Thesis (Ph.D. in Molecular Biology) -- University of Colorado Denver, 2008. / Typescript. Includes bibliographical references (leaves 149-172). Free to UCD affiliates. Online version available via ProQuest Digital Dissertations;

Thesis (M.Sc.)--Memorial University of Newfoundland, Faculty of Medicine, 2001. / Typescript. Bibliography: leaves 123-144.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karolinska institutet, 2010.

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Uppsala universitet, 2009.

Thesis (Ph.D. in Molecular Biology) -- University of Colorado at Denver and Health Sciences Center, 2005. / Typescript. Includes bibliographical references (leaves 89-109 and 224-228).

As efusões cavitárias são de ocorrência frequente na rotina clínica de cães. Na maior parte dos casos são efusões benignas, causadas por distúrbios hidrostáticos do sistema circulatório. As neoplasias são causas comuns de efusões em cães, contudo, nem sempre as células tumorais são encontradas no exame citopatológico. A dosagem de marcadores tumorais e o exame imunocitoquímico são alternativas para tornar o diagnóstico de neoplasia em efusões mais preciso. Os objetivos deste trabalho foram dosar os seguintes marcadores tumorais bioquímicos: antígeno carcinoembrionário (CEA), antígeno associado a câncer 72-4 (CA 72-4) e fragmento de citoqueratina 21-1 (CYFRA 21-1), que ainda não tiveram seu desempenho avaliado em efusões neoplásicas e não neoplásicas caninas, bem como marcadores imunocitoquímicos que incluem dois novos anticorpos primários (MOC-31 e D2-40) para a diferenciação entre carcinoma e mesotelioma. Trinta e duas amostras de líquidos cavitários abdominais e torácicos, provenientes do atendimento clínico do Hospital de Clínicas Veterinárias da Universidade Federal do Rio Grande do Sul foram analisadas. De acordo com o exame citopatológico e ficha clínica do animal essas efusões foram classificadas em dois grupos: neoplásico e não neoplásico. A dosagem dos marcadores tumorais foi realizada pelo método imunoenzimático sanduíche (ELISA), conforme as instruções dos fabricantes. Para a avaliação imunocitoquímica foram utilizadas 14 amostras de efusões neoplásicas. A técnica foi realizada pelo método estreptavidina-biotina ligada a peroxidase ou a fosfatase alcalina, utilizando-se como cromógeno o DAB. Os marcadores tumorais CEA e CA 72-4 não tiveram resultados significativos na diferenciação entre efusões neoplásicas e não neoplásicas, enquanto que o CYFRA 21-1 obteve sensibilidade de 70%, especificidade de 94% e acurácia de 81% para o diagnóstico neoplásico. Em todas as amostras neoplásicas, imunocitoquímica e citopatologia foram compatíveis, verificando-se como válida a padronização dos novos anticorpos para a espécie canina. Este estudo demonstrou que novos marcadores tumorais, tanto bioquímicos como imunocitoquímicos, podem ser empregados no diagnóstico de neoplasias caninas. O marcador tumoral CYFRA 21-1 deve ser utilizado como auxílio diagnóstico para a espécie canina e os anticorpos MOC-31 e D2-40 devem ser incluídos em painéis imunocitoquímicos de rotina para a diferenciação entre carcinomas e mesoteliomas em efusões neoplásicas. / The cavity effusions frequently occur in the clinical routine of dogs. In most cases the effusions are benign caused by circulatory system disorders. Neoplasms are common causes of effusions in dogs, however not always the tumor cells are found in cytopathologycal analysis. The dosage of tumor markers is an alternative to make the neoplastic effusion diagnosis more accurate. The aims of this work were to determine the following biochemical tumor markers: carcinoembryonic antigen (CEA), cancer antigen 72-4 (CA 72-4) and cytokeratin fragment 21-1 (CYFRA 21-1), which have not had their performance evaluated in canine neoplastic and non-neoplastic effusions, as well as immunocytochemical markers including two new primary antibodies (MOC-31 and D2-40) for differentiation between carcinoma and mesothelioma tumors. Thrirtytwo samples of abdominal and thoracic cavity fluids, from the clinical care of the Veterinary Hospital of the Federal University of Rio Grande do Sul were analyzed. According to the cytopathology test