Diss. (sammanfattning) Uppsala : Univ., 2001. / Härtill 4 uppsatser.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / A NEM1 à uma sÃndrome rara com padrÃo de transmissÃo autossÃmico dominante, causada por uma mutaÃÃo que inativa o gene MEN1 (gene supressor tumoral). Define-se sua presenÃa pela ocorrÃncia associada de dois dos trÃs principais tumores endÃcrinos relacionados à NEM-1: hiperparatireoidismo primÃrio (HPT), adenomas hipofisÃrios (AH) e tumores gastroenteropancreÃticos (TEPs) secretores ou nÃo. O gene MEN1, envolvido nessa sÃndrome, consiste de 10 exons (exon 1 e 832 bases do exon 10 nÃo sÃo traduzidos), codificando uma proteÃna que contem 610 aminoÃcidos, denominada MENIN. Mais de 459 diferentes mutaÃÃes germinativas jà foram identificadas em famÃlias com NEM1. Um total de 8 famÃlias e 2 casos esporÃdicos foram estudados, perfazendo um total de 33 pacientes com NEM1. Foram coletados 4mL de sangue perifÃrico para extraÃÃo de DNA e RNA utilizando os kits QIAamp DNA Blood Mini e QIAamp RNA Blood Mini, respectivamente, ambos da QIAGENÂ. Os nove exons da regiÃo codificadora do gene MEN1 foram amplificados por PCR e submetidos, apÃs purificaÃÃo, à reaÃÃo de sequenciamento. Em seguida as amostras foram analisadas atravÃs de eletroforese capilar. As sequÃncias geradas foram analisadas utilizando o software CondonCode Aligner, afim de traÃar um perfil mutacional. As amostras de RNA foram convertidas em cDNA e analisadas em PCR tempo real. A idade mÃdia dos pacientes estudados foi de 40,7Â12,7 anos, onde a prevalÃncia dos tumores associados a NEM1 foi: HPT, 87,8% (29/33); adenoma hipofisÃrio, 81,8% (27/33); TEPs, 54,5% (18/33); outros tumores associados a NEM1, 63,6% (21/33). Como primeira manifestaÃÃo nesses pacientes, os adenomas hipofisÃrios prevaleceram, ocorrendo em 57,5% (19/33). ApÃs sequenciamento automÃtico de toda a regiÃo codificadora do gene MEN1, foram encontradas mutaÃÃes germinativas em sete famÃlias portadoras de NEM1 estudadas e em um dos casos esporÃdicos. TrÃs diferentes mutaÃÃes foram identificadas, estando presentes nos exons 3 e 6: duas do tipo misssense (mutaÃÃes pontuais), c.597 C>T (H199H) e c.830 C>G (P277R); e uma do tipo splice-site (mutaÃÃes nas regiÃes de junÃÃo exon-intron), c.654 +1 G>T (IVS3+1G→T). NÃo foi possÃvel estabelecer uma associaÃÃo entre genÃtipo-fenÃtipo nesses pacientes portadores de NEM1. Foram observadas diferenÃas no perfil de expressÃo. O gene MEN1, nos pacientes com NEM1 estudados, estava regulado negativamente, quando comparado ao grupo controle. / MEN-1 is a rare autosomal dominantly inherited syndrome caused by a mutation that inactivates the MEN1 gene (tumor suppressor gene). The clinical manifestation of MEN-1 is defined by the associated occurrence of at least two of the three main endocrine tumors related to MEN1: primary hyperparathyroidism (PHP), pituitary adenoma (PA) and gastroenteropancreatic tumors (GEPs). The MEN1 gene, involved in the syndrome, consists of 10 exons (exon 1 and 832 bases of exon 10 are not translated) encoding a protein that contains 610 amino acids called MENIN. Over 459 different germline mutations have been identified in families with MEN1. A total of eight families and two sporadic cases were studied, resulting in 33 patients with MEN1, with 31 familiar MEN1 and two sporadic MEN1. Four milliliters of peripheral blood were collected for DNA and RNA extraction using the QIAamp DNA Blood Mini and QIAamp RNA Blood Mini Kits from QIAGENÂ. Each of the nine coding exons of the MEN1 gene was amplified by the Polymerase Chain Reaction (PCR). The PCR products were purified and standard protocols were used for cycle sequencing. Sequences were determined after capillary electrophoresis and analyzed using the software CondonCode AlignerÂ, in order to draw a mutational profile. RNA samples were converted into cDNA and analyzed in real time PCR. The average age of patients was 40.7  12.7 years, and the prevalence of tumors associated with MEN1 was: PHP, 87.8% (29/33), pituitary adenoma, 81.8% (27/33); GEPs, 54.5% (18 / 33), other tumors associated with MEN1, 63.6% (21/33). As the first manifestation in these patients, the pituitary adenomas prevailed, occurring in 57.5% (19/33). After automated sequencing of the entire coding region of the MEN1 gene, germline mutations were found in seven MEN1 families and in one of the sporadic cases. Three different mutations were identified: two missense mutations, c.597 C>T (H199H) e c.830 C>G (P277R); and one splice-site mutation, c.654 +1 G>T (IVS3+1G→T). We could not find any association between genotype-phenotype in these MEN1 patients. Differences in the gene expression profile were observed. The MEN1 gene in the studied patients was down regulated, when compared to healthy individuals.

