INTRODUÇÃO: O câncer de vulva representa entre 3 a 5% dos cânceres do trato genital feminino e aproximadamente 0,6% dos cânceres da mulher. Existem poucos estudos na literatura sobre fatores prognósticos incluindo avaliação molecular, relacionados a esta doença. Este estudo foi realizado para avaliar fatores prognósticos clínicos, epidemiológicos, patológicos e moleculares de pacientes portadores de câncer de vulva submetidos a tratamento cirúrgico. Avaliamos também uma classificação de prognóstico com base na pontuação do risco relativo dos fatores encontrados. MÉTODOS: Foram selecionadas as pacientes portadoras de carcinoma escamocelular de vulva, submetidas a tratamento cirúrgico no Departamento de Cirurgia Pélvica e Serviço de Ginecologia do Hospital Aristides Maltez entre o período de Junho de 1993 e Junho de 2011. Avaliamos as características clínicas, epidemiológicas, de anatomia patológica e molecular, em relação ao prognóstico das pacientes. A avaliação molecular estudou a expressão da proteína p53 e metaloproteinase 2 de matriz por exame de imunohistoquímica pela técnica de arranjo em matriz de amostras teciduais (TMA). Com base no banco de dados realizado através de consulta aos prontuários e com os resultados de anatomia patológica e testes imunohistoquímicos realizamos análise estatística em relação à sobrevida global das pacientes.RESULTADOS: Setenta e cinco pacientes foram elegíveis para o estudo. A análise univariada mostra como fatores relacionados à sobrevida foram a presença de linfonodo suspeito de metástase ao exame clínico (p=0,004), o tamanho maior de 4 centímetros (p=0,001), a presença de linfonodo com metástase (p=0,026), o estadiamento por grupos (p=0,001), a localização mediana (p=0,011), a profundidade de infiltração maior de 2 milímetros (p=0,012), a expressão da MMP 2 em mais de 50% das células (p=0,009). Na análise multivariada os fatores relacionados à sobrevida foram o tamanho maior de 4 centímetros (p=0,014), a profundidade de invasão maior de 2 milímetros (p=0,023) e a expressão de MMP2 em mais de 50% das células (p=0,046). De acordo ao risco relativo dos fatores identificados como relacionados ao prognóstico pela análise multivariada, foi elaborada a contagem de pontos para uma classificação prognóstica. Essa pontuação classifica em três categorias conforme a presença ou ausência dos fatores identificados na análise multivariada e pode corresponder a três expectativas de sobrevida. CONCLUSÕES: Os fatores tamanho maior de 4 centímetros, profundidade de invasão maior de 2 milímetros e expressão em mais de 50% das células tumorais de metaloproteinase 2 parecem estar relacionados a menor taxa de sobrevida global de pacientes portadores de câncer de vulva submetidas a tratamento cirúrgico. Pode ser realizada uma classificação para o prognóstico de acordo com uma contagem de pontos atribuídos ao risco relativo destes fatores / INTRODUCTION: Vulvar cancer accounts for 3-5% of all cancers of the female genital tract and approximately 0.6% of women\'s cancers. There are few studies on prognostic factors including molecular evaluation related to this disease. This study was conducted to evaluate clinical, epidemiological, pathological and molecular prognostic factors of patients with vulvar cancer, undergoing surgical treatment. A classification based on prognostic risk score related to the factors found was also evaluated. METHODS: Patients were selected with squamous cell carcinoma of the vulva who underwent surgical treatment at the Department of Pelvic Surgery and Department of Gynecology, Hospital Aristides Maltez between the period of June 1993 and June 2011. Clinical, epidemiological, and molecular and pathological anatomy characteristics were evaluated in relation to the prognosis of patients. Molecular assessment studied the expression of p53 protein and metalloproteinase 2 by immunohistochemical examination through the technical arrangement on matrix tissue samples (TMA). Based on the database performed on medical records held and the results of pathological anatomy and immunohistochemical tests, the statistical analysis was performed with respect to overall survival of patients. RESULTS: Seventy-five patients were eligible for the study. Univariate analysis shows how factors related to survival were the presence of lymph node metastasis suspected on clinical examination (p = 0.004), the larger size of 4 cm (p = 0.001), presence of lymph node metastasis (p = 0.026), staging groups (p = 0.001), the location median (p = 0.011), the depth of infiltration larger than 2 millimeters (p = 0.012), the expression of MMP 2 in more than 50% of the cells (p = 0.009). In multivariate analysis, factors related to survival were larger size than 4 cm (p = 0.014), depth of invasion greater than 2 mm (p = 0.023) and MMP2 expression in more than 50% of cells (p = 0.046). According to the relative risk of factors identified as related to prognosis by multivariate analysis, a score was developed for a prognostic classification. This score classifies into three categories, according to the presence or absence of the factors identified in the multivariate analysis and may correspond to three survival expectations. CONCLUSIONS: Prognostic factors as the size larger than 4 centimeters, depth of invasion greater than 2 mm and expression in more than 50% of tumor cells of metalloproteinase 2 may be related to lower overall survival rate of patients with cancer of the vulva undergoing surgery. Classification may be performed for the prognostic according to a count point attributed to the relative risk of these factors

INTRODUÇÃO: Os microRNAs (miRNAs) são uma classe de pequenas moléculas não codificadoras de proteínas que regulam a expressão gênica durante a etapa de tradução. Esta regulação é feita pelo pareamento de bases com o mRNA-alvo (RNA mensageiro), resultando na supressão da tradução ou na clivagem do mRNA. A depender se os miRNAs têm como alvo genes supressores de tumor ou oncogenes, eles podem atuar como supressores tumorais ou oncogenes. A imunoistoquímica triplo negativa, no câncer de mama, é, comumente, utilizada como substituto clínico para identificação dos tumores basaloides, que se caracterizam pela expressão de genes epiteliais basais, sendo associados a menores taxas de sobrevida livre de doença e sobrevida global. O câncer de mama triplo negativo faz com que seja necessária a descoberta de marcadores moleculares que possam servir de alvos terapêuticos ou, pelo menos, que sirvam como marcadores preditivos da resposta aos quimioterápicos. OBJETIVO: avaliar a expressão de microRNAs, por PCR em tempo real, no carcinoma mamário ductal invasivo (CDI) triplo negativo. MÉTODOS: Foram avaliados materiais em parafina de tumor de 31 pacientes com as seguintes características: carcinoma invasivo de mama, receptores de estrogênio e de progesterona negativos e HER 2 negativo, bem como tecido mamário histologicamente normal. Foram utilizados kit para extração de RNA de amostras fixadas e parafinadas - miRNeasy FFPE; kit para síntese de cDNA - miScript II RT; kit miScript SYBR Green PCR e miScript miRNA PCR Arrays para análise de 84 sequências de miRNA de câncer humano. Foram avaliados dados clínicos, como idade, paridade, amamentação, status menopausal; variáveis histológicas, como tamanho do tumor, status linfonodal, invasão linfática; características imunoistoquímicas, como expressão de Ki-67, EFGR e CK 5/6. O seguimento das pacientes buscou verificar a ocorrência e o tempo de aparecimento de recidiva loco regional, metástase à distância e óbito. Para análise estatística foi utilizado o software miScript miRNA PCR Array Data Analysis, que utiliza o método de quantificação relativa DeltaCt. RESULTADOS: A análise comparativa dos 31 casos de CDI triplo negativo com os 18 casos de parênquima mamário normal definiu microRNAs hiperexpressos, sendo eles: miR-96-5p (fold-regulation(FR) = 9,68, p = 0,000008), miR-21-5p (FR = 4,47, p = 0,00), miR-7-5p (FR = 5,8, p = 0,00137) , miR-182-5p (FR= 7,92, p = 0,000001), miR-210-3p (FR = 11,83, p = 0,000048), miR-18a-5p (FR = 9,51, p = 0,000034), miR-155-5p (FR= 4,40 , p = 0,00019) e miR-93-5p (FR= 4,15, p = 0,000023). Aponta, ainda, microRNAs com hipoexpressão, a saber: miR-204-5p (FR = -10,26, p = 0), miR-205-5p (FR= -4,07, p = 0,019822), miR-125b-5p (FR= -4,29, p=0) e let 7c-5p (FR= -4,91, p=0). CONCLUSÃO: a expressão de microRNAs no carcinoma ductal invasivo triplo negativo permite diferenciá-lo do tecido normal / INTRODUCTION: MicroRNAs (miRNAs) are a class of small non-coding protein molecules that regulate gene expression during the translation stage. This adjustment is made by base pairing with the mRNA (messenger RNA) target resulting in suppression of translation or cleavage of the mRNA. Depending on whether miRNAs target tumor suppressor genes or oncogenes, they can act as tumor suppressors or oncogenes. The triple negative immunohistochemistry in breast cancer is commonly used as