Foi estudado o ritmo de filtração glomerular (RFG) de pacientes com câncer bem diferenciado da tireoide submetidos à radioiodoterapia (RIT). O estudo avaliou o RFG durante estímulo do hormônio estimulador da tireoide (TSH) por suspensão da reposição hormonal tireoidiana (RHT) ou no uso do hormônio estimulador da tireoide recombinante humano (TSHrh), correlacionou o RFG com o perfil hormonal tireoidiano, avaliou o RFG durante e na semana após a RIT, avaliou o RFG e a dose efetiva de radiação para corpo inteiro e correlacionou métodos de estimativa de RFG. Vinte e oito pacientes incluídos em estudo clínico randomizado não cego foram divididos em dois grupos de 14 pacientes, sendo o grupo A (GA) submetido à suspensão da RHT e o grupo B (GB) ao uso do TSHrh. Os pacientes tiveram antes e após o estímulo do TSH a determinação do RFG por 51Cr-EDTA e coletas séricas do perfil hormonal tireoidiano e creatinina, albumina e ureia, e, após a RIT, colheram exames séricos de creatinina, albumina e ureia, e tiveram estimadas suas doses efetivas de corpo inteiro. Os exames de creatinina, albumina e ureia foram utilizados para estimar o RFG pelas equações de creatinina sérica, Modified Diet in Renal Disease (MDRD), e Cockcroft-Gault. O GA apresentou, pelo 51Cr-EDTA, variação de -18,5% do RFG de 94,4±18,6 mL/min antes da suspensão da RHT para 76,2±15,7 mL/min (p=0,0002) e o GB apresentou pelo 51Cr-EDTA variação de 4% do RFG de 90,8±18,4 mL/min antes do TSHrh para 92,6±15,2 mL/min (p=0,64). O RFG variou significativamente só no GA, sem apresentar proporcionalidade entre as variações do hormônio tireoidiano e do RFG. Não houve correlação do RFG com elevação do TSH. Por equações baseadas em creatinina, houve, no GA, queda do RFG durante toda a suspensão da RHT e estabilidade após o retorno da RHT, e, no GB, houve estabilidade do RFG durante todo o estudo. A dose efetiva de corpo inteiro não apresentou diferenças significativas entre os grupos (p=0,76). Na comparação entre o 51Cr-EDTA e as equações para estimativa de RFG, a correlação de Pearson foi de 0,78 para creatinina sérica, 0,79 para MDRD e 0,66 para CockcroftGault, e a comparação das variações do RFG observadas no GA entre o 51Cr-EDTA e a equação por creatinina sérica foram estatisticamente diferentes. Concluiu-se que o RFG apresenta redução na suspensão da RHT, relacionado ao hipotireoidismo e não à elevação de TSH, voltando a estabilizar após retorno da RHT, e que não varia no uso do TSHrh, que a dose efetiva de corpo inteiro não varia entre os grupos proporcionalmente ao RFG, e que a melhor correlação foi do 51Cr-EDTA com a equação MDRD / Glomerular filtration rate (GFR) was studied in well differentiated thyroid cancer patients referred for radioiodine therapy (RIT). The study evaluated GFR during thyroid stimulating hormone (TSH) stimulation after thyroid hormone withdrawal (THW) or after recombinant human thyroid stimulating hormone (rhTSH), correlated GFR with thyroid hormone profile, evaluated GFR during and in the week after RIT, evaluated GFR and whole body radiation effective dose, and correlated different methods for GFR determination. 28 patients were included in a non-blinded randomized clinical trial and divided in two groups of 14 patients, being group A (GA) stimulated by THW and group B (GB) stimulated by rhTSH. Patients had GFR determined by 51Cr-EDTA, as well as serum thyroid hormone profile, creatinine, albumin and urea before and after TSH stimulation, and after RIT had determined their serum creatinine, albumin and urea and whole body radiation effective dose. Creatinine, albumin and urea were used to estimate GFR by serum creatinine, Modified Diet in Renal Disease (MDRD), and Cockcroft-Gault equations. GA presented a -18,5% GFR variation by 51CrEDTA varying from 94,4 ± 18,6 mL/min before THW to 76,2±15,7 mL/min after THW (p=0,0002) while GB presented a 4% GFR variation by 51Cr-EDTA varying from 90,8 ± 18,4 mL/min before TSHrh to 92,6 ± 15,2 mL/min after rhTSH (p=0,64). GFR significantly varied only in GA without presenting proportionality with thyroid hormone variation. There was no correlation between rise in TSH levels and GFR. Creatinine equations demonstrated a sustained reduction in GFR during THW and GFR stability after thyroid hormone reposition, while GB presented stable GFR during the whole study. Whole body radiation effective dose didn\'t present significant differences between the two groups (p=0,76). Comparing 51Cr-EDTA and GFR estimative equations presented Pearson correlation score of 0,78 for serum creatinine, 0,79 for MDRD and 0,66 for Cockcroft-Gault, while comparison between variances in GA between 51Cr-EDTA e serum creatinine equation was significantly different. In conclusion GFR presents a reduction during THW related to hypothyroidism and not to TSH rise and stabilizing after thyroid hormone therapy, GFR does not vary during rhTSH, whole body radiation effective dose does not vary between the two groups proportionally to GFR, and that MDRD equation had the best correlation with 51Cr-EDTA

