Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Pós-Graduação em Ciências da Cirurgia, Campinas, 2012. / Made available in DSpace on 2017-08-28T16:25:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 347758.pdf: 4105947 bytes, checksum: af11b64c91070282e755c061d50774e9 (MD5) Previous issue date: 2012 / Introdução - Com os estudos de Gould et al. (1960), Cabanas (1977) e Morton et al. (1992), estabeleceu-se o conceito da pesquisa do linfonodo sentinela. Esse se baseia na teoria de que ao identificar a presença ou ausência de metástase no primeiro linfonodo que recebe a drenagem linfática a partir do tumor (sentinela), poderia representar o estado de acometimento dos outros linfonodos. Isto evitaria a realização desnecessária de linfadenectomias. Com o passar dos anos, foi consagrada para ser aplicada em casos de melanoma e câncer de mama. Nesta última década, tenta-se estender os princípios da utilização da pesquisa de linfonodo sentinela para os cânceres do aparelho digestivo. Entretanto, no caso do estômago, existem algumas dificuldades, como: presença de sistema de drenagem linfática multidirecional, ocorrência de metástases saltatórias e identificação de mais de um linfonodo sentinela por indivíduo. Objetivo - Criar e padronizar um modelo animal para o treinamento de pesquisa de linfonodos sentinelas em estômago. Método - Trinta e dois coelhos, saudáveis, foram submetidos à anestesia exclusivamente intramuscular. Por meio de laparotomia, foi injetado na subserosa da parede anterior do corpo gástrico, 0,1 ml de fitato marcado com tecnécio-99m (0,2 mCi), em seguida pelo mesmo orifício, de 0,2 ml de Azul Patente V® 2,5%. A cavidade abdominal foi avaliada, in vivo , para pesquisa de suspeitas de linfonodos azuis (corados em azul) e com detector manual de radiação gamma aos 5, 10 e 20 minutos para detecção de suspeitas de linfonodos radioativos (radioatividade identificada superior a 10X o valor apresentado pelo fundo). Após 20 minutos, realizou-se ressecção e exérese total do estômago, baço e suspeitas de linfonodos, para posterior avaliação da radioatividade ex vivo . A seguir, encaminharam-se as suspeitas de linfonodos para estudo histológico para identificação de tecido linfóide. Resultados - Foram identificados linfonodos em 30 coelhos (93,75%) com média de 2,2 por animal. Das 90 suspeitas de linfonodos detectadas, em 70 casos (77,77%) obteve-se confirmação histológica para tecido linfóide. Dessas, a maioria foi identificada e localizada na região entre o esôfago e o fundo gástrico durante a avaliação in vivo aos 5 minutos. Dois coelhos faleceram durante os experimentos (Taxa de mortalidade = 6,25%). Conclusão - O modelo experimental em coelhos para pesquisa de linfonodos sentinelas em estômago por métodos combinados foi factível, de fácil execução e baixa mortalidade, podendo ser usado para treinamento.<br> / Abstract : Introduction - The concept of sentinel lymph node was established by the studies of Gould et al. (1960), Cabanas (1977) and Morton et al. (1992). It is based on the theory that, whenever the presence or absence of metastasis is identified in the first lymph node that receives the lymphatic drainage from the tumor (sentinel) the status of involvement of other lymph nodes might be infered. This could avoid the performance of unnecessary lymphadenectomies. Over the years, its use was consecrated by its application in melanoma and breast cancer. In the last decade, attempts have been made to extend the principles of sentinel lymph node investigation to cancers of the digestive tract. In the case of stomach cancer, additional difficulties were found, such as multiple and aberrant lymphatic routes, the occurrence of skip metastasis and the possible identification of more than one sentinel lymph node in the same patient. Aim - To develop and evaluate an animal model for training sentinel lymph node navigation in the stomach. Methods - Thirtytwo healthy rabbits, were prepped and given intramuscular anesthesia. Through a formal laparotomy, they received a subserosal injection of 0.1 ml of phytate labeled with technetium-99m (0.2 mCi) in the anterior wall of the gastric corpus, followed by 0.2 ml of Blue Patent ® V 2.5%, through the same puncture site. Suspicious lymph nodes were searched in-vivo at 5, 10 and 20 minutes, both visually (Blue Patent stained lymph nodes) and with a manual gamma radiation detector (to detect suspected radioactive lymph nodes, displaying radioactivity levels over 10X the value displayed by the background). En-block resection of the stomach, spleen, visible limph nodes and local fat tissue was then performed and the specimen was assessed "ex vivo" for radioactivity. Suspected lymph nodes were sent for histological study to evaluate the presence of lymphoid tissue. Results Radiolabeled or stained lymph nodes were identified in 30 rabbits (93.75%) with an average of 2.2 specimens per animal; of the 90 suspicious lymph nodes detected, histology confirmed lymphoid tissue in 70 cases (77.77%). Most lymph nodes were identified at the 5-minute in-vivo evaluation and their most common location was found to be in the region between the esophagus and the gastric fundus. Two rabbits died during the procedure resulting in a 6.25% mortality. Conclusion - The rabbit model proved adequate for training in sentinel node navigation in the stomach by combined methods (dye and radiocolloid) being easy to execute and associated with low mortality.