a substitute for clinical identification of basaloid tumors, which are characterized by the expression of basal epithelial genes and are associated with lower rates of disease-free survival and overall survival. The triple negative breast cancer makes necessary the discovery of molecular markers that may serve as therapeutic targets or at least as predictive markers of response to chemotherapy. OBJECTIVE: evaluate the expression of microRNAs by RT-PCR in triple negative breast invasive ductal carcinoma (IDC). METHODS: Paraffin embedded tumor material from 31 patients with the following characteristics were evaluated: invasive breast carcinoma, negative estrogen and progesterone receptor, negative HER 2, and histologically normal breast tissue. Were used: Kit for RNA extraction from fixed and paraffin embedded samples - miRNeasy FFPE; cDNA synthesis kit - miScript II RT; miScript SYBR Green PCR Kit and miScript miRNA PCR Arrays for analysis of 84 miRNA sequences of human cancer. Clinical data such as age, parity, breastfeeding, menopausal status; histological variables such as tumor size, lymph node status, lymphatic invasion; immunohistochemical characteristics, such as expression of Ki-67, EFGR and CK 5/6 were evaluated. The follow-up of patients aimed to verify the occurrence and time of appearance of loco regional recurrence, distant metastasis and death. For statistical analysis the miScript miRNA PCR Array Data Analysis software, which uses the method of relative quantification DeltaCt, was used. RESULTS: A comparative analysis of 31 cases of triple negative IDC with 18 cases of normal breast parenchyma defined microRNAs overexpressed, as follows: miR-96-5p (fold-regulation (FR) = 9.68, p = 0.000008), miR -21-5p (FR = 4.47, p = 0.00), 5p, miR-7 (FR = 5.8, p = 0.00137), miR-182-5p (FR = 7.92, p = 0.000001), miR-210-3p (FR = 11.83, p = 0.000048), miR-18a-5p (FR = 9.51, p = 0.000034), miR-155-5p (FR = 4.40, p = 0.00019) and miR-93-5p (FR = 4.15, p = 0.000023). Furthermore, microRNAs with reduced expression, as follows: miR-204-5p (FR = -10.26, p = 0), miR-205-5p (FR = -4.07, p = 0.019822), miR -125b-5p (FR = -4.29, p = 0) and Let-7c 5p (FR = -4.91, p = 0). CONCLUSION: the expression of microRNAs in triple negative invasive ductal carcinoma allows to differentiate it from normal tissue

INTRODUÇÃO: Os microRNAs (miRNAs) são uma classe de pequenas moléculas não codificadoras de proteínas que regulam a expressão gênica durante a etapa de tradução. Esta regulação é feita pelo pareamento de bases com o mRNA-alvo (RNA mensageiro), resultando na supressão da tradução ou na clivagem do mRNA. A depender se os miRNAs têm como alvo genes supressores de tumor ou oncogenes, eles podem atuar como supressores tumorais ou oncogenes. A imunoistoquímica triplo negativa, no câncer de mama, é, comumente, utilizada como substituto clínico para identificação dos tumores basaloides, que se caracterizam pela expressão de genes epiteliais basais, sendo associados a menores taxas de sobrevida livre de doença e sobrevida global. O câncer de mama triplo negativo faz com que seja necessária a descoberta de marcadores moleculares que possam servir de alvos terapêuticos ou, pelo menos, que sirvam como marcadores preditivos da resposta aos quimioterápicos. OBJETIVO: avaliar a expressão de microRNAs, por PCR em tempo real, no carcinoma mamário ductal invasivo (CDI) triplo negativo. MÉTODOS: Foram avaliados materiais em parafina de tumor de 31 pacientes com as seguintes características: carcinoma invasivo de mama, receptores de estrogênio e de progesterona negativos e HER 2 negativo, bem como tecido mamário histologicamente normal. Foram utilizados kit para extração de RNA de amostras fixadas e parafinadas - miRNeasy FFPE; kit para síntese de cDNA - miScript II RT; kit miScript SYBR Green PCR e miScript miRNA PCR Arrays para análise de 84 sequências de miRNA de câncer humano. Foram avaliados dados clínicos, como idade, paridade, amamentação, status menopausal; variáveis histológicas, como tamanho do tumor, status linfonodal, invasão linfática; características imunoistoquímicas, como expressão de Ki-67, EFGR e CK 5/6. O seguimento das pacientes buscou verificar a ocorrência e o tempo de aparecimento de recidiva loco regional, metástase à distância e óbito. Para análise estatística foi utilizado o software miScript miRNA PCR Array Data Analysis, que utiliza o método de quantificação relativa DeltaCt. RESULTADOS: A análise comparativa dos 31 casos de CDI triplo negativo com os 18 casos de parênquima mamário normal definiu microRNAs hiperexpressos, sendo eles: miR-96-5p (fold-regulation(FR) = 9,68, p = 0,000008), miR-21-5p (FR = 4,47, p = 0,00), miR-7-5p (FR = 5,8, p = 0,00137) , miR-182-5p (FR= 7,92, p = 0,000001), miR-210-3p (FR = 11,83, p = 0,000048), miR-18a-5p (FR = 9,51, p = 0,000034), miR-155-5p (FR= 4,40 , p = 0,00019) e miR-93-5p (FR= 4,15, p = 0,000023). Aponta, ainda, microRNAs com hipoexpressão, a saber: miR-204-5p (FR = -10,26, p = 0), miR-205-5p (FR= -4,07, p = 0,019822), miR-125b-5p (FR= -4,29, p=0) e let 7c-5p (FR= -4,91, p=0). CONCLUSÃO: a expressão de microRNAs no carcinoma ductal invasivo triplo negativo permite diferenciá-lo do tecido normal / INTRODUCTION: MicroRNAs (miRNAs) are a class of small non-coding protein molecules that regulate gene expression during the translation stage. This adjustment is made by base pairing with the mRNA (messenger RNA) target resulting in suppression of translation or cleavage of the mRNA. Depending on whether miRNAs target tumor suppressor genes or oncogenes, they can act as tumor suppressors or oncogenes. The triple negative immunohistochemistry in breast cancer is commonly used as a substitute for clinical identification of basaloid tumors, which are characterized by the expression of basal epithelial genes and are associated with lower rates of disease-free survival and overall survival. The triple negative breast cancer makes necessary the discovery of molecular markers that may serve as therapeutic targets or at least as predictive markers of response to chemotherapy. OBJECTIVE: evaluate the expression of microRNAs by RT-PCR in triple negative breast invasive ductal carcinoma (IDC). METHODS: Paraffin embedded tumor material from 31 patients with the following characteristics were evaluated: invasive breast carcinoma, negative estrogen and progesterone receptor, negative HER 2, and histologically normal breast tissue. Were used: Kit for RNA extraction from fixed and paraffin embedded samples - miRNeasy FFPE; cDNA synthesis kit - miScript II RT; miScript SYBR Green PCR Kit and miScript miRNA PCR Arrays for analysis of 84 miRNA sequences of human cancer. Clinical data such as age, parity, breastfeeding, menopausal status; histological variables such as tumor size, lymph node status, lymphatic invasion; immunohistochemical characteristics, such as expression of Ki-67, EFGR and CK 5/6 were evaluated. The follow-up of patients aimed to verify the occurrence and time of appearance of loco regional recurrence, distant metastasis and death. For statistical analysis the miScript miRNA PCR Array Data Analysis software, which uses the method of relative quantification DeltaCt, was used. RESULTS: A comparative analysis of 31 cases of triple negative IDC with 18 cases of normal breast parenchyma defined microRNAs overexpressed, as follows: miR-96-5p (fold-regulation (FR) = 9.68, p = 0.000008), miR -21-5p (FR = 4.47, p = 0.00), 5p, miR-7 (FR = 5.8, p = 0.00137), miR-182-5p (FR = 7.92, p = 0.000001), miR-210-3p (FR = 11.83, p = 0.000048), miR-18a-5p (FR = 9.51, p = 0.000034), miR-155-5p (FR = 4.40, p = 0.00019) and miR-93-5p (FR = 4.15, p = 0.000023). Furthermore, microRNAs with reduced expression, as follows: miR-204-5p (FR = -10.26, p = 0), miR-205-5p (FR = -4.07, p = 0.019822), miR -125b-5p (FR = -4.29, p = 0) and Let-7c 5p (FR = -4.91, p = 0). CONCLUSION: the expression of microRNAs in triple negative invasive ductal carcinoma allows to differentiate it from normal tissue

AIMS: The rapidly growing industrial and medical use of nanomaterials, especially zinc oxide and titanium dioxide, has led to growing concerns about their toxicity. Accordingly, the intrinsic genotoxic and cytotoxic potential of these nanoparticles have been evaluated. MATERIALS & METHODS: Using a HEp-2 cell line, cytotoxicity was tested along with mitochondrial activity and neutral red uptake assays. The genotoxic potential was determined using the Comet and the cytokinesis-blocked micronucleus assays. In addition, tyrosine phosphorylation events were investigated. RESULTS & CONCLUSION: We found concentration- and time-dependent cytotoxicity and an increase in DNA and cytogenetic damage with increasing nanoparticle concentrations. Mainly for zinc oxide, genotoxicity was clearly associated with an increase in tyrosine phosphorylation. Our results suggest that both types of nanoparticles can be genotoxic over a range of concentrations without being cytotoxic.

