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Estudo imunocitoquimico das catepsinas D e B em celulas trofoblasticas gigantes de camundongos

Amarante, Andrea Mollica do 01 August 1997 (has links)
Orientador: Aureo T. Yamada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-22T17:24:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Amarante_AndreaMollicado_M.pdf: 18935958 bytes, checksum: c37d0eabf06c6dcc6829ae06e43923fe (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Em roedores, as células trofoblásticas gigantes (CTGs) são as células de origem fetal que se interpõem em todo o perímetro da interface do embrião com o tecido materno. Devido à sua localização estratégica e ao seu comportamento invasivo, têm sido consideradas como responsáveis pela implantação do blastocisto e pela placentação. A placenta madura, por sua vez, é constituída em sua porção fetal por três camadas de células de origem trofoblástica: as células do labirinto-trofoblasto, as células do espôngio-trofoblasto e as CTGs. Além da atividade invasiva, tem sido atribuída às CTGs a remoção de células sangüíneas e do estroma uterino através da fagocitose. Várias enzimas proteolíticas capazes de degradar diferentes substratos poderiam estar envolvidas neste processo. Com o intuito de se estabelecer a presença e a participação de enzimas proteolíticas lisossomais nas atividades invasivas e fagocitárias das CTGs, foram utilizados sítios de implantação e placentas do 8º ao 18º dias de gestação (ddg) de camundongos. Foram realizados estudos morfológicos ao nível de microscopia fotônica e eletrônica, assim como estudos imunoquímicos e imunocitoquímicos para detecção de duas proteases lisossomais, as catepsinas D e B. Os resultados obtidos demonstraram que as CTGs da frente invasiva, em contato com o tecido materno, contêm lisossomas e fagolisossomas que apresentam reações positivas para as catepsinas D e B. Ao nível ultra-estrutural constatou-se que o conteúdo dos fagossomas era predominantemente de células de origem materna em graus variados de degeneração, as quais mostraram-se positivas nas imunomarcações para as catepsinas D e B. Foram ainda observadas imunomarcações para a anticatepsina D nos compartimentos extracelulares das CTGs que continham restos celulares de origem materna. O "western blotting" confrma a presença e a especificidade das imunomarcações para os anticorpos utilizados. A distribuição das CTGs junto à interface com o tecido materno, durante todo o processo da placentação, sugere o seu importante papel na remodelação do tecido materno para a própria progressão da placentação. As imunomarcações positivas ao nível da microscopia fotônica e eletrônica confirmaram, além da presença destas enzimas lisossomais nestas células, a sua participação na degradação do substrato fagocitado. A constatação da imunomarcação positiva no espaço extracelular para a catepsina D sugere a secreção das enzimas lisossomais pelas CTGs e a sua participação na atividade invasiva / Abstract: The trophoblastic giant cells (TGC) differentiate from trophectoderm sheets or from the ectoplacental cone of mouse embryos and are committed to blastocyst implantation and placentation. It has attributed a high invasive capability and phagocytosis to the TGC which degenerate and remove the maternal tissues. However, the exact mechanism controlling their invasive behavior remains to be solved. Recently it has been proposed that the secretion of proteolytic enzymes to the extra cellular space by tumour cells could be a mechanism of metastasis. This mechanism could be related to TGC invasive activity. In the aim to investigate the participation of lysosomal proteolytic enzymes in such a mechanism of TGC, the presence of cathepsin D and B by immunochemical and immunocytochemical approaches as analyzed. Mice uterine implantation sites and placentas from 8th to 18th days of pregnancy (dop) were processed for cryosections, paraffin embedding, epoxy resin and LR-white resin embedding. Pregnant uterine horn homogenates of same dop were prepared for SDS-P AGE and western-blotting. It was used rabbit polyclonal antibo dy anti-cathepsin D and anti-cathepsin B. In Immunohystochemical, the anti-cathepsins immunoreactive sites were analyzed by immunoperoxidase/DAB and imunofluorescence methods. The protein A-gold method was used for immunoelectronrnicroscopy. The TGCs were found surrounding the whole embryo and placenta making maternal-foetal interface at all developmental stages. At the light microscopy level, the immunoreactions were seen in the cytoplasm of TGC and inside compartments surrounded by cytoplasm processes. Positive reaction was seen near the interface between TGC and maternal tissues. At the ultrastructurallevel, the gold particles were seen to label the small primary and large secondary lysosomes present in the cytoplasm of TGC. The immunolabelings were also seen on the extracellular compartment around the TGC and in the compartments surrounded by cytoplasm processes. In these compartments, cell debris resembling degenerative endometrial cells as well as extracellular matrix elements such as collagen fibrils were found. SDS-P AGE and western-blotting showed a 45 kD and 24 kD bands for cathepsin D and B respectively in the uterine homogenates. These findings confirm the presence of cathepsin D and B in the lysosomeendosome system of TGC. Furthermore, the immunelectronrnicroscopy strong1y suggests that cathepsin D is secreted to the extracellular compartment. This is probably related to the mechanism of invasivity where the proteolytic enzymes are released in to the surrounding tissues facilitating progression of the TGC invasion / Mestrado / Morfologia / Mestre em Ciências Biológicas
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Estrutura, ultra-estrutura e citoquimica da espermatogenese, dos ductos e ovidutos do lagarto Tropiduros itambere durante o ciclo reprodutivo

