Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Pesticides use is still the main strategy used in the field for the combat and the prevention of agricultural plagues, guaranteeing enough food and of quality for the population. In the culture of fruits, especially in strawberries, apples and grapes, the consequent contamination by pesticide residues has the been objective of constant concern in the ambit of the public health. Due to the toxicity associated with these substances quality of the produced victuals is necessary in order to prevent possible risks to the consumer. In the present study, a multiresidue method was developed and validated for the quantification of the pesticides chlorothalonil, chlorpyrifos, captan, procymidone, kresoxim methyl, iprodione, fenpropathrin, deltamethrin and azoxystrobine using Gas Chromatography with Electron Capture Detection (GCECD) in different matrices (strawberry, apple and grape). Gas Chromatography coupled with Mass Spectrometry (GC-MS) was used for the investigation of the pesticides present in the samples. Some extraction conditions were appraised, such as type and volume of solvents, amount of sample and purification of the extract. The extraction with 1:1 (v/v) mixture of ethyl acetate/n-hexane, in ultraturrax, followed by purification in florisil® columns and reduction of the extract volume by evaporation of the solvent presented the best results. The optimized conditions for the GC-ECD system were: capillary column DB-5; programming of the oven temperature: 80 °C - 2 min, 180 °C (10 °C min-¹)- 1 min, 255 °C (8 °C min-¹); 315 °C (15 °C min-¹) 4.25 min, pressure of the carrier gas (He) 21 psi; injection volume 1 μL; injetor temperature 270 °C and of the detector to 330 °C. For the analysis by GC-MS the used conditions were: capillary column VF - 5MS, Factor Four/MS (Varian) with 5 m of EZ-Guard®; programming of the column temperature: 80 °C (25 °C min-¹), 180 °C (5 °C min- ¹), 280 °C - 10 min, pressure of the carrier gas 10 psi; injection volume 1 μL, in the splitless mode; temperature of the manifold of 80 °C and of the interface of 230 °C, energy of 600 eV applied to the ion multiplier and ion-trap temperature of 200 °C. In the validation of the method the following parameters were verified: detection limit (LOD), quantification limit (LOQ), linearity, precision (repeatability and intermediary precision) and recovery. LODs and LOQs of the instrument varied from 2.5 to 18.7 μg L-¹ and from 5.0 to 25.0 μg L-¹, except for the deltamethrin (0.2 and 0.8 μg L-¹), respectively. For the analyzed samples obtained LOQs values from 0.6 to 15.6 mg kg-1 were obtained for the pesticides in study. The analytical solutions were prepared in "blank extract" of the fruits to compensate for the observed matrix effect, being obtained analytical curves with r2 ≥0.9925. The precision assays supplied acceptable results, with RDS values between 0.3 and 14.8%. Recoveries from 85.4 to 111.3% were obtained for the studied matrices, except for captan in grape (70.1%). The results obtained in the validation allowed us to conclude that the method is adaptable for the determination of these compounds in strawberries, apples and grapes, being that the method was applied in the analysis of 21 samples obtained in the trade. Pesticides presences were verified in 72.7% in the strawberry samples, 80% of the apple and grape samples, where chlorpyrifos, chlorothalonil, captan, iprodion, deltamethrin and fenpropathrin were found. / O uso de pesticidas é ainda a principal estratégia no campo para o combate e a prevenção de pragas agrícolas, garantindo alimento suficiente e de qualidade para a população. Na fruticultura, em especial nas culturas de morango, maçã e uva, a contaminação por resíduos de pesticidas têm sido alvo de constante preocupação no âmbito da saúde pública e da sociedade. Devido à toxicidade associada a estas substâncias o monitoramento da qualidade dos alimentos produzidos é necessário a fim de prevenir possíveis riscos ao consumidor. No presente trabalho foi desenvolvido e validado um método multirresíduo para a quantificação dos pesticidas clorotalonil, clorpirifós, captana, procimidona, cresoxim metílico, iprodiona, fenpropatrina, deltametrina e azoxistrobina empregando Cromatografia Gasosa com Detecção por Captura de Elétrons (GC-ECD) em diferentes matrizes (morango, maçã e uva). A Cromatografia Gasosa acoplada a Espectrometria de Massas (GC-MS) foi empregada para a investigação da presença de pesticidas nas amostras. Algumas condições de extração foram avaliadas, tais como tipo e volume de solventes, quantidade de amostra e purificação do extrato. A extração com mistura 1:1 (v/v) de acetato de etila/n-hexano, em ultra-turrax, seguida de purificação em colunas de florisil® e redução do volume do extrato por evaporação do solvente