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Uppsala universitet, 2007. / Härtill 4 uppsatser.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2004. / Härtill 4 uppsatser.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-07Bitstream added on 2014-06-13T18:43:12Z : No. of bitstreams: 1 nunes_vs_dr_botfm.pdf: 1297313 bytes, checksum: 470ba33e35f9a75851e361e40639894a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A Neoplasia Endócrina Múltipla tipo 1 (MEN1; OMIM 131100) é uma doença genética, herdada de forma autossômica dominante, caracterizada pela presença de tumores em pelo menos dois dos seguintes tecidos endócrinos: paratireóide, enteropancreático e adenohipófise. Além destes componentes maiores, tumores adrenocorticais, carcinóides, lipomatose, angiofibroma e colagenoma facial têm sido associados. Trata-se de uma síndrome rara com uma prevalência estimada de 2-3/100000 indivíduos, causada por mutações inativadoras no gene MEN1. Este, por sua vez, codifica uma proteína chamada menin, que tem demonstrado interagir com diversas proteínas envolvidas em processos celulares essenciais, como controle do crescimento e ciclo celular, reparo de DNA, regulação da transcrição gênica, regulação estabilidade genômica, e controle da apoptose. A identificação do gene MEN1 possibilitou a detecção de mutações causadoras da doença e, com isto, a confirmação do diagnóstico clínico em pacientes acometidos, bem como o diagnóstico precoce em familiares assintomáticos. É preconizada a pesquisa dos principais tumores associados a MEN1 em pacientes já com o diagnóstico da síndrome ou nos portadores da mutação, mas a abordagem inversa que é a investigação da MEN1 em pacientes com diagnóstico inicial apenas de um dos principais tumores associados tem sido pouco explorada. Por isto, esta pesquisa consistiu em... / Multiple endocrine neoplasia type 1 (MEN1; OMIM 131100) is a genetic disease, inherited in the dominant autosomal form and characterized by the presence of tumors in at least two of the following endocrine tissues: parathyroid, enteropancreatic and adenopituitary. Besides the aforementioned major components, adrenocortical and carcinoid tumors, lipomas, collagenomas and facial angiofibromas have been associated with the disease. MEN1 is a rare disease, with an estimated prevalence of 2-3/100000 individuals; it is caused by inactivated mutations of the MEN1 gene. This gene encodes one protein called menin, which has been shown to interact with a number of proteins that are involved in essential cell processes such as cell division and proliferation, DNA repair, transcriptional regulation, genome stability, and apoptosis control. The MEN1 gene identification has enabled the detection of MEN1 mutations and the confirmation of the disease’s clinical diagnosis as well as its early diagnosis in asymptomatic relatives. The screening of these principal tumors associated with MEN1 has been recommended in patients with MEN1 syndrome or MEN1 mutation. However, the inverse approach (i.e., the investigation of MEN1 in patients with an initial diagnosis of only one of the principal tumors) has been little explored. For this reason, the present study aimed to evaluate the frequency of MEN1 in a group the patients with pituitary adenoma (PA), and to identify, in these individuals, variables... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Célia Regina Nogueira / Banca: Cesar Luiz Boguszewski / Banca: Fernando Rodrigues Pimentel Filho / Banca: Glaucia M. F. S. Mazeto / Banca: Evandro de Souza Portes / Resumo: A Neoplasia Endócrina Múltipla tipo 1 (MEN1; OMIM 131100) é uma doença genética, herdada de forma autossômica dominante, caracterizada pela presença de tumores em pelo menos dois dos seguintes tecidos endócrinos: paratireóide, enteropancreático e adenohipófise. Além destes componentes maiores, tumores adrenocorticais, carcinóides, lipomatose, angiofibroma e colagenoma facial têm sido associados. Trata-se de uma síndrome rara com uma prevalência estimada de 2-3/100000 indivíduos, causada por mutações inativadoras no gene MEN1. Este, por sua vez, codifica uma proteína chamada menin, que tem demonstrado interagir