Ferreira, Adelina Aparecida Francisca, 1989- 26 August 2003 (has links)
Orientador: Mary Anne Heidi Dolder / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T17:18:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ferreira_AdelinaAparecidaFrancisca_D.pdf: 14108792 bytes, checksum: 1219342c239466be393a3a69a7387917 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: o estudo do conjunto de características estruturais, ultra-estruturais e citoquímicas das fases iniciais da espermatogênese, assim como das células presentes nos canais condutores de esperma durante um ciclo reprodutivo podem contribuir de forma significativa para o entendimento da morfologia e fisiologia da reprodução, do processo de maturação dos espermatozóides e de aspectos comportamentais e ecológicos de populações de lagartos. Com o objetivo de contribuir para essas diferentes áreas do conhecimento, o presente trabalho traz novos dados do lagarto Tropidurus itambere, sobre o ciclo reprodutivo testicular e epididimário, a espermatogênese, diferenciação das espermátides e dos espermatozóides analisados com o uso de técnicas de citoquímica estrutural e ultra-estrutural e com o uso de imunocitoquímica ultra-estrutural. Além disso, espermatozóides testiculares e espermatozóides presentes no receptáculo seminal de remeas foram observados com a utilização de lectinas, para localização de açúcares específicos. Também são caracterizados os aspectos morfológicos e histoquímicos (localização de glicoproteínas, polissacarídeos, glicosaminoglicanos ácidos) dos canais condutores de esperma em machos e fêmeas. Esses dados foram obtidos para animais durante o ciclo reprodutivo anual, capturados num fragmento de Mata Atlântica do estado de São Paulo. O ciclo reprodutivo é anual, com breve período de descontinuidade, dados muito semelhantes aos estabelecidos em outros trabalhos prévios de ecologia. A espermatogênese é mostrada pela primeira vez em lagartos desde suas fases iniciais da diferenciação celular. Algumas variações puderam ser notadas quanto à ultra-estrutura do espermatozóide deste lagarto Tropidurídeo e outros das famílias Iguanidae e Agamidae, reforçando a revisão sistemática proposta recentemente. O oviduto é constituído por três regiões distintas, das quais a mais distal é responsável pela estocagem dos espermatozóides por um curto período do ciclo anual. Foram detectados em eventos da espermatogênese, durante o ciclo anual proteínas básicas (principalmente no cone subacrosomal, centríolos da peça intermediária, corpos densos, proteínas periféricas do axonema e bainha fibrosa do flagelo), polissacarídeos (célula de Sertoli e sua organização durante os picos do ciclo reprodutivo, e na formação do complexo acrosomal), glicogênio (formação do complexo acrosomal), fosfatase ácida (em regiões claras do complexo acrosomal e em volta de espermatozóides em degeneração no período quiescente) e lipídeos (na vesícula pró-acrosomal e em vesículas espalhadas no citoplasma da célula de Leydig), áçucares específicos (durante a formação do complexo acrosomal em espermátides e em quase todas as estruturas do espermatozóide). Taís dados inexistiam para o grupo de Lacertílio_ e guardam algumas semelhanças, principalmente quanto à formação do acrosomo, com alguns anuros e aves. Foi detectada através de imunocitoquímica a presença de actina no cone subacrosomal e perforatório do complexo acrosomal, o que confirma a homologia destas organelas quanto à estrutura e função no espermatozóide de lagartos / Abstract: The study of the structural, ultrastructural and cytochemical characteristics of the initial phases of spermatogenesis was undertaken, also including the cells present in the sperm throughout the reproductive cycle. This data brings significant contributions toward a better understanding of the morphology and physiology of reproduction, of the maturation process of the spermatozoa and the behavior and ecology of lizard populations. With this objective, this study brings new data on the lizard, Tropidurus itambere, its testicular and epididymal characteristics during the reproductive cycle, its spermatogenesis showing the differentiation of spermatid and spermatozoon structure and ultrastructure, as analyzed by cytochemical techniques and with ultrastructural immunocytochemistry. A comparison of testicular spermatozoa and those found in the female's seminal receptical was made using lectins to locate specific sugars. Morphological and histochemical methods located glycoproteins, polisaccharides, acid glycosaminoglycans in the sperm ducts of males and females. This data was studied throughout the reproductive cycle of animals obtained from a fragment of the Atlantic forest in the state of São Paulo. The cycle is annual with a brief descontinuous period, as previously very similar of the established by ecological studies. Spermatogenesis is shown for the first time in a lizard, including the first stages of cell differentiation. Some variations were observed for the spermatozoon of this Tropiduridae lizard in relation to the Iguanidae and Agamidae, which reinforces recent revision of their systematic positions. The oviduct is divided into three portions, the most distal one being responsible for spermatozoon storage during a short period in the annual cycle. Basic proteins were detected in specific structures during the annual cycle (especially the subacrosomic cone, centrioles in the midpiece, dense bodies, peripheral proteins of the axoneme and fibrous sheath of the flagellum). Polisacchaddes were found in the Sertoli cell, showing peak organization of this cell during the reproductive period and its disorganization in quiescence, as well as occurring during acrosomal complex formation, while glycogen was identified only in the acrosomal complex.. Acid phosphatase was verified in the clear regions of the acrosomal complex and surrounding the degenerating sperm cells of the quiescent period. Lipids are plentiful in the Leydig cells of this period and in the pro acrosomic vesicle. Specific sugars were verified during the acrosomic complex formation in spermatids and mark almost all structures in the spermatozoon. This data is new among lizards and can be compared with anurans and birds, especially for acrosome formation. Actin was detected with an immunocytochemical method in the subacrosomic cone and the perforatorium of the acrosomic complex, thus confirming their homology as to structure and function / Doutorado / Histologia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural
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Alterações citológicas durante a formação do aerênquima em raízes de Pistia stratiotes L.(Araceae)

Borges, Denisele Neusa Aline Flores January 2014 (has links)
Orientadora : Profª. Drª. Cleusa Bona / Coorientadora : Profª Drª Alexandra Antunes Mastroberti / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Botânica. Defesa: Curitiba, 28/02/2014 / Inclui referências / Resumo: Os conceitos de esquizogenia e lisigenia, utilizados para descrever a origem do aerênquima em raízes de angiospermas, tem sido insuficientes para classificar os diversos padrões de aerênquima. A incongruência de informações na literatura evidencia a necessidade de estudos mais amplos que possam auxiliar na classificação dos padrões e no entendimento de sua funcionalidade. O objetivo deste trabalho foi analisar o aerênquima das raízes de Pistia stratiotes L., a fim de esclarecer sua origem e estrutura das células envolvidas na formação das cavidades. Para microscopia de luz, as raízes foram fixadas com solução Karnovsky, incluídas em resina hidroxietilmetacrilato e coradas com azul de toluidina. Para Microscopia Eletrônica de Transmissão (MET) e imunocitoquímica, as amostras foram fixadas com uma solução de glutaraldeído 1%, formaldeído 4% em tampão fosfato de sódio, pós-fixadas com tetróxido de ósmio e incluídas em resina LRWhite®. Para MET, as grades com secções (60nm) foram contrastadas com acetato de uranila e citrato de chumbo. Para imunocitoquímica, as secções (500nm) foram submetidas as incubações com anticorpos monoclonais para detecção de diferentes glicanos de parede celular. O córtex externo é parenquimático e oriundo da camada subjacente à protoderme. O aerênquima na raiz de P. stratiotes é formado na região interna do córtex a partir de divisões periclinais da pró-endoderme. As lacunas de ar são formadas pela separação, divisão e distensão das células dispostas radialmente no córtex interno. As células formadoras do aerênquima apresentam parede, tonoplasto, núcleo e organelas com aparência normal. Os compostos pécticos e hemicelulósicos analisados provavelmente não tem uma ligação direta com a separação celular. O aerênquima das raízes de P. stratiotes é esquizógeno do tipo radial. Palavras-chave: ontogênese, imunocitoquímica, alface d’água, aerênquima esquizógeno. / Abstract: The concepts of schizogeny and lysogeny used to describe the origin of aerenchyma in roots of angiosperms have been insufficient to categorize the several aerenchyma patterns. The inconsistency of data in the literature highlights the need for further studies that can assist in the classification of patterns and understanding of its functionality. The objective this study is to analyze the aerenchyma in roots of Pistia stratiotes L. (Araceae) to describe their origin and structure of the cells involved in the formation of cavities. For anatomical aspects, roots were fixed in Karnovsky solution, embedded in methacrylate resin and stained with toluidine blue. For ultrastructural and immunocytochemistry studies, samples were fixed in a 1 % glutaraldehyde and 4% formaldehyde in sodium phosphate buffer solution, post-fixed with osmium tetroxide and embedded in resin LRWhite. Grids were counterstained with uranyl acetate and lead citrate. Immunocytochemical sections (500nm) were subjected to incubation with monoclonal antibodies to the detection of cell wall glycans. The outer cortex of the root is parenchymatous and derived from the underlying layer protoderm. The periclinal divisions of the proendoderm originate the aerenchyma in the inner region of the cortex. These air spaces develop through the separation, division and distension of cortical cells arranged radially in the inner cortex. Cells of the aerenchyma show tonoplast, nucleus and organelles with normal appearance. The pectic and hemicellulosic compounds analyzed seem not to be directly involved with the cell separation. The aerenchyma of roots of P. stratiotes is schizogenous the radial type. Keywords: ontogeny, immunocytochemistry, water lettuce, schizogenous aerenchyma.
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Avaliação da resposta imune celular de sangue periférico e medula óssea pela técnica de imunocitoquímica em cães vacinados para Leishmaniose visceral canina

