A via de administração oral é a forma favorita de administração de fármacos em função das vantagens que apresenta, dentre elas destacam-se: a adesão do paciente, conveniência e praticidade. Em função disto, a maioria dos medicamentos comercializados encontra-se disponível na forma farmacêutica de administração oral, entretanto, o sucesso de um tratamento medicamentoso por esta via requer que a absorção gastrointestinal do fármaco seja suficiente para assegurar a sua disponibilidade no local de ação (VOLPE, 2010). No entanto, a absorção do fármaco no trato gastrointestinal é complexa e pode ser influenciada por vários fatores, os quais têm impacto sobre a dissolução, solubilidade e permeabilidade do fármaco. Com o intuito de aumentar a biodisponibilidade de fármacos, que possuem absorção dificultada pela via oral, a via de administração pela mucosa bucal vem sendo uma alternativa na atualidade farmacêutica. Esta mucosa é um tecido não queratinizado, altamente vascularizado e apresenta poucas enzimas metabolizadoras. Tais características possibilitam boa absorção de fármacos sem que ocorra a metabolização pré-sistêmica, ou efeito de primeira passagem, somando-se ao fato desta apresentar fácil acessibilidade para a administração de fármacos (VRIES, M. E et al., 1991; NIELSEN, H. M &RASSING, M. R, 1999). Nesse sentido, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a permeabilidade dos fármacos antirretrovirais (lamivudina e estavudina) por meio de modelo ex vivo em segmentos da mucosa bucal de suínos, com emprego de câmaras de difusão do tipo células de Franz. Para avaliação da permeabilidade bucal dos fármacos antirretrovirais, lamivudina e estavudina, e dos marcadores para transporte transcelular (metoprolol) e paracelular (fluoresceína sódica), empregou-se método ex-vivo, em células de Franz, com segmento de mucosa bucal de suíno ( a 37ºC, meio Ringer- Krebs- HEPES, pH 7,4), e Franz posterior análise das concentrações das substâncias permeadas (fármacos e marcadores) por cromatografia líquida de alta eficiência. Os resultados obtidos, por meio do protocolo desenvolvido, demonstram que o transporte através da via paracelular (marcador fluoresceína) foi mais expressivo que o transporte transcelular (marcador metoprolol), o que provavelmente se deve ao fato dos espaços intercelulares da mucosa bucal serem mais frouxos do que aqueles observados na mucosa intestinal (junções íntimas). Quanto à lamivudina e estavudina, os resultados de permeabilidade indicaram que estes fármacos permearam por mecanismo semelhante ao do metoprolol, isto é, por via transcelular. / The oral route of administration is the preferred mode of administration of drugs according to the advantages which features, among which stand out: patient compliance, convenience and practicality. Because of this, most of the marketed drug is available in pharmaceutical form for oral administration, however, the success of a drug therapy in this way requires that the drug intestinal absorption is sufficient to ensure their availability at the site of action (VOLPE, 2010). However, the drug absorption in the gastrointestinal tract is complex and may be influenced by various factors which have an impact on the dissolution, solubility and permeability of the drug. In order to increase the bioavailability of drugs, which have impeded absorption by oral route of administration from oral mucosa has been an alternative the pharmaceutical today. This mucosa is not keratinized tissue, highly vascular and shows metabolizing enzymes. These characteristics allow good absorption of drugs occurs without presystemic metabolism or first-pass effect, adding to the fact that this display easy accessibility for the administration of drugs (Vries, M. E et al, 1991;. NIELSEN, H. M & RASSING, M. R, 1999). In this sense, this study aimed to evaluate the permeability of antiretroviral drugs (lamivudine and stavudine) through ex vivo model segments of the oral mucosa of pigs with use of diffusion chambers type Franz cells. To evaluate the oral permeability of antiretroviral drugs, lamivudine and stavudine, and markers for transcellular transport (metoprolol) and paracellular (sodium fluorescein), used ex-vivo method, Franz cells, with buccal mucosa segment of swine ( at 37, through Krebs-Ringer- HEPES, pH 7.4) and Franz subsequent analysis of concentrations of the permeated substances (drugs and markers) by high-performance liquid chromatography. The results obtained using the protocol developed demonstrate that transport through the paracellular pathway (marker fluorescein) was higher than that transcellular transport (marker metoprolol), which probably is due to the intercellular spaces of the oral mucosa are looser than those observed in the intestinal mucosa (tight junctions). The lamivudine and stavudine, the permeability results indicate that these drugs permeated by a mechanism similar to that of metoprolol, by transcellular pathway.