Submitted by Gizele Lima (gizele.lima@inpa.gov.br) on 2017-04-05T20:42:27Z No. of bitstreams: 2 Tese doutorado Letícia Cegatti Bridi.pdf: 1541965 bytes, checksum: 4cfd95df1d435b1e09c0bf0fb68a8061 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-05T20:42:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese doutorado Letícia Cegatti Bridi.pdf: 1541965 bytes, checksum: 4cfd95df1d435b1e09c0bf0fb68a8061 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-08-23 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas - FAPEAM / Malaria in Brazil occurs especially in the Amazon (99% of cases), where environmental conditions are favorable for the proliferation of the etiologic and their mosquito vectors agents, whose main transmitter is the Anopheles darlingi. Environmental factors and human activities are some of the main aspects that contribute to the adaptive and evolutionary process that anopheles, which can be reflected in chromosomal rearrangements. We carried out the physical chromosome mapping by fluorescence in situ hybridization (FISH) of inume response genes in the genome of A. darlingi, GNBP (Gran-negative binding protein), Toll-interacting protein (Toll), defensin, Chymotrypsin-like serine protease (AdChyL), 28S ribosomal protein S7- mitochondrial precursor (RpS7), gambicin anti-microbial peptide (gambicin) and also the gene sensory response: OBP (odorant binding protein) to assist in more precise assembly of its structural genomics. These genes have been mapped in single chromosomal regions, with the exception of RpS7, which mapped in more than one location. Other genes have been mapped in inversion regions: GNBP (inversion 2 Rd); AdChyL in the region 38D (inversion 3Lb) and RpS7 in 22C region (inversion 2Lb). The OBP gene mapped the X chromosome from five locations individuals, where only A. darlingi of São Gabriel da Cachoeira/AM (SGC/AM) OBP gene marked the region 3A compared to four locations Coari/AM, Manaus/AM, Barra do Bugres/MT and Macapá/AP, where the probe mapped the region 4A. Two new investments were described for A. darlingi and one on chromosome X (Xb) in the population of SGC/AM and another in the arm 2L (2LC), population Bugres/MT. Geographical distances and ecoregions (geographical barriers) are environmental factors that can favor the appearance of the two new inversions described in this work. In the phylogenetic analysis of GNBP genes Toll, defensin, RpS7 and gambicin, we obtained three clades for GNBP and most of the analyzed sequence was homologous to the subfamily B, including GNBP Anopheles gambiae (87%), suggesting that GNBP A . darlingi belongs to the subfamily B. Phylogenetic trees for RpS7 genes, gambicin, defensin and Toll showed a high degree of conservation between these genes in A. gambiae and Anopheles arabiensis. Immune response genes of A. darlingi and Anopheles albimanus are phylogenetically close but not always a reliable support. This may suggest some level of evolutionary conservation of the genes of the immune response of both species. The genes mapped in situ were considered cytogenetic useful markers for chromosomal variability studies and developments in A. darlingi as they are conserved genes, and assist in the improvement of sequence analyzes not finalized the assembly and annotation of the genome of A. darlingi. / A malária no Brasil ocorre especialmente na Amazônia (99% dos casos), onde as condições ambientais são favoráveis para a proliferação dos agentes etiológicos e de seus mosquitos vetores, cujo principal transmissor é o Anopheles darlingi. Fatores ambientais e atividades antrópicas são alguns dos principais aspectos que contribuem para o processo adaptativo e evolutivo desse anofelino, o que pode ser refletido em rearranjos cromossômicos. Neste trabalho, realizamos o mapeamento físico cromossômico por hibridização in situ fluorescente (FISH) dos genes de resposta inume do genoma de A. darlingi, GNBP (Gran-negative binding protein), Toll-interacting protein (Toll), defensina, Chymotrypsin-like serine protease (AdChyL), 28S ribosomal protein S7- mitochondrial precursor (RpS7), gambicin anti-microbial peptide (gambicina) e ainda, o gene de resposta sensorial: OBP (odorant binding protein), para auxiliar na montagem mais precisa do seu genoma estrutural. Esses genes foram mapeados em regiões cromossômicas únicas, com exceção do RpS7 que mapeou em mais de um local. Outros genes foram mapeados em regiões de inversão: GNBP (inversão 2Rd); AdChyL, na região 38D (inversão 3Lb) e RpS7, na região 22C (inversão 2Lb). O gene OBP mapeou o cromossomo X de