Paiva, Milla Bezerra [UNESP] 14 August 2012 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-14Bitstream added on 2014-06-13T19:53:36Z : No. of bitstreams: 1 paiva_mb_me_araca.pdf: 916442 bytes, checksum: 4f58624ad7c03912e0dcd44c4e383d66 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo dessa pesquisa foi analisar a resposta imune celular de cães negativos (GI), vacinados (GII) e positivos (GIII) para a LVC por meio da imunocitoquímica para os anticorpos anti-CD4, anti-CD8 e FOXP3 na capa leucocitária e medula óssea. Na capa leucocitária, quando comparados os grupos entre si, não houve diferença estatística para as células T CD4. Os grupos I e III apresentaram maior imunomarcação para anti-CD8. Embora não tenha sido observada diferença estatística (p>0,05), a imunomarcação para FOXP3 mostrou os menores valores percentuais nos três grupos estudados. Os grupos I e II apresentaram maior imunomarcação para anti-CD4, seguida do anti-CD8, quando comparados os anticorpos em cada grupo separadamente. Nos animais do grupo III, foi observada maior expressão de células imunorreativas ao anti-CD8 seguida do anti-CD4, e valores reduzidos para FOXP3. Nas células da medula óssea não foi verificada diferença estatística na expressão dos anticorpos anti-CD4, anti-CD8 e FOXP3 quando comparados os grupos entre si. Na análise comparativa entre os anticorpos testados, entretanto, foi observada maior marcação para o anticorpo anti-CD4 em GI, ausência de diferença estatística em GII e maior percentual de células positivas para anti-CD8 em GIII. Os valores de FOXP3 também se mantiveram reduzidos em todos os grupos. A técnica de cito inclusão foi padronizada com sucesso, obtendo 68% de viabilidade para amostras da capa leucocitária e medula óssea. Os resultados obtidos neste estudo indicam que a presença de células T CD4+ e CD8+ em animais vacinados, em associação à expressão reduzida do marcador de células T regulatórias FOXP3, sugerem que a vacina Leishmune® exerce um efeito estimulatório na resposta imune celular de cães, promovendo um incremento da resposta protetora Th1 / The aim of this research was to analyze the cellular immune response of negative (GI), vaccinated (GII) and positive (GIII) dogs for VCL by immunocytochemistry for CD4, CD8 and FOXP3 antibodies on the buffy coat and bone marrow. In the buffy coat, when compared the three groups together, there was no statistical difference in CD4+ T cells. Groups I and III showed higher immunostainning for anti-CD8. Although no statistical difference was observed, immunostainning for FOXP3 showed the lowest percentages in all three groups. Groups I and II showed higher immunoreactivity to anti-CD4 followed by anti-CD8 antibodies when compared each group separately. In group III, we observed increased expression of immunoreactive cells to anti- CD8 followed by anti-CD4, and reduced values for FOXP3. In bone marrow cells there was no statistical difference in the expression of anti-CD4, anti-CD8 and FOXP3 antibodies in the three groups. The comparative analysis between the antibodies tested, however, revealed greater cellularity expressing anti-CD4 in GII, and higher percentage of anti-CD8 positive cells in GIII. The group II showed no statistical difference between the antibodies analyzed. FOXP3 values also remained low in all groups. The results of this study indicate that the presence of CD4 + and CD8 + T lymphocytes in the vaccinated animals, combined with reduced expression of the marker of regulatory T cells FOXP3 suggest that Leishmune ® vaccine exerts a stimulatory effect on immune response of dogs, promoting an increase in the protective Th1 response
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Avaliação da resposta imune celular de sangue periférico e medula óssea pela técnica de imunocitoquímica em cães vacinados para Leishmaniose visceral canina /

Paiva, Milla Bezerra. January 2012 (has links)
Orientador: Maria Cecilia Rui Luvizotto / Banca: Fabio dos Santos Nogueira / Banca: Suely Regina Mogami Bomfim / Resumo: O objetivo dessa pesquisa foi analisar a resposta imune celular de cães negativos (GI), vacinados (GII) e positivos (GIII) para a LVC por meio da imunocitoquímica para os anticorpos anti-CD4, anti-CD8 e FOXP3 na capa leucocitária e medula óssea. Na capa leucocitária, quando comparados os grupos entre si, não houve diferença estatística para as células T CD4. Os grupos I e III apresentaram maior imunomarcação para anti-CD8. Embora não tenha sido observada diferença estatística (p>0,05), a imunomarcação para FOXP3 mostrou os menores valores percentuais nos três grupos estudados. Os grupos I e II apresentaram maior imunomarcação para anti-CD4, seguida do anti-CD8, quando comparados os anticorpos em cada grupo separadamente. Nos animais do grupo III, foi observada maior expressão de células imunorreativas ao anti-CD8 seguida do anti-CD4, e valores reduzidos para FOXP3. Nas células da medula óssea não foi verificada diferença estatística na expressão dos anticorpos anti-CD4, anti-CD8 e FOXP3 quando comparados os grupos entre si. Na análise comparativa entre os anticorpos testados, entretanto, foi observada maior marcação para o anticorpo anti-CD4 em GI, ausência de diferença estatística em GII e maior percentual de células positivas para anti-CD8 em GIII. Os valores de FOXP3 também se mantiveram reduzidos em todos os grupos. A técnica de cito inclusão foi padronizada com sucesso, obtendo 68% de viabilidade para amostras da capa leucocitária e medula óssea. Os resultados obtidos neste estudo indicam que a presença de células T CD4+ e CD8+ em animais vacinados, em associação à expressão reduzida do marcador de células T regulatórias FOXP3, sugerem que a vacina Leishmune® exerce um efeito estimulatório na resposta imune celular de cães, promovendo um incremento da resposta protetora Th1 / Abstract: The aim of this research was to analyze the cellular immune response of negative (GI), vaccinated (GII) and positive (GIII) dogs for VCL by immunocytochemistry for CD4, CD8 and FOXP3 antibodies on the buffy coat and bone marrow. In the buffy coat, when compared the three groups together, there was no statistical difference in CD4+ T cells. Groups I and III showed higher immunostainning for anti-CD8. Although no statistical difference was observed, immunostainning for FOXP3 showed the lowest percentages in all three groups. Groups I and II showed higher immunoreactivity to anti-CD4 followed by anti-CD8 antibodies when compared each group separately. In group III, we observed increased expression of immunoreactive cells to anti- CD8 followed by anti-CD4, and reduced values for FOXP3. In bone marrow cells there was no statistical difference in the expression of anti-CD4, anti-CD8 and FOXP3 antibodies in the three groups. The comparative analysis between the antibodies tested, however, revealed greater cellularity expressing anti-CD4 in GII, and higher percentage of anti-CD8 positive cells in GIII. The group II showed no statistical difference between the antibodies analyzed. FOXP3 values also remained low in all groups. The results of this study indicate that the presence of CD4 + and CD8 + T lymphocytes in the vaccinated animals, combined with reduced expression of the marker of regulatory T cells FOXP3 suggest that Leishmune ® vaccine exerts a stimulatory effect on immune response of dogs, promoting an increase in the protective Th1 response / Mestre