Introdução: A radioiodoterapia (RIT) constitui tratamento consagrado para carcinomas diferenciados de tireoide, sendo amplamente utilizada em todo o mundo, tendo-se em vista a incidência crescente desse tipo de neoplasia maligna. Embora efeitos adversos graves sejam infrequentes, são descritas complicações como xerostomia, sialoadenite e disfagia. O acometimento de olhos e anexos é pouco discutido, sendo relatadas xeroftalmia, ceratoconjuntivite e obstrução de vias lacrimais (OVL), notadamente após altas doses cumulativas do radiofármaco. A incidência de OVL e a eventual relação com outros sintomas oculares ou extraoculares não são bem estabelecidas. Neste estudo, buscamos determinar a frequência de obstrução de vias lacrimais (OVL) em pacientes submetidos à RIT, a existência de fatores preditores de OVL e a relação entre alterações de superfície ocular, xerostomia e alterações da mucosa nasal. Métodos: Foram avaliados pacientes com diagnóstico de carcinoma diferenciado de tireoide submetidos à RIT (Grupo 1) e não submetidos à RIT (Grupo 2) no período pré-operatório, pós-operatório e no 2º, 4º, 6º e 12º mês pós-cirurgia ou pós-RIT. Os pacientes foram submetidos a avaliações da superfície ocular e do filme lacrimal, sondagem e irrigação de vias lacrimais, quantificação da produção salivar e endoscopia nasal. As avaliações subjetivas de sintomas oculares, nasais e de xerostomia foram realizadas, respectivamente, por meio dos questionários OSDI, NOSE e Xerostomia Inventory. Resultados: O Grupo 1 (n=44, 88 olhos) apresentou 3 pacientes (04 olhos) com OVL, o que corresponde à incidência de 4,55% (4 eventos em 88 olhos) ou 6,8% (3 casos em 44 pacientes). O Grupo 2 (n=43, 86 olhos) não apresentou nenhum caso de OVL, fato que impossibilitou o cálculo da razão de chances (odds ratio). A avaliação objetiva da superfície ocular não apresentou diferenças significantes entre os grupos. Por outro lado, a avaliação endoscópica nasal revelou maior palidez de mucosa no Grupo 1 no 2º mês (OR: 3,61; IC 95%: 1,44-9,09; p < 0,01), 4º mês (OR: 4,00; IC 95%: 1,48-10,79; p < 0,01) e 12º mês de seguimento pós-RIT (OR: 3,24; IC 95%: 1,14-9,22; p=0,03), com piora do escore de aparência endoscópica quanto a edema, a pólipos e à secreção no 6º mês de seguimento pós-RIT, em comparação à avaliação pré-operatória (p < 0,01). Os resultados do questionário OSDI demonstraram piora do escore no Grupo 1 no 2º mês (p < 0,01), 4º mês (p < 0,01), 6º mês (p < 0,01) e 12º mês (p < 0,01) de seguimento pós-RIT em comparação à avaliação inicial pré-operatória. A avaliação pelo questionário NOSE demonstrou piora dos sintomas nasais no Grupo 1 no 2º mês (p=0,02) e no 4º mês de seguimento pós-RIT (p < 0,01), em comparação aos sintomas pré-operatórios. A avaliação da xerostomia demonstrou piora dos sintomas no Grupo 1 em relação à avaliação pré-operatória e no 2º mês (p < 0,01), 4º mês (p < 0,01), 6º mês (p < 0,01) e 12º mês (p=0,01) de seguimento pós-RIT, bem como diminuição objetiva da produção salivar até o 12º mês pós-RIT (p < 0,01). Conclusões: Embora em pequeno número, o presente estudo demonstrou aparecimento de casos de obstrução lacrimal, mesmo que assintomáticas, nos primeiros 12 meses após-RIT. Não foi possível estabelecer relação da OVL com eventuais fatores preditores. Entretanto, demonstrou-se piora subjetiva da xerostomia, da xeroftalmia, dos sintomas nasais e significativa alteração da mucosa nasal nos pacientes do Grupo 1 / Introduction: Radioiodine therapy (RIT) is an established treatment for differentiated thyroid carcinomas and is widely used throughout the world, given the increasing incidence of this malignancy. Although serious adverse effects are infrequent, complications such as dry mouth, sialadenitis