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-03-07Bitstream added on 2014-06-13T19:15:16Z : No. of bitstreams: 1 ferrari_jcl_me_arafo.pdf: 586190 bytes, checksum: 9d2b3e05fab36cdba127c98ead9b8910 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A cavidade oral é alvo freqüente dos efeitos tóxicos dos agentes antineoplásicos por apresentar tecidos com rápida divisão celular, comparável à dos tumores malignos. Uma das complicações orais mais freqüentes da quimioterapia é a mucosite, uma alteração de caráter inflamatório para a qual ainda não existe tratamento definido. Essa complicação oral provoca desconforto e dor severa, dificulta a alimentação e pode determinar a interrupção do tratamento antineoplásico. Considerando-se a relevância clínica da mucosite, é importante encontrar meios para tratá-la. O presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito do laser terapêutico na redução da incidência e da severidade da mucosite induzida em hamsters. O quimioterápico 5-FU foi aplicado em 60 animais nos dias 0 e 2 do experimento, nas doses de 90 e 60 mL/Kg de peso, respectivamente. Para simular o efeito de uma irritação crônica, as mucosas jugais dos animais foram escarificadas nos dias 3 e 4. Aplicou-se o laser terapêutico (InGaAlP, 683 nm, 12 J/cm2) em 5 pontos da mucosa jugal direita e esquerda de 30 animais (Grupo I), durante 7 dias. Os animais do Grupo II não receberam tratamento. O Grupo III (controle negativo) foi composto por 5 animais que não receberam o protocolo de indução de mucosite. Nos dias 0, 4, 8, 12 e 15 do experimento, as mucosas de 6 animais dos Grupos I e II foram removidas para avaliação histopatológica. A partir de fotografias tiradas diariamente, a mucosite foi classificada clinicamente. O teste de Mann-Whitney demonstrou haver diferenças estatisticamente significantes (p<0,05) entre o grupo tratado com laser e o grupo não tratado quando se comparou, clinica e histopatologicamente, a intensidade da mucosite induzida. Concluiu-se que a aplicação do laser de baixa intensidade, nos parâmetros determinados para este estudo, promoveu a redução... . / Toxic and dose-limiting effects of antineoplastic agents in oral cavity are frequently observed during cancer therapy. The available therapies are not able to destroy tumor cells without causing damage to the rapid dividing cells in normal tissues like the epithelial cells in the oral mucosa. Mucositis is the most debilitating side effect, for which there is no established treatment. This oral complication restricts intake of food and liquids, causes discomfort, severe pain and may determine interruption of the cancer therapy, interfering on the disease control. Considering the clinical significance of mucositis, it is important to find ways to treat this condition. The present study was conducted to evaluate the laser therapy effects on prevention or reduction of chemotherapy-induced mucositis in hamsters. Mucositis was induced in 60 animals with intraperitoneal injections of 5-fluorouracil (5-FU) on days 0 and 2, associated with cheek pouches scarification on days 3 and 4. Thirty animals (Group I) received laser irradiation at five points in each cheek pouch, for seven consecutives days. Laser parameters were set to 685 nm, 12 J/cm2 and 30 mW. Other 30 animals (Group II) received no treatment. In Group III, 5 animals represented the baseline control. The cheek pouches of 6 animals from Groups I and II were dissected for histophatological examination on days 0, 4, 8, 12, and 15. Daily photographs were taken and mucositis was clinically scored. The nonparametric test of Mann-Whitney showed statistical difference between treated and nontreated group (p<0.05). It was concluded that the low intensity laser therapy protocol established for this study reduced the severity of oral mucositis and accelerated the healing process, although it has not prevented the appearance of oral manifestations.