foi a que apresentou melhores resultados. As condições otimizadas para o sistema GC-ECD foram: coluna capilar DB-5; programação da temperatura do forno: 80 ºC 2 min, 180 ºC (10ºC min- ¹) - 1 min, 255 ºC (8 ºC min-¹); 315 oC (15 ºC min-¹) 4,25 min, pressão do gás de arraste (He) 21 psi; volume de injeção 1 μL; temperatura do injetor 270 °C e do detector a 330 ºC. Para a análise por GC-MS usaram-se as condições: coluna capilar VF- 5MS, Factor Four/MS (Varian) com 5 m de EZ-Guard®; programação da temperatura da coluna de: 80 ºC (25 °C min-¹), 180 ºC (5 ºC min-¹), 280 ºC 10 min, pressão do gás de arraste 10 psi; volume de injeção 1 μL, no modo splitless; temperatura do manifold de 80 °C e da interface de 230 °C, energia de 600 eV aplicada à multiplicadora de íons e temperatura do iontrap a 200 ºC. Na validação do método foram avaliados os seguintes parâmetros: limite de detecção (LOD), limite de quantificação (LOQ), linearidade, precisão (repetitividade e precisão intermediária) e recuperação. Os LODs e LOQs do instrumento variaram de 2,5 a 18,7 μg L-¹ e de 5,0 a 25,0 μg L-¹, exceto para a deltametrina (0,2 e 0,8 μg L-¹), respectivamente. Para as amostras analisadas obtiveram-se valores de LOQs de 0,6 a 15,6 μg kg-¹ para os pesticidas em estudo. As soluções analíticas foram preparadas em extrato branco das frutas para compensar o efeito matriz observado, obtendo-se curvas analíticas com r² ≥ 0,9925. Os ensaios de precisão forneceram resultados aceitáveis, com valores de RDS entre 0,3 e 14,8%. Recuperações de 85,4 a 111,3% foram obtidas para as matrizes estudadas, exceto para a captana (70,1%) em uva. Os resultados obtidos na validação permitiram concluir que o método é adequado para determinação destes compostos em morango, maçã e uva, sendo o método aplicado na análise de 21 amostras obtidas no comércio. Foram constatadas presenças de pesticidas em 72,7% das amostras de morango, 80% das amostras de maçã e de uva, onde foram encontrados clorpirifós, clorotalonil, captana, iprodiona, deltametrina e fenpropatrina.

Um método para determinação de praguicidas das classes organofosforados, carbamatos, triazinas e ureias por HPLC-MS/MS em urina de pessoas expostas em decorrência de atividades agrícolas é proposto neste trabalho. O modo de eluição isocrática e gradiente em cromatografia líquida de fase reversa com a coluna Synergi Max RP (150 x 4,6 mm, 4 µm) foram experimentados para a separação dos componentes da amostra. O modo isocrático de eluição nas condições 45:55, 60:40 e 70:30 de ACN/água foram insuficientes para eluição dos componentes da amostra com fatores de retenção aceitáveis entre 0,5 e 20. Em modo gradiente, os efeitos do tempo de gradiente (30 a 100 min), a concentração inicial de ACN (8 a 14%), vazão da fase móvel (0,5 a 1,0 mL min-1) e temperatura (30 a 40 °C) foram verificados para aumento de resolução e diminuição do tempo de análise. Em composições distintas de fase móvel (ACN/água), o logaritmo dos fatores de retenção foi colocado em gráfico em função da acidez (α) e a basicidade (β) da ligação de H, constante dielétrica (ε) e parâmetro de solubilidade de Hildebrand (δH). Dimetoato e metomil tiveram comportamentos diferenciados, ambos explicados pelas ligações de H intramoleculares. Através de um planejamento fatorial completo de dois níveis, usando-se as funções COF e CRS como resposta, variáveis como vazão da fase móvel, tempo de gradiente, concentração inicial de ACN e temperatura foram investigados. A melhor resposta experimental forneceu como condições de análise: 0,5 mL min-1, 40 °C, 75 min e 5% de ACN, para vazão, temperatura, tempo de gradiente e concentração inicial de ACN, respectivamente. Em um sistema LC-MS/MS usando o ion trap como analizador de massas, a infusão direta dos padrões de praguicidas, para conhecimento do pico do íon molecular e das transições MS/MS, foi estudada. Experimentos de quantificação em UPLC-MS/MS foram baseados na separação em fase reversa com a coluna ACQUITY UPLC HSS T3 (50 x 2,1 mm, 1,8 µm), espectrômetro de massas equipado com analizador de massas triplo quadrupolo e modo positivo de ionização. Transições MRM de quantificação e de confirmação foram monitoradas para cada praguicida. O método apresentou respostas lineares no intervalo de 0,25 a 50 µg L-1 para todos os praguicidas com coeficiente de determinação maiores que 0,999. O LD do método variou de 0,192 a 3,19 µg L-1. O LQ do método variou entre 0,582 e 13,6 µg L-1, com coeficiente de variação inferior a 20% CV. As recuperações em amostras fortificadas em 0,75 µg L-1 variaram entre 55,7 e 72,6% e a precisão em termos de %CV entre 1,94 e 19,1%. As recuperações em amostras fortificadas em 10 µg L-1 variaram entre 99,1 a 105% e a precisão entre 0,751 e 8,98% CV. As recuperações em amostras fortificadas em 50 µg L-1 variaram entre 99,5 a 101% e a precisão entre 