and dysphagia have been described. The involvement of the eyes and adnexa is not commonly discussed, despite dry eye, keratoconjunctivitis and lacrimal system obstruction (LSO) being reported, especially after high cumulative doses of this radiopharmaceutical. The incidence of LSO and any relationship with other ocular or extraocular symptoms are not well established. The study objectives were to determine the frequency of lacrimal system obstruction (LSO) in patients undergoing RIT, the existence of predictive factors of LSO and the relationship between ocular surface changes, xerostomia and changes in nasal mucosa. Patients and Methods: Patients with differentiated thyroid carcinoma undergoing (Group 1) and not undergoing (Group 2) RIT were evaluated in the preoperative and postoperative periods and 2, 4, 6 and 12 months post-surgery or post-RIT. Patients underwent ocular surface and tear film evaluation, lacrimal system probing and irrigation, quantification of salivary production and nasal endoscopy. The subjective evaluations of ocular symptoms, nasal symptons and xerostomia were done, respectively, through the OSDI, NOSE and Xerostomia Inventory questionnaires. Results: Group 1 (n = 44, 88 Eyes) had 3 patients (4 eyes) with LSO, corresponding to an incidence of 4.55% (4 events in 88 eyes) or 6.8% (3 cases in 44 patients). Group 2 (n = 43.86 eyes) did not present any cases of LSO, that makes it impossible to calculate the odds ratio. Objective assessment of ocular surface did not show significant differences between groups. On the other hand, nasal endoscopy revealed larger mucosa pallor in Group 1 in the 2nd month (OR: 3.61; 95% CI: 1.44 to 9.09; p < 0.01), 4th month (OR: 4.00; 95% CI: 1.48 to 10.79; p < 0.01) and 12th month after RIT (OR: 3.24; 95% CI: 1.14 to 9.22; p = 0.03), with worsening of the endoscopic appearance score in the 6th month after RIT, compared to the preoperative evaluation (p < 0.01). The results of the questionnaires showed worsening OSDI score in Group 1 at 2nd month (p < 0.01), 4th month (p < 0.01) and 6 months (p <0.01) and 12 months (p < 0, 01) post RIT as compared to the preoperative baseline. The evaluation by the NOSE questionnaire showed worsening of nasal symptoms in Group 1 in the 2nd month (p=0.02) and 4th month (p < 0.01) after RIT, compared to preoperative data. The evaluation of xerostomia showed worsening of symptoms in Group 1 compared to preoperative assessment at 2nd month (p < 0.01), 4th month (p < 0.01), 6th month (p < 0.01) and 12 months (p = 0.01) after RIT. Objective decreased saliva production was observed until the 12th month after RIT (p < 0.01). Conclusions: Although in small number, the present study demonstrated the emergence of cases of lacrimal obstruction, even if asymptomatic, in the first 12 months after RIT. It was not possible to establish a relationship between LSO and predictive factors. However, it was demonstrated subjective worsening of xerostomia, xerophthalmia and nasal symptoms. There was also significant decrease in salivar production and nasal mucosa changes in patients of Group 1

Pacientes com câncer diferenciado de tireoide (CDT) são submetidos à tireoidectomia e usualmente necessitam de tratamento adjuvante para ablação do tecido tireoidiano remanescente. Para ocorrer uma captação de radioiodo adequada, é necessário elevar os níveis de TSH através da suspensão da reposição do hormônio tireoidiano (T3 ou T4), o que gera um quadro clínico de hipotireoidismo. Como alternativa, o TSH humano recombinante (rec-hTSH) foi desenvolvido e com seu uso, não é necessário suspender a reposição do hormônio, impedindo, assim, os sintomas observados quando da suspensão deste. O objetivo deste trabalho foi calcular a dosimetria para os restos tireoidianos e demais órgãos de 22 indivíduos com CDT, dos quais 11 pacientes receberam a terapia com 131I (grupo A) sob estímulo endógeno com supressão da reposição hormonal, e os outros 11, receberam o radioiodo precedido de rec-hTSH (grupo B), na vigência de hormonioterapia substitutiva; e comparar os resultados dosimétricos com os possíveis efeitos deletérios da radiação. A partir da metodologia do MIRD e dos softwares MIRDOSE-3 e OLINDA, foram calculadas as doses absorvidas para a região da tireoide e para o corpo inteiro. Com um detector Geiger-Müller foram realizadas medidas de taxa de exposição durante a internação para