Magíster en Bioquímica Área de Especialización en Bioquímica Clínica Aplicada y Memoria para optar al Título de Bioquímico / Durante la progresión tumoral las células epiteliales malignas pierden su polaridad, disminuyen la adhesión celular, aumentan la motilidad y adquieren capacidad invasiva. Este proceso se conoce como transición epitelio mesenquimal (TEM). En el cáncer de próstata (CaP) la disminución en la expresión de e-cadherina, que es inhibida por el factor de transcripción snail, se acompaña de una serie de otros cambios que facilitan el fenotipo mesenquimal. Las moléculas de adhesión celular (MACs)sindecano 1 y sindecano 2 cambian sus patrones de expresión y localización celular en relación a la agresividad del tumor prostático. A través de un análisis in silico, se ha descrito que existen sitios putativos de unión para snail en las regiones promotoras de los genes de sindecano 1ysindecano 2. El objetivo de esta tesis es demostrar que snail se une a regiones específicas de estos promotores reprimiendo su expresión en líneas celulares de CaP. El presente trabajo se realizó utilizando líneas celulares comerciales de CaP de baja (LNCaP) y alta (PC3) capacidad tumorigénica. Se estudió la unión de snail a regiones promotoras de los genes de sindecano 1y 2, mediante ensayos de inmunoprecipitación de cromatina (ChIP) y retardo en la movilidad electroforética en ambas líneas celulares. Para determinar si snail participa en la regulación transcripcional desindecano 1 ysindecano 2 se generó mediante infección con lentivirus una línea celular, LNCaP-Snail+, con sobreexpresión de snaily mediantePCR en tiempo real e inmunofluorescencia, se determinaron los niveles mRNA y proteínassnail,sindecano 1 y sindecano 2. Complementariamente se clonóel promotor de sindecano 1para evaluar, mediante ensayos de gen reportero con actividad luciferasa, el efecto de la sobreexpresión de snail en la regulación génica sindecano 1. Los resultados obtenidos mediante ChIP en este estudio demuestran que existe una interacción de snailcon las dos zonas más próximas al sitio de inicio de la transcripción del promotor del gen de sindecano 1, pero que no existe interacción de snailcon la región promotora de sindecano 2.Se confirmó que los niveles del transcrito y proteína snail aumentanen la línea celular LNCaP-Snail+ en comparación con líneas controles. Al determinar el efecto de la sobreexpresión de snail no se observaron disminuciones en los niveles de mRNA y proteínas de las moléculas sindecano 1 y sindecano 2 cuando existía sobreexpresión de snail. El ensayo de gen reportero tampoco da cuenta de una represión en el promotor de los genes de sindecano 1en la línea celular LNCaP-Snail+. Es posible concluir que existe unión de snail con dos regiones sólo en el promotor de sindecano 1, pero no existe una disminución en la expresión de esta molécula de adhesión en la línea celular LNCaP-Snail+. En el modelo estudiado no existe una disminución en la expresión de sindecano 1 y sindecano 2 cuando se sobreexpresa snail.Se propone que snail participa en la regulación génica de sindecano 1 en conjunto con otros represores transcripcionales que aún no han sido estudiados / During tumor progression epithelial cells lose their polarity, decrease their cell adhesion, increase their motility and acquire invasive capacity. This process is known as epithelial mesenchymal transition (EMT). In prostate cancer (PCa), the loss of e-cadherin, which is inhibited by the expression of snail, is accompanied by a number of other changes that facilitate the mesenchymal phenotype. The cellular adhesion molecules (CAMs) syndecan 1 and syndecan 2 change their patterns of expression and cellular localization in relation to prostate tumor aggressiveness. Through