INTRODUÇÃO: o padrão-ouro para o diagnóstico histológico dos tumores corticais adrenais (TCAs) e sua diferenciação entre adenomas e carcinomas é o sistema de Weiss, cuja aplicação é limitada pela baixa reprodutibilidade de alguns dos critérios que o compõe. Recentemente foi proposto e validado um algoritmo diagnóstico para os TCAs baseado na integridade do arcabouço de reticulina e da membrana basal. Os carcinomas adrenais são tumores raros e apresentam prognóstico reservado, mesmo nos pacientes com doença aparentemente localizada. Além do estadiamento e da extensão da ressecção cirúrgica, outros dados foram reportados na literatura como tendo importância prognóstica, tais como idade ao diagnóstico, padrão funcional, tamanho tumoral, extensão local do tumor primário e alguns achados histológicos e imuno-histoquímicos, com destaque à taxa mitótica e ao índice de Ki-67. O sistema de Weiss, embora permita o diagnóstico diferencial entre adenomas e carcinomas, não foi testado completamente como uma ferramenta para distinguir os carcinomas com boa evolução clínica daqueles com desfecho desfavorável. OBJETIVOS: o presente estudo teve como objetivo primário construir um nomograma para estimar o risco de metástases e recorrência local em portadores de carcinoma adrenal, a partir de dados clínico-patológicos. O objetivo secundário foi avaliar o desempenho do algoritmo da reticulina no diagnóstico diferencial entre adenomas e carcinomas do córtex adrenal. MÉTODOS: para a construção do nomograma, foram analisados dados clínico-patológicos de 129 portadores de carcinomas adrenais atendidos no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo entre 1976 e 2010. A avaliação do desempenho do algoritmo da reticulina para o diagnóstico histológico dos TCAs foi feita a partir do exame de 89 lâminas (45 adenomas e 44 carcinomas adrenais), que foram classificadas de acordo com o sistema de Weiss e pelo algoritmo da reticulina, pelo mesmo patologista e de forma cega. RESULTADOS: utilizando a análise de regressão logística binária, foi proposto um escore prognóstico com cinco covariáveis: padrão funcional outro que não o hiperandrogenismo isolado, tamanho tumoral > 7,5 cm, tumor primário classificado como T3 ou T4, presença de invasão venosa microscópica e índice mitótico > 5/50 campos de grande aumento. O escore prognóstico estava calibrado de acordo com o teste de aderência de Hosmer-Lemeshow (P =0,9329) e apresentou excelente desempenho global (escore de Brier =0,0738). Finalmente, a capacidade discriminatória do modelo, determinada pela área sob a curva ROC (AROC), foi considerada quase perfeita (AROC, 0,9611; IC95%, 0,92676-0,99552). O modelo preditivo foi validado internamente com 200 reamostragens por bootstrap. A partir destes resultados, desenvolvemos um aplicativo para iOS7 para estimar o risco de metástases e recorrência local em portadores de carcinomas adrenais (ACCPS - Adrenal Cortical Carcinoma Prognostic Score). O aplicativo está disponível para download gratuito na App Store. Em relação à avaliação do desempenho do algoritmo da reticulina, o mesmo apresentou sensibilidade =84,1% e especificidade =95,6% para o diagnóstico de carcinoma adrenal. Não se observou diferença estatisticamente significante entre os diagnósticos obtidos pelo escore de Weiss e pelo algoritmo da reticulina (P =0,1797; Teste exato de McNemar). A concordância dos dois sistemas, avaliada pelo coeficiente k, foi considerada substancial (k =0,7975; IC95%, 0,6728-0,9221). CONCLUSÕES: propusemos e validamos internamente um escore prognóstico baseado em informações clínicopatológicas que estão facilmente disponíveis ao clínico. O modelo proposto está disponível para uso como um aplicativo gratuito para iOS7 e é capaz de estimar o risco de desfechos desfavoráveis nos pacientes com carcinoma cortical adrenal. O escore pode ter grande utilidade na determinação do tipo e frequência do acompanhamento clínico-radiológico e na decisão de um tratamento profilático, após a retirada cirúrgica completa do carcinoma adrenal. O algoritmo da reticulina teve desempenho equivalente ao sistema de Weiss para o diagnóstico histológico dos tumores corticais adrenais, mas oferece a vantagem de ter aplicação mais fácil / INTRODUCTION: The gold standard for the histological diagnosis of adrenal cortical tumors (ACTs) and for the differentiation between adenomas and carcinomas is the Weiss system, whose application is limited by poor reproducibility of some of its criteria. Recently, a diagnostic algorithm for ACT diagnosis based on the integrity of the reticulin network and the basal membrane has been proposed and validated. Adrenal carcinomas are rare tumors and have a poor prognosis, even in patients with apparently localized disease. Besides tumor staging and extent of surgical resection, other data have been reported in the literature as having prognostic importance, such as age at diagnosis, the functional pattern, tumor size, local extension of the primary tumor and some histological and immunohistochemical findings, such as the mitotic rate and the Ki-67 index. The Weiss system, while allowing the differential diagnosis between adrenal cortical adenomas and carcinomas, has not been fully tested as a tool for distinguishing carcinomas with favorable clinical outcome from those with unfavorable outcome. OBJECTIVES: The primary objective of this study was to construct a nomogram for estimating the risk of metastasis and local recurrence in patients with adrenal cortical carcinoma, based on clinical and pathological data. The secondary objective was to evaluate the performance of the reticulina algorithm in the differential diagnosis between adenomas and carcinomas of the adrenal cortex. METHODS: For the construction of the nomogram, clinical and pathological data from 129 patients with adrenal cortical carcinomas treated at the Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo between 1976 and 2010 were analyzed. The evaluation of the performance of the reticulin algorithm for the histological diagnosis of ACTs was made from the examination of 89 slides (45 adenomas and 44 adrenal carcinomas), which were classified according to the Weiss system and the reticulin algorithm by the same pathologist in a blinded fashion. RESULTS: Using binary logistic regression analysis, we proposed a prognostic score with five covariates: a functional pattern other than isolated hyperandrogenism, a tumor size > 7.5 cm, a primary tumor classified as T3 or T4, the presence of microscopic venous invasion and a mitotic index > 5/50 high-power fields. The prognostic score was calibrated according to the Hosmer-Lemeshow goodness-of-fit test (P =0.9329) and showed excellent overall performance (Brier score =0.0738). Finally, the discriminatory ability of the model, as determined by the area under the ROC curve (AROC), was considered near-perfect (AROC, 0.9611; 95%CI, 0.92676 to 0.99552). The predictive model was internally validated with 200 bootstrap resamples. Based on these results, we develop an app for iOS7 for estimating the risk of metastasis and local recurrence in patients with adrenal carcinomas (ACCPS - Adrenal Cortical Carcinoma Prognostic Score). The app is available for free download on the App Store. Regarding the assessment of the performance of the reticulin algorithm, it had a sensitivity of 84.1% and specificity of 95.6% for the diagnosis of adrenal cortical carcinoma. No statistically significant difference between the diagnoses obtained by Weiss score and the reticulin algorithm was observed (P =0.1797, McNemar\'s exact test). The concordance between the two systems, assessed by the k coefficient, was considered substantial (k =0.7975; 95%CI, 0.6728 to 0.9221). CONCLUSIONS: we proposed and internally validated a prognostic score based on clinical and pathological information that are readily available to the attending physician. The proposed model is available as a free app for iOS7 and can estimate the risk of adverse outcomes in patients with adrenal cortical carcinoma. The score may be useful in determining the type and frequency of clinical and radiological evaluation and the decision of adjuvant treatment after complete surgical removal of the adrenal carcinoma. The reticulin algorithm was equivalent to the Weiss system for the histological diagnosis of adrenal cortical tumors, but offers the advantage of an easier application

