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O ácido azelaico é um fármaco amplamente utilizado como tratamento em diversas doenças de pele, como acne, rosácea e melasma. A utilização de sistemas nanoestruturados para aplicação tópica se mostra interessante visto que o menor tamanho de partícula proporciona uma melhor entrega de fármacos até o seu sítio de ação. É promissor o desenvolvimento de formulações capazes de diminuir os efeitos adversos do ácido azelaico e intensificar sua eficácia no tratamento de desordens pigmentárias da pele, aliado ao desenvolvimento de uma formulação com controle de permeação e perfil sensorial que facilite a adesão ao tratamento. O objetivo do presente trabalho é desenvolver uma nanoemulsão contendo ácido azelaico e realizar ensaios da tirosinase, permeação cutânea e análise sensorial da formulação desenvolvida. A nanoemulsão foi preparada através da técnica de homogeneização a alta velocidade. A caracterização físico-química avaliou os parâmetros de diâmetro médio de partícula e distribuição do tamanho de partícula pela técnica de difração de laser, o potencial zeta foi medido por mobilidade eletroforética, o pH por potenciometria e teor e eficiência de encapsulação por CLAE. A morfologia foi observada por microscopia eletrônica de transmissão. A nanoemulsão foi estável por 30 dias a 30°C/ 65% UR. A formulação apresentou teor de 10 mg/mL, tamanho de partícula de 419 ± 23 nm, distribuição monomodal, eficiência de encapsulação de 84,65%, potencial zeta de -10,9 ± 0,44 mV e pH de 5,01 ± 0,01. Para verificar a eficácia despigmentante da formulação foi realizado o ensaio in vitro de inibição de tirosinase, onde a nanoemulsão se mostrou mais eficaz que o controle com o fármaco na sua forma livre. O ensaio de permeação cutânea in vitro em células de difusão de Franz foi realizado com pele de orelha de porcos durante 24 horas e ele demonstrou que a formulação nanotecnológica conseguiu atingir as camadas mais profundas da pele (epiderme viável e derme), permitindo que o fármaco alcance o seu sítio de ação, facilitando a inibição da síntese de melanina. Foi realizada análise sensorial descritiva, com 16 voluntários demonstrando que a formulação apresentou maior espalhabilidade e menor brilho que um produto já disponível no mercado. Portanto, a nanoemulsão desenvolvida se mostra promissora para utilização no tratamento de melasma, inclusive o dérmico. / Azelaic acid is a drug commonly used in the treatment of several skin diseases such as acne, rosacea and melasma. Nanostructured systems for topical application are interesting because its smaller particle size lead to a better drug delivery to its action site. Therefore, it is promising to develop formulations able to lower azelaic acid’s side effects and increase its efficacy as a skin whitening agent as well as control its permeation and shows a sensory profile that helps with patient adherence. The aim of the present work is to develop an azelaic-acid loaded nanoemulsion, evaluating its tyrosinase inhibition, skin permeation and sensory profile. The nanoemulsion was prepared using high shear homogenization. Its characterization was conducted evaluating the average particle diameter through laser diffraction, the zeta potential by eletrophoretic mobility, pH by potentiometry and drug content and encapsulation efficiency by HPLC. The morphology of the nanoemulsion was observed by transmission electron microscopy. The product was stable for 30 days at 30°C/ 65 % RH. The theoretical drug content was 10 mg/mL and the particle size 419 ± 23 nm with a monomodal distribution profile, encapsulation efficiency of 84,65% and the zeta potencial was -10,9 ± 0,44 mV while the pH was 5,01 ± 0,01. To evaluate the formulation’s whitening efficacy, tyrosinase inhibition was calculated and the azelaicacid loaded nanoemulsion was more effective than the control with the drug in its free form. The in vitro permeation study using Franz diffusion cells was conducted for 24 hours, using pig ear skin and showed that the formulation was able to permeate through the skin and reach the deeper layers (viable epidermis and dermis), allowing the drug to reach its action site, improving the melanin synthesis inhibition. To help understand the sensory profile of the nanoemulsion, a descriptive sensory evaluation was conducted with 16 volunteers. The nanoemulsion’s sensory profile showed a better spreadability and lower shine comparing with a product already available in pharmacies. Hence, the azelaic acid-loaded nanoemulsion developed in this word seems to be promising as a treatment for pigmentary skin disorders as dermal melasma.