0,877 e 5,94% CV. Das 25 amostras quantificadas, 13 apresentaram concentrações dos praguicidas na faixa linear da curva de calibração. Estes valores de concentração variaram entre 10 e 50 µg L-1. / In this work a method for determination of different chemical groupes of pesticides (organophosphorus, carbamates, triazines, organochlorine and ureas) is proposed using HPLC-MS/MS in samples from occupational exposed agriculture workers. Isocratic and gradien elution in reversed-phase chromatography using a Synergi Max RP (150 x 4,6 mm, 4 µm) column were investigated for separation proposal. Isocratic elution conditions 45:55, 60:40, 70:30 ACN/water provided unsatisfactory results with retention factor from 0.5 to 20. In gradient elution, effects of gradient time (30 to 100 min), initial concentration of ACN (8 to 14%), flow rate (0.5 to 1 mL min-1) and temperature (30 to 40 °C) were studied for increasing resolution and decreasing analysis time. For different proportion of ACN in the mobile phase, the logarithm of retention factor has been ploted against solvent hydrogen-bond donor (α), solvent hydrogen-bond acceptor (β), dieletric constant (ε) and Hildebrand solubility (δH). Dimethoate and methomyl presented different behaviour in relation to others, explained by H intramolecular bond. Applying a two level experimental design having as response functions COF and CRS, combined factors such as flow rate, gradient time, ACN initial concentration and temperature were investigated. Optimal conditions were obtained in 0.5 mL min-1, 40 °C, 75 min e 5% CAN, for flow rate, temperature, gradient time and ACN initial concentration, respectively. Applying a LC-MS/MS system equipped with an ion trap mass analyzer, direct infusion of standard solutions of pesticides for knowledge of ion molecular peak and their MRM transitions was obtained. Quantitative experiments using UPLC-MS/MS were based in reversed-phase separation with a Acquity UPLC HSS T3 (50 x 2,1 mm, 1,8 µm) column, mass spectrometry instrument equipped with triple quadrupole mass analyzer at positive ion polarity. Quantifying and confirming ion transitions were monitored for each pesticide compound. Linearity in range of 0.25 to 50 µg L-1 was established for all pesticides with high coefficients determination R2 0.999 were obtained. The method LOD varied between 0.192 to 3.19 µg L-1. LOQ varied from 0.582 to 13.6 µg L-1, with coefficient variation below 20% CV. Recoveries for samples spiked at 0.75 µg L-1 concentration level varied from 55.7 to 72.6% and precision in terms of CV between 1.94 and 19.1% CV. Spiked samples at 10 µg L-1 concentration level varied from 99.1 to 105% and precision between 0.751 and 8.98% CV. Recoveries for samples spiked at 50 µg L-1 concentration level varied from 99.5 to 101% and precision from 0.877 to 5.94% CV. From 25 samples quantified, 13 presented concentration values in linear range of the calibration curve. These values varied from 10 to 50 µg L-1.

Um método para determinação de praguicidas das classes organofosforados, carbamatos, triazinas e ureias por HPLC-MS/MS em urina de pessoas expostas em decorrência de atividades agrícolas é proposto neste trabalho. O modo de eluição isocrática e gradiente em cromatografia líquida de fase reversa com a coluna Synergi Max RP (150 x 4,6 mm, 4 µm) foram experimentados para a separação dos componentes da amostra. O modo isocrático de eluição nas condições 45:55, 60:40 e 70:30 de ACN/água foram insuficientes para eluição dos componentes da amostra com fatores de retenção aceitáveis entre 0,5 e 20. Em modo gradiente, os efeitos do tempo de gradiente (30 a 100 min), a concentração inicial de ACN (8 a 14%), vazão da fase móvel (0,5 a 1,0 mL min-1) e temperatura (30 a 40 °C) foram verificados para aumento de resolução e diminuição do tempo de análise. Em composições distintas de fase móvel (ACN/água), o logaritmo dos fatores de retenção foi colocado em gráfico em função da acidez (α) e a basicidade (β) da ligação de H, constante dielétrica (ε) e parâmetro de solubilidade de Hildebrand (δH). Dimetoato e metomil tiveram comportamentos diferenciados, ambos explicados pelas ligações de H intramoleculares. Através de um planejamento fatorial completo de dois níveis, usando-se as funções COF e CRS como resposta, variáveis como vazão da fase móvel, tempo de gradiente, concentração inicial de ACN e temperatura foram investigados. A melhor resposta experimental forneceu como condições de análise: 0,5 mL min-1, 40 °C, 75 min e 5% de ACN, para vazão, temperatura, tempo de gradiente e concentração inicial de ACN, respectivamente. Em um sistema LC-MS/MS usando o ion trap como analizador de massas, a infusão direta dos padrões de praguicidas, para conhecimento do pico do íon molecular e das transições MS/MS, foi estudada. Experimentos de quantificação em UPLC-MS/MS