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:13:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MariaGMS_DISSERT.pdf: 1866837 bytes, checksum: 91eb5257faab9e533844708d4ac24632 (MD5) Previous issue date: 2010-03-25 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Estudo transversal com o objetivo de identificar a preval?ncia de altera??es dos tecidos moles orais em pacientes portadores de Diabetes Mellitus (DM) tipo 2, utilizou-se a an?lise de vari?veis socioecon?micas, g?nero, hereditariedade, glicose capilar e fatores locais como uso de pr?tese e sensa??o de boca seca. A amostra constou de 196 pacientes diab?ticos e n?o-diab?ticos, arrolados do HIPERDIA em 41 Unidades da Rede B?sica de Sa?de na cidade de Natal-RN-Brasil. Os resultados encontrados para a ?ltima glicemia sangu?nea entre os diab?ticos teve m?dia de 177,0 mg/dl, e entre os n?o diab?ticos foi de 89,46 mg/dl; a glicemia capilar dos diab?ticos estava com m?dia elevada no valor de 215,95 mg/dl; enquanto que entre os n?o-diab?ticos foi de 102,31mg/dl. A presen?a da DM tipo 2 e a an?lise para o hist?rico familiar confirmou a hereditariedade da doen?a com 68,8% pacientes diab?ticos (n=66) (p<0,001), o grau do parentesco pelo pai ou m?e com 59,7% dos pacientes(n=40). A hipertens?o estava presente entre os dois grupos e o uso do tabaco teve resultado favor?vel ao abandono do uso do mesmo entre os grupos; a preval?ncia de fluxo salivar baixo nos diab?ticos foi de 49% (n=47) e nos pacientes n?o diab?ticos de 34% (n=34). A presen?a de candid?ase foi de 30,5% nos pacientes diab?ticos e nos pacientes n?o diab?ticos foi de 36%, sem significado estat?stico (p=0,23). As les?es encontradas situavam-se no palato para os dois grupos em 81,4% dos pacientes diab?ticos (n=35) e 71,1% dos pacientes n?o diab?ticos (n=27) (p=0,68). As altera??es orais encontradas n?o est?o relacionadas com a DM, que se apresentam independentes da presen?a ou n?o da DM tipo 2

Motivado pela crescente importância que os animais domésticos vêem causando na sociedade humana, tanto em relação à busca de melhor qualidade de vida, quanto em relação ao seu valor epidemiológico, visto que são poucos os estudos sobre este assunto, este trabalho objetivou-se em identificar e traçar o perfil de sensibilidade frente aos antífúngicos das espécies de leveduras potencialmente patogênicas isoladas da mucosa oral de cães sem raça definida, da cidade de Campinas, São Paulo. Por motivos de segurança, os animais selecionados foram anestesiados para a realização de exame clínico da cavidade oral e coleta de amostras da região de mucosa oral, seguida de inoculação em ágar Sabouraund dextrose com cloranfenicol. A partir do crescimento em placa, foram isoladas as colônias de fungos leveduriformes, submetidas a exames macromorfológicos e micromorfológicos, meio cromogênico, provas bioquímicas (urease e método API 20C AUX) e teste de sensibilidade aos antifúngicos. Dos 50 animais participantes do estudo, os cães com idade superior a 4 anos e os que apresentavam doença periodontal tiveram maior percentual de isolamento. Foram identificadas 43 leveduras das 45 amostras isoladas, sendo elas 86% (37) correspondentes ao gênero Candida spp, 11,6% (5) pertencentes ao gênero Trichosporon spp e 2,3% (1) do gênero Malassezia pachydermatis. O perfil de sensibilidade pelo método \"Etest\" identificou importante resistência de algumas amostras à antifúngicos rotineiramente utilizados na clínica médica veterinária, o que ressalta a importância da continuidade deste trabalho para o melhoramento da conduta clínica e para a explicação dos inúmeros tratamentos recidivos tanto em animais como em humanos. / Regarding the increasing impact that that the pets have been causing to the human society as its relation to the search for a better quality of life, and its relation with the epidemiological value, this study aimed to identify and draw the profile of the susceptibility to the antifungal drugs of the potentially pathogenic species of yeasts isolated from the oral canine mucosa of animals from indefinite breed of the city of Campinas, São Paulo. For their safety, the selected animals were anesthetized to have a short clinic exam of the oral cavity performed and to have samples from the oral mucosa collected. Later an inoculation in Sabouraud Dextrose Agar with chloramphenicol was performed. After the growth on a dish, colonies of fungi with yeast shape were isolated and submitted to macro morphological and micro morphological exams, chromogenous medium, biochemical proofs (urease and API 20C AUX method), and the test of the susceptibility to the antifungal drugs. Among the 50 animals taken part in the study, the dogs over 4 years old and those which presented periodontal diseases had a higher isolation percentage. Yeasts were identified 43 of the 45 isolates, being that 86%(37) were from the genus Candida spp, 11,6% (5) belonged to the genus Trichosporon spp., and 2,3% (1) belonged to the genus Malasseziapachydermatis.The susceptibility profile through the \"Etest®\" method identified a relevant resistance of some strains to the antifungal drugs commonly used in the veterinary medical clinic. This found highlights the relevance of the continuity of this study to improve the clinical conduct and to explain many relapse treatments in both animals and humans.