cálculos de meia-vida efetiva (Teff) e foram coletadas amostras sanguíneas para verificação de aberrações cromossômicas. As doses absorvidas médias para o corpo inteiro obtidas foram de 0,96 ± 0,23 Gy para o grupo A e 0,44 ± 0,21 Gy para o grupo B. Os valores de Teff também foram menores para o grupo B (11,2 ± 1,9 h) quando comparados aos do grupo A (13,9 ± 2,4 h). A análise citogenética mostrou a presença de vários tipos de aberrações cromossômicas estruturais. O cromossomo dicêntrico foi o mais frequentemente encontrado e pode ser considerado o melhor indicador de dano por radiação ionizante. As diferenças entre os valores de aberrações encontradas para os dois grupos não foram significativas, com o número de células afetadas relativamente pequeno, não causando danos severos durante o tratamento. A obtenção de doses e Teff menores para os pacientes do grupo B está de acordo com o descrito na literatura. O clareamento renal do radioiodo é mais rápido com o rec-hTSH (conforme observado com a dosimetria interna), mas a captação e consequente ablação ocorrem em taxas similares (como se observa pela análise citogenética). Portanto, com os resultados obtidos, o rec-hTSH se mostrou uma ferramenta útil ao dispensar a suspensão do hormônio tireoidiano, mantendo a qualidade de vida dos pacientes e auxiliando para uma menor irradiação dos tecidos extratireoidianos / Patients with differentiated thyroid cancer (DTC) are submitted to a thyroidectomy and usually require adjuvant therapy to ablate the remaining thyroid tissue. In order to have an adequate uptake of radioiodine, it is necessary to increase TSH levels by thyroid hormone withdrawal, which leads to a hypothyroidism state. As an alternative, the use of recombinant human thyroid stimulating hormone (rec-hTSH) may prevent the hormonal therapy withdrawal; therefore avoiding the hypothyroidism symptoms. The aim of this study was to calculate the dosimetry for thyroid remnants and total body of 22 individuals with DTC, of which 11 patients received 131I (group A) under endogenous stimulus, and the other 11 received 131I preceded by rec-hTSH (group B), and compare the dosimetric results with the potential harmful effects of radiation. Using the MIRD methodology and softwares MIRDOSE-3 and OLINDA, the absorbed doses were calculated for thyroid region and total body. Measurements of the exposure rates were made with a Geiger-Müller detector during the hospital stay, in order to calculate the effective half-lives (Teff), and blood samples were collected to verify chromosome aberrations. The average absorbed doses to the whole body obtained were 0.96 ± 0.23 Gy for group A and 0.44 ± 0.21 Gy for group B. Teff values were also lower for group B (11.2 ± 1.9 h) when compared to the results of group A (13.9 ± 2.4 h). The cytogenetic analysis showed the presence of various types of structural chromosome aberrations. The dicentric chromosome was the cytogenetic abnormality most frequently found and is considered to be the best indicator of ionizing radiation damage. The differences between the values of aberrations found in both groups were not significant, being the number of affected cells relatively small, causing no severe damage during treatment. The smaller doses and Teff obtained from the patients in group B are in agreement with the literature. The renal clearance of radioiodine is faster with rec-hTSH (as seen with the internal dosimetry), but the uptake and subsequent ablation occur at similar rates (as observed by cytogenetic analysis). Therefore, according to the above mentioned results, it is possible to observe that rec-hTSH is an useful alternative to the endogenous stimuli, while maintaining the patients\' quality of life and helping to reduce irradiation of extrathyroidal tissues