A metaplasia intestinal gástrica (MIG) é considerada como lesão precursora para o câncer gástrico, mas isto não tem levado a um controle maior dos portadores. Estudamos uma população dispéptica adulta e detectamos a prevalência de MIG. Vários marcadores têm sido testados para indicar qual paciente portador de metaplasia intestinal deva ser acompanhado com exames periódicos. Um destes marcadores é a pesquisa da proteína de membrana CD44v6 em lesões pré-malignas. Objetivo: estudar a expressão da CD44v6 em pacientes dispépticos com Helicobacter pylori (H. pylori) e metaplasia intestinal gástrica. Local: Hospital de Clínicas de Porto Alegre, Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Pacientes: 642 pacientes dispépticos dos quais foram estudados 56 pacientes com MIG e comparados com outros dois grupos, um de pacientes com H. pylori e outro, sem H. pylori e sem MIG. Métodos: estudo da MIG com colorações HE (hematoxilina-eosina), PAS/AB (periodic acid-Schiff/ Alcian blue), HID (high iron diamine) e, para estudar a expressão da CD44v6, empregou-se a imuno-histoquímica. Resultados: De 642 pessoas avaliadas, 424 eram portadoras de Helicobacter pylori e 218 não. Das portadoras, 77 tinham MIG (18,2%) e das não portadoras, 15 (6,9%). Das pessoas com MIG, estudamos 56 casos, sendo MIG do tipo I em 55% (31/56) dos casos, 22% (12/56) do tipo II e 23% (13/56) do tipo III. A MIG teve igual proporção entre os sexos, foi mais frequente no antro, o tipo de MIG não teve relação com a extensão da metaplasia e não houve aumento proporcional com a idade. Na nossa população de estudo, a MIG foi de baixa frequência relativa (14,4%). Quanto à CD44v6, todos os nossos casos foram negativos para esta proteína. Conclusões: 1) Os nossos casos foram todos negativos para CD44v6 e não vemos utilidade de utilizar este marcador no nosso meio no rastreamento de pacientes com metaplasia intestinal gástrica que mereceriam um acompanhamento subsequente. 2) Biópsias do antro e da incisura detectaram quase a totalidade (93%) dos casos de metaplasia intestinal gástrica nos nossos casos e isto pode ser uma indicação para a prática clínica. 3) A distribuição da metaplasia intestinal gástrica entre os sexos seguiu a proporção no grupo estudado, concluindo-se que não há diferença entre os sexos. 4) Não encontramos alteração da freqüência da metaplasia intestinal gástrica conforme a idade. 5) O achado de borda em escova ou células de Paneth não exclui que naquela lâmina haja glândulas metaplásicas do tipo incompleto. 6) Não houve relação entre o local da metaplasia intestinal gástrica e seu tipo. 7) Não houve relação entre extensão e tipo de metaplasia intestinal gástrica. 8) A população estudada tem baixa prevalência de metaplasia intestinal gástrica. / The gastric intestinal metaplasia (GIM) is considered a premalignant lesion for gastric cancer, but this has not led to greater control of the carriers. We studied a dyspeptic adult population and detected the prevalence of GIM. Several markers have been tested to indicate which patients with intestinal metaplasia should be followed with periodic examinations. One of these markers is the membrane protein CD44v6. Objective: To study the expression of CD44v6 in dyspeptic patients with Helicobacter pylori (H. pylori) and gastric intestinal metaplasia. Location: Hospital de Clinicas de Porto Alegre, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, RS, Brazil. Patients: 642 dyspeptic patients of which 56 patients with GIM and compared with two other groups, one of patients with H. pylori and another without H. pylori. Methods: A study of GIM with HE staining (hematoxylin-eosin), PAS / AB (periodic acid-Schiff / Alcian blue), HID (high iron diamine). We used immunohistochemistry (IHC) to study the expression of CD44v6. Results: Of 642 patients evaluated, 424 were carriers of Helicobacter pylori and 218 did not. The carriers had 77 MIG (18.2%) and noncarriers, 15 (6.9%). Of those GIM 56 study cases, GIM type I by 55% (31/56) cases, 22% (12/56) Type II and 23% (13/56) of Type III. GIM had equal sex ratio, was more frequent in the antrum, the type of GIM was not related to the extent of metaplasia and there was no proportional increase with age. In our study population, the GIM has low relative frequency (14.4%). As to CD44v6, all our cases were negative for this protein. Conclusions: 1 ) Our cases were all negative for CD44v6 and we do not see the usefulness of using this marker in screening patients with gastric intestinal metaplasia that merit a subsequent follow-up. 2) Biopsies of the antrum and incisura detected almost all (93 %) cases of gastric intestinal metaplasia in our cases and this can be an indication for clinical practice. 