A via de administração oral é a forma favorita de administração de fármacos em função das vantagens que apresenta, dentre elas destacam-se: a adesão do paciente, conveniência e praticidade. Em função disto, a maioria dos medicamentos comercializados encontra-se disponível na forma farmacêutica de administração oral, entretanto, o sucesso de um tratamento medicamentoso por esta via requer que a absorção gastrointestinal do fármaco seja suficiente para assegurar a sua disponibilidade no local de ação (VOLPE, 2010). No entanto, a absorção do fármaco no trato gastrointestinal é complexa e pode ser influenciada por vários fatores, os quais têm impacto sobre a dissolução, solubilidade e permeabilidade do fármaco. Com o intuito de aumentar a biodisponibilidade de fármacos, que possuem absorção dificultada pela via oral, a via de administração pela mucosa bucal vem sendo uma alternativa na atualidade farmacêutica. Esta mucosa é um tecido não queratinizado, altamente vascularizado e apresenta poucas enzimas metabolizadoras. Tais características possibilitam boa absorção de fármacos sem que ocorra a metabolização pré-sistêmica, ou efeito de primeira passagem, somando-se ao fato desta apresentar fácil acessibilidade para a administração de fármacos (VRIES, M. E et al., 1991; NIELSEN, H. M &RASSING, M. R, 1999). Nesse sentido, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a permeabilidade dos fármacos antirretrovirais (lamivudina e estavudina) por meio de modelo ex vivo em segmentos da mucosa bucal de suínos, com emprego de câmaras de difusão do tipo células de Franz. Para avaliação da permeabilidade bucal dos fármacos antirretrovirais, lamivudina e estavudina, e dos marcadores para transporte transcelular (metoprolol) e paracelular (fluoresceína sódica), empregou-se método ex-vivo, em células de Franz, com segmento de mucosa bucal de suíno ( a 37ºC, meio Ringer- Krebs- HEPES, pH 7,4), e Franz posterior análise das concentrações das substâncias permeadas (fármacos e marcadores) por cromatografia líquida de alta eficiência. Os resultados obtidos, por meio do protocolo desenvolvido, demonstram que o transporte através da via paracelular (marcador fluoresceína) foi mais expressivo que o transporte transcelular (marcador metoprolol), o que provavelmente se deve ao fato dos espaços intercelulares da mucosa bucal serem mais frouxos do que aqueles observados na mucosa intestinal (junções íntimas). Quanto à lamivudina e estavudina, os resultados de permeabilidade indicaram que estes fármacos permearam por mecanismo semelhante ao do metoprolol, isto é, por via transcelular. / The oral route of administration is the preferred mode of administration of drugs according to the advantages which features, among which stand out: patient compliance, convenience and practicality. Because of this, most of the marketed drug is available in pharmaceutical form for oral administration, however, the success of a drug therapy in this way requires that the drug intestinal absorption is sufficient to ensure their availability at the site of action (VOLPE, 2010). However, the drug absorption in the gastrointestinal tract is complex and may be influenced by various factors which have an impact on the dissolution, solubility and permeability of the drug. In order to increase the bioavailability of drugs, which have impeded absorption by oral route of administration from oral mucosa has been an alternative the pharmaceutical today. This mucosa is not keratinized tissue, highly vascular and shows metabolizing enzymes. These characteristics allow good absorption of drugs occurs without presystemic metabolism or first-pass effect, adding to the fact that this display easy accessibility for the administration of drugs (Vries, M. E et al, 1991;. NIELSEN, H. M & RASSING, M. R, 1999). In this sense, this study aimed to evaluate the permeability of antiretroviral drugs (lamivudine and stavudine) through ex vivo model segments of the oral mucosa of pigs with use of diffusion chambers type Franz cells. To evaluate the oral permeability of antiretroviral drugs, lamivudine and stavudine, and markers for transcellular transport (metoprolol) and paracellular (sodium fluorescein), used ex-vivo method, Franz cells, with buccal mucosa segment of swine ( at 37, through Krebs-Ringer- HEPES, pH 7.4) and Franz subsequent analysis of concentrations of the permeated substances (drugs and markers) by high-performance liquid chromatography. The results obtained using the protocol developed demonstrate that transport through the paracellular pathway (marker fluorescein) was higher than that transcellular transport (marker metoprolol), which probably is due to the intercellular spaces of the oral mucosa are looser than those observed in the intestinal mucosa (tight junctions). The lamivudine and stavudine, the permeability results indicate that these drugs permeated by a mechanism similar to that of metoprolol, by transcellular pathway.