O ácido azelaico é um fármaco amplamente utilizado como tratamento em diversas doenças de pele, como acne, rosácea e melasma. A utilização de sistemas nanoestruturados para aplicação tópica se mostra interessante visto que o menor tamanho de partícula proporciona uma melhor entrega de fármacos até o seu sítio de ação. É promissor o desenvolvimento de formulações capazes de diminuir os efeitos adversos do ácido azelaico e intensificar sua eficácia no tratamento de desordens pigmentárias da pele, aliado ao desenvolvimento de uma formulação com controle de permeação e perfil sensorial que facilite a adesão ao tratamento. O objetivo do presente trabalho é desenvolver uma nanoemulsão contendo ácido azelaico e realizar ensaios da tirosinase, permeação cutânea e análise sensorial da formulação desenvolvida. A nanoemulsão foi preparada através da técnica de homogeneização a alta velocidade. A caracterização físico-química avaliou os parâmetros de diâmetro médio de partícula e distribuição do tamanho de partícula pela técnica de difração de laser, o potencial zeta foi medido por mobilidade eletroforética, o pH por potenciometria e teor e eficiência de encapsulação por CLAE. A morfologia foi observada por microscopia eletrônica de transmissão. A nanoemulsão foi estável por 30 dias a 30°C/ 65% UR. A formulação apresentou teor de 10 mg/mL, tamanho de partícula de 419 ± 23 nm, distribuição monomodal, eficiência de encapsulação de 84,65%, potencial zeta de -10,9 ± 0,44 mV e pH de 5,01 ± 0,01. Para verificar a eficácia despigmentante da formulação foi realizado o ensaio in vitro de inibição de tirosinase, onde a nanoemulsão se mostrou mais eficaz que o controle com o fármaco na sua forma livre. O ensaio de permeação cutânea in vitro em células de difusão de Franz foi realizado com pele de orelha de porcos durante 24 horas e ele demonstrou que a formulação nanotecnológica conseguiu atingir as camadas mais profundas da pele (epiderme viável e derme), permitindo que o fármaco alcance o seu sítio de ação, facilitando a inibição da síntese de melanina. Foi realizada análise sensorial descritiva, com 16 voluntários demonstrando que a formulação apresentou maior espalhabilidade e menor brilho que um produto já disponível no mercado. Portanto, a nanoemulsão desenvolvida se mostra promissora para utilização no tratamento de melasma, inclusive o dérmico. / Azelaic acid is a drug commonly used in the treatment of several skin diseases such as acne, rosacea and melasma. Nanostructured systems for topical application are interesting because its smaller particle size lead to a better drug delivery to its action site. Therefore, it is promising to develop formulations able to lower azelaic acid’s side effects and increase its efficacy as a skin whitening agent as well as control its permeation and shows a sensory profile that helps with patient adherence. The aim of the present work is to develop an azelaic-acid loaded nanoemulsion, evaluating its tyrosinase inhibition, skin permeation and sensory profile. The nanoemulsion was prepared using high shear homogenization. Its characterization was conducted evaluating the average particle diameter through laser diffraction, the zeta potential by eletrophoretic mobility, pH by potentiometry and drug content and encapsulation efficiency by HPLC. The morphology of the nanoemulsion was observed by transmission electron microscopy. The product was stable for 30 days at 30°C/ 65 % RH. The theoretical drug content was 10 mg/mL and the particle size 419 ± 23 nm with a monomodal distribution profile, encapsulation efficiency of 84,65% and the zeta potencial was -10,9 ± 0,44 mV while the pH was 5,01 ± 0,01. To evaluate the formulation’s whitening efficacy, tyrosinase inhibition was calculated and the azelaicacid loaded nanoemulsion was more effective than the control with the drug in its free form. The in vitro permeation study using Franz diffusion cells was conducted for 24 hours, using pig ear skin and showed that the formulation was able to permeate through the skin and reach the deeper layers (viable epidermis and dermis), allowing the drug to reach its action site, improving the melanin synthesis inhibition. To help understand the sensory profile of the nanoemulsion, a descriptive sensory evaluation was conducted with 16 volunteers. The nanoemulsion’s sensory profile showed a better spreadability and lower shine comparing with a product already available in pharmacies. Hence, the azelaic acid-loaded nanoemulsion developed in this word seems to be promising as a treatment for pigmentary skin disorders as dermal melasma.