3) The distribution of gastric intestinal metaplasia between the sexes followed the proportion in the group studied, and so there is no difference between the sexes. 4) No change was found in the frequency of gastric intestinal metaplasia according to age. 5) The finding of brush border and Paneth cells does not preclude that metaplastic glands is not of the incomplete type. 6) There was no relationship between the location of gastric intestinal metaplasia and its type. 7) There was no relationship between the extent and type of gastric intestinal metaplasia. 8) The population has a low prevalence of gastric intestinal metaplasia.

O câncer gástrico é a terceira causa de morte por câncer no mundo e a quimioterapia combinatória é um dos principais tratamentos para esta doença. Contudo, a principal causa de falha do tratamento é a quimiorresistência. Considerando este obstáculo juntamente com a descoberta de que muitas proteínas envolvidas na mitose podem estar associadas à tumorigênese, vários agentes antimitóticos estão sendo desenvolvidos e testados. As proteínas mitóticas AURKB e NDC80 foram recentemente identificadas como proteínas potenciais a serem inibidas no câncer gástrico. Portanto, o objetivo deste estudo foi analisar os efeitos da inibição de AURKB e NDC80 pelos fármacos experimentais ZM447439 e INH1, respectivamente. Analisamos os efeitos em duas linhagens de adenocarcinoma gástrico avaliando expressão gênica, ciclo celular, morte celular, análise morfométrica nuclear, capacidade de migração e presença de células-tronco tumorais. É importante enfatizar que essas duas pequenas moléculas não foram testadas na quimioterapia do câncer gástrico até o momento. Além disso, após uma revisão da literatura, concluímos que os melhores resultados dos ensaios clínicos foram alcançados quando antimitóticos foram combinados com a terapia convencional. Dessa forma, avaliamos também os efeitos da associação de 5- FU com ZM447439. Nossos resultados demonstraram que a monoterapia com 5-FU, ZM447439 e INH1 induziu a expressão gênica diferencial nas linhagens de câncer gástrico (ACP02 e ACP03) de pelo menos 22 de um total de 82 genes envolvidos em várias vias, como apoptose, ciclo celular, senescência e transição epitélio-mesenquimal. Observamos também que ZM447439 e sua combinação com 5-FU induziram apoptose, catástrofe mitótica, senescência e ciclo celular alterado nas linhagens de câncer gástrico. Outro dado interessante foi a expressão dos marcadores de células-tronco tumorais gástricas, LGR5 e CD24, e a capacidade de formar esferas, indicando que ambas ACP02 e ACP03 podem conter células tronco tumorais. Além disso, a monoterapia com ZM447439 ou 5-FU foi capaz de inibir a formação de esferas. Por outro lado, o INH1 mostrou menor atividade antitumoral, uma vez que apresentou o maior valor de IC50 e foi capaz somente de induzir apoptose e reduzir a migração celular. Interessantemente, a combinação do 5-FU com ZM447439 permitiu o uso de doses menores dos compostos, além de ser capaz de induzir a apoptose num tempo mais curto quando comparado com o tratamento com os fármacos isolados. Em síntese, os resultados observados sugerem o inibidor de AURKB, ZM447439, e sua associação com o agente quimioterápico 5-FU, como tratamentos promissores do câncer gástrico com base em sua elevada atividade antitumoral in vitro. / Gastric cancer is the third cause of cancer death worldwide and combinatorial chemotherapy is one of the main treatments for this disease. However, the major cause of treatment failure is chemoresistance. Considering this obstacle together with the discovery that many proteins involved in mitosis might be associated to tumorigenesis, several new anti-mitotics are being developed and tested. The mitotic proteins AURKB and NDC80 were recently shown as potential proteins