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Marcadores tumorais bioquímicos e imunocitoquímicos em efusões neoplásicas caninas / Biochemical and immunocytochemical tumor markers in canine neoplastic effusions

Teixeira, Luciele Varaschini January 2012 (has links)
As efusões cavitárias são de ocorrência frequente na rotina clínica de cães. Na maior parte dos casos são efusões benignas, causadas por distúrbios hidrostáticos do sistema circulatório. As neoplasias são causas comuns de efusões em cães, contudo, nem sempre as células tumorais são encontradas no exame citopatológico. A dosagem de marcadores tumorais e o exame imunocitoquímico são alternativas para tornar o diagnóstico de neoplasia em efusões mais preciso. Os objetivos deste trabalho foram dosar os seguintes marcadores tumorais bioquímicos: antígeno carcinoembrionário (CEA), antígeno associado a câncer 72-4 (CA 72-4) e fragmento de citoqueratina 21-1 (CYFRA 21-1), que ainda não tiveram seu desempenho avaliado em efusões neoplásicas e não neoplásicas caninas, bem como marcadores imunocitoquímicos que incluem dois novos anticorpos primários (MOC-31 e D2-40) para a diferenciação entre carcinoma e mesotelioma. Trinta e duas amostras de líquidos cavitários abdominais e torácicos, provenientes do atendimento clínico do Hospital de Clínicas Veterinárias da Universidade Federal do Rio Grande do Sul foram analisadas. De acordo com o exame citopatológico e ficha clínica do animal essas efusões foram classificadas em dois grupos: neoplásico e não neoplásico. A dosagem dos marcadores tumorais foi realizada pelo método imunoenzimático sanduíche (ELISA), conforme as instruções dos fabricantes. Para a avaliação imunocitoquímica foram utilizadas 14 amostras de efusões neoplásicas. A técnica foi realizada pelo método estreptavidina-biotina ligada a peroxidase ou a fosfatase alcalina, utilizando-se como cromógeno o DAB. Os marcadores tumorais CEA e CA 72-4 não tiveram resultados significativos na diferenciação entre efusões neoplásicas e não neoplásicas, enquanto que o CYFRA 21-1 obteve sensibilidade de 70%, especificidade de 94% e acurácia de 81% para o diagnóstico neoplásico. Em todas as amostras neoplásicas, imunocitoquímica e citopatologia foram compatíveis, verificando-se como válida a padronização dos novos anticorpos para a espécie canina. Este estudo demonstrou que novos marcadores tumorais, tanto bioquímicos como imunocitoquímicos, podem ser empregados no diagnóstico de neoplasias caninas. O marcador tumoral CYFRA 21-1 deve ser utilizado como auxílio diagnóstico para a espécie canina e os anticorpos MOC-31 e D2-40 devem ser incluídos em painéis imunocitoquímicos de rotina para a diferenciação entre carcinomas e mesoteliomas em efusões neoplásicas. / The cavity effusions frequently occur in the clinical routine of dogs. In most cases the effusions are benign caused by circulatory system disorders. Neoplasms are common causes of effusions in dogs, however not always the tumor cells are found in cytopathologycal analysis. The dosage of tumor markers is an alternative to make the neoplastic effusion diagnosis more accurate. The aims of this work were to determine the following biochemical tumor markers: carcinoembryonic antigen (CEA), cancer antigen 72-4 (CA 72-4) and cytokeratin fragment 21-1 (CYFRA 21-1), which have not had their performance evaluated in canine neoplastic and non-neoplastic effusions, as well as immunocytochemical markers including two new primary antibodies (MOC-31 and D2-40) for differentiation between carcinoma and mesothelioma tumors. Thrirtytwo samples of abdominal and thoracic cavity fluids, from the clinical care of the Veterinary Hospital of the Federal University of Rio Grande do Sul were analyzed. According to the cytopathology test and patient’s clinical record the effusions were classified in two groups: neoplastic or non-neoplastic. The tumor markers measurement was performed by sandwich enzyme immunoassay (ELISA) according to the manufacturer instructions. Fourteen neoplastic samples were used for the immunocytochemical tests. The tests were performed by streptavidin-biotin method linked to peroxidase or to alkaline phosphatase using the DAB chromogen. The tumor markers CEA and CA 72-4 had no significant results for differentiating between neoplastic and non neoplastic effusions, whereas the tumor marker CYFRA 21-1 obtained 70% of sensibility, 94% of specificity and 81% of accuracy for the neoplastic diagnosis. In all neoplastic samples the immunocytochemical and cytological tests were compatible, which make valid their use for standardization of those new antibodies for the canine species. This study demonstrated that new tumor markers both biochemical and immunocytochemical could be used in the canine neoplastic diagnosis. The tumor marker CYFRA 21-1 must be used for the canine species, and the antibodies MOC-31 and D2-40 must be included in routine immunocytochemistry panel for the differenciation between carcinoma and mesothelioma in neoplastic effusions.