O ácido azelaico é um fármaco amplamente utilizado como tratamento em diversas doenças de pele, como acne, rosácea e melasma. A utilização de sistemas nanoestruturados para aplicação tópica se mostra interessante visto que o menor tamanho de partícula proporciona uma melhor entrega de fármacos até o seu sítio de ação. É promissor o desenvolvimento de formulações capazes de diminuir os efeitos adversos do ácido azelaico e intensificar sua eficácia no tratamento de desordens pigmentárias da pele, aliado ao desenvolvimento de uma formulação com controle de permeação e perfil sensorial que facilite a adesão ao tratamento. O objetivo do presente trabalho é desenvolver uma nanoemulsão contendo ácido azelaico e realizar ensaios da tirosinase, permeação cutânea e análise sensorial da formulação desenvolvida. A nanoemulsão foi preparada através da técnica de homogeneização a alta velocidade. A caracterização físico-química avaliou os parâmetros de diâmetro médio de partícula e distribuição do tamanho de partícula pela técnica de difração de laser, o potencial zeta foi medido por mobilidade eletroforética, o pH por potenciometria e teor e eficiência de encapsulação por CLAE. A morfologia foi observada por microscopia eletrônica de transmissão. A nanoemulsão foi estável por 30 dias a 30°C/ 65% UR. A formulação apresentou teor de 10 mg/mL, tamanho de partícula de 419 ± 23 nm, distribuição monomodal, eficiência de encapsulação de 84,65%, potencial zeta de -10,9 ± 0,44 mV e pH de 5,01 ± 0,01. Para verificar a eficácia despigmentante da formulação foi realizado o ensaio in vitro de inibição de tirosinase, onde a nanoemulsão se mostrou mais eficaz que o controle com o fármaco na sua forma livre. O ensaio de permeação cutânea in vitro em células de difusão de Franz foi realizado com pele de orelha de porcos durante 24 horas e ele demonstrou que a formulação nanotecnológica conseguiu atingir as camadas mais profundas da pele (epiderme viável e derme), permitindo que o fármaco alcance o seu sítio de ação, facilitando a inibição da síntese de melanina. Foi realizada análise sensorial descritiva, com 16 voluntários demonstrando que a formulação apresentou maior espalhabilidade e menor brilho que um produto já disponível no mercado. Portanto, a nanoemulsão desenvolvida se mostra promissora para utilização no tratamento de melasma, inclusive o dérmico. / Azelaic acid is a drug commonly used in the treatment of several skin diseases such as acne, rosacea and melasma. Nanostructured systems for topical application are interesting because its smaller particle size lead to a better drug delivery to its action site. Therefore, it is promising to develop formulations able to lower azelaic acid’s side effects and increase its efficacy as a skin whitening agent as well as control its permeation and shows a sensory profile that helps with patient adherence. The aim of the present work is to develop an azelaic-acid loaded nanoemulsion, evaluating its tyrosinase inhibition, skin permeation and sensory profile. The nanoemulsion was prepared using high shear homogenization. Its characterization was conducted evaluating the average particle diameter through laser diffraction, the zeta potential by eletrophoretic mobility, pH by potentiometry and drug content and encapsulation efficiency by HPLC. The morphology of the nanoemulsion was observed by transmission electron microscopy. The product was stable for 30 days at 30°C/ 65 % RH. The theoretical drug content was 10 mg/mL and the particle size 419 ± 23 nm with a monomodal distribution profile, encapsulation efficiency of 84,65% and the zeta potencial was -10,9 ± 0,44 mV while the pH was 5,01 ± 0,01. To evaluate the formulation’s whitening efficacy, tyrosinase inhibition was calculated and the azelaicacid loaded nanoemulsion was more effective than the control with the drug in its free form. The in vitro permeation study using Franz diffusion cells was conducted for 24 hours, using pig ear skin and showed that the formulation was able to permeate through the skin and reach the deeper layers (viable epidermis and dermis), allowing the drug to reach its action site, improving the melanin synthesis inhibition. To help understand the sensory profile of the nanoemulsion, a descriptive sensory evaluation was conducted with 16 volunteers. The nanoemulsion’s sensory profile showed a better spreadability and lower shine comparing with a product already available in pharmacies. Hence, the azelaic acid-loaded nanoemulsion developed in this word seems to be promising as a treatment for pigmentary skin disorders as dermal melasma.