foram baseados na separação em fase reversa com a coluna ACQUITY UPLC HSS T3 (50 x 2,1 mm, 1,8 µm), espectrômetro de massas equipado com analizador de massas triplo quadrupolo e modo positivo de ionização. Transições MRM de quantificação e de confirmação foram monitoradas para cada praguicida. O método apresentou respostas lineares no intervalo de 0,25 a 50 µg L-1 para todos os praguicidas com coeficiente de determinação maiores que 0,999. O LD do método variou de 0,192 a 3,19 µg L-1. O LQ do método variou entre 0,582 e 13,6 µg L-1, com coeficiente de variação inferior a 20% CV. As recuperações em amostras fortificadas em 0,75 µg L-1 variaram entre 55,7 e 72,6% e a precisão em termos de %CV entre 1,94 e 19,1%. As recuperações em amostras fortificadas em 10 µg L-1 variaram entre 99,1 a 105% e a precisão entre 0,751 e 8,98% CV. As recuperações em amostras fortificadas em 50 µg L-1 variaram entre 99,5 a 101% e a precisão entre 0,877 e 5,94% CV. Das 25 amostras quantificadas, 13 apresentaram concentrações dos praguicidas na faixa linear da curva de calibração. Estes valores de concentração variaram entre 10 e 50 µg L-1. / In this work a method for determination of different chemical groupes of pesticides (organophosphorus, carbamates, triazines, organochlorine and ureas) is proposed using HPLC-MS/MS in samples from occupational exposed agriculture workers. Isocratic and gradien elution in reversed-phase chromatography using a Synergi Max RP (150 x 4,6 mm, 4 µm) column were investigated for separation proposal. Isocratic elution conditions 45:55, 60:40, 70:30 ACN/water provided unsatisfactory results with retention factor from 0.5 to 20. In gradient elution, effects of gradient time (30 to 100 min), initial concentration of ACN (8 to 14%), flow rate (0.5 to 1 mL min-1) and temperature (30 to 40 °C) were studied for increasing resolution and decreasing analysis time. For different proportion of ACN in the mobile phase, the logarithm of retention factor has been ploted against solvent hydrogen-bond donor (α), solvent hydrogen-bond acceptor (β), dieletric constant (ε) and Hildebrand solubility (δH). Dimethoate and methomyl presented different behaviour in relation to others, explained by H intramolecular bond. Applying a two level experimental design having as response functions COF and CRS, combined factors such as flow rate, gradient time, ACN initial concentration and temperature were investigated. Optimal conditions were obtained in 0.5 mL min-1, 40 °C, 75 min e 5% CAN, for flow rate, temperature, gradient time and ACN initial concentration, respectively. Applying a LC-MS/MS system equipped with an ion trap mass analyzer, direct infusion of standard solutions of pesticides for knowledge of ion molecular peak and their MRM transitions was obtained. Quantitative experiments using UPLC-MS/MS were based in reversed-phase separation with a Acquity UPLC HSS T3 (50 x 2,1 mm, 1,8 µm) column, mass spectrometry instrument equipped with triple quadrupole mass analyzer at positive ion polarity. Quantifying and confirming ion transitions were monitored for each pesticide compound. Linearity in range of 0.25 to 50 µg L-1 was established for all pesticides with high coefficients determination R2 0.999 were obtained. The method LOD varied between 0.192 to 3.19 µg L-1. LOQ varied from 0.582 to 13.6 µg L-1, with coefficient variation below 20% CV. Recoveries for samples spiked at 0.75 µg L-1 concentration level varied from 55.7 to 72.6% and precision in terms of CV between 1.94 and 19.1% CV. Spiked samples at 10 µg L-1 concentration level varied from 99.1 to 105% and precision between 0.751 and 8.98% CV. Recoveries for samples spiked at 50 µg L-1 concentration level varied from 99.5 to 101% and precision from 0.877 to 5.94% CV. From 25 samples quantified, 13 presented concentration values in linear range of the calibration curve. These values varied from 10 to 50 µg L-1.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The rice is the main component of the basic diet of the world-wide population, is therefore, of extreme importance for the food security. In function of this, related aspects its production and comsumption must continuously be monitored and be evaluated, so that its supply is guaranteed. In this study, was development and validated a methodology for determination of residues of 51 pesticides in polish rice grains, using the modified QuEChERS extraction method and Gas Chromatography coupled to Mass Spectrometry with Negative Chemical Ionization and Selected Ion Monitoring (GC-MS NCI-SIM). To that end, previous homogenized rice was spiked with 51 pesticides at 3 different spiking levels (10, 20 and 50 μg kg-1, 6 replicates at each level) and extracted by the modified QuEChERS method. Applying this method, 10 mL of acetonitrile was added to 10.0 g of rice matrix and the