INTRODUÇÃO: Quimiorradioterapia (QRT) concomitante adjuvante aumenta a sobrevida livre de doença (SLD) em pacientes portadores de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço (CECCP) de alto risco operados com intenção curativa, porém está associada a toxicidade não desprezível e seu impacto na sobrevida global (SG) é incerto. ERCC1 (Excision Repair Cross Complementing Group 1) é uma proteína com função crítica no reparo de DNA por excisão de nucleotídeos (NER) e está envolvido na resistência à quimio- e radioterapia. Neste trabalho tivemos como objetivos determinar a expressão da proteína ERCC1, a expressão do RNA mensageiro (mRNA) de ERCC1 e a ocorrência do polimorfismo de nucleotídeo único T19007C de ERCC1 em pacientes portadores de CECCP de alto risco, operados e tratados com QRT adjuvante, bem como o valor prognóstico destes marcadores. MÉTODOS: Trata-se de um estudo retrospectivo em pacientes portadores de CEC de cavidade oral, orofaringe, hipofaringe ou laringe, operados com intenção curativa e portadores de doença de risco alto ou intermediário. Pacientes elegíveis haviam sido tratados com QRT adjuvante: 60-70 Gy e cisplatina concomitante (100 mg/m2, dias 1, 22 e 43), não apresentavam metástases a distância e nem sinais de recidiva após cirurgia. A expressão da proteína ERCC1 foi avaliada por imunohistoquímica, através de um escore H semiquantitativo, obtido pelo produto da intensidade da coloração nuclear (0-3) pelo escore proporcional atribuído à porcentagem estimada de núcleos corados (0;0,1;0,5;1). O método da transcrição reversa e reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real quantitativo foi utilizado para determinação da expressão do mRNA de ERCC1 em tecido de tumor primário, normalizada em relação à expressão da fração 18S do RNA ribossomal. Genotipagem de ERCC1 (códon 118) foi realizada por PCR - polimorfismo do tamanho do fragmento de restrição a partir de DNA genômico extraído de linfonodos normais destes pacientes, após digestão com BsrDI. RESULTADOS: 69 pacientes com idade mediana de 56a, sendo 81% homens, foram estudados. Em relação à neoplasia, os sítios primários observados foram: cavidade oral (41%), laringe (32%), hipofaringe (16%) e orofaringe (12%), com estadio III 14% e estadio IV 86%, sendo pT3-pT4 78% e pN2-pN3 58%. Quarenta e três pacientes apresentaram-se com pelo menos dois linfonodos positivos, 27 com extravazamento extracapsular da metástase linfonodal e 18 com margens positivas. Achados de alto risco foram detectados em 40 pacientes (58%). No seguimento mediano de 47 meses, observou-se 11 recidivas loco-regionais, sete recidivas a distância, 10 casos com segundo tumor primário (sendo quatro com primário em pulmão e quatro em esôfago) e 30 óbitos (22 pela doença). A taxa de SG em 5 anos foi 40% e a taxa de SLD em 5 anos foi 31%. Escore H superior a 1,5 foi encontrado em 32 pacientes (54%), os quais apresentaram melhor taxa de sobrevida global em 5 anos (50% versus 18%, HR 0,43, 95%CI 0,20-0,90, p=0,026). Quinze pacientes (33%), dos 45 analisados, apresentaram elevada expressão do mRNA de ERCC1 (> 3,1) e estes pacientes tiveram melhor taxa de sobrevida global em 5 anos em comparação com aqueles com baixa expressão (86% versus 31%, HR 0,26, 95%CI 0,14-1,01, p=0,052). A distribuição dos genótipos de ERCC1 no códon 118 em 49 pacientes foi 39% C/T, 37% C/C, e 24% T/T. Não foi encontrada associação significativa entre idade, sexo, estadiamento e achados anatomopatológicos de risco, e os polimorfismos genéticos no códon 118 de ERCC1 ou a expressão do mRNA de ERCC1. Não houve diferença entre os genótipos C/C, C/T e T/T seja em termos taxa de sobrevida global em 5 anos (45%, 46%, 46%; p=0,808), seja em termos de taxa de sobrevida livre de doença em 5 anos (31%, 34%, 20%, p=0,770, respectivamente). O escore H (> 1,5 versus 1,5; HR ajustado 0,20, 95%CI 0,07-0,57, p=0,003) e a expressão normalizada do mRNA de ERCC1 (> 3,1 versus 3,1; HR ajustado 0,12, 95%CI 0,03-0,59, p=0,009), permaneceram significantes do ponto de vista estatístico, como fatores prognósticos na análise multivariada. CONCLUSÕES: Alta expressão imunohistoquímica da proteína ERCC1 e alta expressão do mRNA de ERCC1 conferem melhor prognóstico em pacientes portadores de CECCP operados de alto risco tratados com QRT adjuvante baseada em cisplatina. O polimorfismo genético T19007C de ERCC1 não apresentou valor prognóstico nestes pacientes. / BACKGROUND: Adjuvant concurrent chemoradiation (CRT) improves diseasefree survival (DFS) in patients diagnosed with head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) presenting with high-risk features treated with surgery with curative intent, but treatment-related toxicity is not negligible and its impact on overall survival (OS) is uncertain. ERCC1 (Excision Repair Cross Complementing Group 1) is a protein with a critical role in the nucleotide excision repair (NER) pathway, associated with resistance to chemo- and radiation therapy. We aimed here to study ERCC1 protein expression, ERCC1 messenger RNA (mRNA) expression and the single nucleotide polymorphism T19007C of ERCC1 as prognostic markers in HNSCC patients presenting with high-risk features treated with surgery and adjuvant CRT. METHODS: It is a retrospective study in patients with oral cavity, oropharynx, hypopharynx or larynx SCC submitted to radical surgery with curative intent and presenting with pathologic features of high- or intermediate-risk. Eligible patients were treated with adjuvant CRT: 60-70 Gy and concurrent cisplatin (100 mg/m2, days 1, 22 and 43), with no distant metastasis and no relapsed disease after surgery. ERCC1 protein expression was evaluated by immunohistochemistry, using a semi-quantitative H-score, calculated by multiplying the nuclear staining intensity (0-3) by the proportion score attributed to the percentage of positive tumor nuclei (0;0,1;0,5;1). Quantitative real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction (PCR) assay was performed to determine ERCC1 mRNA expression in primary tumors tissue specimens. The ERCC1 mRNA expression was normalized using 18S fraction of ribosomal RNA expression as internal reference. ERCC1 (codon 118) genotypes were detected using PCR restriction fragment length polymorphism method carried out in genomic DNA extracted from normal lymph nodes. The PCR products were digested with BsrDI. RESULTS: 69 patients (median age 56 y, 81% male) were studied. Regarding tumor characteristics, primary sites were: oral cavity 41%, larynx 32%, hypopharynx 16%, oropharynx 12%, stage III 14%, stage IV 86%, pT3- pT4 78% and pN2-pN3 58%. Forty-three patients presented with two or more positive lymph nodes, 27 with extracapsular spread of nodal disease and 18 with positive margins. High-risk pathologic features were detected in 40 patients (58%). During the median follow-up of 47 months, we observed 11 locoregional relapses, seven distant relapses, 10 patients were diagnosed with secondary primary tumors (four in lungs and four in esophagus) and 30 deaths (22 disease-related). The 5-year overall survival rate was 40% and the 5-year disease-free survival rate was 31%. High H-score (> 1.5) was seen in 32 patients (54%), who presented better 5-year overall survival rate in comparison to those with lower H-scores (50% versus 18%, HR 0.43, 95%CI 0.20-0.90, p=0.026). Fifteen patients (out