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Diferenciação de laticíferos articulados em plantas de Tabernaemontana catharinensis (Apocynaceae)

Canaveze, Yve. January 2016 (has links)
Orientador: Silvia Rodrigues Machado / Resumo: Neste estudo buscamos avaliar diferentes aspectos da diferenciação de laticíferos. O crescimento intrusivo (capacidade de crescer penetrando a lamela média de células adjacentes) e a ação indutora dos laticíferos (capacidade de induzir uma célula vizinha a adquirir características de laticíferos) são mecanismos de crescimento interessantes que podem ocorrer nos laticíferos, mas que são mal compreendidos. O etileno e o ácido jasmônico são hormônios vegetais liberados durante a herbivoria e podem afetar a diferenciação de estruturas secretoras relacionadas à defesa, como laticíferos e ductos resiníferos. Utilizando métodos convencionais em microscopia eletrônica de transmissão, para caracterização da ultraestrutura celular, e imunocitoquímicos, para a detecção de componentes de parede celular, exploramos o desenvolvimento de laticíferos articulados anastomosados com crescimento intrusivo e a ação indutora dos laticíferos no embrião maduro e na planta de Tabernaemontana catharinensis A.DC. (Apocynaceae). Além disso, pulverizamos soluções de etileno 2%, ácido jasmônico 0,1% ou água deionizada em plantas (n = 33) de T. catharinensis cultivadas em condições controladas e avaliamos a influência destes reguladores vegetais sobre a diferenciação dos laticíferos nos tecidos primários e floema secundário. Ultraestruturalmente, verificamos que o processo de incorporação de células ao sistema laticífero é distinto no embrião e na planta. Entretanto, em ambos os casos, o protoplasto da cél... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In this study, we evaluated different aspects of the laticifer differentiation. The intrusive growth (the capacity of grow penetrating the middle lamella that cements adjacent cells) and the inducing action of laticifers (the capacity of induced an adjacent cell to acquirer laticifer features) are exciting growth mechanisms that may occur in laticifers, but they are poorly understood. Ethylene and jasmonic acid are plant hormones released during the herbivory and may affect the differentiation of secretory structures related with plant defense, as laticifers and resin ducts. Using transmission electron microcopy conventional methods (for characterization of the cell ultrastructure), and immunocytochemistry (for detection of the cell wall compounds), we explored the development of the articulated anastomosing laticifers with intrusive growth and the induction action of laticifer in the mature embryo and plant of Tabernaemontana catharinensis A.DC. (Apocynaceae). Additionally, we sprayed solutions of the 2% ethephon, 0.1% jasmonic acid and deonized water in plants of T. catharinensis (n = 33) growing under controlled conditions and evaluated the influence of these plant regulators on laticifer differentiation in the primary tissues and secondary phloem. In the ultrastructure, we verified that the process of cell incorporation within the laticifer system is distinct in the embryo and plant. However, in both the cases the protoplast of the incorporated cells acquires similar feat... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Marcadores tumorais bioquímicos e imunocitoquímicos em efusões neoplásicas caninas / Biochemical and immunocytochemical tumor markers in canine neoplastic effusions

Teixeira, Luciele Varaschini January 2012 (has links)
As efusões cavitárias são de ocorrência frequente na rotina clínica de cães. Na maior parte dos casos são efusões benignas, causadas por distúrbios hidrostáticos do sistema circulatório. As neoplasias são causas comuns de efusões em cães, contudo, nem sempre as células tumorais são encontradas no exame citopatológico. A dosagem de marcadores tumorais e o exame imunocitoquímico são alternativas para tornar o diagnóstico de neoplasia em efusões mais preciso. Os objetivos deste trabalho foram dosar os seguintes marcadores tumorais bioquímicos: antígeno carcinoembrionário (CEA), antígeno associado a câncer 72-4 (CA 72-4) e fragmento de citoqueratina 21-1 (CYFRA 21-1), que ainda não tiveram seu desempenho avaliado em efusões neoplásicas e não neoplásicas caninas, bem como marcadores imunocitoquímicos que incluem dois novos anticorpos primários (MOC-31 e D2-40) para a diferenciação entre carcinoma e mesotelioma. Trinta e duas amostras de líquidos cavitários abdominais e torácicos, provenientes do atendimento clínico do Hospital de Clínicas Veterinárias da Universidade Federal do Rio Grande do Sul foram analisadas. De acordo com o exame citopatológico e ficha clínica do animal essas efusões foram classificadas em dois grupos: neoplásico e não neoplásico. A dosagem dos marcadores tumorais foi realizada pelo método imunoenzimático sanduíche (ELISA), conforme as instruções dos fabricantes. Para a avaliação imunocitoquímica foram utilizadas 14 amostras de efusões neoplásicas. A técnica foi realizada pelo método estreptavidina-biotina ligada a peroxidase ou a fosfatase alcalina, utilizando-se como cromógeno o DAB. Os marcadores tumorais CEA e CA 72-4 não tiveram resultados significativos na diferenciação entre efusões neoplásicas e não neoplásicas, enquanto que o CYFRA 21-1 obteve sensibilidade de 70%, especificidade de 94% e acurácia de 81% para o diagnóstico neoplásico. Em todas as amostras neoplásicas, imunocitoquímica e citopatologia foram compatíveis, verificando-se como válida a padronização dos novos anticorpos para a espécie canina. Este estudo demonstrou que novos marcadores tumorais, tanto bioquímicos como imunocitoquímicos, podem ser empregados no diagnóstico de neoplasias caninas. O marcador tumoral CYFRA 21-1 deve ser utilizado como auxílio diagnóstico para a espécie canina e os anticorpos MOC-31 e D2-40 devem ser incluídos em painéis imunocitoquímicos de rotina para a diferenciação entre carcinomas e mesoteliomas em efusões neoplásicas. / The cavity effusions frequently occur in the clinical routine of dogs. In most cases the effusions are benign caused by circulatory system disorders. Neoplasms are common causes of effusions in dogs, however not always the tumor cells are found in cytopathologycal analysis. The dosage of tumor markers is an alternative to make the neoplastic effusion diagnosis more accurate. The aims of this work were to determine the following biochemical tumor markers: carcinoembryonic antigen (CEA), cancer antigen 72-4 (CA 72-4) and cytokeratin fragment 21-1 (CYFRA 21-1), which have not had their performance evaluated in canine neoplastic and non-neoplastic effusions, as well as immunocytochemical markers including two new primary antibodies (MOC-31 and D2-40) for differentiation between carcinoma and mesothelioma tumors. Thrirtytwo samples of abdominal and thoracic cavity fluids, from the clinical care of the Veterinary Hospital of the Federal University of Rio Grande do Sul were analyzed. According to the cytopathology test and patient’s clinical record the effusions were classified in two groups: neoplastic or non-neoplastic. The tumor markers measurement was performed by sandwich enzyme immunoassay (ELISA) according to the manufacturer instructions. Fourteen neoplastic samples were used for the immunocytochemical tests. The tests were performed by streptavidin-biotin method linked to peroxidase or to alkaline phosphatase using the DAB chromogen. The tumor markers CEA and CA 72-4 had no significant results for differentiating between neoplastic and non neoplastic effusions, whereas the tumor marker CYFRA 21-1 obtained 70% of sensibility, 94% of specificity and 81% of accuracy for the neoplastic diagnosis. In all neoplastic samples the immunocytochemical and cytological tests were compatible, which make valid their use for standardization of those new antibodies for the canine species. This study demonstrated that new tumor markers both biochemical and immunocytochemical could be used in the canine neoplastic diagnosis. The tumor marker CYFRA 21-1 must be used for the canine species, and the antibodies MOC-31 and D2-40 must be included in routine immunocytochemistry panel for the differenciation between carcinoma and mesothelioma in neoplastic effusions.