com diversas proteínas envolvidas em processos celulares essenciais, como controle do crescimento e ciclo celular, reparo de DNA, regulação da transcrição gênica, regulação estabilidade genômica, e controle da apoptose. A identificação do gene MEN1 possibilitou a detecção de mutações causadoras da doença e, com isto, a confirmação do diagnóstico clínico em pacientes acometidos, bem como o diagnóstico precoce em familiares assintomáticos. É preconizada a pesquisa dos principais tumores associados a MEN1 em pacientes já com o diagnóstico da síndrome ou nos portadores da mutação, mas a abordagem inversa que é a investigação da MEN1 em pacientes com diagnóstico inicial apenas de um dos principais tumores associados tem sido pouco explorada. Por isto, esta pesquisa consistiu em... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Multiple endocrine neoplasia type 1 (MEN1; OMIM 131100) is a genetic disease, inherited in the dominant autosomal form and characterized by the presence of tumors in at least two of the following endocrine tissues: parathyroid, enteropancreatic and adenopituitary. Besides the aforementioned major components, adrenocortical and carcinoid tumors, lipomas, collagenomas and facial angiofibromas have been associated with the disease. MEN1 is a rare disease, with an estimated prevalence of 2-3/100000 individuals; it is caused by inactivated mutations of the MEN1 gene. This gene encodes one protein called menin, which has been shown to interact with a number of proteins that are involved in essential cell processes such as cell division and proliferation, DNA repair, transcriptional regulation, genome stability, and apoptosis control. The MEN1 gene identification has enabled the detection of MEN1 mutations and the confirmation of the disease's clinical diagnosis as well as its early diagnosis in asymptomatic relatives. The screening of these principal tumors associated with MEN1 has been recommended in patients with MEN1 syndrome or MEN1 mutation. However, the inverse approach (i.e., the investigation of MEN1 in patients with an initial diagnosis of only one of the principal tumors) has been little explored. For this reason, the present study aimed to evaluate the frequency of MEN1 in a group the patients with pituitary adenoma (PA), and to identify, in these individuals, variables... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientadores: Laura Sterian Ward, Janete Cerutti / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-20T07:05:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barbieri_RaquelBueno_M.pdf: 1118684 bytes, checksum: aea72fb3df76b68d6756c422b46ffc56 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Polimorfismos de genes baixa penetrância têm sido consistentemente associados com a suscetibilidade a uma série de tumores humanos, incluindo o câncer de tireóide. A fim de determinar seu papel no carcinoma medular de tireóide (CMT), foi utilizado o método TaqMan® SNP Genotyping em 138 pacientes com CMTH, 47 pacientes com CMT-s e um grupo controle de 578 indivíduos para genotipagem dos polimorfismos CYP1A2*F (rs762551), CYP1A1m1 (rs4646903), NAT2 C282T (rs1041983), GSTP1 codon 105 (rs1695), TP53 codon 72 (rs1042522). Este estudo demonstrou uma associação entre a presença de alelos polimórficos de CYP1A2*F, GSTP1 e NAT2 e o desenvolvimento de CMTH. A herança do alelo C em homozigose do gene CYP1A 2*F influencia o desenvolvimento de CMTH em mais de 2 vezes. Pacientes que apresentaram o alelo T em homozigose para o gene NAT2 possuem uma probabilidade 3 vezes maior para o desenvolvimento de CMTH e os indivíduos que herdaram o alelo G do gene GSTP1 em homozigose apresentam maior probabilidade de desenvolvimento de CMTH. Uma análise estatística de regressão logística, ajustada para sexo, idade, etnia, tabagismo e os genes CYP1A*F, CYP1A1m1, NAT, GSTP1 e TP53 para os pacientes com CMTH demonstrou que, quando considerado o tamanho do tumor como estimativa de agressividade, o sexo masculino apresentou-se como fator de proteção ao aumento do tamanho do tumor (OR=0,12; p=0,0072). Considerando a recidiva local como estimativa de agressividade, o genótipo alterado do gene GSTP1 