tubes were vigorously shaken by hand for 45 s. The tubes were uncapped, 3.0 g of anhydrous magnesium sulfate and 1.7 g of sodium acetate were added, the shaking procedure was repeated and the extract was centrifuged for 8 min. Furthermore, a dispersive clean-up was developed for extract purification. The upper layer (4 mL) of the extracts was transferred to another tube containing 600 mg of anhydrous magnesium sulfate and 500 mg of C18, the shaking procedure was repeated and the extract was centrifuged for 8 min. The extracts were analized by GC-MS NCI-SIM. The method validation was performed of the linear range of the analytical curves (7 concentration levels and 6 injections each), detection limit (LOD), quantification limit (LOQ), matrix effect, as well as precision (as RSD%) and accuracy (as recovery percent). In general, LOD, LOQ and r2 results, obtained from GC, were affected by standards prepared in matrix extract compared to the preparation in solvent. The linear calibration curves was between 1.0 or 2.0 to 100.0 ng mL-1 with r2 values ≥ 0,99. The GC-MS (NCI) allowing the quantification (recovery criteria 70-120% and RSD% values ≤ 20%) of 87% of the target compounds, that showed LOQm of 10 or 20 mg kg-1. Hence, it is possible to conclude, this method proved to be adequate for the multi-residue analysis of pesticides in rice, conciliating sensitivity and acceptable selectivity and all the validation parameters were within the limits suggested for validation of chromatographic methods. / O arroz é o principal componente da dieta básica da população mundial. É, portanto, de extrema importância para a segurança alimentar e, em função disso, aspectos relacionados à sua produção e consumo devem ser continuamentemonitorados e avaliados em profundidade, para que o seu suprimento seja garantido. Neste estudo, foi desenvolvida e validada uma metodologia para a determinação, em grãos de arroz polido, de resíduos de 51 pesticidas, analisados utilizando o método de extração QuEChERS modificado e Cromatografia Gasosa com Detecção por Espectrometria de Massas, operando no modo de Ionização Química Negativa e Monitoramento do Ion Selecionado (GC-MS NCI-SIM). Para isso, realizou-se a fortificação do arroz, previamente homogeinizado, com soluções contendo os 51 pesticidas, em 3 níveis de fortificação (10, 20 e 50 μg kg-1), 6 réplicas para cada nível, e aplicou-se o método QueChERS modificado. A extração por este método consistiu na pesagem de 10,0 g da matriz, adição de 10 mL de acetonitrila e procedeu-se a agitação manual e vigorosa, por cerca de 45 segundos. Acrescentou-se 3,0 g de sulfato de magnésio anidro e 1,7 g de acetato de sódio anidro, repetindo-se agitação. Foram, posteriormente, centrifugados por 8 minutos A purificação dos extratos foi realizada através de clean-up dispersivo, onde 4 mL do extrato foram transferidos para outro tubo já contendo 600 mg de sulfato de magnésio anidro e 500 mg de C18, repetindo-se a agitação e a centrifugação, e em seguida os extratos foram analisados por GC-MS NCI-SIM. Neste trabalho avaliouse os seguintes parâmetros de validação do método: faixa de linearidade das curvas analíticas (7 níveis de concentração e seis injeções cada), limite de detecção (LOD), limite de quantificação (LOQ), efeito matriz, bem como a precisão e a exatidão (em termos de percentual de recuperação). Em geral, os valores de LOD, LOQ e r2, obtidos por GC, foram influenciados pela utilização de extratos da matriz para o preparo das soluções analíticas. A faixa linear de concentração das curvas analíticas situou-se entre 1,0 ou 2,0 a 100,0 ng mL-1 com valores de r2 ≥ 0,99. A técnica GCMS NCI modo SIM promoveu a quantificação (critérios de recuperação entre 70 e 120% e valores de RSD% ≤ 20%) de 87% dos compostos que apresentaram LOQm de 10 ou 20 mg kg-1. Portanto, conclui-se que o método mostrou-se adequado à análise multirresíduo dos pesticidas em arroz, conciliando sensibilidade e seletividade adequadas, e todos os parâmetros de validação encontram-se dentro dos limites sugeridos para validação de métodos cromatográficos.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The optimization and validation of an analytical method for 51 pesticides determination in tomato, using UPLC-MS/MS, was developed in order to fulfill the requirement 5.4.5 (Method Validation) of the NBR ISO/IEC 17025:2005 and following the orientation document DOQ-CGCRE-008 (Orientation of analytical methods validation). This item is very important to a laboratory to be accredited by INMETRO (Brazilian accreditation body). The method validation was carried out following all the validation parameters, such as linearity of the analytical curves, limits of detection and quantification, matrix effects, accuracy and precision of the method. The studied compounds in this work were determined by