and patient’s clinical record the effusions were classified in two groups: neoplastic or non-neoplastic. The tumor markers measurement was performed by sandwich enzyme immunoassay (ELISA) according to the manufacturer instructions. Fourteen neoplastic samples were used for the immunocytochemical tests. The tests were performed by streptavidin-biotin method linked to peroxidase or to alkaline phosphatase using the DAB chromogen. The tumor markers CEA and CA 72-4 had no significant results for differentiating between neoplastic and non neoplastic effusions, whereas the tumor marker CYFRA 21-1 obtained 70% of sensibility, 94% of specificity and 81% of accuracy for the neoplastic diagnosis. In all neoplastic samples the immunocytochemical and cytological tests were compatible, which make valid their use for standardization of those new antibodies for the canine species. This study demonstrated that new tumor markers both biochemical and immunocytochemical could be used in the canine neoplastic diagnosis. The tumor marker CYFRA 21-1 must be used for the canine species, and the antibodies MOC-31 and D2-40 must be included in routine immunocytochemistry panel for the differenciation between carcinoma and mesothelioma in neoplastic effusions.

Introdução: Nefrectomia radical tem sido o tratamento mais utilizado para o carcinoma de células renais. Atualmente, a preservação da função renal do paciente após a cirurgia tem sido um fator de preocupação, já que a sobrevida desses pacientes vem aumentando, assim como a detecção de lesões pequenas, incidentais e assintomáticas. Vários estudos tentam identificar fatores preditores da função renal pós-operatória, no entanto poucos avaliam os achados não-neoplásicos do parênquima renal. Objetivos: O estudo tem como objetivos: 1) descrever as alterações nãoneoplásicas do parênquima renal encontradas nos espécimes de nefrectomia; 2) correlacionar os achados com a função renal pós-operatória dos pacientes e 3) correlacionar essas alterações com o laudo anatomopatológico original. Materiais e métodos: Foram revisados 262 exames anatomopatológicos de espécimes de nefrectomias realizadas em pacientes adultos por neoplasias primárias renais no Hospital de Clínicas de Porto Alegre durante o período de 2005 a 2009. O laudo anatomopatológico e o prontuário eletrônico desses pacientes foram revisados de forma cegada. Um patologista renal realizou a revisão de todas lâminas histopatológicas do estudo. Posteriormente, nos pacientes com dados clínicos e laboratoriais disponíveis, foram correlacionadas as alterações encontradas com a variação da função renal dos mesmos (creatinina sérica e o cálculo da fórmula de Cockroft-Gault, antes e cerca de seis meses após a cirurgia). Resultados: Na amostra inicial, houve uma predominância de pacientes masculinos (57,6%), de raça branca (88%), com uma idade média de 60 anos. Cerca de 76% foram submetidos a nefrectomias radicais e 70% dos pacientes apresentavam estágio tumoral T1 e T2, sendo o tamanho tumoral médio de 6,0 cm e o tipo histológico mais frequente o de células claras (67%). Hipertensão, tabagismo, diabetes melitus e obesidade foram encontrados em, respectivamente, 53%, 32%, 19% e 9% dos pacientes. Apenas 10% dos casos cujas lâminas foram revisadas não apresentavam alterações parenquimatosas. As alterações vasculares foram as mais frequentes, e destas a aterosclerose a mais comum. Esclerose diabética estava presente em quatro pacientes. As variações das estimativas da função renal entre o período pré e pós-operatório não apresentaram diferença significativa entre os grupos de pacientes com e sem alterações parenquimatosas. Foi encontrada diferença significativa entre os valores da creatinina pré e pós-operatória em ambos os grupos e dos valores da fórmula de Cockroft-Gault no grupo com alterações (p<0,001). Em apenas 50 laudos anatomopatológicos originais, haviam sido descritas alterações parenquimatosas. Conclusões: O estudo mostrou que os patologistas gerais se mostram despreparados ou não conscientes acerca da recente inclusão da descrição dos achados não-neoplásicos nos checklists dos laudos anatomopatológicos de neoplasia renais primárias, portanto acreditamos que