to be inhibited in gastric cancer. Therefore, the aim of this study was to analyze the effects of AURKB and NDC80 inhibition by the experimental drugs ZM447439 and INH1, respectively. We analyzed the effects in two gastric adenocarcinoma cell lines evaluating gene expression, cell cycle, cell death, nuclear morphometric analysis, migration ability and presence of gastric cancer stem cells. It is important to emphasize these two small molecules have not been tested in gastric cancer chemotherapy until now. Moreover, after reviewing the literature, we concluded the best results of clinical trials were achieved when anti-mitotics were combined with conventional therapy. Thus, we evaluated the effects of 5-FU and ZM447439 combination as well. Our results demonstrated that monotherapy with 5-FU, ZM447439 and INH1 induced differential gene expression in gastric cancer cell lines (ACP02 and ACP03) of at least 22 from 82 genes involved in several pathways such as apoptosis, cell cycle, senescence and epithelial mesenchymal transition. We also observed that ZM447439 and its combination with 5-FU induced apoptosis, mitotic catastrophe, senescence and altered cell cycle in gastric cancer cell lines. Another interesting data was the expression of the gastric cancer stem cell markers LGR5 and CD24, and the ability to form spheres, indicating that both ACP02 and ACP03 may be composed by cancer stem cells. Furthermore, monotherapy with either ZM447439 or 5-FU were capable of inhibiting the formation of spheres. On the other hand, INH1 have shown lower antitumoral activity since it presented the highest IC50 value and was only capable of inducing apoptosis and reducing cell migration. Interestingly, the combination of 5-FU with ZM447439 allowed the use of smaller doses of the compounds, in addition to being able to induce apoptosis in a shorter time when compared to the treatment with the isolated drugs. Taken together, our findings suggest that due to the high antitumoral activity shown by ZM447439 and mainly its association with 5-FU, these might be promising gastric cancer therapies.

Resumo não disponível

Resumo não disponível

O câncer gástrico é ainda hoje um dos tumores sólidos mais comuns , sendo a segunda causa mais freqüente de morte por doença maligna no mundo. Apesar do aprimoramento da técnica cirúrgica e da utilização de tratamentos multimodais, o câncer gástrico, em geral, ainda permanece com um mau prognóstico. Na maioria dos países a doença é freqüentemente diagnosticada após ter invadido a camada muscular própria do órgão, estágio no qual a sobrevida média em cinco anos é inferior a 20%. Como a maioria dos tumores humanos, o câncer gástrico é uma doença multifatorial, que se desenvolve em indivíduos geneticamente suscetíveis expostos a agentes carcinogênicos externos. Ultimamente, diversos oncogenes e genes supressores tumorais vêm sendo estudados na tentativa de esclarecer detalhadamente a carcinogênese gástrica. Her-2/Neu ou CerbB-2 e EGFR são oncogenes da família Her ou erb de receptores de fatores de crescimento. Ambos têm se mostrado com expressão aumentada em diversas neoplasias e possuem anticorpos monoclonais específicos como potencial forma de tratamento adjuvante. Em relação ao câncer gástrico, as prevalências destes oncogenes são bastante variáveis na literatura. O objetivo deste estudo foi determinar as prevalências de Her-2/Neu e EGFR na mucosa gástrica de pacientes com adenocarcinoma de estômago. Foram estudados 37 casos com avaliação de expressão imunohistoquímica de Her-2/neu e EGFR em amostras teciduais fixadas em formalina e armazenadas em parafina. Dois casos demonstraram expressão aumentada de Her-2/Neu, correspondendo a 5,4%. Nenhum caso demonstrou aumento da expressão de EGFR. Os autores concluem que a ausência da expressão do EGFR na amostra estaria mais relacionada a uma dificuldade encontrada de trabalhar com o anticorpo do que a real ausência de expressão do oncogene no câncer gástrico. Também sugerem que, apesar da baixa prevalência do Her-2/Neu na amostra, e devido à pouca resposta dos tumores gástricos às terapias hoje disponíveis, os anticorpos monoclonais específicos anti-Her deveriam ser futuramente testados nos indivíduos Her positivos, em ensaios clínicos randomizados.