UPLC-MS/MS in the positive ESI ionization mode. The stock solutions of the pesticides were prepared in organic solvent compatible with the compound solubility. These solutions were prepared by two different analysts in order to validate the preparation by comparing the areas of the injections (n=7) of each individual solution. After evaluation, 43 from 51 studied solutions showed results between the acceptable range of ± 10% demonstrating the satisfactory quality of solutions preparation. The evaluated pesticides were extracted from tomatoes applying the mini Luke method with a mixture 1:1:1 (v/v/v) of each acetone/petroleum ether/dichloromethane solvent as extraction solvent. After extraction, the organic solvent extract was evaporate and reconstituted in appropriate solvent (acidified methanol with 0.1% acetic acid) for UPLC-MS/MS analysis. The recovery experiments were done at 10, 20 and 50 μg kg-1 spike levels, by two analysts in different days, and 7 replicates (n=7) for each spike level plus the blank matrix (without pesticides). The limits of detection and quantification for the instrument and method were estimated, as well as the linearity of the analytical curves evaluated based on determination coefficient (r²), dynamic linear range, accuracy by recovery experiments (%), precision (RSD%) and matrix effect. From the 51 studied compounds, 46 showed recoveries between the range of 81 115% for all the evaluated spike levels. About precision, 92% of the compounds showed RSD% below 18.7% in the lowest spike level. The quantification limit of the method, for 82% from all evaluated compounds, was the lowest spike level studied (10 μg kg-1). The matrix effect observed was between ± 20% for all evaluated compounds, showing that there is not considerable suppression or enhancement in the analytes signal. For all evaluated pesticides the intermediate precision was below 20% of RSD showing the good repeatability of the method. / O desenvolvimento e validação do método analítico para determinação de 51 agrotóxicos em tomate por UPLC-MS/MS foi realizado a fim de atender ao requisito 5.4.5 (Validação de Métodos) da norma NBR ISO/IEC 17025:2005 e seguindo o documento orientativo DOQ-CGCRE-008 (Orientação sobre validação de métodos analíticos). Esse item descrito na norma é de fundamental importância para que o laboratório possa ser acreditado pelo INMETRO. A validação do método seguiu todos os parâmetros de validação, tal como a linearidade das curvas analíticas, limites de detecção e quantificação, efeito matriz, exatidão e precisão do método. Os agrotóxicos estudados neste trabalho foram determinados por UPLC- MS/MS no modo de ionização ESI positivo. As soluções estoque dos agrotóxicos foram preparadas em solvente orgânico compatível com a solubilidade de cada substância. Essas soluções foram preparadas por dois analistas distintos a fim de validar o preparo dessas a partir da comparação das áreas das injeções realizadas (n=7) de cada solução individual. Após avaliação, 43 das 51 soluções estudadas mostraram resultados dentro da faixa de ± 10% demonstrando a excelente qualidade no preparo dessas soluções. Os agrotóxicos estudados foram extraídos das amostras de tomate utilizando o método mini Luke o qual faz o uso de uma mistura 1:1: 1 (v/v/v) de acetona/éter de petróleo/diclorometano como solvente extrator. Após extração, o extrato em solvente orgânico foi evaporado e ressuspendido em solvente apropriado (metanol acidificado com 0,1% ácido acético) para análise por UPLC-MS/MS. O estudo de fortificação e recuperação dos analitos foi realizado nas concentrações de 10, 20 e 50 μg kg-1, por dois analistas, e 7 replicatas (n=7) para cada concentração, além das amostras branco (sem conter os agrotóxicos). Os limites de detecção e quantificação do instrumento e do método foram determinados, bem como a linearidade das curvas analíticas avaliadas através do coeficiente de determinação (r²), faixa linear dinâmica de trabalho, exatidão através do estudo de fortificação e recuperação (%) dos analitos, precisão (RSD%) e efeito matriz. Dos 51 agrotóxicos estudados, 46 apresentaram recuperação média na faixa de 81 a 115 % para todas as concentrações avaliadas. Com relação à precisão, 92% dos agrotóxicos demonstraram RSD% abaixo de 18,7% na menor concentração de fortificação. O limite de quantificação do método, para 82% dos agrotóxicos, foi a concentração de fortificação mais baixa estudada (10 μg kg-1). O efeito matriz observado foi inferior a ± 20% para todos os agrotóxicos avaliados, demonstrando assim que não há supressão ou aumento considerável no sinal do analito. Para todos os agrotóxicos estudados os resultados de precisão intermediária (onde foram avaliados diferentes analistas em diferentes dias) ficaram abaixo de 20% demonstrando a repetitividade satisfatória do método proposto.