A poluição atmosférica vem recebendo crescente atenção como problema de saúde pública, pois representa uma fonte de agentes que podem promover o stress oxidativo e danos ao DNA, levando a efeitos cancerígenos e mutagênicos. As vias aéreas superiores, incluindo a cavidade oral são as áreas mais expostas do sistema respiratório, a material particulado e gases, e podem ser facilmente acessadas para monitorar a exposição humana a estes agentes. Nosso objetivo foi analisar o impacto da poluição do ar sobre a incidência de mutagénese em habitantes de nossa cidade. Para o estudo da mutagênese, utilizamos o teste de micronucleous (Mn), em células do epitélio da mucosa oral. Uma média de 4 a 6 amostras foram coletadas de cada voluntário, que concordou em participar do estudo, em São Paulo (SP) (n = 39) e, em Peruibe (PER), uma pequena cidade à beira-mar (n = 24), utilizados como um grupo controle. Os níveis de material particulado (PM10) foram medidos pelo método gravimétrico, e o ozônio e NO2 foram medidos pelos amostradores passivos, bem como pelas medições realizadas pela CETESB no mesmo local da coleta. Os resultados expostos em relação à concentração de MN / células, mostraram uma diferença estatisticamente significativa comparando SP (0042 ± 0032) e Per (0023 ± 0019), p = 0,009. Um aumento de MN / células foi observado em fumantes comparados aos não fumantes em SP (0055 ± 0012 e 0.040 ± 0005), p< 0,001 e em Per (0,0268 ± 0,00167 and 0,0181 ± 0,00128), p<0,001. Nosso estudo confirma os efeitos da poluição do ar na promoção de mutagênese e sugere possível sinergismo entre poluição e tabagismo / Air pollution is receiving crescent attention as a public health problem, as it represents a source of agents that may promote oxidative stress and DNA damage, leading to mutagenic and carcinogenic effects. The upper airways, including the oral cavity are the most exposed areas of the respiratory system to airborne particles and gases, and can be easily accessed to monitor human exposure to these agents. Our aim was to analyze the impact of air pollution on the incidence of mutagenesis in habitants of our city. To address mutagenicity, we used the micronucleous (mn) assay in desquamated cells of the oral mucosa. An average of 4 to 6 samples were collected from each subject that agreed to participate in the study in Sao Paulo (SP) (n=39) and in Peruibe (Per), a small city by the sea, (n=24) used as a control group. The levels of particulate (PM10) were measured by gravimetric methodology, ozone and NO2 were measured by passive monitors as well as by governmental monitoring stations in each location. The results exposed as mn/cells showed a statistically significant difference comparing SP (0,042 ± 0,032) and Per (0,023 ± 0,019), p= 0,009. An increase in mn/cells was observed in smokers compared to non smokers in SP (0,055 ± 0,012 and 0,040 ± 0,005), p<0,001 and in Peruíbe (0, 0268 ± 0,00167 and 0,0181 ± 0,00128), p<0,001. Our study confirms the hazardous effects of air pollution promoting mutagenesis and suggests that its effects may be synergic to smoking habit. We hope that our work may influence habits and public politics in order to improve public health in this issue

RESUMO A grande prevalência de câncer bucal está relacionada à ação de agentes e de fatores físicos e químicos. As substâncias químicas têm grande importância na indução de cânceres em humanos. Existe grande preocupação em relação aos agentes clareadores à base de peróxido de carbamida a 10%, usados com freqüência na técnica de clareamento caseiro de dentes vitalizados. A preocupação deve-se ao potencial carcinogênico dessas substâncias. Com o efeito somatório sobre as células, toda e qualquer substância deve ser avaliada quanto ao seu potencial carcinogênico sobre a mucosa bucal. Com a intenção de avaliar a proliferação celular nos carcinomas epidermóides desenvolvidos no modelo DMBA-indução associado ao peróxido de carbamida 10%, utilizou-se um dos marcadores biológicos de proliferação celular, que é o método histoquímico pela técnica AgNOR. Foram avaliados quantitativamente os carcinomas epidermóides desenvolvidos no modelo DMBA-indução + peróxido de carbamida 10%, observando-se que: nos grupos I, II, III e VII, onde não houve proliferação celular compatível com alteração neoplásica, o número de ocorrências de NORs/núcleo foi menor que nos demais grupos; no grupo IV (DMBA), o número de ocorrência de NORs/núcleo foi menor que nos grupos V e VI (peróxido de carbamida 10% + DMBA). O número de ocorrência de NORs/núcleo foi maior nos grupos V (DMBA + Opalescence) e VI (DMBA + White & Brite), em que foram desenvolvidos carcinomas, caracterizando maior proliferação das células e maior grau de malignidade dos carcinomas epidermóides desenvolvidos. Tais conclusões evidenciaram que a proliferação celular nos grupos associados (clareadores + DMBA) foi mais intensa que no grupo do carcinógeno (DMBA), possivelmente pelo efeito promotor dos agentes clareadores. Observou-se uma ação promotora dos clareadores dentais à base de peróxido de carbamida 10% no modelo estudado, com capacidade para potencializar carcinógenos, levando a um possível desenvolvimento neoplásico. / SUMMARY Oral squamous cell carcinoma is the mouth