a in silico analysis, we have described putative snail binding sites in promoter regions of syndecan 1 and 2 genes. The aim of this thesis is to demonstrate that snail binds to specific regions of these promoters repressing their expression in PCa cell lines. This work was performed using commercial PCa cell lines with low (LNCaP) and high (PC3) tumorigenic capacity. The snail binding to promoter regions of genes syndecan 1 and 2 was studied through chromatin immunoprecipitation (ChIP) and electrophoretic mobility shift assay in both cell lines. To determine whether snail participates in the transcriptional regulation of syndecan 1 and syndecan 2, a cell line (LNCaP-Snail+) with overexpression of snail was generated by infection with lentivirus, and through real time PCR and immunofluorescence, mRNA levels and protein snail, syndecan 1 and syndecan 2 were determined. Additionally promoter of syndecan 1 was cloned to evaluate, by reporter gene assays with luciferase activity, the effect of the overexpression of snail in gene regulation of syndecan 1. The results obtained by ChIP in this study show that snail interacts with the two regions closer to the start site of transcription of the gene promoter syndecan 1, but no interaction of snail with the promoter region of syndecan 2. It was confirmed that the snail transcript and protein levels increase in LNCaP-Snail+ cell line compared to controls. The snail overexpression was not reduced syndecan 1 and syndecan 2 mRNA and protein levels. The reporter gene assay result also shows no repression in the promoter of the gene of syndecan 1 in the LNCaP-Snail+ cell line. We conclude that there is snail binding with only two regions in the promoter of the syndecan 1 gene, but there is no decrease in the expression of this CAM in the LNCaP-Snail+ cell line. In this model study, snail was not involved in gene regulation of syndecan 1. It is proposed that snail is involved in gene regulation of syndecan 1 in conjunction with other repressor molecules that have not yet been studied

Memoria para optar el título de Bioquímico

Memoria para optar el título de Bioquímico y Magíster en Bioquímica

Memoria para optar el título de Bioquímico

Objetivos: La calidad de vida de pacientes en estadios III y IV de cáncer de próstata disminuye significativamente debido a varios factores como: efectos secundarios al tratamiento, pronóstico de la enfermedad, entre otros. Este estudio busca describir qué áreas de la calidad de vida son más afectadas y en qué medida, en pacientes con tratamiento antineoplásico. Material y métodos: El estudio es descriptivo transversal. Se calculó un tamaño muestral de 81 pacientes. Se incluyeron a aquellos entre 50 y 80 años, con diagnóstico histopatológico de cáncer de próstata en estadios clínicos III y IV y que recibieron tratamiento entre 3 meses y 2 años en el INEN. Para evaluar calidad de vida se empleó el UCLA-PCI-SF y el SF-12 v2. Para evaluar riesgo de episodio depresivo mayor se empleó el test de Zung abreviado. Resultados: Se incluyeron 82 pacientes. La edad media fue 68,2, el 51.2% tenía estadio III y el 48.8% estadio IV. El 7,3% recibió radioterapia, 56% terapia hormonal y 36.7% tratamiento combinado. Las áreas más afectadas fueron la función sexual y urinaria con una mediana de puntaje de 2.5 y 43.75, respectivamente. El 57.3% de los pacientes presentó riesgo de desarrollar un episodio depresivo mayor. Conclusión: La calidad de vida está afectada significativamente en pacientes con cáncer de próstata avanzado, siendo la función sexual la más comprometida. Un alto porcentaje tuvo riesgo de depresión mayor. Se recomienda introducir intervenciones de salud mental e intervenciones para abordar la disfunción sexual en este grupo de pacientes.