apresentou-se como fator de risco para presença de recidiva local (OR=1,17; p=0,035). A análise de regressão logística mostrou que a herança do genótipo C/C dos genes NAT2 (OR=3,87; IC95%=2,11-7,10; p=2,2x10-5) e TP53 (OR=3,87 IC95%=1,78-6,10; p=2,8x10-4) aumentou o risco de CMT-s. Uma análise de regressão indicou que o genótipo C/C do gene TP53 contribui com 8,07% do risco CMT-s. Não foi possível identificar qualquer relação entre os polimorfismos de NAT2 e TP53, sugerindo que são fatores independentes de risco para o CMT-s. Em conclusão, foi demonstrado que os genes de detoxificação e genes de apoptose e controle do ciclo celular estão envolvidos na suscetibilidade ao desenvolvimento de CMT-s e CMTH e podem modular a suscetibilidade à doença / Abstract: Polymorphisms in low penetrance genes have been consistently associated with susceptibility to a variety of human tumors, including thyroid cancer. In order to determine its role in medullary thyroid carcinoma (MTC) TaqMan® SNP Genotyping method was used in 138 patients with HMTC, 47 patients with MTC-s and a control group of 578 for genotyping of polymorphisms CYP1A2*F (rs762551), CYP1A1m1 (rs4646903), NAT2 C282T (rs1041983), GSTP1 codon 105 (rs1695) and TP53 codon 72 (rs1042522). This study demonstrated an association between the presence of polymorphic alleles of CYP1A2 F, GSTP1 and NAT2 and the development of HMTC. The legacy of the C allele in homozygous CYP1A2*F gene influences the development of CMTH in more than two times. Patients who had the T allele in homozygous for the NAT2 gene have a three times more likely to develop HMTC and individuals who have inherited the G allele of GSTP1 gene in homozygous are more likely to develop CMTH. A statistical analysis of logistic regression, adjusted for sex, age, ethnicity, smoking and genes CYP1A*F, CYP1A1m1, NAT, GSTP1, and TP53, in patients with HMTC, showed that, when considering the size of the tumor as an estimate of aggression, sex male presented himself as a protective factor to the increase in tumor size (OR=0.12; p=0.0072). Considering the estimate of local recurrence and aggressiveness, the altered gene GSTP1 genotype appeared as a risk factor for presence of local recurrence (OR=1.17; p=0.035). The logistic regression analysis showed that the genotypes of the NAT2 gene C/C (OR=3.87; 95%CI=2.11-7.10, p=2.2x10-5) and TP53 C/C (OR=3.87; 95%CI=1.78-6.10; p=2.8x10-4) inheritance increased the risk of sporadic MTC. A regression analysis showed that genotype C/C TP53 gene accounts for 8.07% of sporadic MTC risk. In addition, there was no association between the investigated genes and clinical or pathological features of aggressiveness of the tumors or the outcome of MTC patients. In conclusion, we demonstrated that detoxification genes and apoptotic and cell-cycle control genes are involved in the susceptibility of MTC-s and HMTC and may modulate the susceptibility to the disease / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

Abstract Multiple endocrine neoplasia type 1 (MEN1) is an inherited syndrome characterized by parathyroid, gastroenteropancreatic and pituitary neuroendocrine tumours. In Northern Finland, two founder mutations of the MEN1 gene (1466del12, 1657insC) accounting for the majority of the MEN1 cases, have common ancestors born in the 18th and 19th centuries, respectively. Three small clusters of familial pituitary adenoma have also been detected, two of which could be linked by genealogy to a common ancestral couple born in the 18th century. Clinical evaluation of 82 MEN1 mutation carriers showed that age was a risk factor for most of the MEN1-related manifestations. In the whole group, nonfunctional pancreatic tumour (NFPT) was more common in the frameshift/nonsense mutation carriers (odds ratio 3.26; 95% confidence interval 1.27–8.33, P = 0.014), whereas gastrinoma was more common in the in-frame/missense mutation carriers (OR 6.77, CI 1.31–35.0, P = 0.022). In the founder mutation carriers, the 1657insC mutation predicted the risk for NFPT (OR 3.56, CI 1.29–9.83, P = 0.015), while the 1466del12 mutation was associated with the risk for gastrinoma (OR 15.1, CI 1.73–131.9, P = 0.014). The