Digestion and absorption of bioactive free fatty acids have been studied using the nematode Caernohabditis elegans (C. elegans). However, fatty acids mostly occur in foods in the form of triglycerides, which are highly hydrophobic molecules with low water-solubility, thereby making it difficult to study the fate of ingested fatty acids in C. elegans. The purpose of this research was to develop a method to deliver hydrophobic bioactives, including triglycerides, into C. elegans. Nanoemulsions containing triglyceride nanoparticles were prepared by sonication, and nanoparticle ingestion was confirmed by optical and confocal microscopy, and quantified by spectrometry. Changes in fatty acid composition were measured to confirm the absorption of triglycerides delivered as nanoparticles. Nanoparticles with a wide range of particle diameters (40 to 500 nm) were ingested by C. elegans. The ingested triglyceride amount was dependent on the size and concentration of the nanoparticles, but the fatty acid composition of C. elegans was not significantly changed by dietary triglycerides. Nanoemulsion based-delivery systems enable C. elegans to be used for evaluation of hydrophobic bioactives and may provide a useful tool for testing their biological activities.

Vitamin D deficiency is an epidemic issue in all age groups in Western countries and that affects both skeletal and non-skeletal functions. Even with the wide application of food fortification, vitamin D deficiency tends to increase continuously. Being hydrophobic in nature, vitamin D has poor solubility; thereby it negatively affects its absorption and bioavailability when compared to other hydrophilic dietary compounds. The need to develop a novel strategy is of greater importance to enhance its bioavailability and thereby improving vitamin D level in the body. In this study, lipid-based delivery of oil-in-water nanoemulsion (diameter < 200nm) was utilized to improve the bioaccessibility and oral bioavailability of vitamin D3. First, we examined the in vitro relative bioaccessibility of nanoencapsulated vitamin D3 using a simulated gastrointestinal system. The study results showed that nanoemulsion-based delivery system significantly increased the relative bioaccessibility by 3.94 fold when compared to the coarse emulsion (diameter >200nm), as indicated by the concentration of vitamin D3 in the mixed micelles. To evaluate the in vivo bioavailability of vitamin D3 an animal study was conducted. Mice were assigned randomly to three groups: vitamin D3 nanoemulsion (n=6), coarse emulsion (diameter > 200nm) (n=6) and vehicle (nanoemulsion without vitamin D3) (n=3), which is the control group. After 3-days of feeding emulsion by mixing in drinking water, the serum 25(OH)D3, a biomarker of vitamin D availability, was measured using immunoassay. We found that serum 25(OH)D3 level in animals fed with vitamin D3 nanoemulsion was significantly higher than in those animals fed with coarse emulsion (22.7 ± 1.10 ngmL-1 vs 17.92 ± 2.82 ngmL-1). It indicated that nanoemulsion improved the in vivo bioavailability by 28%. These results showed that the nano-based delivery systems can be utilized to improve vitamin D level, and further human studies are warranted for its application to the human population in order to improve the vitamin D status.