Grado de doctor en ciencias biomédicas / Introducción: El cáncer de próstata (CaP) en Chile representa la tercera patología oncológica más común en hombres y la segunda en causas de muerte por cáncer. Recientemente se ha visto que uno de los mecanismos involucrados en la malignización celular sería la activación anómala del programa de transición epitelio mesénquima (TEM). Este proceso se caracteriza por la represión de la expresión de marcadores epiteliales y un aumento en la expresión de marcadores mesenquimales, motilidad e invasividad celular y está controlado por factores transcripcionales como Snail, Twist y ZEB1. Estos factores transcripcionales ejercen su función generalmente mediante el reclutamiento de corepresores (como CtBP) o coactivadores (como la histona acetil transferasa p300). Se ha reportado que el factor transcripcional ZEB1, a través de la activación del proceso de TEM, no solo controlaría varios de estos cambios fenotípicos sino que además podría promover la resistencia a quimioterapéuticos. Pese a esto, el rol de ZEB1 en el progreso tumoral del CaP aún no está claro. Por lo tanto, el propósito de nuestra investigación es proponer al factor transcripcional ZEB1 como un componente clave en el progreso tumoral hacia etapas avanzadas del CaP y en el desarrollo de un fenotipo quimioresistente. Hipótesis y objetivos: “El Factor Transcripcional ZEB1 regula la expresión de marcadores de transición epitelio-mesénquima e induce un fenotipo maligno y de resistencia a quimioterapéuticos en células epiteliales de cáncer prostático”. Para responder la hipótesis se plantearon los siguientes objetivos: 1) Generar y caracterizar líneas celulares de cáncer prostático con sobreexpresión y silenciamiento estable de ZEB1 en cuanto a marcadores de TEM y propiedades relacionadas con la malignidad tumoral. 2) Estudiar la sensibilidad y resistencia de células 22Rv1 con sobreexpresión y DU145 con silenciamiento de ZEB1 en respuesta a Docetaxel y posibles mecanismos de resistencia a dicho fármaco. 3) Evaluar el rol de ABCC1 y el mecanismo de apoptosis en la sensibilidad a Docetaxel de células con sobreexpresión y silenciamiento de ZEB1. 3) Evaluar el rol de ABCC1 y el mecanismo de apoptosis en la sensibilidad a Docetaxel de células con sobreexpresión y silenciamiento de ZEB1. Resultados: Los resultados mostraron que la sobreexpresión de ZEB1 causó un aumento en el marcador mesenquimal Vimentina y una disminución del marcador epitelial E-Cadherina, con un aumento en la motilidad, invasividad y capacidades clonogénicas, mientras que su silenciamiento causó una baja en Vimentina, un aumento en E-Cadherina y una baja en las propiedades malignas. Adicionalmente la expresión de ZEB1 promovió un aumento en la resistencia a Docetaxel, cambió que estaría siendo mediado por una menor activación del programa de apoptosis y un aumento en la expresión de la proteína de multiresistencia a drogas ABCC1. Proyección: Nuestros resultados sugieren que ZEB1 podría ser un marcador no solo de progreso y agresividad tumoral en CaP sino también de resistencia al tratamiento con Docetaxel y como blanco terapéutico. / Introduction: Prostate cancer is a cronic health problem representing one of the most diagnosed cancers in men worldwide. The disease has a good prognostic when it is detected in its early stages but at late stages it becomes resistant to all therapies used to treat it. One of the factors that have lately been signaled as a key promoter of tumoral progress is the abnormal activation of the epithelial-mesenchymal transition program (EMT), which allows tumoral cells to acquire malignant properties and resistance to common treatments such as radio and chemotherapy. The transcription factor ZEB1 is one of its main activators and even though it has been reported that it shows higher expression in prostate cancer samples with high Gleason score, its effect over prostate cancer progression still remains unclear. Material and Methods: The prostate cancer cell lines 22Rv1 and DU145 cell were selected for this research due to their low and high expression of ZEB1 respectively. ZEB1 overexpression and silencing was achieved using lentiviral vectors. EMT and chemoresistance was evaluated by measuring levels of key markers using qRT-PCR and Western Blot. Malignancy was evaluated using a Boyden chamber assay. Sensitivity to Docetaxel was analyzed using the MTT method. To study apoptosis we used a commercial kit and the Annexin-V assay. Results: ZEB1 expression caused an upregulation of the mesenchymal marker Vimentin and a downregulation of the epithelial marker E-Cadherin and conferred enhanced motility and invasiveness to 22Rv1 cells while its silencing in DU145 cells showed the opposite switch in markers and decreased motility and invasiveness. Finally, cells overexpressing ZEB1 exhibited lower sensitivity to Docetaxel while silenced cells proved to be more sensitive, change that was mediated by the multi-resistance protein ABCC1 and changes in the apoptosis program. Discussion: Our data poises ZEB1 as a key driver of tumoral malignancy and resistance to Docetaxel treatment, which could be attributed to changes in ABCC1 expression and the apoptosis program. This suggests ZEB1 as a potential therapeutic target to overcome chemoresistance.