most prevalent malignancy, accouting for more than 90% of all oral malignancies. It also known that the development of oral cancer has a strong relationship with chemical and physical action of some agents that are in daily contact with oral mucosa as drugs, food, alcohol, tobacco and environmental factors. Oral carcinogenesis has a cumulative effect upon cells, every substance with potential risk of evidencing this malignant process showed be evaluated. The concern is about carcinogenic potential this chemical bleaching agents in the proliferation cells. The bleaching agents containing 10% carbamide peroxide are often used for vital teeth home bleaching and there is the risk of tissue damage from ingestion of the substance and contact with the oral mucosa during the bleaching process. The current study involve the evaluation of the cell proliferation and squamous cell carcinomas development in DMBA induction-model + 10% carbamide peroxide using biologic markers in the detection of incipient cellular alterations with histochemical method AgNOR, to investigate the relationship between the number of interphase silver-stained nucleolar organizer regions (AgNORs). The numbers of the NORs can be related to proliferative activity and the degree of the developed malignancy tumours. The quantitative analysis of the number of the NORs in the group I (acetone), II (Opalescence), III (White & Brite) and VII (destiled water) showed no cells proliferation compatible with neoplasic alterations. The occurrence of the number per nucleus was less than in the others groups. The groups IV (carcinogen DMBA), V (DMBA + 10% carbamide peroxide - Opalescence), VI (DMBA + 10% carbamide peroxide - White & Brite) showed the development micro-invasive and invasive carcinomas. The occurrence of the number of the NORs/nucleus was greater in those three groups than in the groups without carcinomas. The groups V (DMBA + Opalescence) and VI (DMBA + White & Brite) developed a greater of the occurrence of the number of the NORs per nucleus than in the group IV (DMBA). In the groups V and VI with developed invasive carcinomas showed growth cells proliferation and increase in the rate of the malignancy in the squamous cells carcinomas developed. This showed an cell proliferation of the groups (DMBA + 10% carbamide peroxide) is more intensive than in the group IV, probably by promoter effect of the bleaching agents. It was concluded that the bleaching agents based on 10% carbamide peroxide used in this study model, has a enhance promoter action, with capacity for carcinogens pottentialy and developed neoplasic alterations.

Muitas doenças genéticas permanecem ainda sem sua causa definida. A dificuldade de estudar algumas dessas doenças remontam a problemática da obtenção de material clinico, sugerindo situações extremas para a coleta, dependendo da patologia. Além disso, é necessário que se obtenha material genético em quantidade adequada para os ensaios e que, de preferência, venha de uma fonte celular que não esteja diretamente exposta a mutações. Nesse trabalho estabelecemos o cultivo inédito das células epiteliais de mucosa oral como modelo celular para o estudo de doenças genéticas. As amostras foram coletadas através da raspagem da mucosa oral de voluntários saudáveis. Após estabelecimento do cultivo, as células foram caracterizadas em relação à sua morfologia através de técnica de colorações, ensaios para analisar a viabilidade celular, microscopia eletrônica de transmissão e varredura, analise da expressão de marcadores por imunocitoquímica e por RT-PCR. Os resultados revelaram a expressão de marcadores como citoquetaratinas 4, 13 e 18, conexinas e marcadores de ciclo celular, como PCNA3 e GAPDH. A expressão de marcadores de pluripotência foi negativa, já que essas células são adultas e totalmente diferenciadas. Com a realização deste trabalho, concluímos que essas células são um bom modelo para o estudo de doenças genéticas e futuras terapias gênicas. / Many genetic diseases are still without their cause defined. The difficulty in studying these diseases back to the problem of obtaining clinical material, suggesting extreme situations for the collection, depending on the pathology. Moreover, it is necessary to obtain genetic material in sufficient quantities for testing and preferably come from a cellular source that is not directly exposed to mutations. This work established for the first time, a protocol for culturing of epithelial cells from oral mucosa as a cellular model for studying genetic diseases. The samples were collected by scraping the oral mucosa of healthy volunteers. After the establishment of cultivation, cells were characterized for their morphology by staining technique, tests to analyze cell viability, transmission electron microscopy and scanning, analysis of expression of markers by immunocytochemistry and RT-PCR. The results revealed the expression of markers such as citoquetaratinas 4, 13 and 18, connexins and cell cycle markers, as PCNA3 and GAPDH. The expression of pluripotency markers were negative, as these cells are adult and fully differentiated. With this work, we conclude that these cells are a good model for studying genetic diseases and future gene therapies.