Artrite reumatóide é uma doença auto-imune que apresenta acentuado quadro inflamatório e proliferação celular o que, provavelmente, determina a alta prevalência de doenças cardiovasculares quando comparados a população mundial. A mortalidade e a morbidade conseqüentes das doenças cardiovasculares estão 2 vezes aumentadas em pacientes com artrite reumatóide e um dos principais fatores de risco relacionados ao desenvolvimento da aterosclerose é a dislipidemia. Esse importante fator de risco vem sendo associado à artrite reumatóide e as concentrações plasmáticas de lípides são constantemente avaliadas, já que se encontra bem estabelecido a relação entre dislipidemia e alta incidência de doença cardiovascular. No entanto, o verdadeiro impacto das alterações lipídicas na artrite reumatóide não é bem conhecido, já que os resultados de perfil lipídico são contraditórios. Alterações nas concentrações plasmáticas de lípides não necessariamente acompanham distúrbios no metabolismo das lipoproteínas plasmáticas. O objetivo do presente estudo foi avaliar aspectos do metabolismo da LDL e da HDL, em pacientes com artrite reumatóide. Nesse sentido, foi avaliada a cinética plasmática de uma nanoemulsão lipídica artificial com comportamento metabólico semelhante ao da LDL em 30 pacientes com artrite reumatóide divididos em 2 grupos de acordo com a atividade da doença, alta atividade (n=14) e remissão (n=16) e 30 indivíduos controle. A nanoemulsão marcada com éster de colesterol 14EC (EC-14C) e colesterol livre 3H (CL-3H) foi injetada endovenosamente após 12 horas de jejum. As amostras de sangue foram coletadas em tempos pré-determinados (5 min, 1, 2, 4, 6, 8 e 24 horas) após a injeção, para determinação das curvas de decaimento plasmático e da taxa fracional de remoção (TFR) dos lípides marcados, por análise compartimental. As TFR-EC-14C e TFR-CL-3H foram maiores no grupo AR quando comparado ao grupo controle (49%, p<0,05 e 44%, p<0,05, respectivamente), não havendo diferença entre os subgrupos de artrite reumatóide. No grupo artrite reumatóide e em seus subgrupos, as concentrações de HDL-C e apo E foram maiores quando comparados ao grupo controle (33%, p<0,0001 e 20%, p<0,01, respectivamente), enquanto os níveis de apo B foram menores na artrite reumatóide quando comparados ao grupo controle (16%, p<0,05). A transferência de colesterol esterificado radioativo da nanoemulsão para a HDL foi menor na artrite reumatóide, comparando-se com o grupo controle. A transferência dos outros lípides foi similar nos dois grupos. A HDL dos pacientes com artrite reumatóide foi menor do que a dos controles. Esses resultados podem contribuir com a melhor compreensão de possíveis mecanismos relacionados a uma maior incidência de doenças cardiovasculares em pacientes com artrite reumatóide / Mortality and morbidity, as a consequence of cardiovascular diseases, is twice as high in patients with rheumatoid arthritis than in the general worldwide population. This autoimmune disease has predominant inflammatory and cell proliferation background probably explains the high prevalence of cardiovascular disease. Dyslipidemias are important risk factors for cardiovascular disease. This study investigated the link between RA and plasma lipids as a predisposition to this high cardiovascular disease incidence. However, the impact of lipids on cardiovascular risk in rheumatoid arthritis is unclear. So much so, that lipid profiles in patients with rheumatoid arthritis in published studies is contradictory. The events of intravascular lipoprotein metabolism do not necessarily produce altered levels of plasma lipids. In an attempt to unravel novel dysfunctional mechanisms that could trigger pro-atherogenic processes beyond the concentration of the plasma lipids, plasma clearance of a lipidic nanoemulsion that resembles the LDL metabolic behavior were investigated in rheumatoid arthritis patients and compared to control subjects without the disease. 