Pacientes com câncer diferenciado de tireoide (CDT) são submetidos à tireoidectomia e usualmente necessitam de tratamento adjuvante para ablação do tecido tireoidiano remanescente. Para ocorrer uma captação de radioiodo adequada, é necessário elevar os níveis de TSH através da suspensão da reposição do hormônio tireoidiano (T3 ou T4), o que gera um quadro clínico de hipotireoidismo. Como alternativa, o TSH humano recombinante (rec-hTSH) foi desenvolvido e com seu uso, não é necessário suspender a reposição do hormônio, impedindo, assim, os sintomas observados quando da suspensão deste. O objetivo deste trabalho foi calcular a dosimetria para os restos tireoidianos e demais órgãos de 22 indivíduos com CDT, dos quais 11 pacientes receberam a terapia com 131I (grupo A) sob estímulo endógeno com supressão da reposição hormonal, e os outros 11, receberam o radioiodo precedido de rec-hTSH (grupo B), na vigência de hormonioterapia substitutiva; e comparar os resultados dosimétricos com os possíveis efeitos deletérios da radiação. A partir da metodologia do MIRD e dos softwares MIRDOSE-3 e OLINDA, foram calculadas as doses absorvidas para a região da tireoide e para o corpo inteiro. Com um detector Geiger-Müller foram realizadas medidas de taxa de exposição durante a internação para cálculos de meia-vida efetiva (Teff) e foram coletadas amostras sanguíneas para verificação de aberrações cromossômicas. As doses absorvidas médias para o corpo inteiro obtidas foram de 0,96 ± 0,23 Gy para o grupo A e 0,44 ± 0,21 Gy para o grupo B. Os valores de Teff também foram menores para o grupo B (11,2 ± 1,9 h) quando comparados aos do grupo A (13,9 ± 2,4 h). A análise citogenética mostrou a presença de vários tipos de aberrações cromossômicas estruturais. O cromossomo dicêntrico foi o mais frequentemente encontrado e pode ser considerado o melhor indicador de dano por radiação ionizante. As diferenças entre os valores de aberrações encontradas para os dois grupos não foram significativas, com o número de células afetadas relativamente pequeno, não causando danos severos durante o tratamento. A obtenção de doses e Teff menores para os pacientes do grupo B está de acordo com o descrito na literatura. O clareamento renal do radioiodo é mais rápido com o rec-hTSH (conforme observado com a dosimetria interna), mas a captação e consequente ablação ocorrem em taxas similares (como se observa pela análise citogenética). Portanto, com os resultados obtidos, o rec-hTSH se mostrou uma ferramenta útil ao dispensar a suspensão do hormônio tireoidiano, mantendo a qualidade de vida dos pacientes e auxiliando para uma menor irradiação dos tecidos extratireoidianos / Patients with differentiated thyroid cancer (DTC) are submitted to a thyroidectomy and usually require adjuvant therapy to ablate the remaining thyroid tissue. In order to have an adequate uptake of radioiodine, it is necessary to increase TSH levels by thyroid hormone withdrawal, which leads to a hypothyroidism state. As an alternative, the use of recombinant human thyroid stimulating hormone (rec-hTSH) may prevent the hormonal therapy withdrawal; therefore avoiding the hypothyroidism symptoms. The aim of this study was to calculate the dosimetry for thyroid remnants and total body of 22 individuals with DTC, of which 11 patients received 131I (group A) under endogenous stimulus, and the other 11 received 131I preceded by rec-hTSH (group B), and compare the dosimetric results with the potential harmful effects of radiation. Using the MIRD methodology and softwares MIRDOSE-3 and OLINDA, the absorbed doses were calculated for thyroid region and total body. Measurements of the exposure rates were made with a Geiger-Müller detector during the hospital stay, in order to calculate the effective half-lives (Teff), and blood samples were collected to verify chromosome aberrations. The average absorbed doses to the whole body obtained were 0.96 ± 0.23 Gy for group A and 0.44 ± 0.21 Gy for group B. Teff values were also lower for group B (11.2 ± 1.9 h) when compared to the results of group A (13.9 ± 2.4 h). The cytogenetic analysis showed the presence of various types of structural chromosome aberrations. The dicentric chromosome was the cytogenetic abnormality most frequently found and is considered to be the best indicator of ionizing radiation damage. The differences between the values of aberrations found in both groups were not significant, being the number of affected cells relatively small, causing no severe damage during treatment. The smaller doses and Teff obtained from the patients in group B are in agreement with the literature. The renal clearance of radioiodine is faster with rec-hTSH (as seen with the internal dosimetry), but the uptake and subsequent ablation occur at similar rates (as observed by cytogenetic analysis). Therefore, according to the above mentioned results, it is possible to observe that rec-hTSH is an useful alternative to the endogenous stimuli, while maintaining the patients\' quality of life and helping to reduce irradiation of extrathyroidal tissues