A metaplasia intestinal gástrica (MIG) é considerada como lesão precursora para o câncer gástrico, mas isto não tem levado a um controle maior dos portadores. Estudamos uma população dispéptica adulta e detectamos a prevalência de MIG. Vários marcadores têm sido testados para indicar qual paciente portador de metaplasia intestinal deva ser acompanhado com exames periódicos. Um destes marcadores é a pesquisa da proteína de membrana CD44v6 em lesões pré-malignas. Objetivo: estudar a expressão da CD44v6 em pacientes dispépticos com Helicobacter pylori (H. pylori) e metaplasia intestinal gástrica. Local: Hospital de Clínicas de Porto Alegre, Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Pacientes: 642 pacientes dispépticos dos quais foram estudados 56 pacientes com MIG e comparados com outros dois grupos, um de pacientes com H. pylori e outro, sem H. pylori e sem MIG. Métodos: estudo da MIG com colorações HE (hematoxilina-eosina), PAS/AB (periodic acid-Schiff/ Alcian blue), HID (high iron diamine) e, para estudar a expressão da CD44v6, empregou-se a imuno-histoquímica. Resultados: De 642 pessoas avaliadas, 424 eram portadoras de Helicobacter pylori e 218 não. Das portadoras, 77 tinham MIG (18,2%) e das não portadoras, 15 (6,9%). Das pessoas com MIG, estudamos 56 casos, sendo MIG do tipo I em 55% (31/56) dos casos, 22% (12/56) do tipo II e 23% (13/56) do tipo III. A MIG teve igual proporção entre os sexos, foi mais frequente no antro, o tipo de MIG não teve relação com a extensão da metaplasia e não houve aumento proporcional com a idade. Na nossa população de estudo, a MIG foi de baixa frequência relativa (14,4%). Quanto à CD44v6, todos os nossos casos foram negativos para esta proteína. Conclusões: 1) Os nossos casos foram todos negativos para CD44v6 e não vemos utilidade de utilizar este marcador no nosso meio no rastreamento de pacientes com metaplasia intestinal gástrica que mereceriam um acompanhamento subsequente. 2) Biópsias do antro e da incisura detectaram quase a totalidade (93%) dos casos de metaplasia intestinal gástrica nos nossos casos e isto pode ser uma indicação para a prática clínica. 3) A distribuição da metaplasia intestinal gástrica entre os sexos seguiu a proporção no grupo estudado, concluindo-se que não há diferença entre os sexos. 4) Não encontramos alteração da freqüência da metaplasia intestinal gástrica conforme a idade. 5) O achado de borda em escova ou células de Paneth não exclui que naquela lâmina haja glândulas metaplásicas do tipo incompleto. 6) Não houve relação entre o local da metaplasia intestinal gástrica e seu tipo. 7) Não houve relação entre extensão e tipo de metaplasia intestinal gástrica. 8) A população estudada tem baixa prevalência de metaplasia intestinal gástrica. / The gastric intestinal metaplasia (GIM) is considered a premalignant lesion for gastric cancer, but this has not led to greater control of the carriers. We studied a dyspeptic adult population and detected the prevalence of GIM. Several markers have been tested to indicate which patients with intestinal metaplasia should be followed with periodic examinations. One of these markers is the membrane protein CD44v6. Objective: To study the expression of CD44v6 in dyspeptic patients with Helicobacter pylori (H. pylori) and gastric intestinal metaplasia. Location: Hospital de Clinicas de Porto Alegre, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, RS, Brazil. Patients: 642 dyspeptic patients of which 56 patients with GIM and compared with two other groups, one of patients with H. pylori and another without H. pylori. Methods: A study of GIM with HE staining (hematoxylin-eosin), PAS / AB (periodic acid-Schiff / Alcian blue), HID (high iron diamine). We used immunohistochemistry (IHC) to study the expression of CD44v6. Results: Of 642 patients evaluated, 424 were carriers of Helicobacter pylori and 218 did not. The carriers had 77 MIG (18.2%) and noncarriers, 15 (6.9%). Of those GIM 56 study cases, GIM type I by 55% (31/56) cases, 22% (12/56) Type II and 23% (13/56) of Type III. GIM had equal sex ratio, was more frequent in the antrum, the type of GIM was not related to the extent of metaplasia and there was no proportional increase with age. In our study population, the GIM has low relative frequency (14.4%). As to CD44v6, all our cases were negative for this protein. Conclusions: 1 ) Our cases were all negative for CD44v6 and we do not see the usefulness of using this marker in screening patients with gastric intestinal metaplasia that merit a subsequent follow-up. 2) Biopsies of the antrum and incisura detected almost all (93 %) cases of gastric intestinal metaplasia in our cases and this can be an indication for clinical practice. 