??o supressora desse fen?tipo devido ? falta de intera??o desta mol?cula com a fibronectina da MEC