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Marcadores tumorais bioquímicos e imunocitoquímicos em efusões neoplásicas caninas / Biochemical and immunocytochemical tumor markers in canine neoplastic effusions

Teixeira, Luciele Varaschini January 2012 (has links)
As efusões cavitárias são de ocorrência frequente na rotina clínica de cães. Na maior parte dos casos são efusões benignas, causadas por distúrbios hidrostáticos do sistema circulatório. As neoplasias são causas comuns de efusões em cães, contudo, nem sempre as células tumorais são encontradas no exame citopatológico. A dosagem de marcadores tumorais e o exame imunocitoquímico são alternativas para tornar o diagnóstico de neoplasia em efusões mais preciso. Os objetivos deste trabalho foram dosar os seguintes marcadores tumorais bioquímicos: antígeno carcinoembrionário (CEA), antígeno associado a câncer 72-4 (CA 72-4) e fragmento de citoqueratina 21-1 (CYFRA 21-1), que ainda não tiveram seu desempenho avaliado em efusões neoplásicas e não neoplásicas caninas, bem como marcadores imunocitoquímicos que incluem dois novos anticorpos primários (MOC-31 e D2-40) para a diferenciação entre carcinoma e mesotelioma. Trinta e duas amostras de líquidos cavitários abdominais e torácicos, provenientes do atendimento clínico do Hospital de Clínicas Veterinárias da Universidade Federal do Rio Grande do Sul foram analisadas. De acordo com o exame citopatológico e ficha clínica do animal essas efusões foram classificadas em dois grupos: neoplásico e não neoplásico. A dosagem dos marcadores tumorais foi realizada pelo método imunoenzimático sanduíche (ELISA), conforme as instruções dos fabricantes. Para a avaliação imunocitoquímica foram utilizadas 14 amostras de efusões neoplásicas. A técnica foi realizada pelo método estreptavidina-biotina ligada a peroxidase ou a fosfatase alcalina, utilizando-se como cromógeno o DAB. Os marcadores tumorais CEA e CA 72-4 não tiveram resultados significativos na diferenciação entre efusões neoplásicas e não neoplásicas, enquanto que o CYFRA 21-1 obteve sensibilidade de 70%, especificidade de 94% e acurácia de 81% para o diagnóstico neoplásico. Em todas as amostras neoplásicas, imunocitoquímica e citopatologia foram compatíveis, verificando-se como válida a padronização dos novos anticorpos para a espécie canina. Este estudo demonstrou que novos marcadores tumorais, tanto bioquímicos como imunocitoquímicos, podem ser empregados no diagnóstico de neoplasias caninas. O marcador tumoral CYFRA 21-1 deve ser utilizado como auxílio diagnóstico para a espécie canina e os anticorpos MOC-31 e D2-40 devem ser incluídos em painéis imunocitoquímicos de rotina para a diferenciação entre carcinomas e mesoteliomas em efusões neoplásicas. / The cavity effusions frequently occur in the clinical routine of dogs. In most cases the effusions are benign caused by circulatory system disorders. Neoplasms are common causes of effusions in dogs, however not always the tumor cells are found in cytopathologycal analysis. The dosage of tumor markers is an alternative to make the neoplastic effusion diagnosis more accurate. The aims of this work were to determine the following biochemical tumor markers: carcinoembryonic antigen (CEA), cancer antigen 72-4 (CA 72-4) and cytokeratin fragment 21-1 (CYFRA 21-1), which have not had their performance evaluated in canine neoplastic and non-neoplastic effusions, as well as immunocytochemical markers including two new primary antibodies (MOC-31 and D2-40) for differentiation between carcinoma and mesothelioma tumors. Thrirtytwo samples of abdominal and thoracic cavity fluids, from the clinical care of the Veterinary Hospital of the Federal University of Rio Grande do Sul were analyzed. According to the cytopathology test and patient’s clinical record the effusions were classified in two groups: neoplastic or non-neoplastic. The tumor markers measurement was performed by sandwich enzyme immunoassay (ELISA) according to the manufacturer instructions. Fourteen neoplastic samples were used for the immunocytochemical tests. The tests were performed by streptavidin-biotin method linked to peroxidase or to alkaline phosphatase using the DAB chromogen. The tumor markers CEA and CA 72-4 had no significant results for differentiating between neoplastic and non neoplastic effusions, whereas the tumor marker CYFRA 21-1 obtained 70% of sensibility, 94% of specificity and 81% of accuracy for the neoplastic diagnosis. In all neoplastic samples the immunocytochemical and cytological tests were compatible, which make valid their use for standardization of those new antibodies for the canine species. This study demonstrated that new tumor markers both biochemical and immunocytochemical could be used in the canine neoplastic diagnosis. The tumor marker CYFRA 21-1 must be used for the canine species, and the antibodies MOC-31 and D2-40 must be included in routine immunocytochemistry panel for the differenciation between carcinoma and mesothelioma in neoplastic effusions.