mean ages at death of the 32 obligatory MEN1 founder mutation carriers born between 1728 and 1929 were compared to those of the 29 spouses and sex-matched life expectancy estimates derived from Finnish national statistics. The ages at death of the mutation carrier males (61.1 ± 12.0 years) and females (67.2 ± 10.7 years) did not differ from the control groups. PAP (pituitary adenoma predisposition) locus was mapped in the chromosome region 11q12–11q13 by whole-genome single-nucleotide polymorphism genotyping. Combining the linkage and the gene expression array data, AIP (aryl hydrocarbon receptor interacting protein) was chosen for sequencing. The nonsense mutation Q14X was identified in the affected (acromegaly, gigantism, prolactinoma) family members and in four other patients. Loss of heterozygosity was detected in pituitary adenomas of AIP mutation carriers. Mutation analysis of MEN1, HRPT2 (hyperparathyroidism 2), CASR (calcium-sensing receptor), CDKN1B (cyclin-dependent kinase inhibitor 1B) and AIP genes was performed in primary hyperparathyroidism patients with features of inherited predisposition. One out of 29 patients was found to have the 1466del12 mutation, while no mutations were detected in other genes.

京都大学 / 新制・課程博士 / 博士(医学) / 甲第23080号 / 医博第4707号 / 新制||医||1049(附属図書館) / 京都大学大学院医学研究科医学専攻 / (主査)教授 萩原 正敏, 教授 伊藤 貴浩, 教授 稲垣 暢也 / 学位規則第4条第1項該当 / Doctor of Medical Science / Kyoto University / DFAM

INTRODUÇÃO: A imensa maioria dos casos com Neoplasia Endócrina Múltipla Tipo 2 (NEM2) é causada por uma única mutação germinativa no proto-oncogene RET. Entretanto, há alguns poucos casos descritos na literatura (~16) que apresentam duplas mutações/polimorfismos no gene RET, geralmente associados a fenótipos atípicos. OBJETIVOS: Os objetivos deste projeto são: a) caracterizar os aspectos clínicos de pacientes advindos de cinco famílias não relacionadas com diagnóstico de NEM2A, nas quais se documentou a presença de uma nova dupla mutação germinativa RET nos códons 634 e 791 e b) realizar rastreamento gênico familiar dos casos sob-risco com a finalidade de identificarmos possíveis casos com esta nova mutação. PACIENTES: Cinco casos-índice foram recentemente descobertos albergando a dupla mutação germinativa RET C634Y/Y791F. Nestas famílias há relato de 208 parentes, potencialmente, sob-risco (~50%) de serem portadores desta mutação. Dentre estes 208 indivíduos, 81 (38,9%) aceitaram participar do rastreamento gênico. MÉTODOS: O estudo foi realizado na Disciplina de Endocrinologia, Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. O DNA do sangue periférico dos pacientes e de seus parentes sob- risco foi obtido após a obtenção do consentimento livre e esclarecido. Após PCR, foi realizado o sequenciamento gênico direto (ABI 3130x/l Sequencer, Applied Biosystems), abrangendo todos os 20 éxons do RET. Foram investigados potenciais polimorfismos e mutações no RET. Os tumores NEM2-relacionados (carcinoma medular de tireoide, CMT; feocromocitoma, FEO; hiperparatireoidismo primário, HPT) foram estudados quanto a vários parâmetros clínicos, como: sinais/sintomas; dimensão, penetrância e agressividade dos tumores; porcentagem de remissão bioquímica do CMT, e recidiva ou persistência dos tumores. RESULTADOS: Dentre os 81 indivíduos que participaram do rastreamento gênico, documentamos 28 casos (34,5%) como portadores da dupla mutação RET C634Y/Y791F. Além disso, as mutações foram testadas in vitro e um gene de efeito fundador foi descartado. Observou-se que: a) os cinco casos-índice (100%) com mutação germinativa RET C634Y/Y791F apresentaram FEO com características tais como, tumores medindo acima de 5,0 cm, e quatro dentre os cinco casos (80%) tiveram o diagnóstico com idades inferiores a 35 anos. A frequência de FEO nos parentes adultos (a partir da terceira década) foi de 73% e eram bilaterais em 80%; b) as características do CMT nos afetados albergando a mutação RET 634/791 eram similares às que ocorrem em pacientes com a mutação 634 isolada. Adicionalmente, estudo in vitro desta dupla mutação revelou que o grau de fosforilação das células com a dupla mutação celular 634/791 era significativamente maior (p=0,04), quando