Atualmente reagrupou-se sob o nome de subnutrição calórico-protéica uma série de afecções de carência antigamente descritas com diversos nomes e que tinham uma etiologia comum, a insuficiência alimentar, acarretando, ao mesmo tempo um emagrecimento e um esgotamento progressivo do estoque de proteínas do organismo. A partir de alterações na quantidade e qualidades dos alimentos ingeridos, o organismo busca regular seu metabolismo visando atingir a homeostase, na qual os hormônios desempenham papel fundamental. Dessa maneira, a desnutrição protéica e a secreção de insulina foram aqui correlacionados na avaliação morfológica e funcional do epitélio oral, representando, respectivamente, grave alteração nutricional (à semelhança da que acomete a população, especialmente, de países subdesenvolvidos e em desenvolvimento) e resposta produzida pela alteração do metabolismo energético das células. Os fatores de crescimento insulino-símile tipos 1 e 2 (IGF-I e IGF-II) são os principais fatores endócrinos determinantes do crescimento fetal. A maioria das ações conhecidas do IGF-I é mediada via um receptor tirosina-quinase, conhecido como IGF-IR. Recentemente, a insensibilidade ao IGF-I foi identificada como uma das causas de retardo de crescimento sem recuperação espontânea do desenvolvimento na vida pós-natal. Sendo assim, o presente trabalho tem o objetivo de estudar, através de métodos morfométricos, na mucosa palatina de ratos Wistar na fase púbere submetidos à desnutrição protéica pré e pós-natal e a renutrição pós-natal, o padrão celular e o componente colágeno da lâmina própria, bem como a expressão do IGF-I, do IGF-IR e da insulina e seu receptor, no intuito de encontrar possível correspondência entre as alterações metabólicas e morfofuncionais, decorrentes da depleção protéica. Para tanto, foram formados os seguintes grupos experimentais constituídos por animais heterogênicos (n=3) de acordo com a ração oferecida, protéica ou hipoprotéica: nutridos (N) e desnutridos (D) com 60 dias de idade, por ser essa a fase do final do período púbere, e renutridos (R), formado por animais do grupo D que, a partir do 21º dia (época do desmame) foram submetidos à ração protéica até atingirem 60 dias de idade. Os espécimes foram processados rotineiramente para microscopia de luz (HE, Azo-carmin e Pircro-sírius) e para imunohistoquímica (IGF-I, IGF-IR e insulina e seu receptor) e os dados morfoquantitativos analisados estatisticamente. Os resultados demonstraram que os parâmetros metabólicos tais como: alimentar, massa corporal, excreção de fezes, urina e ingestão de água, diferiram em todos os grupos semana após semana (S1&#8800;S2&#8800;S3&#8800;S4&#8800;S5&#8800;S6). A densidade de células epiteliais fora constatada pelo método de coloração H.E. e imunomarcadas com insulina e IGF-I e seus respectivos receptores. A subnutrição determinou um aumento significativo de células reativas a insulina (I) e seu receptor (IR) em relação ao grupo renutrido e nutrido (I: S &#8800;R; p<0.05) e (IR: S&#8800;N; S&#8800;R; p<0.05). O grupo R não obeteve aumento significativo de células imunomarcadas, assim, diferiu significativamente em relação ao grupo N para os hormônios IGF-I e seu receptor IGF-IR (R&#8800;N;p<0.05). O número de células da mucosa palatina modifica-se pouco na fase púbere e o seu desenvolvimento normal é sensível à depleção protéica, de modo que o tecido não é capaz de responder ao restabelecimento protéico. / Currently it has been grouped and named protein-caloric under nutrition a series of deficiency described in the past under several denominations with similar etiology, the food deficiency which leads simultaneously to a weight loss and progressive decrease of protein storage in the body. From the changes in the quantity and quality of ingested food, the organism tries to regulate its metabolism in order to homeostasis, in which the hormones play a fundamental role. This way, the protein under nutrition and the insulin secretion were here correlated in the morphological and functional evaluation of the oral epithelium representing high nutritional change (similarly to one which affect people specially from under developed countries) and response produced by changes in the energetic metabolism of the cells respectively. The grown factors insuline-símile type 1 and 2 (IGF-I and IGF-II) are the principal endocrine factors which determine the fetal growth. Many known actions of the IGF-I are mediated via tyrosine-kinase receptor known as IGF-IR. Recently, the insensibility to IGF-I was identified as one of the reason for the regrowth without abrupt recovery of the development in the post-natal life. Therefore, the present work aims to study, the cellular standard and the collagen of lamina propria, as well as the expression of the IGF-I, of the IGF-IR and the insulin and its receptor, using morphometric methods in the palatine mucosa of wistar rats in the pubertal phase subject to protein under nutrition pre and post natal and post-natal re-feeding with the objective of finding possible association between metabolic and morph functional changes coming from protein depletion. For this purpose, the following experimental groups were formed: heterogenic animals (n=3) according to the diet offered protein or hyperprotein diet: nourished (N) and undernourished (D) with 60 days of age (finish of pubertal phase), and re-nourished (R), formed by animals of D group that, from the 21st day (weaning day) were subject to protein diet up to 60 days of age. The specimens were processed routinely for light microscopy (HE, Azo-carmin and Pircro-sírius) and for immunohistochemistry (IGF-I, IGF-IR and insulin and its receptor) and the morph quantitative data statistically analyzed. The results demonstrate that the metabolic parameters such as: food, body mass, feces excretion, urine and water ingestion differ in all groups weekly (S1&#8800;S2&#8800;S3&#8800;S4&#8800;S5&#8800;S6). The density of epithelial was observed by HE method and immune-marked with insulin and IGF-I and their respective receptors. The under nutrition determined a significant increase of the cells reacting to insulin (I) and its receptor (IR) in relation to re-nourished and nourished groups (I: S &#8800;R; p<0.05) and (IR: S&#8800;N; S&#8800;R; p<0.05). No significant increase of immune-marked cells was observed in the R group, thus, differing significantly when comparing to N group for the hormones IGF-I and its receptor IGF-IR (R&#8800;N;p<0.05). The number of palatine mucosal cells has changed little in the pubertal phase and its normal development is sensitive to protein depletion, so the tissue cannot respond to the protein replacement.