of 45, 33%) whose tumors presented normalized ERCC1 expression > 3.1 were classified as having high ERCC1 mRNA expression, and these patients presented better 5-year overall survival rate in comparison to those with lower ERCC1 mRNA expression (86% versus 30%, HR 0.26, 95%CI 0.14-1.01, p=0.052). Genotype distribution at ERCC1 codon 118 in 49 patients was 39% C/T, 37% C/C, and 24% T/T. No significant association was found between age, gender, stage, grading and pathological risk features and ERCC1 codon 118 genotypes or ERCC1 mRNA expression. No difference was detected among C/C, C/T and T/T genotypes, either in terms of 5-year overall survival rates (45%, 46%, 46%; p=0.808), or 5-year diseasefree survival rate (31%, 34%, 20%, p=0.770, respectively). H-score (> 1.5 versus 1.5; adjusted HR 0.20, 95%CI 0.07-0.57, p=0.003) and ERCC1 mRNA normalized expression (> 3.1 versus 3.1; adjusted HR 0.12, 95%CI 0.03-0.59, p=0.009), remained significant as favorable prognostic factors after adjusting for prognostic factors in a multivariate analysis. CONCLUSIONS: High immunohistochemical expression of ERCC1 protein and high ERCC1 mRNA expression, but not the T19007 single nucleotide polymorphism, were associated with better prognosis in HNSCC patients submitted to surgery and adjuvant cisplatin-based chemoradiation.

Introdução: O câncer de mama é, em sua essência, uma doença genética. O acúmulo de alterações moleculares no genoma das células somáticas é a base para a progressão do câncer. Além de ter biologia natural mais favorável, os tumores com alta expressão de receptores de estrogênio têm terapia-alvo bem estabelecida. Apesar disso, as pacientes podem apresentar resistência medicamentosa, recidiva e óbito. Os microRNAs (miRNAs) são uma classe de pequenas moléculas não codificadoras de proteínas que regulam a expressão gênica durante a etapa de tradução. Esta regulação é feita pelo pareamento de bases com o mRNA-alvo (RNA mensageiro), resultando na supressão da tradução ou na clivagem do mRNA. Se os miRNAs têm como alvo genes supressores de tumor ou oncogenes, podem atuar como supressores tumorais ou oncogenes. OBJETIVO: avaliar a expressão de microRNAs, por PCR em tempo real, no carcinoma mamário ductal invasivo (CDI) com receptores hormonais positivos e HER-2 negativo (luminal A). MÉTODOS: Foram avaliados materiais em parafina de 33 pacientes com tumores luminal A, bem como tecido mamário histologicamente normal. Foram utilizados kit para extração de RNA de amostras fixadas e parafinadas - miRNeasy FFPE; kit para síntese de cDNA - miScript II RT; kit miScript SYBR Green PCR e miScript miRNA PCR Arrays para análise de 84 sequências de miRNA de câncer humano. Analisaram-se dados clínicos, como idade, paridade, amamentação, estado menopausal; variáveis histológicas, como tamanho do tumor, estado linfonodal, invasão linfática; características imunoistoquímicas, como expressão de Ki-67. Para a análise estatística utilizou-se o software miScript miRNA PCR Array Data Analysis, que emprega o método de quantificação relativa ??Ct. RESULTADOS: A análise comparativa dos 33 casos de CDI luminal A com os 15 casos de parênquima mamário normal revelou haver microRNAs hiperexpressos, sendo eles: miR-96-5p (fold-regulation = 9,245, p = 0,000192), miR-182-5p (fold-regulation = 6,4813, p = 0,00024), miR-21-5p (fold-regulation = 6,3129, p = 0,000001), miR- 210-3p (fold-regulation =4,3584, p =0,001002) e. miR-7-5p (fold-regulation = 4,0166, p = 0,036407). Apontou, ainda, microRNAs com hipoexpressão, a saber: miR-204-5p (Fold-regulation = -8,2104, p = 0,000000), miR-125b-5p (Fold-regulation = --6,332, p=0,000000), let-7c-5p (Fold-regulation: -4,5142, p=0,000000) e let-7e-5p (Fold-regulation = -4,059, p = 0,011625): CONCLUSÕES: CDI luminal A apresentou hiperexpressão de miR-96-5p, miR-182-5p, miR-21-5p, miR-210-3p e miR-7-5p. Apontou, ainda, hipoexpressão do miR-204-5p, miR-125b-5p, let-7c-5p e let-7e-5p, permitindo diferenciá-lo do tecido normal / INTRODUCTION: Breast cancer is a genetic disease and the accumulation of molecular alterations in the genome of somatic cells is the basis for cancer progression. Besides having a more favorable natural biology, tumors with high expression of estrogen receptor have a well established targeted therapy. Nevertheless, patients may present with resistance and eventually relapse and death. MicroRNAs (miRNAs) are a class of small non-coding protein molecules that regulate gene expression during the translation stage. This adjustment is made by base pairing with the mRNA (messenger RNA) target resulting in suppression of translation or cleavage of the mRNA. Depending on whether miRNAs target tumor suppressor genes or oncogenes, they can act as tumor suppressors or oncogenes. OBJECTIVE: evaluate the expression of microRNAs by RT-PCR in positive hormonal receptors, negative HER 2 (luminal A) invasive ductal carcinoma (IDC). METHODS: Paraffin embedded tumor material from 33 patients with luminal A IDC, and histologically normal breast tissue. Were used: Kit for RNA extraction from fixed and paraffin embedded samples - miRNeasy FFPE; cDNA synthesis kit - miScript II RT; miScript SYBR Green PCR Kit and miScript miRNA PCR Arrays for analysis of 84 miRNA sequences of human cancer. Clinical data such as age, parity, breastfeeding, menopausal status; histological variables such as tumor size, lymph node status, lymphatic invasion; immunohistochemical characteristics, such as expression of Ki-67, were evaluated. For statistical analysis the miScript miRNA PCR Array Data Analysis software, which uses the method of relative quantification ??Ct, was used. RESULTS: A comparative analysis of 33 cases of luminal A IDC with 15 cases of normal breast parenchyma defined microRNAs overexpressed, as follows: miR-96-5p (fold-regulation = 9,245, p = 0,000192), miR-182-5p (fold-regulation = 6,4813, p = 0,00024), miR-21-5p (fold-regulation = 6,3129, p = 0,000001), miR- 210-3p (fold-regulation =4,3584, p =0,001002) and miR-7-5p (fold-regulation = 4,0166, p = 0,036407). Furthermore, microRNAs with reduced expression, as follows:. miR-204-5p (Fold-regulation = -8,2104, p = 0,000000), miR-125b-5p (Fold-regulation = -6,332, p=0,000000), let-7c-5p (Fold-regulation: -4,5142, p=0,000000) and let-7e-5p (Fold-regulation = -4,059, p = 0,011625): CONCLUSION: Luminal A CDI breast cancer has shown overexpression of miR-96-5p, miR-182-5p, miR-21-5p, miR-210-3p and miR-7-5p. Also has shown,downregulation of miR-204-5p, miR-125b-5p, let-7c-5p e let-7e-5p, allowing differentiating it from normal tissue

INTRODUÇÃO: o padrão-ouro para o diagnóstico histológico dos tumores corticais adrenais (TCAs) e sua diferenciação entre adenomas e carcinomas é o sistema de Weiss, cuja aplicação é limitada pela baixa reprodutibilidade de alguns dos critérios que o compõe. Recentemente foi proposto e validado um algoritmo diagnóstico para os TCAs baseado na integridade do arcabouço de reticulina e da membrana basal. Os carcinomas adrenais são tumores raros e apresentam prognóstico reservado, mesmo nos pacientes com doença aparentemente localizada. Além do estadiamento e da extensão da ressecção cirúrgica, outros dados foram reportados na literatura como tendo importância prognóstica, tais como idade ao diagnóstico, padrão funcional, tamanho tumoral, extensão local do tumor primário e alguns achados histológicos e imuno-histoquímicos, com destaque à taxa mitótica e ao índice de Ki-67. O sistema de Weiss, embora permita o diagnóstico diferencial entre adenomas e carcinomas, não foi testado completamente como uma ferramenta para distinguir os carcinomas com boa evolução clínica daqueles com desfecho desfavorável. OBJETIVOS: o presente estudo teve como objetivo primário construir um nomograma para estimar o risco de metástases e recorrência local em portadores de carcinoma adrenal, a partir de dados clínico-patológicos. O