indivíduos de cinco localidades, onde apenas A. darlingi de São Gabriel da Cachoeira/AM (SGC/AM) o gene OBP marcou na região 3A em comparação com as quatro localidades Coari/AM, Manaus/AM, Barra do Bugres/MT e Macapá/AP, onde a sonda mapeou a região 4A. Duas novas inversões foram descritas, para A. darlingi sendo uma no cromossomo X (Xb) na população de SGC/AM e outra no braço 2L (2Lc), população de Barra do Bugres/MT. Distâncias geográficas e ecoregiões (barreiras geográficas) são fatores ambientais que podem favorecer o aparecimento das duas novas inversões descritas nesse trabalho. Na análise filogenética dos genes GNBP, Toll, defensina, RpS7 e gambicina, obtivemos três clados para GNBP e a maioria das sequências analisadas foi homóloga com a da subfamília B, incluindo GNBP de Anopheles gambiae (87%), sugerindo, que GNBP de A. darlingi pertence à subfamília B. As árvores filogenéticas para os genes RpS7, gambicina, defensina e Toll mostraram um alto grau de conservação entre esses genes em A. gambiae e Anopheles arabiensis. Os genes de resposta imune de A. darlingi e Anopheles albimanus são filogeneticamente próximos, mas nem sempre com um suporte confiável. Isso pode sugerir algum nível de conservação evolutiva entre os genes de resposta imune de ambas as espécies. Os genes mapeados in situ foram considerados marcadores citogenéticos úteis aos estudos de variabilidade cromossômica e evolução em A. darlingi já que são genes conservados, além de auxiliar no aprimoramento das análises de sequências não finalizadas na montagem e anotação do genoma de A. darlingi.

Introdução Anopheles (Nsssorhynchus) constitui o grupo de anofelinos que encerra o maior número de vetores de plasmódios que causam a malária humana na Região Neotropical. Em vista disso, são as espécies que têm sido mais frequentemente estudadas. O subgênero possui 33 espécies e está dividido em três seções, Myzorhynchella, Albimanus e Argyritarsis. A última revisão da seção Myzorhynchella é a de Galvão (1941) e são raros os estudos com a seção que é formada pelas espécies An. lutzii, An. parvus, An. nigritarsis e An. antunesi. Embora estas espécies sejam consideradas zoofílicas, estudos taxonômicos são necessários para estabelecer a identificação morfológica e para diferenciar estas espécies de outros Anophelinae, fornecendo assim condições adequadas para avaliar as espécies que estão envolvidas na transmissão da malária. Objetivos Caracterizar morfologicamente e molecularmente as espécies da seção Myzorhynchella e estabelecer caracteres morfológicos que permitam a separação entre as mesmas. Métodos Foram realizadas coletas de mosquitos em diferentes localidades da Mata Atlântica, além da análise de caracteres morfológicos de larva, pupa, adultos macho e fêmea e ovos de espécimes disponíveis na coleção entomológica da Faculdade de Saúde Pública FSP/USP, do Museu de Zoologia MZUSP e do Instituto Oswaldo Cruz IOC. Foram realizadas análises moleculares utilizando sequências de bases nucleotídicas da região do Espaçador Interno Transcrito 2 - ITS2 do DNA ribossômico e do gene mitocondrial Citocromo Oxidase Subunidade I - COI. Resultados - Foram caracterizados os adultos, machos e fêmeas, as formas imaturas e os ovos de An. antunesi e de An. lutzii. Anopheles guarani e An. niger foram retiradas da sinonímia de An. lutzii. Foi descrita uma espécie nova que é encontrada em simpatria com An. antunesi na Serra da Mantiqueira. Os resultados das análises filogenéticas corroboraram a existência de pelo menos cinco espécies dentro da seção Myzorhynchella e indicam que An. parvus e An. antunesi podem representar complexos de espécies. Acresce considerar que An. lutzii foi redescrita com o emprego de espécimes do Vale do Ribeira. No entanto, a falta de espécimes de An. lutzii da localidade tipo com as formas adultas e imaturos associados, impediram a caracterização adequada da espécie. Conclusão Foram caracterizadas quatro espécies da seção Myzorhynchella, foi descrita uma espécie nova que ocorre na Serra da Mantiqueira e demonstrou-se que An. parvus e An. antunesi podem ser complexos de espécies. Há a necessidade de continuar os estudos da Seção Myzorhynchella e obter topotipos de An. lutzii / Introduction Anopheles (Nsssorhynchus) is the group of anophelines that has the largest number of vectors of plasmodium that causes human malaria in the Neotropics. Because of this, species of this subgenus have been most frequently studied. The subgenus has 33 nominal species, subdivided into three sections, Myzorhynchella, Albimanus and Argyritarsis. The last revision on