INTRODUÇÃO: Na Neoplasia Endócrina Múltipla tipo 2 (NEM2), o desenvolvimento do Carcinoma Medular de Tireoide (CMT), Feocromocitoma (FEO) e Hiperparatireoidismo primário (HPT) está associado à mutações germinativas ativadoras no proto-oncogene RET. Casos de CMT esporádico podem apresentar mutações somáticas no RET (~40%). A variabilidade fenotípica observada em casos de CMT e FEO familiais associados à NEM2 indica o envolvimento de eventos genéticos adicionais que seriam responsáveis pelas diferenças clínicas observadas nos indivíduos afetados (idade de desenvolvimento, progressão e agressividade do tumor). Outras alterações genéticas no RET como duplas mutações, SNPs e haplótipos específicos podem influenciar na susceptibilidade, agressividade e modulação do fenótipo NEM2. Entretanto, os estudos de outros genes envolvidos no processo da tumorigênese NEM2 ainda estão em andamento. Recentemente foi mostrado que RET ativado controla a expressão de proteínas inibidoras do ciclo celular (p18 e p27). Mutações germinativas no gene p27 foram recentemente associadas à susceptibilidade de tumores neuroendócrinos e estão associadas à síndrome NEM4 (Neoplasia endócrina múltipla tipo 4). Mutações somáticas, inativadoras de p27, são raramente encontradas em vários tipos de tumores. Entretanto, diversos estudos documentaram que a redução na expressão e a sublocalização citoplamática de p27 são controladas por alterações pós-transducionais e/ou epigenéticas. OBJETIVOS: o estudo teve como objetivos avaliar a participação de genes, recentemente associados ao RET ativado, em tumores de pacientes com NEM2 e também verificar se polimorfismos no gene p27 estariam atuando como moduladores de fenótipo em uma grande família com NEM2. CASUÍTICA: foram analisadas 66 amostras tumorais advindas de 36 pacientes com diagnóstico clínico e genético de NEM2 e 28 indivíduos pertencentes a uma grande família com NEM2A-CMTF e mutação C620R no gene RET. MÉTODOS: As análises somáticas do p27 e também de p15, p18 e RET foram realizadas por PCR e sequenciamento direto de DNA e análise de microssatélites para p27 foi realizada por PCR e eletroforese capilar. Análises de expressão e localização da proteína p27 celular foram realizadas por Western blot e imunohistoquímica. A análise da modulação de fenótipo na família com NEM2A foi realizada por meio da amplificação do éxon 1 do gene p27 na amostra de sangue total. RESULTADOS: Não foram encontradas mutações somáticas no gene p27 e também nos genes p15 e p18. Entretanto, verificamos baixa expressão proteica de p27 em tumores CMT e FEO, a qual se encontrava relacionada com o tipo e agressividade do códon mutado no RET, principalmente em tumores que apresentavam mutação RET no códon 634 (controle x 634 p=0,05; controle x 634/791 p= 0,032; 620 x 634 p=0,045; 620 x 634/791 p= 0,002; 620 x 634 + 634/791 p=0,036). Notou-se também correlação positiva entre os níveis de expressão de p27 na localização nuclear, analisada por imunohistoquímica, e o genótipo TT do SNP p27 p.V109G (p=0,03). CONCLUSÕES: Alterações moleculares somáticas no gene p27 nos tumores NEM2 não são frequentes. Entretanto, a redução na expressão e a localização citoplasmática de p27 provavelmente estão associadas a alterações somáticas em outros genes que controlam os processos de fosforilação da proteína p27 (eventos pós-transducionais) / INTRODUCTION: In Multiple Endocrine Neoplasia type 2 (MEN2) the development of medullary thyroid carcinoma (MTC), pheochromocytoma (PHEO) and primary hyperparathyroidism (HPT) are associated with activating germline mutations in RET proto-oncogene. Cases of sporadic MTC may have somatic RET mutations (~ 40%). The phenotypic variability observed in cases with familial MTC/MEN2 and PHEO/MEN2 indicates the probable involvement of additional genetic events that could be responsible for the clinical differences observed in the affected individuals (age development, progression and aggressiveness of the tumor). Other genetic alterations such as RET double mutations, SNPs and specific haplotypes may influence susceptibility, aggressiveness and MEN2 phenotype modulation. However, studies of other genes involved in the tumorigenesis of MEN2 are still in progress. Recently, it was shown that the activated RET controls the expression of cell cycle