Submitted by Vasti Diniz (vastijpa@hotmail.com) on 2017-09-04T14:53:59Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1981370 bytes, checksum: 073d461bd0c895a458664955c646a988 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-04T14:53:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1981370 bytes, checksum: 073d461bd0c895a458664955c646a988 (MD5) Previous issue date: 2016-03-18 / Epigenetic is the study of inherited and reversible changes in functional genome that do not alter the sequence of nucleotide bases. Modulate gene expression mainly by interference of external factors, such as smoking. MicroRNAs are a family of small post transcriptional regulatory RNAs genes which expression can also be controlled by DNA methylation.The aim of this study was to investigate the influence of smoking on the methylation and hydroxymethylation status of global DNA and specific sites of miR-9-3 and miR-137 genes in the healthy oral mucosa. Samples of oral epithelial cells were collected using mouthwash from a population of 95 individuals who were divided into three groups according to smoking status: never (n=30), current (n=29) and former smokers (n=36). Genomic DNA was extracted, and global DNA methylation and hydroxymethylation was performed using an ELISA-based technique; DNA methylation at specific sites of miR-9-3 and miR-137 was performed using methylation-specific PCR. Higher levels of global DNA methylation were found in current smokers with over 15 years of consumption, but no differences were found in relation to global DNA hydroxymethylation. Global DNA methylation was higher than the hydroxymethylation level but they were not correlated in the oral mucosa. For specific sites, the miR-137 promoter had partially methylated DNA in all groups and miR-9-3 hypomethylation was detected in current smokers in comparison to never and former smokers. There were no differences in epigenetic marks analyzed in relation to gender and age. We concluded that smoking habits were capable of inducing changes in global DNA methylation and miR-9-3 promoter methylation status. / Epigenética é o estudo das mudanças herdadas e reversíveis no genoma funcional que não alteram a sequência de bases nucleotídicas. Modulam a expressão gênica principalmente por interferência de fatores externos, como o tabagismo. Os microRNAs constituem uma família de pequenos RNAs reguladores pós transcripcionais da expressão gênica também controlados pela metilação do DNA. O objetivo deste estudo foi investigar a influência do fumo sobre o perfil de metilação e hidroximetilação global do DNA, e o perfil de metilação em sítios específicos dos genes miR-9-3 e miR-137 na mucosa bucal de indivíduos sem alterações clínicas visíveis. Para tanto, amostras de células bucais foram obtidas por bochecho de 95 indivíduos, os quais foram divididos em três grupos de acordo com o hábito de fumar: não fumantes (n=30), fumantes (n=29) e ex-fumantes (n=36). O DNA genômico foi extraído e a análise da metilação e hidroximetilação global foi realizada pelo teste ELISA e a metilação nos sítios específicos dos genes pela técnica de PCR específica para metilação. As análises estatísticas foram realizadas pelo software BioEstat 5.0 ao nível de significância de 5%. Os dados mostraram que indivíduos fumantes por um período superior a 15 anos apresentaram maior nível de metilação global que não fumantes e ex-fumantes. Não foram detectadas diferenças em relação ao nível de hidroximetilação global entre os grupos. O nível de metilação global apresentou-se maior quando comparado ao nível de hidroximetilação global, porém esses níveis não estão correlacionados na mucosa oral. Em relação aos sítios específicos, o gene miR-137 apresentou-se parcialmente metilado em todos os grupos, e o miR-9-3 mostrou uma tendência a hipometilação no grupo de indivíduos fumantes em comparação aos não fumantes e ex-fumantes. Não foram observadas diferenças nas marcas epignéticas analisadas em relação a gênero e idade. Conclui-se que o hábito de fumar pode modificar o perfil de metilação global do DNA e no promotor do gene miR-9-3.