species of the Myzorhynchella section is that by Galvão (1941) and taxonomic studies are rare in the section that is formed by An. lutzii, An. parvus, An. nigritarsis and An. antunesi. Although these species are considered to be zoophilic, taxonomic studies are necessary to fix the morphological identification, and to differentiate these species from other Anophelinae, thus providing appropriate conditions to evaluate which species are involved in the transmission of malaria. Objetives To fix the morphological and molecular identification of species of the Myzorhynchella section and to define morphological characters to separate the species. Methods The mosquitoes were collected in different localities in the Mata Atlântica. These specimens were employed in analyses of morphological characters of eggs, larva, pupa, adult male and female, and were compared to specimens deposited in the Entomological Collection of Faculdade de Saúde Pública FSP/USP, Museu de Zoologia MZUSP and Instituto Oswaldo Cruz IOC. Molecular analysis were performed using sequences of of the internal transcribed spacer 2 ITS2 of ribosomal DNA and the mitochondrial cytochrome oxidase subunit I gene COI. Results We characterized the adults, male and female, immature forms and the eggs of An. antunesi and An. lutzii. Anopheles guarani and An. niger were removed from the synomym of An. lutzii. A new species that was found in sympatry with An. antunesi in Serra da Mantiqueira was described. Results of phylogenetic analysis corroborate the existence of at least five species within Myzorhynchella Section and indicate that An. parvus and An. antunesi may represent complexes of species. Besides An. lutzii was redescribed using specimens of Ribeira Valley. However, the lack of specimens of An. lutzii from the type locality with associated adults and immature forms prevented the proper characterization of the species. Conclusion We characterized four species of Myzorhynchella section, a new species that occurs in Serra da Mantiqueira was described, and it showed that An. parvus and An. antunesi may be species complex. There is a need to continue the studies of the section and get topotypes of An. lutzii

Anopheles é o gênero da família Culicidae mais estudado devido sua importância médica. Atualmente o gênero Anopheles compreende 472 espécies válidas que estão divididas em sete subgêneros. Os principais vetores de plasmódio da Malária no Brasil pertencem ao subgênero Nyssorhynchus, que inclui 39 espécies oficialmente reconhecidas e um número crescente de complexos de espécies crípticas que estão distribuídas em três Seções: Myzorhynchella, Albimanus e Argyritarsis. Atualmente a Seção Myzorhynchella é formada por seis espécies: An. lutzii, An. parvus, An. nigritarsis, An. guarani, An. antunesi e An. pristinus. Para o desenvolvimento da análise morfológica, observou-se material-tipo depositado em diferentes coleções, espécimes depositados na coleção entomológica da FSP/USP, além de outros obtidos em coletas realizadas durante o presente estudo em diferentes localidades do Brasil. As análises moleculares foram desenvolvidas a partir de espécimes obtidos nas coletas. Revisão taxonômica da Seção Myzorhynchella é apresentada, incluindo-se descrições de quatro novas espécies e redescrições das demais, informações sobre bionomia, importância médica, caracterização molecular, distribuição geográfica, estado de preservação do material-tipo, além de chaves de identificação de adultos, larva de quarto estádio e genitália masculina. Os resultados das análises filogenéticas utilizando sequências de ITS2, COI e Catalase indicam a existência de pelo menos doze espécies dentro da Seção Myzorhynchella, os espécimes que vêm sendo identificados como An. antunesi constitui um complexo formado por possíveis cinco espécies e aqueles de An. parvus e An. pristinus também podem representar complexos de espécies. As sequências de ITS2 podem ser utilizadas como marcador diagnóstico para espécies da Seção Myzorhynchella. Contudo, o estudo ainda demonstra que pouco se conhece sobre a diversidade de espécies de Anopheles que ocorrem em ambientes onde a malária ocorre em baixa endemicidade. Pelo número de espécies novas encontradas e pela escassez de trabalhos com espécies da Seção, fica evidente a necessidade de mais estudos. / Anopheles is the Culicidae Family genus most studied because of its medical importance. The genus currently comprises 472 valid species that are divided into seven subgenus. The main vectors of plasmodium malaria in Brazil belong to the subgenus Nyssorhynchus, that