3) The distribution of gastric intestinal metaplasia between the sexes followed the proportion in the group studied, and so there is no difference between the sexes. 4) No change was found in the frequency of gastric intestinal metaplasia according to age. 5) The finding of brush border and Paneth cells does not preclude that metaplastic glands is not of the incomplete type. 6) There was no relationship between the location of gastric intestinal metaplasia and its type. 7) There was no relationship between the extent and type of gastric intestinal metaplasia. 8) The population has a low prevalence of gastric intestinal metaplasia.

O câncer gástrico é a terceira causa de morte por câncer no mundo e a quimioterapia combinatória é um dos principais tratamentos para esta doença. Contudo, a principal causa de falha do tratamento é a quimiorresistência. Considerando este obstáculo juntamente com a descoberta de que muitas proteínas envolvidas na mitose podem estar associadas à tumorigênese, vários agentes antimitóticos estão sendo desenvolvidos e testados. As proteínas mitóticas AURKB e NDC80 foram recentemente identificadas como proteínas potenciais a serem inibidas no câncer gástrico. Portanto, o objetivo deste estudo foi analisar os efeitos da inibição de AURKB e NDC80 pelos fármacos experimentais ZM447439 e INH1, respectivamente. Analisamos os efeitos em duas linhagens de adenocarcinoma gástrico avaliando expressão gênica, ciclo celular, morte celular, análise morfométrica nuclear, capacidade de migração e presença de células-tronco tumorais. É importante enfatizar que essas duas pequenas moléculas não foram testadas na quimioterapia do câncer gástrico até o momento. Além disso, após uma revisão da literatura, concluímos que os melhores resultados dos ensaios clínicos foram alcançados quando antimitóticos foram combinados com a terapia convencional. Dessa forma, avaliamos também os efeitos da associação de 5- FU com ZM447439. Nossos resultados demonstraram que a monoterapia com 5-FU, ZM447439 e INH1 induziu a expressão gênica diferencial nas linhagens de câncer gástrico (ACP02 e ACP03) de pelo menos 22 de um total de 82 genes envolvidos em várias vias, como apoptose, ciclo celular, senescência e transição epitélio-mesenquimal. Observamos também que ZM447439 e sua combinação com 5-FU induziram apoptose, catástrofe mitótica, senescência e ciclo celular alterado nas linhagens de câncer gástrico. Outro dado interessante foi a expressão dos marcadores de células-tronco tumorais gástricas, LGR5 e CD24, e a capacidade de formar esferas, indicando que ambas ACP02 e ACP03 podem conter células tronco tumorais. Além disso, a monoterapia com ZM447439 ou 5-FU foi capaz de inibir a formação de esferas. Por outro lado, o INH1 mostrou menor atividade antitumoral, uma vez que apresentou o maior valor de IC50 e foi capaz somente de induzir apoptose e reduzir a migração celular. Interessantemente, a combinação do 5-FU com ZM447439 permitiu o uso de doses menores dos compostos, além de ser capaz de induzir a apoptose num tempo mais curto quando comparado com o tratamento com os fármacos isolados. Em síntese, os resultados observados sugerem o inibidor de AURKB, ZM447439, e sua associação com o agente quimioterápico 5-FU, como tratamentos promissores do câncer gástrico com base em sua elevada atividade antitumoral in vitro. / Gastric cancer is the third cause of cancer death worldwide and combinatorial chemotherapy is one of the main treatments for this disease. However, the major cause of treatment failure is chemoresistance. Considering this obstacle together with the discovery that many proteins involved in mitosis might be associated to tumorigenesis, several new anti-mitotics are being developed and tested. The mitotic proteins AURKB and NDC80 were recently shown as potential proteins to