objetivo secundário foi avaliar o desempenho do algoritmo da reticulina no diagnóstico diferencial entre adenomas e carcinomas do córtex adrenal. MÉTODOS: para a construção do nomograma, foram analisados dados clínico-patológicos de 129 portadores de carcinomas adrenais atendidos no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo entre 1976 e 2010. A avaliação do desempenho do algoritmo da reticulina para o diagnóstico histológico dos TCAs foi feita a partir do exame de 89 lâminas (45 adenomas e 44 carcinomas adrenais), que foram classificadas de acordo com o sistema de Weiss e pelo algoritmo da reticulina, pelo mesmo patologista e de forma cega. RESULTADOS: utilizando a análise de regressão logística binária, foi proposto um escore prognóstico com cinco covariáveis: padrão funcional outro que não o hiperandrogenismo isolado, tamanho tumoral > 7,5 cm, tumor primário classificado como T3 ou T4, presença de invasão venosa microscópica e índice mitótico > 5/50 campos de grande aumento. O escore prognóstico estava calibrado de acordo com o teste de aderência de Hosmer-Lemeshow (P =0,9329) e apresentou excelente desempenho global (escore de Brier =0,0738). Finalmente, a capacidade discriminatória do modelo, determinada pela área sob a curva ROC (AROC), foi considerada quase perfeita (AROC, 0,9611; IC95%, 0,92676-0,99552). O modelo preditivo foi validado internamente com 200 reamostragens por bootstrap. A partir destes resultados, desenvolvemos um aplicativo para iOS7 para estimar o risco de metástases e recorrência local em portadores de carcinomas adrenais (ACCPS - Adrenal Cortical Carcinoma Prognostic Score). O aplicativo está disponível para download gratuito na App Store. Em relação à avaliação do desempenho do algoritmo da reticulina, o mesmo apresentou sensibilidade =84,1% e especificidade =95,6% para o diagnóstico de carcinoma adrenal. Não se observou diferença estatisticamente significante entre os diagnósticos obtidos pelo escore de Weiss e pelo algoritmo da reticulina (P =0,1797; Teste exato de McNemar). A concordância dos dois sistemas, avaliada pelo coeficiente k, foi considerada substancial (k =0,7975; IC95%, 0,6728-0,9221). CONCLUSÕES: propusemos e validamos internamente um escore prognóstico baseado em informações clínicopatológicas que estão facilmente disponíveis ao clínico. O modelo proposto está disponível para uso como um aplicativo gratuito para iOS7 e é capaz de estimar o risco de desfechos desfavoráveis nos pacientes com carcinoma cortical adrenal. O escore pode ter grande utilidade na determinação do tipo e frequência do acompanhamento clínico-radiológico e na decisão de um tratamento profilático, após a retirada cirúrgica completa do carcinoma adrenal. O algoritmo da reticulina teve desempenho equivalente ao sistema de Weiss para o diagnóstico histológico dos tumores corticais adrenais, mas oferece a vantagem de ter aplicação mais fácil / INTRODUCTION: The gold standard for the histological diagnosis of adrenal cortical tumors (ACTs) and for the differentiation between adenomas and carcinomas is the Weiss system, whose application is limited by poor reproducibility of some of its criteria. Recently, a diagnostic algorithm for ACT diagnosis based on the integrity of the reticulin network and the basal membrane has been proposed and validated. Adrenal carcinomas are rare tumors and have a poor prognosis, even in patients with apparently localized disease. Besides tumor staging and extent of surgical resection, other data have been reported in the literature as having prognostic importance, such as age at diagnosis, the functional pattern, tumor size, local extension of the primary tumor and some histological and immunohistochemical findings, such as the mitotic rate and the Ki-67 index. The Weiss system, while allowing the differential diagnosis between adrenal cortical adenomas and carcinomas, has not been fully tested as a tool for distinguishing carcinomas with favorable clinical outcome from those with unfavorable outcome. OBJECTIVES: The primary objective of this study was to construct a nomogram for estimating the risk of metastasis and local recurrence in patients with adrenal cortical carcinoma, based on clinical and pathological data. The secondary objective was to evaluate the performance of the reticulina algorithm in the differential diagnosis between adenomas and carcinomas of the adrenal cortex. METHODS: For the construction of the nomogram, clinical and pathological data from 129 patients with adrenal cortical carcinomas treated at the Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo between 1976 and 2010 were analyzed. The evaluation of the performance of the reticulin algorithm for the histological diagnosis of ACTs was made from the examination of 89 slides (45 adenomas and 44 adrenal carcinomas), which were classified according to the Weiss system and the reticulin algorithm by the same pathologist in a blinded fashion. RESULTS: Using binary logistic regression analysis, we proposed a prognostic score with five covariates: a functional pattern other than isolated hyperandrogenism, a tumor size > 7.5 cm, a primary tumor classified as T3 or T4, the presence of microscopic venous invasion and a mitotic index > 5/50 high-power fields. The prognostic score was calibrated according to the Hosmer-Lemeshow goodness-of-fit test (P =0.9329) and showed excellent overall performance (Brier score =0.0738). Finally, the discriminatory ability of the model, as determined by the area under the ROC curve (AROC), was considered near-perfect (AROC, 0.9611; 95%CI, 0.92676 to 0.99552). The predictive model was internally validated with 200 bootstrap resamples. Based on these results, we develop an app for iOS7 for estimating the risk of metastasis and local recurrence in patients with adrenal carcinomas (ACCPS - Adrenal Cortical Carcinoma Prognostic Score). The app is available for free download on the App Store. Regarding the assessment of the performance of the reticulin algorithm, it had a sensitivity of 84.1% and specificity of 95.6% for the diagnosis of adrenal cortical carcinoma. No statistically significant difference between the diagnoses obtained by Weiss score and the reticulin algorithm was observed (P =0.1797, McNemar\'s exact test). The concordance between the two systems, assessed by the k coefficient, was considered substantial (k =0.7975; 95%CI, 0.6728 to 0.9221). CONCLUSIONS: we proposed and internally validated a prognostic score based on clinical and pathological information that are readily available to the attending physician. The proposed model is available as a free app for iOS7 and can estimate the risk of adverse outcomes in patients with adrenal cortical carcinoma. The score may be useful in determining the type and frequency of clinical and radiological evaluation and the decision of adjuvant treatment after complete surgical removal of the adrenal carcinoma. The reticulin algorithm was equivalent to the Weiss system for the histological diagnosis of adrenal cortical tumors, but offers the advantage of an easier application