comparada com a capacidade fosforilativa das mutações 634 e 791 avaliadas individualmente. CONCLUSÃO: Diante dos presentes achados, conclui-se que os pacientes com esta nova dupla mutação tenderam a apresentar FEO de maior agressividade (precocidade, tumores volumosos e bilaterais), enquanto que o CMT, nestes casos, apresentava características usuais aos portadores de mutação RET no códon 634. A nossa hipótese é que os achados relativos ao FEO, nos presentes pacientes, foram influenciados pela presença da segunda mutação RET Y791F, a qual teria atuado como fator modulador do fenótipo. Esta hipótese foi suportada pelos estudos in vitro. Além disso, a ausência de um efeito fundador levou-nos a prever que esta dupla mutação RET pode não ser rara, na área geográfica estudada. Ainda que estes achados devam ser validados, os presentes dados podem ser úteis no diagnóstico genético e no manejo clínico e terapêutico dos pacientes com NEM2A / INTRODUCTION: The vast majority of cases with multiple endocrine neoplasia type 2A (MEN2A) is caused by a single germline mutation in the RET proto-oncogene. However, some instances (~16) of double germline RET mutations have been reported, most frequently associated with atypical phenotypes. OBJECTIVES: The main goals of this project were: a) to characterize the phenotype of patients from five unrelated MEN2A families harboring a new RET double germline in codons 634 and 791; b) perform the genetic screening in at-risk family members attempting to search for new similarly affected cases. PATIENTS: Five affected index-cases were recently found with this new double RET mutation C634Y/Y791F. In these five families, 208 first-degree relatives were reported and they were at-risk (~50%) to develop this mutation. Eighty-one individuals out of the 208 at-risk relatives (38.9%) were available and signed the informed consent. METHODS: The present investigation was performed at the Department of Endocrinology, School of Medicine, University of São Paulo. DNA was obtained from the peripheral blood of patients and at-risk relatives, after obtaining the informed consent of all individuals. After PCR, the direct genetic sequence was performed (ABI 3130x/l Sequencer, Applied Biosystems), involving all 20 exons of the RET proto-oncogene. Potential mutations and polymorphisms were investigated. In addition, the mutations were tested in vitro and a potential founder effect was evaluated. The MEN2A- related tumors (medullary thyroid carcinoma, MTC; pheochromocytoma, PHEO; and primary hyperparathyroidism, HPT) were approached using several clinical parameters, as: signs and symptoms; age at the diagnosis; tumor size and aggressiveness; biochemical remission of MTC; tumor relapse or persistence; RESULTS: Within the 81 genetically screened individuals, 28 cases (34.5%) were documented harboring the RET C634Y/Y791F germline mutation. It was observed that: a) the five affected index-cases (100%) were presented with PHEOs with features such as tumors measuring more than 5.0cm, and four out of the five cases (80%) had this diagnosis under the age of 35 years old. The frequency of PHEO in the adult affected relatives was also high (73%), from the third decade on, and were bilateral in 80%; b) the features and outcome of MTC in the affected C634Y/Y791F cases were similar to those MEN2A cases harboring the RET 634 mutation only. In addition, in vitro studies verified that cells with the 634/791 mutation had a significantly higher capacity of phosphorylation than cells harboring each individual mutation (p=0.04). Also, a founding gene was ruled out in these families. CONCLUSION: Our present data indicated that the earlier and more aggressive PHEOs seen in the present cases were most probably due to a phenotype modulation of the second RET 791 mutation. This hypothesis was supported by data from in vitro studies. Also, the absence of a founding couple led us to predict that this double RET mutation may not be rare, in the studied geographic area. Although these findings need to be validated, the present data may be useful in the genetic diagnosis as well as in the clinical and therapeutic management of MEN2A