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Regulação hormonal da prostata de femeas do gerbilo : avaliação estrutural, citoquimica e imunocitoquimica / Hormonal regulation of the gerbil female propstate: morphology, cytochemistry and immunocytochemistry

Santos, Fernanda Cristina Alcântara dos 11 October 2006 (has links)
Orientador: Sebastião Roberto Taboga / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-07T21:06:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_FernandaCristinaAlcantarados_D.pdf: 8013059 bytes, checksum: 981f820c48d983ff59f0fae9c64ba43d (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A próstata feminina é uma glândula funcionalmente ativa encontrada em diversas espécies de mamíferos, incluindo humanos e roedores. Em fêmeas adultas de gerbilos, a próstata apresenta localização parauretral, exibindo íntimo contato com a parede da uretra mediana e distal. Esta glândula é homóloga a próstata ventral de roedores machos, sendo formada por um conjunto de glândulas e ductos inseridos em um estroma fibromuscular. Em machos, a fisiologia prostática é regulada por hormônios esteróides, principalmente andrógenos e estrógenos. Em fêmeas, os fatores que influenciam a atividade prostática são pouco conhecidos, embora existam indícios de que alterações hormonais decorrentes da senescência estejam associadas à instalação de lesões prostáticas. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar os fatores que promovem a regulação hormonal da próstata feminina do gerbilo (Meriones unguiculatus) em condições de hiperandrogenismo e de supressão da atividade estrogênica. Os resultados obtidos com as análises estruturais, ultra-estruturais, sorológicas e imunocitoquímicas permitiram concluir que a próstata feminina do gerbilo é sensível à ação de andrógenos e de agentes anti-estrogênicos. O estímulo androgênico provocou crescimento anormal da próstata, aumento da atividade secretória, além de causar displasia prostática e síndrome de ovário policístico. O tratamento com letrozol resultou em aumento dos níveis séricos de testosterona, hiperplasia glandular, incremento da atividade secretória e crescimento displásico, simulando os efeitos causados por andrógenos exógenos. Os efeitos causados pelo tamoxifeno indicam que este agente endócrino atuou como agonista estrogênico na próstata, causando hipertrofia glandular, diminuição da atividade secretória e desenvolvimento de lesões prostáticas, tais como prostatites e adenocarcinoma. Deste modo, pode-se concluir que a utilização de drogas hormonalmente ativas resulta em uma série de efeitos complexos que comprometem a fisiologia de órgãos hormônio-dependentes, como a próstata feminina e os ovários. O desequilíbrio hormonal provocado pela administração destas drogas causa profundas alterações na morfologia prostática, de maneira muito similar ao que ocorre durante o desenvolvimento de lesões espontâneas em mulheres no período pós-menopausa. Assim, essas terapias devem ser utilizadas com cautela, visto que longos períodos de tratamento podem resultar em lesões malignas da próstata feminina / Abstract: The female prostate is a functionally active gland found in several species of mammals, including humans and rodents. In adult female gerbils, the prostate presents a paraurethral location, showing close contact with the wall of urethra in its median and distal portions. This gland is homologue to the ventral prostate of male rodents and it is formed by a cluster of glands and ducts inserted into a fibermuscular stroma. In males, the prostatic physiology is regulated by steroid hormones, mainly androgen and estrogen. In females, the factors that influence the prostatic activity are unclear, although there are evidences that the hormonal alterations caused by aging are associated with the installation of prostatic lesions. Thus, the objective of this work is to evaluate the factors that promote the hormonal regulation of the gerbil (Meriones unguiculatus) female prostate in hyperandrogenic conditions and estrogenic activity suppression. The results obtained with the structural, ultrastructural, serologic and immunocytochemical analyses showed that the gerbil female prostate is responsive to androgenic and the anti-estrogenic action. The androgenic stimulus has caused an abnormal prostatic growth, increase in secretory activity, and has also caused prostatic dysplasia and polycystic ovary syndrome. The letrozole treatment has stimulated an increase in testosterone serum levels, glandular hyperplasia, increment of the secretory activity and dysplasic growth, simulating the effects provoked by exogenous androgens. The effects caused by tamoxifen indicate that this endocrine agent has acted as an estrogenic agonist on the prostate, causing glandular hypertrophy, decrease in secretory activity and prostatic lesions. Hence, it is possible to conclude that the use of hormonally active drugs results in a series of complex effects that endanger the physiology of hormone-dependent organs, like female prostate and ovaries. The hormonal unbalance caused by the administration of such drugs results in alterations in prostatic morphology similar to what occurs during the development of spontaneous lesions in post-menopausal women. Thus, the utilization of such therapies must occur in a careful manner because a long-term treatment can cause malignant lesions in female prostate / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

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