a mesma deva ser encorajada. Além disso, investigações futuras prospectivas que acompanhem os pacientes por um longo período e utilizem formas mais acuradas de estimativa da função renal devem ser conduzidas para que o real impacto desses achados na função renal dos pacientes após a cirurgia seja bem estudada. / Background: Radical nephrectomy has been the most common treatment for renal cell carcinoma. Besides, the preservation of the renal function after surgery has been a worrisome factor. Patient’s survival rates are increasing, along with the detection of small, incidental and asymptomatic lesions. Several studies have attempted to identify predictors of postoperative renal function, yet few assessed the findings of non-neoplastic renal parenchyma. Objectives: The study aims at: 1) describing the findings in non-neoplastic renal parenchyma found in nephrectomy specimens, 2) correlating these findings with postoperative renal function and 3) correlating these changes with the original pathology report. Materials and Methods: The specimens of two-hundred and sixty-two nephrectomies performed in adult patients for primary renal neoplasms at Hospital de Clinicas de Porto Alegre during the period of 2005 to 2009 were reviewed. The pathology report and electronic medical records of these patients were reviewed in a blinded fashion. A renal pathologist performed the histopathological review of the renal parenchyma slides. After that, in patients with clinical and laboratory data available, the alterations found were correlated with the renal function. Results: There was a predominance of male patients (57.6%) and caucasians (88%), with a mean age of 60 years. About 76% underwent radical nephrectomy and 70% of patients had tumor stage T1 or T2. The average tumor size was 6.0 cm and the most common histological type was clear renal cell carcinoma (67%). Hypertension, smoking, diabetes mellitus and obesity were found in respectively 53%, 32%, 19% and 9% of the patients. Only 10% of the cases whose slides were reviewed had no abnormalities. The vascular changes were the most frequent, and of these the most common was atherosclerosis. Diabetic sclerosis was present in four patients. Renal function variations between the pre and postoperative estimates showed no significant difference between the groups of patients with and without parenchymal abnormalities. Significant difference was found between the pre and postoperative creatinine in both groups and the Cockroft-Gault formula in the group with changes (p<0.001). Only 50 original pathology reports described non-neoplastic abnormalities. Conclusions: The study showed that general pathologists are unaware of the recent inclusion of the non-neoplastic findings in the primary renal neoplasm’s protocols. Therefore, we believe that the evaluation of these findings should be encouraged. In addition, future prospective investigations monitoring patients over a long period of time and using more accurate ways of estimating renal function on postoperative period should be performed.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:53:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JACQUES DOUGLAS COIMBRA DIAS.pdf: 804280 bytes, checksum: 28e6a9176e82afb4cfdb911bd8f1cc57 (MD5) Previous issue date: 2010-08-13 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The bovine enzootic hematuria (BEH) is a disease of worldwide occurrence and presents a varied prevalence in endemic areas, which can reach 90% in animals older than two years. The technique of polymerase chain reaction (PCR) was developed and standardized for the detection of bovine papillomavirus type 2 (BPV-2). This technique was based on enzymatic amplification of a fragment of 386 bp highly conserved gene. Infection with bovine papillomavirus type 2 (BPV-2) has also been implicated in the etiology of this disease. The objective of this study make a macroscopic lesions of bovine bladder and the presence of human papillomavirus type 2 by the technique of polymerase chain reaction - PCR. For this 50 bladders were collected from cattle with gross lesions, each being divided into four quadrants, referenced in the body for cuts such as A, B, C