30 patients with rheumatoid arthritis divided into 2 groups according to disease activity, high activity (n=14) and remission (n=16), and 30 controls were studied. A nanoemulsion labeled with 14C-cholesteryl esther (14C-CE) and 3H-free cholesterol (3H-FC) were endovenously injected after which blood samples were collected at pre-determined periods (5 min, 1, 2, 4, 6, 8 and 24 hours), in order to determine the radioactivity of the plasma decay curves and calculate the fractional clearance rate (FCR) of the labeled lipids for compartmental analysis. In the rheumatoid arthritis group and subgroups the HDL-C and apo E concentration were higher when compared to control group (33%, p<0,0001 e 20%, p<0,01, respectively) while apo B concentration was lower (16%, p<0,05). The 14-CE-FCR and 3H-FC-FCR were greater in rheumatoid arthritis group and subgroups when compared to controls (49%, p<0,05 e 44%, p<0,05, respectively). There were no differences between the rheumatoid arthritis subgroups. Therefore, rheumatoid arthritis accelerates the LDL plasma removal, as indicated by a higher 14-CE-FCR and 3H-FC-FCR. The transfer of other lipids was also similar in both groups. The HDL of the rheumatoid arthritis patients was lower than that of the control group. These results could clarify possible mechanisms that can be related to a higher cardiovascular incidence in patients with rheumatoid arthritis

O tratamento da ceratite por Acanthamoeba é longo, inespecífico e de baixa adesão do paciente. Assim, a busca por novas estratégias de tratamento é necessária. Extratos não aquosos de algumas espécies de Pterocaulon exibem efeito antimicótico e antiparasitário, sendo esta atividade correntemente relacionada à presença de cumarinas. Neste contexto, o presente estudo teve por objetivo o desenvolvimento de nanoemulsões contendo extrato hexânico de Pterocaulon balansae Chodat (rico em cumarinas) visando à obtenção de um produto de uso ocular com atividade amebicida. Em uma primeira etapa, o extrato hexânico foi caracterizado por cromatografia líquida de alta eficiência com detector de arranjo de diodos, detectando-se a presença de quatro cumarinas majoritárias, entre elas, a 5-metoxi-6,7-metileno dioxicumarina (5MMDC), selecionada como marcador químico do extrato vegetal. O extrato foi na sequência incorporado em nanoemulsões constituídas de um núcleo de triglicerídeos de cadeia média estabilizado por lecitina de gema de ovo, preparadas por emulsificação espontânea. Tal procedimento conduziu à obtenção de nanoemulsões monodispersas com diâmetro médio de gotícula de aproximadamente 200-300 nm, independente da quantidade de extrato adicionado à formulação (1,0 a 5,0 mg/mL). A atividade amebicida das formulções contra Acanthamoeba castellanii foi dependente da dose e do tempo de incubação, sendo 24 horas e a concentração de 1,25 mg/mL de extrato considerada como ótima (~5% de viabilidade), com efeito similar ao controle clorexidina. Enfim, os estudos de citotoxicidade in vitro demonstraram que as células de epitélio de córnea humana (HCE) não foram afetadas com a incubação com as nanoemulsões através do ensaio de MTT. Esses resultados sugerem o potencial do extrato hexânico, rico em cumarinas de Pterocaulon balansae, associado a nanoemulsões como uma nova estratégia para o tratamento da ceratite ocular causada por Acanthamoeba. / Treatment for keratitis caused by Acanthamoeba is unspecific, long term and with low patient compliance, being the search of new treatment strategies a need. Non-aqueous extracts of some species of Pterocaulon exhibit antimycotic and anti-parasitic activity, usually attributed to the presence of coumarins. In this scenario, the aim of this work is the development of nanoemulsion to associate the coumarin-rich n-hexane extract of Pterocaulon balansae. Previously, the extract was prepared and characterized by high performance liquid chromatography with photodiode array detector. The presence of 4 major coumarins was detected, where 5-methoxy-6,7-methylene dioxycoumarin (5MMDC) was selected as chemical marker. This extract was associated to nanoemulsions composed of egg lecithin and medium chain triglycerides, prepared by spontaneous emulsification. The physicochemical characterization showed the formation of monodisperse nanoemulsions with 200-300 nm diameter, regardless the amount of extract incorporated (1.0-5.0 mg/mL). The amoebicidal activity of the formulations against Acanthamoeba castellanii was both dose-dependent and incubation time-dependent, being 24h of incubation and concentration of 1.25 mg/mL of the extract the optimal (~5% viability), with effect similar to chlorexidine control. Finally, in vitro cytotoxicity studies showed that human corneal epithelial cells were unaffected after incubation with nanoemulsions by MTT assay. These results suggest a potential of the coumarin-rich n-hexane extracts of Pterocaulon balansae associated to nanoemulsion as a new strategy for the treatment of ocular keratitis caused by Acanthamoeba.