includes 39 valid species and a growing number of cryptic species complexes that are divided in three Sections: Myzorhynchella, Albimanus and Argyritarsis. Myzorhynchella Section currently consists of six species: An. lutzii, An. parvus, An. nigritarsis, An. guarani, An. antunesi and An. pristinus. For the morphological analysis, type material deposited in different collections were studied, specimens deposited in the entomological collection of FSP/USP, and other obtained from field collections in different localities in Brazil during this study. The molecular analyzes were taken from specimens obtained in field collections. Taxonomic review of Myzorhynchella Section is presented, including descriptions of four new species and redescriptions of the others, information on bionomics, medical importance, molecular characterization, geographical distribution, preservation status of type material, as well as identification keys of adults, fourth instar larvae and male genitalia. The results of phylogenetic analysis using sequences of ITS2, COI and Catalase indicate the existence of at least twelve species within Myzorhynchella Section, the specimens which have been identified as An. antunesi is a species complex formed by possible five species and those of An. parvus and An. pristinus may also represent species complexes. The ITS2 sequences can be used as a diagnostic marker for species of Myzorhynchella Section. However, the study also shows that little is known about the diversity of Anopheles species that occur in environments where malaria occurs in low endemicity. By the number of new species found and the lack of studies with species of the Section, it is evident the need for further studies.

Introdução Anopheles (Nsssorhynchus) constitui o grupo de anofelinos que encerra o maior número de vetores de plasmódios que causam a malária humana na Região Neotropical. Em vista disso, são as espécies que têm sido mais frequentemente estudadas. O subgênero possui 33 espécies e está dividido em três seções, Myzorhynchella, Albimanus e Argyritarsis. A última revisão da seção Myzorhynchella é a de Galvão (1941) e são raros os estudos com a seção que é formada pelas espécies An. lutzii, An. parvus, An. nigritarsis e An. antunesi. Embora estas espécies sejam consideradas zoofílicas, estudos taxonômicos são necessários para estabelecer a identificação morfológica e para diferenciar estas espécies de outros Anophelinae, fornecendo assim condições adequadas para avaliar as espécies que estão envolvidas na transmissão da malária. Objetivos Caracterizar morfologicamente e molecularmente as espécies da seção Myzorhynchella e estabelecer caracteres morfológicos que permitam a separação entre as mesmas. Métodos Foram realizadas coletas de mosquitos em diferentes localidades da Mata Atlântica, além da análise de caracteres morfológicos de larva, pupa, adultos macho e fêmea e ovos de espécimes disponíveis na coleção entomológica da Faculdade de Saúde Pública FSP/USP, do Museu de Zoologia MZUSP e do Instituto Oswaldo Cruz IOC. Foram realizadas análises moleculares utilizando sequências de bases nucleotídicas da região do Espaçador Interno Transcrito 2 - ITS2 do DNA ribossômico e do gene mitocondrial Citocromo Oxidase Subunidade I - COI. Resultados - Foram caracterizados os adultos, machos e fêmeas, as formas imaturas e os ovos de An. antunesi e de An. lutzii. Anopheles guarani e An. niger foram retiradas da sinonímia de An. lutzii. Foi descrita uma espécie nova que é encontrada em simpatria com An. antunesi na Serra da Mantiqueira. Os resultados das análises filogenéticas corroboraram a existência de pelo menos cinco espécies dentro da seção Myzorhynchella e indicam que An. parvus e An. antunesi podem representar complexos de espécies. Acresce considerar que An. lutzii foi redescrita com o emprego de espécimes do Vale do Ribeira. No entanto, a falta de espécimes de An. lutzii da localidade tipo com as formas adultas e imaturos associados, impediram a caracterização adequada da espécie. Conclusão Foram caracterizadas quatro espécies da seção Myzorhynchella, foi descrita uma espécie nova que ocorre na Serra da Mantiqueira e demonstrou-se que An. parvus e An. antunesi podem ser complexos de espécies. Há a necessidade de continuar os estudos da Seção Myzorhynchella e obter topotipos de An. lutzii / Introduction Anopheles (Nsssorhynchus) is the group of anophelines that has the largest number of vectors of plasmodium that causes human malaria in the Neotropics. Because of this, species of this subgenus have been most frequently