inhibitory proteins (p18 and p27). Germline mutations in the p27 gene have recently been associated with the susceptibility to neuroendocrine tumors and are associated with the MEN4 syndrome (Multiple endocrine neoplasia type 4). Somatic inactivating mutations p27 are rarely found in many types of tumors. However, several studies have documented that reduced expression and subcellular location of p27 is controlled by post-transductional changes and/or epigenetic factors. OBJECTIVES: This study aimed to evaluate the role of genes recently associated with RET activated in tumors from MEN2 patients and also check whether polymorphisms in the p27 gene would be acting as modulators of phenotype in a large MEN2 family. PATIENTS: We analyzed 66 tumor samples from 36 patients with clinical and genetic diagnosis of MEN2 and from 28 individuals belonging to a large family with FMTC/MEN2A and RET C620R mutation. METHODS: The analyses of somatic p27, p15, p18 and RET were performed by PCR and direct sequencing of DNA and microsatellite analysis was performed for p27 by PCR and capillary electrophoresis. Expression analysis and subcellular localization of p27 protein were performed by Western blot and immunohistochemistry. The analysis of phenotype modulation in MEN2A families was performed by the amplification of exon 1 of the p27 gene in a whole blood sample. RESULTS: There were no somatic mutations in the p27 gene and also in the p15 and p18 genes. However, we verified a low p27 protein expression in MTC/MEN2 and PHEO/MEN2 that showed a definite correlation with the type and aggressiveness of the mutated RET codon, mainly in those tumors from cases with germline RET codon 634 mutations (control vs 634, p=0,05; control vs 634/791, p= 0,032; 620 vs 634, p=0,045; 620 vs 634/791, p= 0,002; 620 vs 634 + 634/791, p=0,036). It was also verified a positive correlation between the immunohistochemistry expression of nuclear p27 subcellular location and the p27 p.V109G TT genotype (p=0,03). CONCLUSIONS: The reduction in the expression of p27 and its subcellular localization are likely to be associated with somatic changes in other genes that control the processes of phosphorylation of p27 protein through post-transductional events

INTRODUÇÃO: Na Neoplasia Endócrina Múltipla tipo 2 (NEM2), o desenvolvimento do Carcinoma Medular de Tireoide (CMT), Feocromocitoma (FEO) e Hiperparatireoidismo primário (HPT) está associado à mutações germinativas ativadoras no proto-oncogene RET. Casos de CMT esporádico podem apresentar mutações somáticas no RET (~40%). A variabilidade fenotípica observada em casos de CMT e FEO familiais associados à NEM2 indica o envolvimento de eventos genéticos adicionais que seriam responsáveis pelas diferenças clínicas observadas nos indivíduos afetados (idade de desenvolvimento, progressão e agressividade do tumor). Outras alterações genéticas no RET como duplas mutações, SNPs e haplótipos específicos podem influenciar na susceptibilidade, agressividade e modulação do fenótipo NEM2. Entretanto, os estudos de outros genes envolvidos no processo da tumorigênese NEM2 ainda estão em andamento. Recentemente foi mostrado que RET ativado controla a expressão de proteínas inibidoras do ciclo celular (p18 e p27). Mutações germinativas no gene p27 foram recentemente associadas à susceptibilidade de tumores neuroendócrinos e estão associadas à síndrome NEM4 (Neoplasia endócrina múltipla tipo 4). Mutações somáticas, inativadoras de p27, são raramente encontradas em vários tipos de tumores. Entretanto, diversos estudos documentaram que a redução na expressão e a sublocalização citoplamática de p27 são controladas por alterações pós-transducionais e/ou epigenéticas. OBJETIVOS: o estudo teve como objetivos avaliar a participação de genes, recentemente associados ao RET ativado, em tumores de pacientes com NEM2 e também verificar se polimorfismos no gene p27 estariam atuando como moduladores de fenótipo em uma grande família com NEM2. CASUÍTICA: foram analisadas 66 amostras tumorais advindas de 36 pacientes com diagnóstico clínico e genético de NEM2 e 28 indivíduos pertencentes a uma grande família com NEM2A-CMTF e mutação C620R no gene RET. MÉTODOS: As análises somáticas do p27 e também de p15, p18 e RET foram realizadas por PCR e sequenciamento direto de DNA e análise de microssatélites para p27 foi realizada por PCR e eletroforese capilar. Análises