be inhibited in gastric cancer. Therefore, the aim of this study was to analyze the effects of AURKB and NDC80 inhibition by the experimental drugs ZM447439 and INH1, respectively. We analyzed the effects in two gastric adenocarcinoma cell lines evaluating gene expression, cell cycle, cell death, nuclear morphometric analysis, migration ability and presence of gastric cancer stem cells. It is important to emphasize these two small molecules have not been tested in gastric cancer chemotherapy until now. Moreover, after reviewing the literature, we concluded the best results of clinical trials were achieved when anti-mitotics were combined with conventional therapy. Thus, we evaluated the effects of 5-FU and ZM447439 combination as well. Our results demonstrated that monotherapy with 5-FU, ZM447439 and INH1 induced differential gene expression in gastric cancer cell lines (ACP02 and ACP03) of at least 22 from 82 genes involved in several pathways such as apoptosis, cell cycle, senescence and epithelial mesenchymal transition. We also observed that ZM447439 and its combination with 5-FU induced apoptosis, mitotic catastrophe, senescence and altered cell cycle in gastric cancer cell lines. Another interesting data was the expression of the gastric cancer stem cell markers LGR5 and CD24, and the ability to form spheres, indicating that both ACP02 and ACP03 may be composed by cancer stem cells. Furthermore, monotherapy with either ZM447439 or 5-FU were capable of inhibiting the formation of spheres. On the other hand, INH1 have shown lower antitumoral activity since it presented the highest IC50 value and was only capable of inducing apoptosis and reducing cell migration. Interestingly, the combination of 5-FU with ZM447439 allowed the use of smaller doses of the compounds, in addition to being able to induce apoptosis in a shorter time when compared to the treatment with the isolated drugs. Taken together, our findings suggest that due to the high antitumoral activity shown by ZM447439 and mainly its association with 5-FU, these might be promising gastric cancer therapies.

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O câncer gástrico é ainda hoje um dos tumores sólidos mais comuns , sendo a segunda causa mais freqüente de morte por doença maligna no mundo. Apesar do aprimoramento da técnica cirúrgica e da utilização de tratamentos multimodais, o câncer gástrico, em geral, ainda permanece com um mau prognóstico. Na maioria dos países a doença é freqüentemente diagnosticada após ter invadido a camada muscular própria do órgão, estágio no qual a sobrevida média em cinco anos é inferior a 20%. Como a maioria dos tumores humanos, o câncer gástrico é uma doença multifatorial, que se desenvolve em indivíduos geneticamente suscetíveis expostos a agentes carcinogênicos externos. Ultimamente, diversos oncogenes e genes supressores tumorais vêm sendo estudados na tentativa de esclarecer detalhadamente a carcinogênese gástrica. Her-2/Neu ou CerbB-2 e EGFR são oncogenes da família Her ou erb de receptores de fatores de crescimento. Ambos têm se mostrado com expressão aumentada em diversas neoplasias e possuem anticorpos monoclonais específicos como potencial forma de tratamento adjuvante. Em relação ao câncer gástrico, as prevalências destes oncogenes são bastante variáveis na literatura. O objetivo deste estudo foi determinar as prevalências de Her-2/Neu e EGFR na mucosa gástrica de pacientes com adenocarcinoma de estômago. Foram estudados 37 casos com avaliação de expressão imunohistoquímica de Her-2/neu e EGFR em amostras teciduais fixadas em formalina e armazenadas em parafina. Dois casos demonstraram expressão aumentada de Her-2/Neu, correspondendo a 5,4%. Nenhum caso demonstrou aumento da expressão de EGFR. Os autores concluem que a ausência da expressão do EGFR na amostra estaria mais relacionada a uma dificuldade encontrada de trabalhar com o anticorpo do que a real ausência de expressão do oncogene no câncer gástrico. Também sugerem que, apesar da baixa prevalência do Her-2/Neu na amostra, e devido à pouca resposta dos tumores gástricos às terapias hoje disponíveis, os anticorpos monoclonais específicos anti-Her deveriam ser futuramente testados nos indivíduos Her positivos, em ensaios clínicos randomizados.