INTRODUÇÃO: Quimiorradioterapia (QRT) concomitante adjuvante aumenta a sobrevida livre de doença (SLD) em pacientes portadores de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço (CECCP) de alto risco operados com intenção curativa, porém está associada a toxicidade não desprezível e seu impacto na sobrevida global (SG) é incerto. ERCC1 (Excision Repair Cross Complementing Group 1) é uma proteína com função crítica no reparo de DNA por excisão de nucleotídeos (NER) e está envolvido na resistência à quimio- e radioterapia. Neste trabalho tivemos como objetivos determinar a expressão da proteína ERCC1, a expressão do RNA mensageiro (mRNA) de ERCC1 e a ocorrência do polimorfismo de nucleotídeo único T19007C de ERCC1 em pacientes portadores de CECCP de alto risco, operados e tratados com QRT adjuvante, bem como o valor prognóstico destes marcadores. MÉTODOS: Trata-se de um estudo retrospectivo em pacientes portadores de CEC de cavidade oral, orofaringe, hipofaringe ou laringe, operados com intenção curativa e portadores de doença de risco alto ou intermediário. Pacientes elegíveis haviam sido tratados com QRT adjuvante: 60-70 Gy e cisplatina concomitante (100 mg/m2, dias 1, 22 e 43), não apresentavam metástases a distância e nem sinais de recidiva após cirurgia. A expressão da proteína ERCC1 foi avaliada por imunohistoquímica, através de um escore H semiquantitativo, obtido pelo produto da intensidade da coloração nuclear (0-3) pelo escore proporcional atribuído à porcentagem estimada de núcleos corados (0;0,1;0,5;1). O método da transcrição reversa e reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real quantitativo foi utilizado para determinação da expressão do mRNA de ERCC1 em tecido de tumor primário, normalizada em relação à expressão da fração 18S do RNA ribossomal. Genotipagem de ERCC1 (códon 118) foi realizada por PCR - polimorfismo do tamanho do fragmento de restrição a partir de DNA genômico extraído de linfonodos normais destes pacientes, após digestão com BsrDI. RESULTADOS: 69 pacientes com idade mediana de 56a, sendo 81% homens, foram estudados. Em relação à neoplasia, os sítios primários observados foram: cavidade oral (41%), laringe (32%), hipofaringe (16%) e orofaringe (12%), com estadio III 14% e estadio IV 86%, sendo pT3-pT4 78% e pN2-pN3 58%. Quarenta e três pacientes apresentaram-se com pelo menos dois linfonodos positivos, 27 com extravazamento extracapsular da metástase linfonodal e 18 com margens positivas. Achados de alto risco foram detectados em 40 pacientes (58%). No seguimento mediano de 47 meses, observou-se 11 recidivas loco-regionais, sete recidivas a distância, 10 casos com segundo tumor primário (sendo quatro com primário em pulmão e quatro em esôfago) e 30 óbitos (22 pela doença). A taxa de SG em 5 anos foi 40% e a taxa de SLD em 5 anos foi 31%. Escore H superior a 1,5 foi encontrado em 32 pacientes (54%), os quais apresentaram melhor taxa de sobrevida global em 5 anos (50% versus 18%, HR 0,43, 95%CI 0,20-0,90, p=0,026). Quinze pacientes (33%), dos 45 analisados, apresentaram elevada expressão do mRNA de ERCC1 (> 3,1) e estes pacientes tiveram melhor taxa de sobrevida global em 5 anos em comparação com aqueles com baixa expressão (86% versus 31%, HR 0,26, 95%CI 0,14-1,01, p=0,052). A distribuição dos genótipos de ERCC1 no códon 118 em 49 pacientes foi 39% C/T, 37% C/C, e 24% T/T. Não foi encontrada associação significativa entre idade, sexo, estadiamento e achados anatomopatológicos de risco, e os polimorfismos genéticos no códon 118 de ERCC1 ou a expressão do mRNA de ERCC1. Não houve diferença entre os genótipos C/C, C/T e T/T seja em termos taxa de sobrevida global em 5 anos (45%, 46%, 46%; p=0,808), seja em termos de taxa de sobrevida livre de doença em 5 anos (31%, 34%, 20%, p=0,770, respectivamente). O escore H (> 1,5 versus 1,5; HR ajustado 0,20, 95%CI 0,07-0,57, p=0,003) e a expressão normalizada do mRNA de ERCC1 (> 3,1 versus 3,1; HR ajustado 0,12, 95%CI 0,03-0,59, p=0,009), permaneceram significantes do ponto de vista estatístico, como fatores prognósticos na análise multivariada. CONCLUSÕES: Alta expressão imunohistoquímica da proteína ERCC1 e alta expressão do mRNA de ERCC1 conferem melhor prognóstico em pacientes portadores de CECCP operados de alto risco tratados com QRT adjuvante baseada em cisplatina. O polimorfismo genético T19007C de ERCC1 não apresentou valor prognóstico nestes pacientes. / BACKGROUND: Adjuvant concurrent chemoradiation (CRT) improves diseasefree survival (DFS) in patients diagnosed with head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) presenting with high-risk features treated with surgery with curative intent, but treatment-related toxicity is not negligible and its impact on overall survival (OS) is uncertain. ERCC1 (Excision Repair Cross Complementing Group 1) is a protein with a critical role in the nucleotide excision repair (NER) pathway, associated with resistance to chemo- and radiation therapy. We aimed here to study ERCC1 protein expression, ERCC1 messenger RNA (mRNA) expression and the single nucleotide polymorphism T19007C of ERCC1 as prognostic markers in HNSCC patients presenting with high-risk features treated with surgery and adjuvant CRT. METHODS: It is a retrospective study in patients with oral cavity, oropharynx, hypopharynx or larynx SCC submitted to radical surgery with curative intent and presenting with pathologic features of high- or intermediate-risk. Eligible patients were treated with adjuvant CRT: 60-70 Gy and concurrent cisplatin (100 mg/m2, days 1, 22 and 43), with no distant metastasis and no relapsed disease after surgery. ERCC1 protein expression was evaluated by immunohistochemistry, using a semi-quantitative H-score, calculated by multiplying the nuclear staining intensity (0-3) by the proportion score attributed to the percentage of positive tumor nuclei (0;0,1;0,5;1). Quantitative real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction (PCR) assay was performed to determine ERCC1 mRNA expression in primary tumors tissue specimens. The ERCC1 mRNA expression was normalized using 18S fraction of ribosomal RNA expression as internal reference. ERCC1 (codon 118) genotypes were detected using PCR restriction fragment length polymorphism method carried out in genomic DNA extracted from normal lymph nodes. The PCR products were digested with BsrDI. RESULTS: 69 patients (median age 56 y, 81% male) were studied. Regarding tumor characteristics, primary sites were: oral cavity 41%, larynx 32%, hypopharynx 16%, oropharynx 12%, stage III 14%, stage IV 86%, pT3- pT4 78% and pN2-pN3 58%. Forty-three patients presented with two or more positive lymph nodes, 27 with extracapsular spread of nodal disease and 18 with positive margins. High-risk pathologic features were detected in 40 patients (58%). During the median follow-up of 47 months, we observed 11 locoregional relapses, seven distant relapses, 10 patients were diagnosed with secondary primary tumors (four in lungs and four in esophagus) and 30 deaths (22 disease-related). The 5-year overall survival rate was 40% and the 5-year disease-free survival rate was 31%. High H-score (> 1.5) was seen in 32 patients (54%), who presented better 5-year overall survival rate in comparison to those with lower H-scores (50% versus 18%, HR 0.43, 95%CI 0.20-0.90, p=0.026). Fifteen patients (out of 45, 33%) whose tumors presented normalized ERCC1 expression > 3.1 were classified as having high ERCC1 mRNA expression, and these patients presented better 5-year overall survival rate in comparison to those with lower ERCC1 mRNA expression (86% versus 30%, HR 0.26, 95%CI 0.14-1.01, p=0.052). Genotype distribution at ERCC1 codon 118 in 49 patients was 39% C/T, 37% C/C, and 24% T/T. No significant association was found between age, gender, stage, grading and pathological risk features and ERCC1 codon 118 genotypes or ERCC1 mRNA expression. No difference was detected among C/C, C/T and T/T genotypes, either in terms of 5-year overall survival rates (45%, 46%, 46%; p=0.808), or 5-year diseasefree survival rate (31%, 34%, 20%, p=0.770, respectively). H-score (> 1.5 versus 1.5; adjusted HR 0.20, 95%CI 0.07-0.57, p=0.003) and ERCC1 mRNA normalized expression (> 3.1 versus 3.1; adjusted HR 0.12, 95%CI 0.03-0.59, p=0.009), remained significant as favorable prognostic factors after adjusting for prognostic factors in a multivariate analysis. CONCLUSIONS: High immunohistochemical expression of ERCC1 protein and high ERCC1 mRNA expression, but not the T19007 single nucleotide polymorphism, were associated with better prognosis in HNSCC patients submitted to surgery and adjuvant cisplatin-based chemoradiation.