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Logo, o objetivo deste estudo foi avaliar o potencial antimicobacteriano de naftoquinonas, um nanocarreador lipídico e seus excipientes (óleo de rícino, lecitina de soja, estearato de PEG 660 e rifampicina (RIF)), pelo método Resazurin Microtiter Assay, através da determinação da concentração mínima inibitória (CMI). As naftoquinonas foram avaliadas in vitro frente a três cepas de M. tuberculosis: uma pan-suscetível H37Rv (ATCC 27294); uma monoresistente à isoniazida (INHr - ATCC 35822) com mutação no gene katG (S315T); e outra monoresistente à rifampicina (RIFr - ATCC 35338) com mutação no gene rpoB (H526T), enquanto a RIF-NE e seus excipientes foram avaliados frente a outras três cepas: uma pan-suscetível H37Rv (ATCC 27294); um isolado clínico suscetível e um isolado clínico multidroga resistente (MDR), com mutações nos genes katG (S315T) e rpoB (S531L). Todas as naftoquinonas foram ativas frente às três cepas de M. tuberculosis, com CMI entre 234 e 12,5 μM. Entretanto, as moléculas que apresentam um grupamento amina em sua composição, apresentaram resultados promissores relacionados à primeira etapa de desenvolvimento de um novo fármaco, devido à atividade antimicobacteriana e à baixa toxicidade frente a macrófagos da linhagem J774A.1. Em relação aos nanocarreadores lipídicos, foi possível observar que o encapsulamento da RIF não foi capaz de potencializar sua atividade in vitro para as cepas suscetíveis, porém, aumentou 130x a suscetibilidade da cepa MDR à RIF. Com base nesse resultado, foi avaliada a atividade antimicobacteriana da nanoemulsão sem rifampicina (UN-NE) e dos excipientes utilizados na sua formulação. O estearato de PEG 660 foi ativo frente às três cepas de M. tuberculosis, enquanto o óleo de rícino e a lecitina de soja não apresentaram atividade antimicobacteriana. Considerando as concentrações proporcionais de cada componente na formulação das nanoemulsões e a CMI desses compostos separadamente, pode-se inferir que a atividade antimicrobiana da UN-NE para as três cepas e da RIF-NE para a cepa MDR pode estar relacionada à atividade do estearato de PEG 660. Dessa forma, alguns compostos avaliados neste estudo apresentaram potencial antimicobacteriano e podem ser promissores no desenvolvimento de novas alternativas terapêuticas para a TB, servindo como protótipos para novos fármacos ou novos carreadores de fármacos anti-TB. / Tuberculosis (TB) is an infectious disease caused mainly by Mycobacterium tuberculosis and although curable, is still considered a problem of public health worldwide. Prolonged treatment combined with its toxic effects and pharmacokinetic interactions with other compounds can hamper patient adherence to therapy, besides selecting resistant bacilli. These factors reinforce the need to search for new drugs and substances that can enhance the action of other drugs already established. Therefore, the aim of this study was to evaluate the antimycobacterial potential of naphthoquinones, a lipid nanocarrier and its ingredients (castor oil, soy lecithin, PEG stearate 660 and rifampicin (RIF)), by Resazurin Microtiter Assay, by determining the minimum inhibitory concentration (MIC). The naphthoquinones were evaluated against three strains in vitro: a pan-susceptible H37Rv (ATCC 27294); one monoresistant isoniazid (ATCC 35822) with mutation in the katG gene (S315T); and a monoresistant to RIF (ATCC 35338) with a mutation in rpoB gene (H526T), while RIF-NE and the excipients have been evaluated against other three strains: a pan-susceptible H37Rv (ATCC 27294); a susceptible clinical isolate and a multidrug-resistant (MDR) clinical isolate, with mutations in the katG gene (S315T) and rpoB (S531L). All naphthoquinones were active against the three strains of M. tuberculosis, with MIC between 234 and 12.5 μM. However, the molecules which have an amine grouping in their composition have shown promising results related to the first stage of a new drug development, due to the antimycobacterial activity and low toxicity against the J774A.1 macrophage lineage. About lipid nanocarriers, it was observed that the encapsulation of RIF was not able to enhance its in vitro activity for susceptible strains, however, increased 130x the susceptibility of the MDR strain to RIF. Based on this result, the antimycobacterial activity of the nanoemulsion without rifampicin (UN-NE) and excipients used in the formulation was evaluated. The PEG-660 stearate was active against the three strains of M. tuberculosis, while castor oil and soy lecithin showed no antimycobacterial activity. Considering the proportional concentrations of each component in the formulation of nanoemulsions and MIC of these compounds separately, it can infer that the antimicrobial activity of UN-NE for the three strains and RIF-NE for MDR strain can be related to PEG-660 stearate activity. Thus, some compounds evaluated in this study showed antimycobacterial activity and may be promising in the development of new therapeutic alternatives for TB, serving as prototypes for new drugs or new carriers of anti-TB drugs.