de expressão e localização da proteína p27 celular foram realizadas por Western blot e imunohistoquímica. A análise da modulação de fenótipo na família com NEM2A foi realizada por meio da amplificação do éxon 1 do gene p27 na amostra de sangue total. RESULTADOS: Não foram encontradas mutações somáticas no gene p27 e também nos genes p15 e p18. Entretanto, verificamos baixa expressão proteica de p27 em tumores CMT e FEO, a qual se encontrava relacionada com o tipo e agressividade do códon mutado no RET, principalmente em tumores que apresentavam mutação RET no códon 634 (controle x 634 p=0,05; controle x 634/791 p= 0,032; 620 x 634 p=0,045; 620 x 634/791 p= 0,002; 620 x 634 + 634/791 p=0,036). Notou-se também correlação positiva entre os níveis de expressão de p27 na localização nuclear, analisada por imunohistoquímica, e o genótipo TT do SNP p27 p.V109G (p=0,03). CONCLUSÕES: Alterações moleculares somáticas no gene p27 nos tumores NEM2 não são frequentes. Entretanto, a redução na expressão e a localização citoplasmática de p27 provavelmente estão associadas a alterações somáticas em outros genes que controlam os processos de fosforilação da proteína p27 (eventos pós-transducionais) / INTRODUCTION: In Multiple Endocrine Neoplasia type 2 (MEN2) the development of medullary thyroid carcinoma (MTC), pheochromocytoma (PHEO) and primary hyperparathyroidism (HPT) are associated with activating germline mutations in RET proto-oncogene. Cases of sporadic MTC may have somatic RET mutations (~ 40%). The phenotypic variability observed in cases with familial MTC/MEN2 and PHEO/MEN2 indicates the probable involvement of additional genetic events that could be responsible for the clinical differences observed in the affected individuals (age development, progression and aggressiveness of the tumor). Other genetic alterations such as RET double mutations, SNPs and specific haplotypes may influence susceptibility, aggressiveness and MEN2 phenotype modulation. However, studies of other genes involved in the tumorigenesis of MEN2 are still in progress. Recently, it was shown that the activated RET controls the expression of cell cycle inhibitory proteins (p18 and p27). Germline mutations in the p27 gene have recently been associated with the susceptibility to neuroendocrine tumors and are associated with the MEN4 syndrome (Multiple endocrine neoplasia type 4). Somatic inactivating mutations p27 are rarely found in many types of tumors. However, several studies have documented that reduced expression and subcellular location of p27 is controlled by post-transductional changes and/or epigenetic factors. OBJECTIVES: This study aimed to evaluate the role of genes recently associated with RET activated in tumors from MEN2 patients and also check whether polymorphisms in the p27 gene would be acting as modulators of phenotype in a large MEN2 family. PATIENTS: We analyzed 66 tumor samples from 36 patients with clinical and genetic diagnosis of MEN2 and from 28 individuals belonging to a large family with FMTC/MEN2A and RET C620R mutation. METHODS: The analyses of somatic p27, p15, p18 and RET were performed by PCR and direct sequencing of DNA and microsatellite analysis was performed for p27 by PCR and capillary electrophoresis. Expression analysis and subcellular localization of p27 protein were performed by Western blot and immunohistochemistry. The analysis of phenotype modulation in MEN2A families was performed by the amplification of exon 1 of the p27 gene in a whole blood sample. RESULTS: There were no somatic mutations in the p27 gene and also in the p15 and p18 genes. However, we verified a low p27 protein expression in MTC/MEN2 and PHEO/MEN2 that showed a definite correlation with the type and aggressiveness of the mutated RET codon, mainly in those tumors from cases with germline RET codon 634 mutations (control vs 634, p=0,05; control vs 634/791, p= 0,032; 620 vs 634, p=0,045; 620 vs 634/791, p= 0,002; 620 vs 634 + 634/791, p=0,036). It was also verified a positive correlation between the immunohistochemistry expression of nuclear p27 subcellular location and the p27 p.V109G TT genotype (p=0,03). CONCLUSIONS: The reduction in the expression of p27 and its subcellular localization are likely to be associated with somatic changes in other genes that control the processes of phosphorylation of p27 protein through post-transductional events