Introdução: O câncer de mama é, em sua essência, uma doença genética. O acúmulo de alterações moleculares no genoma das células somáticas é a base para a progressão do câncer. Além de ter biologia natural mais favorável, os tumores com alta expressão de receptores de estrogênio têm terapia-alvo bem estabelecida. Apesar disso, as pacientes podem apresentar resistência medicamentosa, recidiva e óbito. Os microRNAs (miRNAs) são uma classe de pequenas moléculas não codificadoras de proteínas que regulam a expressão gênica durante a etapa de tradução. Esta regulação é feita pelo pareamento de bases com o mRNA-alvo (RNA mensageiro), resultando na supressão da tradução ou na clivagem do mRNA. Se os miRNAs têm como alvo genes supressores de tumor ou oncogenes, podem atuar como supressores tumorais ou oncogenes. OBJETIVO: avaliar a expressão de microRNAs, por PCR em tempo real, no carcinoma mamário ductal invasivo (CDI) com receptores hormonais positivos e HER-2 negativo (luminal A). MÉTODOS: Foram avaliados materiais em parafina de 33 pacientes com tumores luminal A, bem como tecido mamário histologicamente normal. Foram utilizados kit para extração de RNA de amostras fixadas e parafinadas - miRNeasy FFPE; kit para síntese de cDNA - miScript II RT; kit miScript SYBR Green PCR e miScript miRNA PCR Arrays para análise de 84 sequências de miRNA de câncer humano. Analisaram-se dados clínicos, como idade, paridade, amamentação, estado menopausal; variáveis histológicas, como tamanho do tumor, estado linfonodal, invasão linfática; características imunoistoquímicas, como expressão de Ki-67. Para a análise estatística utilizou-se o software miScript miRNA PCR Array Data Analysis, que emprega o método de quantificação relativa ??Ct. RESULTADOS: A análise comparativa dos 33 casos de CDI luminal A com os 15 casos de parênquima mamário normal revelou haver microRNAs hiperexpressos, sendo eles: miR-96-5p (fold-regulation = 9,245, p = 0,000192), miR-182-5p (fold-regulation = 6,4813, p = 0,00024), miR-21-5p (fold-regulation = 6,3129, p = 0,000001), miR- 210-3p (fold-regulation =4,3584, p =0,001002) e. miR-7-5p (fold-regulation = 4,0166, p = 0,036407). Apontou, ainda, microRNAs com hipoexpressão, a saber: miR-204-5p (Fold-regulation = -8,2104, p = 0,000000), miR-125b-5p (Fold-regulation = --6,332, p=0,000000), let-7c-5p (Fold-regulation: -4,5142, p=0,000000) e let-7e-5p (Fold-regulation = -4,059, p = 0,011625): CONCLUSÕES: CDI luminal A apresentou hiperexpressão de miR-96-5p, miR-182-5p, miR-21-5p, miR-210-3p e miR-7-5p. Apontou, ainda, hipoexpressão do miR-204-5p, miR-125b-5p, let-7c-5p e let-7e-5p, permitindo diferenciá-lo do tecido normal / INTRODUCTION: Breast cancer is a genetic disease and the accumulation of molecular alterations in the genome of somatic cells is the basis for cancer progression. Besides having a more favorable natural biology, tumors with high expression of estrogen receptor have a well established targeted therapy. Nevertheless, patients may present with resistance and eventually relapse and death. MicroRNAs (miRNAs) are a class of small non-coding protein molecules that regulate gene expression during the translation stage. This adjustment is made by base pairing with the mRNA (messenger RNA) target resulting in suppression of translation or cleavage of the mRNA. Depending on whether miRNAs target tumor suppressor genes or oncogenes, they can act as tumor suppressors or oncogenes. OBJECTIVE: evaluate the expression of microRNAs by RT-PCR in positive hormonal receptors, negative HER 2 (luminal A) invasive ductal carcinoma (IDC). METHODS: Paraffin embedded tumor material from 33 patients with luminal A IDC, and histologically normal breast tissue. Were used: Kit for RNA extraction from fixed and paraffin embedded samples - miRNeasy FFPE; cDNA synthesis kit - miScript II RT; miScript SYBR Green PCR Kit and miScript miRNA PCR Arrays for analysis of 84 miRNA sequences of human cancer. Clinical data such as age, parity, breastfeeding, menopausal status; histological variables such as tumor size, lymph node status, lymphatic invasion; immunohistochemical characteristics, such as expression of Ki-67, were evaluated. For statistical analysis the miScript miRNA PCR Array Data Analysis software, which uses the method of relative quantification ??Ct, was used. RESULTS: A comparative analysis of 33 cases of luminal A IDC with 15 cases of normal breast parenchyma defined microRNAs overexpressed, as follows: miR-96-5p (fold-regulation = 9,245, p = 0,000192), miR-182-5p (fold-regulation = 6,4813, p = 0,00024), miR-21-5p (fold-regulation = 6,3129, p = 0,000001), miR- 210-3p (fold-regulation =4,3584, p =0,001002) and miR-7-5p (fold-regulation = 4,0166, p = 0,036407). Furthermore, microRNAs with reduced expression, as follows:. miR-204-5p (Fold-regulation = -8,2104, p = 0,000000), miR-125b-5p (Fold-regulation = -6,332, p=0,000000), let-7c-5p (Fold-regulation: -4,5142, p=0,000000) and let-7e-5p (Fold-regulation = -4,059, p = 0,011625): CONCLUSION: Luminal A CDI breast cancer has shown overexpression of miR-96-5p, miR-182-5p, miR-21-5p, miR-210-3p and miR-7-5p. Also has shown,downregulation of miR-204-5p, miR-125b-5p, let-7c-5p e let-7e-5p, allowing differentiating it from normal tissue