and D, for histopathologic evaluation. The characterization included the definition of macroscopic types of lesions: focal or diffuse hemorrhages, lesions or verrucous hemangiomas ulcerated lesions, among others. Histopathologic analysis showed five samples positive for cancer (2.5%). The method of polymerase chain reaction, all samples were considered malignant and showed the bovine papillomavirus type 2. The presence of bovine papillomavirus type 2 in neoplastic lesions of the urinary bladder of cattle, confirmed by PCR indicates that this virus may be directly involved in the pathogenesis of bovine enzootic hematuria (BEH) in association with the consumption of the fern, and one plant endemic in the region / A hematúria enzootica bovina (HEB) é uma doença de ocorrência mundial e apresenta uma prevalência variada em áreas endêmicas, que pode chegar a 90% em animais com idade superior a dois anos. A técnica da reação em cadeia pela polimerase (PCR) foi desenvolvida e padronizada para a detecção do papilomavírus bovino tipo 2 (BPV-2). Esta técnica é baseada na amplificação enzimática de um fragmento altamente conservado de 386 pb do gene. A infecção com o papilomavírus bovino Tipo 2 (BPV-2) também tem sido implicada na etiologia desta enfermidade. Objetivou-se com este estudo realizar a avaliação macroscópica das lesões de bexiga de bovino e detectar a presença do papilomavírus tipo 2 pela técnica de reação em cadeia de polimerase PCR. Para isso foram coletadas 50 bexigas de bovinos que apresentaram lesões macroscópicas, sendo cada uma dividida em quatro quadrantes, referenciadas no órgão para os cortes como A, B, C e D, para avaliação histopatológica. A caracterização macroscópica incluiu a definição dos tipos de lesões em: hemorragias difusas ou focais, lesões verrucosas ou hemangiomatosas, lesões ulceradas, dentre outras. A análise histopatológica revelou cinco amostras positivas para neoplasia (2,5%). Pelo método de reação em cadeia pela polimerase, todas as amostras foram consideradas neoplásicas e apresentaram o papilomavírus bovino tipo 2. A presença do papilomavírus bovino tipo 2 nas lesões neoplásicas de bexiga urinária de bovinos, confirmada pela técnica de PCR, indica que este vírus pode estar diretamente envolvido na patogênese da hematúria enzoótica bovina (HEB) em associação com o consumo da samambaia, sendo uma planta endêmica na região

Introdução: Nefrectomia radical tem sido o tratamento mais utilizado para o carcinoma de células renais. Atualmente, a preservação da função renal do paciente após a cirurgia tem sido um fator de preocupação, já que a sobrevida desses pacientes vem aumentando, assim como a detecção de lesões pequenas, incidentais e assintomáticas. Vários estudos tentam identificar fatores preditores da função renal pós-operatória, no entanto poucos avaliam os achados não-neoplásicos do parênquima renal. Objetivos: O estudo tem como objetivos: 1) descrever as alterações nãoneoplásicas do parênquima renal encontradas nos espécimes de nefrectomia; 2) correlacionar os achados com a função renal pós-operatória dos pacientes e 3) correlacionar essas alterações com o laudo anatomopatológico original. Materiais e métodos: Foram revisados 262 exames anatomopatológicos de espécimes de nefrectomias realizadas em pacientes adultos por neoplasias primárias renais no Hospital de Clínicas de Porto Alegre durante o período de 2005 a 2009. O laudo anatomopatológico e o prontuário eletrônico desses pacientes foram revisados de forma cegada. Um patologista renal realizou a revisão de todas lâminas histopatológicas do estudo. Posteriormente, nos pacientes com dados clínicos e laboratoriais disponíveis, foram correlacionadas as alterações encontradas com a variação da função renal dos mesmos (creatinina sérica e o cálculo da fórmula de Cockroft-Gault, antes e cerca de seis meses após a cirurgia). Resultados: Na amostra inicial, houve uma predominância de pacientes masculinos (57,6%), de raça branca (88%), com uma idade média de 60 anos. Cerca de 76% foram submetidos a nefrectomias radicais e 70% dos pacientes apresentavam estágio tumoral T1 e T2, sendo o tamanho tumoral médio de 6,0 cm e o tipo histológico mais frequente o