Submitted by Fabíola Silva (fabiola.silva@famerp.br) on 2018-01-04T16:27:03Z No. of bitstreams: 1 rildocesarnczorny_dissert.pdf: 922116 bytes, checksum: 21576df5fc3874640ad5d3bc25ba686f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-04T16:27:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 rildocesarnczorny_dissert.pdf: 922116 bytes, checksum: 21576df5fc3874640ad5d3bc25ba686f (MD5) Previous issue date: 2017-03-24 / Objectives: To describe the profile of the male patient in a Primary Family Health Unit and identify risk factors for prostate cancer. Method: This is a descriptive, cross-sectional study, of quantitative approach developed in a Primary Family Health Unit integrated into the networkservice of the Unified Health System. The study sample comprised 150 male users who have been attended this unit for consultation and / or nursing reception in the month of November / 2015. Results: The majority of patients evaluated were between 61 and 80 years old (48 ¬- 32.00%); they were considered whites (91 - 60.67%), with a fundamental level of education (75 - 50.00%), with Monthly income of 2 to 3 minimum wages (55 - 36.67%). The majority of the patients were classified as sedentary (114 - 76.00%), ingesting alcohol (84 - 56.00%) up to twice a week (53 - 63.10%) and not smoking and Or use of inhaled drugs (113 - 75.33%). The majority of patients reported eating red (133-88.67%), milk (96-64.00%), fat (76-50.67%), fruits (115-76.67%), vegetables - 82.00%) and legumes (129 - 86.00%) five or more times per week, 23.33% had a history of prostate cancer (father or brother). The data indicated that the patients presented chronic diseases (82 - 54.67%), the main one being Systemic Hypertension (35 - 42.68%), followed by diabetes and Systemic Hypertension (20 - 34.39%), Diabetes (14 - 14.63%), and others (15-18.29%). Specific prostate antigen was the most frequent (84 - 56.00%) followed by rectal (48 - 32.00%), ultrasound (16 - 10.67%) and biopsy (12 - 8.00 %). Conclusions: Need for new strategies to sensitize younger men to seek care in the pursuit of disease prevention and health promotion. The main factors for prostate cancer reported by participants were age, schooling, sedentary lifestyle, use of alcoholic beverage, red meat intake, milk and milk products, fat and overweight. The present study suggests that the male population needs to be assisted according to the guidelines of the National Policy for Integral Attention to Human Health, and there may be a protocol of care with actions necessary for the knowledge of the situation and the impact on the morbidity and mortality profile aimed at This clientele. / Objetivos: Describir perfil del usuario hombre atendido en una Unidad de Salud de la Familia e identificar los factores de riesgo para el cáncer de próstata. Método: Se trata de una estudio transversal, enfoque descriptivo, cuantitativo desarrollado en una Unidad Básica de Salud de la Familia integrada al Sistema de Salud Servicio de red La muestra del estudio consistió en 150 hombres usuarios que se sirve esta unidad de consulta y recepción o de enfermería en noviembre / 2015. Resultados: La mayoría de los pacientes han de ser de entre 61-80 años (48 ¬ 32,00%) se consideran blancos (91 a la 60.67%), con educación primaria (75 a 50,00%) con uningreso mensual de 2 a 3 salarios mínimos (de 55 a 36,67%). La mayoría de los pacientes fueron clasificados como sedentarios (114 a 76.00%), ingiere alcohol (de 84 a 56.00%) hasta dos veces por semana (de 53 a 63.10%) y no tiene el hábito de fumar y o uso de drogas inhalables (113 a 75,33%). La mayoría de los pacientes informaron de comer carne roja (de 133 a 88.67%), leche (96 a 64.00%), grasas (76 a 50.67%), frutas (de 115 a 76,67%), verduras (123 - 82.00%) y legumbres (129 a 86.00%) cinco o más veces a la semana, 23.33% tenían antecedentes de cáncer de próstata (padre o hermano). Los datos indicaron que los pacientes con enfermedades crónicas (82-54,67%) Hipertensión siendo la principal (35 a 42,68%), seguido de la diabetes y la hipertensión (20 a 34,39%); diabetes (de 14 a 14,63%) y otra de (15 - 18,29%). La finalización del antígeno específico de la próstata se presentó la frecuencia más alta (84 a 56,00%), seguido de rectal (48 a 32,00%), ultrasonidos (16 a 10.67%) y biopsia (de 12 a 8,00 %). Conclusiones: La necesidad de nuevas estrategias para sensibilizar a los hombres más jóvenes a buscar el servicio en la búsque da de la prevención de enfermedades y promoción de la salud. Los principales factores para el cáncer de próstata reportados por los participantes fueron la edad, la educación, la inactividad física, el consumo de alcohol, el consumo de carne roja, productos lácteos, lasgrasas y el sobrepeso. Este estudio sugiere que la población masculina necesita ser asistida de acuerdo con las directrices de la Política Nacional de Atención Integral a la Salud del Hombre, y puede haber un protocolo de atención a las acciones necesarias para la comprensión de la situación y el impacto en la morbilidad y la mortalidad perfil frente esta clientela. / Objetivos: Descrever o perfil do usuário homem atendido em uma Unidade Básica de Saúde da Família e identificar os fatores de risco para o câncer de próstata. Método: Trata-se de um estudo descritivo, transversal, de abordagem quantitativa desenvolvido em uma Unidade Básica de Saúde da Família integrada ao serviço de rede do Sistema Único de Saúde. A amostra do estudo foi composta por 150 usuários do sexo masculino que foram atendidos nesta unidade para consulta e ou acolhimento de enfermagem no mês de novembro / 2015. Resultados: A maioria dos pacientes avaliados tem idade ente 61 a 80 anos (48 - 32,00%), consideram-se brancos (91 – 60,67%), com escolaridade de nível fundamental (75 – 50,00%), com renda mensal de 2 a 3 salários mínimos (55 – 36,67%). A maior parte dos pacientes foi classificada como sedentária (114 – 76,00%), ingere bebida alcoólica (84 – 56,00%) até duas vezes na semana (53 – 63,10%) e não apresenta o hábito de fumar e ou uso de drogas inaláveis (113 – 75,33%). A maioria dos pacientes relatou ingerir carne vermelha (133 – 88,67%), leite (96 – 64,00%), gordura (76 – 50,67%), frutas (115 – 76,67%), vegetais (123 – 82,00%) e leguminosas (129 – 86,00%) cinco ou mais vezes por semana, 23,33% apresentavam história de câncer de próstata (pai ou irmão). Os dados indicaram que os pacientes apresentam doenças crônicas (82 – 54,67%) sendo a Hipertensão Arterial Sistêmica a principal delas (35 – 42,68%), seguida de diabetes e Hipertensão Arterial Sistêmica (20 – 34,39%), diabetes (14 - 14,63%), e outras (15 - 18,29%). A realização do Antígeno Prostático Especifico foi o que apresentou maior frequência (84 – 56,00%) seguido do toque retal (48 – 32,00%), ultrassom (16 – 10,67%) e biópsia (12 – 8,00%). Conclusões: Necessidade de novas estratégias para sensibilizar os homens mais jovens a procurarem o serviço na busca de prevenção de doenças e promoção da saúde. Os principais fatores para o câncer de próstata relatados pelos participantes foram idade, escolaridade, sedentarismo, uso de bebida alcoólica, ingestão de carnes vermelha, leite e derivados, gorduras e sobrepeso. O presente estudo sugere que a população masculina precisa ser assistida de acordo com as orientações da Política Nacional de Atenção Integral à Saúde do Homem, podendo haver um protocolo de cuidado com ações necessárias para o conhecimento da situação e do impacto no perfil de morbimortalidade voltado para essa clientela.