A atividade antiviral de compostos flavonoídicos tem sido amplamente investigada nos últimos anos. Nesse contexto, a primeira etapa da presente tese teve por objetivo avaliar a atividade anti-herpética in vitro dos principais isoflavonóides de Glycine max (soja): genisteína, daidzeína, gliciteína e cumestrol. Dentre os isoflavonóides investigados, a genisteína e o cumestrol mostraram uma interessante atividade frente aos vírus HSV-1 (cepa KOS e 29R, sensível e resistente ao aciclovir, respectivamente) e HSV-2 (cepa 333), interferindo em diferentes etapas do ciclo de replicação dos vírus. Devido à reduzida hidrossolubilidade desses isoflavonóides, foi proposta a sua incorporação em nanoemulsões de uso tópico. As formulações foram otimizadas através de um experimento fatorial completo do tipo 23 . O efeito dos fatores tipo de óleo (óleo de rícino ou miristato de isopropila), co-tensoativo iônico (oleilamina ou ácido olêico) e fosfolipídeo (DSPC ou DOPC) sobre as propriedades das nanoemulsões e a retenção da genisteína na pele de orelha suína foi investigado. Nanoemulsões compostas de miristato de isopropila/ oleilamina/DOPC apresentaram um menor diâmetro de gotícula e uma maior retenção de genisteína na pele de orelha suína enquanto que a combinação miristato de isopropila/oleilamina/DSPC mostrou o menor índice de polidispersão. A viscosidade das formulações selecionadas foi ajustada através do uso de hidroxietilcelulose visando à obtenção de produtos de uso tópico, obtendo-se hidrogéis de comportamento pseudoplástico. Na sequência, um conjunto de resultados obtidos demonstrou que a composição das formulações (especialmente o fosfolipídeo DOPC e o agente espessante hidroxietil celulose) pode influenciar a liberação e a retenção dos isoflavonóides em mucosa esofágica suína. A integridade da mucosa também desempenha um papel no aumento da permeação/retenção do cumestrol, conforme ilustrado nas imagens de microscopia confocal, utilizando vermelho do Nilo como marcador fluorescente. De maneira geral, a incorporação dos isoflavonóides nas nanoemulsões aumenta a atividade anti-herpética desses compostos in vitro. O conjunto dos resultados demonstra que as formulações desenvolvidas são potenciais carreadores de uso tópico para genisteína e cumestrol no tratamento das infecções herpéticas. / The antiviral activity of flavonoid compounds has been extensively investigated in recent years. In this context, the first step of this study was to evaluate the antiherpes activity in vitro of the main isoflavonoids of Glycine max (soybean): genistein, daidzein, glycitein and coumestrol. Among the investigated isoflavonoids, genistein and coumestrol showed interesting activity against HSV-1 (KOS and 29R strains, which are acyclovir-sensitive and acyclovir–resistant strains, respectively) and HSV-2 (333 strain), interfering at different stages of the virus replication cycle. Due to the low hydrosolubility of these isoflavonoids, their incorporation into topical nanoemulsions was proposed in this study. The formulations were optimized through a 23 full factorial design. The factors effect of oil type (castor oil or isopropyl myristate), ionic co-surfactant (oleylamine or oleic acid) and phospholipid type (DSPC or DOPC) on physicochemical properties and genistein retention into porcine ear skin was investigated. Nanoemulsions composed of isopropyl myristate/ DOPC/oleylamine showed the smaller particle size and higher genistein retention into skin, whereas the formulation composed of isopropyl myristate/DSPC/oleylamine exhibited the lower polydispersity index. The viscosity of selected formulations was adjusted with hydroxyethyl cellulose to obtain topical products, which showed nonNewtonian behavior. In sequence, a set of results showed that formulations composition (especially the phospholipid DOPC and the thickening agent hydroxyethyl cellulose) could influence the release and retention of isoflavonoids in porcine esophagus mucosa. The integrity of mucosa plays a role on the increase of coumestrol permeation/retention, according to confocal microscopy images, using Red Nile as fluorescent label. In general terms, the incorporation of isoflavonoids into nanoemulsions increases the antiherpes activity of these compounds in vitro. The overall results show that the formulations developed in this study are potential topical carriers for genistein and coumestrol in the treatment of herpes infections.