de células claras (67%). Hipertensão, tabagismo, diabetes melitus e obesidade foram encontrados em, respectivamente, 53%, 32%, 19% e 9% dos pacientes. Apenas 10% dos casos cujas lâminas foram revisadas não apresentavam alterações parenquimatosas. As alterações vasculares foram as mais frequentes, e destas a aterosclerose a mais comum. Esclerose diabética estava presente em quatro pacientes. As variações das estimativas da função renal entre o período pré e pós-operatório não apresentaram diferença significativa entre os grupos de pacientes com e sem alterações parenquimatosas. Foi encontrada diferença significativa entre os valores da creatinina pré e pós-operatória em ambos os grupos e dos valores da fórmula de Cockroft-Gault no grupo com alterações (p<0,001). Em apenas 50 laudos anatomopatológicos originais, haviam sido descritas alterações parenquimatosas. Conclusões: O estudo mostrou que os patologistas gerais se mostram despreparados ou não conscientes acerca da recente inclusão da descrição dos achados não-neoplásicos nos checklists dos laudos anatomopatológicos de neoplasia renais primárias, portanto acreditamos que a mesma deva ser encorajada. Além disso, investigações futuras prospectivas que acompanhem os pacientes por um longo período e utilizem formas mais acuradas de estimativa da função renal devem ser conduzidas para que o real impacto desses achados na função renal dos pacientes após a cirurgia seja bem estudada. / Background: Radical nephrectomy has been the most common treatment for renal cell carcinoma. Besides, the preservation of the renal function after surgery has been a worrisome factor. Patient’s survival rates are increasing, along with the detection of small, incidental and asymptomatic lesions. Several studies have attempted to identify predictors of postoperative renal function, yet few assessed the findings of non-neoplastic renal parenchyma. Objectives: The study aims at: 1) describing the findings in non-neoplastic renal parenchyma found in nephrectomy specimens, 2) correlating these findings with postoperative renal function and 3) correlating these changes with the original pathology report. Materials and Methods: The specimens of two-hundred and sixty-two nephrectomies performed in adult patients for primary renal neoplasms at Hospital de Clinicas de Porto Alegre during the period of 2005 to 2009 were reviewed. The pathology report and electronic medical records of these patients were reviewed in a blinded fashion. A renal pathologist performed the histopathological review of the renal parenchyma slides. After that, in patients with clinical and laboratory data available, the alterations found were correlated with the renal function. Results: There was a predominance of male patients (57.6%) and caucasians (88%), with a mean age of 60 years. About 76% underwent radical nephrectomy and 70% of patients had tumor stage T1 or T2. The average tumor size was 6.0 cm and the most common histological type was clear renal cell carcinoma (67%). Hypertension, smoking, diabetes mellitus and obesity were found in respectively 53%, 32%, 19% and 9% of the patients. Only 10% of the cases whose slides were reviewed had no abnormalities. The vascular changes were the most frequent, and of these the most common was atherosclerosis. Diabetic sclerosis was present in four patients. Renal function variations between the pre and postoperative estimates showed no significant difference between the groups of patients with and without parenchymal abnormalities. Significant difference was found between the pre and postoperative creatinine in both groups and the Cockroft-Gault formula in the group with changes (p<0.001). Only 50 original pathology reports described non-neoplastic abnormalities. Conclusions: The study showed that general pathologists are unaware of the recent inclusion of the non-neoplastic findings in the primary renal neoplasm’s protocols. Therefore, we believe that the evaluation of these findings should be encouraged. In addition, future prospective investigations monitoring patients over a long period of time and using more accurate ways of estimating renal function on postoperative period should be performed.