A aquicultura teve um aumento significativo em todo o mundo nos últimos anos. Muitas classes de antimicrobianos são usadas na aquicultura para o tratamento de infecções causadas por bactérias patogênicas. Entretanto, a contaminação do ambiente, do alimento e a ocorrência de resistência microbiana decorrentes da intensa utilização dos antimicrobianos são motivos de preocupação. Com o objetivo de se saber a ocorrência de antimicrobianos e possíveis formação de resistência microbiana em pisciculturas paulistas, um método rápido, sensível e simples de extração em fase sólida acoplada à cromatografia líquida e espectrometria de massas sequencial (SPE-LC-MS/MS), foi desenvolvido e validado para a determinação simultânea de 12 antimicrobianos (oxitetraciclina, tetraciclina, clortetraciclina, ciprofloxacina, enrofloxacina, sarafloxacina, norfloxacina, florfenicol, cloranfenicol, sulfatizol, sulfadimetoxina e sulfametazina) em água superficial e sedimento. Outro método, utilizando LC-MS/MS, foi elaborado para a determinação dos antimicrobianos em peixes. Paralelamente, também, foi avaliada a seleção de resistência microbiana dessas classes de antimicrobianos em peixe. Os antimicrobianos foram extraídos do sedimento com acetonitrila e tampão citrato, a fase orgânica foi eliminada e a purificação do extrato realizada com cartuchos SPE Strata SAX 500 mg Phenomenex. Os extratos de sedimento e as amostras de água (sem pré-tratamento) foram injetadas em um sistema analítico, pela primeira vez utilizado no Brasil, que consistia em uma pré-concentração com um amostrador automático equipado com um loop de 900 ?L, uma válvula usada para alternar entre os modos de carregamento ou eluição, duas bombas e um sistema de MS/MS. Os extratos de peixe foram purificados por filtração utilizando cartuchos Captiva ND. Sulfadimetoxina-d6 foi utilizado como padrão interno para aferir a precisão dos resultados. Os métodos desenvolvidos foram validados baseados na decisão da União Europeia 2002/657/CE. As amostras foram coletadas de 4 pisciculturas localizadas na represa da usina hidrelétrica de Ilha Solteira, Brasil. Foram feitas 4 amostragens no período de abril de 2013 a janeiro de 2014, totalizando 144 amostras de água, 144 de sedimento e 126 amostras de peixe. Resíduos de oxitetraciclina, tetraciclina e clortetraciclina foram encontrados em sedimentos e oxitetraciclina, tetraciclina e florfenicol foram identificados nas amostras de água e peixe; à medida que aumentava a distância dos tanques e o tamanho do peixe as quantidades encontradas nas amostras diminuíam. Isolou-se bactérias resistentes a quinolonas, tetraciclinas, sulfonamidas em 36 cepas e o índice de resistência múltipla a antibióticos (MAR), variou entre 0 e 0,86, ou seja, cepas sensíveis a 100% dos antimicrobianos testados e outras resistentes a 86%. De acordo com os resultados encontrados considera-se que ações mais restritivas são necessárias quanto ao uso intensivo de antibióticos na produção de peixes / The aquiculture has had a sharp increase worldwide in the last years. Many classes of antibiotics have been used in aquaculture to treat infections caused by a number of pathogenic bacteria. However, environmental and food contamination and bacterial resistance are the main concerns arisen by these intense uses. In order to know the occurrence of antibiotics and possible antimicrobial resistance in fish farms in São Paulo, a fast, sensitive, and simple on-line solid phase extraction to liquid chromatography-tandem mass spectrometry (SPE-LC-MS/MS) was developed and validated for simultaneous assessment of 12 drugs (chloramphenicol, florfenicol, oxytetracycline, tetracycline, chlortetracycline, sulfadimethoxine, sulfathiazole, sulfamethazine, enrofloxacin, ciprofloxacin, norfloxacin, and sarafloxacin) in surface water and sediment. Another method using LC-MS/MS was elaborated to determine antibiotics in fish. In parallel, the selection of antimicrobial resistance of these classes of antibiotics in fish was evaluated. The antibiotics were extracted from sediment with acetonitrile and citric buffer, the organic phase was eliminated and the clean-up was made by Strata SAX 500 mg of Phenomenex. The water phase of sediment and water samples (without pre-treatment) was injected in the analytical system, which consisted of a pre-concentration with an automated liquid sampler fitted with a 900 ?L injection loop; a valve is used to switch between the load or elution modes, a pair of pumps and a MS/MS system, it is the first time that this system is used in Brazil. The fish extracts were cleaned by filtration by Captiva cartridges. Sulfadimethoxine-d6 was used as an internal standard to obtain more reliable results. The developed method was validated based in the European Union Decision 2002/657/EC. The samples were collected from 4 fish farms located in Ilha Solteira hydroelectric dam, Brazil. Four sampling were made in the period April/2013 until January/2014, totalizing 144 samples of water and sediment and 126 fish samples. Residues of oxytetracycline, tetracycline and chlortetracycline, were found in sediment and oxytetracycline, tetracycline, and florfenicol have been identified in water and fish samples, with increasing distance from the tanks and the size of the fishs the quantities of residue found in the samples decreased. Bacteria were resistant to quinolones, tetracyclines, sulfonamides in 36 strains and the multiple antibiotic resistance index (MAR) values ranged between 0 and 0.86, that is, strains with a sensitivity of 100% to the tested antimicrobials and others resistant of 86% to the tested antimicrobials. According to the results it is believed that more stringent measures are needed concerning the intensive use of antibiotics in fish production