As efusões cavitárias são de ocorrência frequente na rotina clínica de cães. Na maior parte dos casos são efusões benignas, causadas por distúrbios hidrostáticos do sistema circulatório. As neoplasias são causas comuns de efusões em cães, contudo, nem sempre as células tumorais são encontradas no exame citopatológico. A dosagem de marcadores tumorais e o exame imunocitoquímico são alternativas para tornar o diagnóstico de neoplasia em efusões mais preciso. Os objetivos deste trabalho foram dosar os seguintes marcadores tumorais bioquímicos: antígeno carcinoembrionário (CEA), antígeno associado a câncer 72-4 (CA 72-4) e fragmento de citoqueratina 21-1 (CYFRA 21-1), que ainda não tiveram seu desempenho avaliado em efusões neoplásicas e não neoplásicas caninas, bem como marcadores imunocitoquímicos que incluem dois novos anticorpos primários (MOC-31 e D2-40) para a diferenciação entre carcinoma e mesotelioma. Trinta e duas amostras de líquidos cavitários abdominais e torácicos, provenientes do atendimento clínico do Hospital de Clínicas Veterinárias da Universidade Federal do Rio Grande do Sul foram analisadas. De acordo com o exame citopatológico e ficha clínica do animal essas efusões foram classificadas em dois grupos: neoplásico e não neoplásico. A dosagem dos marcadores tumorais foi realizada pelo método imunoenzimático sanduíche (ELISA), conforme as instruções dos fabricantes. Para a avaliação imunocitoquímica foram utilizadas 14 amostras de efusões neoplásicas. A técnica foi realizada pelo método estreptavidina-biotina ligada a peroxidase ou a fosfatase alcalina, utilizando-se como cromógeno o DAB. Os marcadores tumorais CEA e CA 72-4 não tiveram resultados significativos na diferenciação entre efusões neoplásicas e não neoplásicas, enquanto que o CYFRA 21-1 obteve sensibilidade de 70%, especificidade de 94% e acurácia de 81% para o diagnóstico neoplásico. Em todas as amostras neoplásicas, imunocitoquímica e citopatologia foram compatíveis, verificando-se como válida a padronização dos novos anticorpos para a espécie canina. Este estudo demonstrou que novos marcadores tumorais, tanto bioquímicos como imunocitoquímicos, podem ser empregados no diagnóstico de neoplasias caninas. O marcador tumoral CYFRA 21-1 deve ser utilizado como auxílio diagnóstico para a espécie canina e os anticorpos MOC-31 e D2-40 devem ser incluídos em painéis imunocitoquímicos de rotina para a diferenciação entre carcinomas e mesoteliomas em efusões neoplásicas. / The cavity effusions frequently occur in the clinical routine of dogs. In most cases the effusions are benign caused by circulatory system disorders. Neoplasms are common causes of effusions in dogs, however not always the tumor cells are found in cytopathologycal analysis. The dosage of tumor markers is an alternative to make the neoplastic effusion diagnosis more accurate. The aims of this work were to determine the following biochemical tumor markers: carcinoembryonic antigen (CEA), cancer antigen 72-4 (CA 72-4) and cytokeratin fragment 21-1 (CYFRA 21-1), which have not had their performance evaluated in canine neoplastic and non-neoplastic effusions, as well as immunocytochemical markers including two new primary antibodies (MOC-31 and D2-40) for differentiation between carcinoma and mesothelioma tumors. Thrirtytwo samples of abdominal and thoracic cavity fluids, from the clinical care of the Veterinary Hospital of the Federal University of Rio Grande do Sul were analyzed. According to the cytopathology test and patient’s clinical record the effusions were classified in two groups: neoplastic or non-neoplastic. The tumor markers measurement was performed by sandwich enzyme immunoassay (ELISA) according to the manufacturer instructions. Fourteen neoplastic samples were used for the immunocytochemical tests. The tests were performed by streptavidin-biotin method linked to peroxidase or to alkaline phosphatase using the DAB chromogen. The tumor markers CEA and CA 72-4 had no significant results for differentiating between neoplastic and non neoplastic effusions, whereas the tumor marker CYFRA 21-1 obtained 70% of sensibility, 94% of specificity and 81% of accuracy for the neoplastic diagnosis. In all neoplastic samples the immunocytochemical and cytological tests were compatible, which make valid their use for standardization of those new antibodies for the canine species. This study demonstrated that new tumor markers both biochemical and immunocytochemical could be used in the canine neoplastic diagnosis. The tumor marker CYFRA 21-1 must be used for the canine species, and the antibodies MOC-31 and D2-40 must be included in routine immunocytochemistry panel for the differenciation between carcinoma and mesothelioma in neoplastic effusions.