A aquicultura teve um aumento significativo em todo o mundo nos últimos anos. Muitas classes de antimicrobianos são usadas na aquicultura para o tratamento de infecções causadas por bactérias patogênicas. Entretanto, a contaminação do ambiente, do alimento e a ocorrência de resistência microbiana decorrentes da intensa utilização dos antimicrobianos são motivos de preocupação. Com o objetivo de se saber a ocorrência de antimicrobianos e possíveis formação de resistência microbiana em pisciculturas paulistas, um método rápido, sensível e simples de extração em fase sólida acoplada à cromatografia líquida e espectrometria de massas sequencial (SPE-LC-MS/MS), foi desenvolvido e validado para a determinação simultânea de 12 antimicrobianos (oxitetraciclina, tetraciclina, clortetraciclina, ciprofloxacina, enrofloxacina, sarafloxacina, norfloxacina, florfenicol, cloranfenicol, sulfatizol, sulfadimetoxina e sulfametazina) em água superficial e sedimento. Outro método, utilizando LC-MS/MS, foi elaborado para a determinação dos antimicrobianos em peixes. Paralelamente, também, foi avaliada a seleção de resistência microbiana dessas classes de antimicrobianos em peixe. Os antimicrobianos foram extraídos do sedimento com acetonitrila e tampão citrato, a fase orgânica foi eliminada e a purificação do extrato realizada com cartuchos SPE Strata SAX 500 mg Phenomenex. Os extratos de sedimento e as amostras de água (sem pré-tratamento) foram injetadas em um sistema analítico, pela primeira vez utilizado no Brasil, que consistia em uma pré-concentração com um amostrador automático equipado com um loop de 900 ?L, uma válvula usada para alternar entre os modos de carregamento ou eluição, duas bombas e um sistema de MS/MS. Os extratos de peixe foram purificados por filtração utilizando cartuchos Captiva ND. Sulfadimetoxina-d6 foi utilizado como padrão interno para aferir a precisão dos resultados. Os métodos desenvolvidos foram validados baseados na decisão da União Europeia 2002/657/CE. As amostras foram coletadas de 4 pisciculturas localizadas na represa da usina hidrelétrica de Ilha Solteira, Brasil. Foram feitas 4 amostragens no período de abril de 2013 a janeiro de 2014, totalizando 144 amostras de água, 144 de sedimento e 126 amostras de peixe. Resíduos de oxitetraciclina, tetraciclina e clortetraciclina foram encontrados em sedimentos e oxitetraciclina, tetraciclina e florfenicol foram identificados nas amostras de água e peixe; à medida que aumentava a distância dos tanques e o tamanho do peixe as quantidades encontradas nas amostras diminuíam. Isolou-se bactérias resistentes a quinolonas, tetraciclinas, sulfonamidas em 36 cepas e o índice de resistência múltipla a antibióticos (MAR), variou entre 0 e 0,86, ou seja, cepas sensíveis a 100% dos antimicrobianos testados e outras resistentes a 86%. De acordo com os resultados encontrados considera-se que ações mais restritivas são necessárias quanto ao uso intensivo de antibióticos na produção de peixes / The aquiculture has had a sharp increase worldwide in the last years. Many classes of antibiotics have been used in aquaculture to treat infections caused by a number of pathogenic bacteria. However, environmental and food contamination and bacterial resistance are the main concerns arisen by these intense uses. In order to know the occurrence of antibiotics and possible antimicrobial resistance in fish farms in São Paulo, a fast, sensitive, and simple on-line solid phase extraction to liquid chromatography-tandem mass spectrometry (SPE-LC-MS/MS) was developed and validated for simultaneous assessment of 12 drugs (chloramphenicol, florfenicol, oxytetracycline, tetracycline, chlortetracycline, sulfadimethoxine, sulfathiazole, sulfamethazine, enrofloxacin, ciprofloxacin, norfloxacin, and sarafloxacin) in surface water and sediment. Another method using LC-MS/MS was elaborated to determine antibiotics in fish. In parallel, the selection of antimicrobial resistance of these classes of antibiotics in fish was evaluated. The antibiotics were extracted from sediment with acetonitrile and citric buffer, the organic phase was eliminated and the clean-up was made by Strata SAX 500 mg of Phenomenex. The water phase of sediment and water samples (without pre-treatment) was injected in the analytical system, which consisted of a pre-concentration with an automated liquid sampler fitted with a 900 ?L injection loop; a valve is used to switch between the load or elution modes, a pair of pumps and a MS/MS system, it is the first time that this system is used in Brazil. The fish extracts were cleaned by filtration by Captiva cartridges. Sulfadimethoxine-d6 was used as an internal standard to obtain more reliable results. The developed method was validated based in the European Union Decision 2002/657/EC. The samples were collected from 4 fish farms located in Ilha Solteira hydroelectric dam, Brazil. Four sampling were made in the period April/2013 until January/2014, totalizing 144 samples of water and sediment and 126 fish samples. Residues of oxytetracycline, tetracycline and chlortetracycline, were found in sediment and oxytetracycline, tetracycline, and florfenicol have been identified in water and fish samples, with increasing distance from the tanks and the size of the fishs the quantities of residue found in the samples decreased. Bacteria were resistant to quinolones, tetracyclines, sulfonamides in 36 strains and the multiple antibiotic resistance index (MAR) values ranged between 0 and 0.86, that is, strains with a sensitivity of 100% to the tested antimicrobials and others resistant of 86% to the tested antimicrobials. According to the results it is believed that more stringent measures are needed concerning the intensive use of antibiotics in fish production