studied. The subgenus has 33 nominal species, subdivided into three sections, Myzorhynchella, Albimanus and Argyritarsis. The last revision on species of the Myzorhynchella section is that by Galvão (1941) and taxonomic studies are rare in the section that is formed by An. lutzii, An. parvus, An. nigritarsis and An. antunesi. Although these species are considered to be zoophilic, taxonomic studies are necessary to fix the morphological identification, and to differentiate these species from other Anophelinae, thus providing appropriate conditions to evaluate which species are involved in the transmission of malaria. Objetives To fix the morphological and molecular identification of species of the Myzorhynchella section and to define morphological characters to separate the species. Methods The mosquitoes were collected in different localities in the Mata Atlântica. These specimens were employed in analyses of morphological characters of eggs, larva, pupa, adult male and female, and were compared to specimens deposited in the Entomological Collection of Faculdade de Saúde Pública FSP/USP, Museu de Zoologia MZUSP and Instituto Oswaldo Cruz IOC. Molecular analysis were performed using sequences of of the internal transcribed spacer 2 ITS2 of ribosomal DNA and the mitochondrial cytochrome oxidase subunit I gene COI. Results We characterized the adults, male and female, immature forms and the eggs of An. antunesi and An. lutzii. Anopheles guarani and An. niger were removed from the synomym of An. lutzii. A new species that was found in sympatry with An. antunesi in Serra da Mantiqueira was described. Results of phylogenetic analysis corroborate the existence of at least five species within Myzorhynchella Section and indicate that An. parvus and An. antunesi may represent complexes of species. Besides An. lutzii was redescribed using specimens of Ribeira Valley. However, the lack of specimens of An. lutzii from the type locality with associated adults and immature forms prevented the proper characterization of the species. Conclusion We characterized four species of Myzorhynchella section, a new species that occurs in Serra da Mantiqueira was described, and it showed that An. parvus and An. antunesi may be species complex. There is a need to continue the studies of the section and get topotypes of An. lutzii

Introdução Os complexos An. oswaldoi e An. albitarsis são formados por espécies morfologicamente semelhantes e, algumas delas, são importantes vetores de plasmódios que causam a malária humana. A separação das espécies de cada complexo é problemática devido ao polimorfismo e sobreposição dos caracteres morfológicos utilizados em chaves de identificação, que muitas vezes só é alcançada com o uso de marcadores moleculares. No entanto, a identificação correta das espécies se faz necessária para a avaliação adequada da importância epidemiológica das mesmas. Infelizmente, são poucos os estudos que objetivam a caracterização morfológica dos membros do complexo An. oswaldoi e An. albitarsis. Objetivos Caracterizar morfologicamente e molecularmente o An. oswaldoi s.s.; caracterizar morfologicamente cinco espécies do complexo An. albitarsis; estabelecer caracteres morfológicos que permitam a separação entre as espécies do complexo An. albitarsis; solucionar problema de nomenclatura de An. marajoara. Métodos - Foram utilizados espécimes disponíveis nos acervos da Coleção Entomológica do Departamento de Epidemiologia da Faculdade de Saúde Pública (FSP/USP), do Museu Nacional do Rio de Janeiro e do Instituto Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Brasil e do National Museum of Natural History (NMNH), EUA. Foram descritas e ilustradas as fêmeas adultas, genitálias masculinas, larvas de quarto estadio e pupas de seis espécies de Nyssorhynchus, e a larva de primeiro estadio de An. albitarsis s.s. Foram utilizados 40 caracteres de fêmeas adultas das cinco espécies do complexo An. albitarsis. Nas análises morfométricas foram empregadas técnicas de análises estatísticas multivariadas. Resultados Os adultos machos e fêmeas, larvas de quarto estadio e pupas de An. oswaldoi s.s., An. albitarsis s.s., An. marajoara e An.deaneorum foram redescritos, e descritos aqueles de An. albitarsis B e An. albitarsis E. Os resultados das análises multivariadas dos caracteres morfométricos demonstraram que é possível separar as cinco espécies do complexo An. albitarsis. Para promover a estabilidade do nome An. marajoara, a lâmina da genitália masculina que acompanha o holótipo foi invalidada. Conclusões Foi possível caracterizar An. oswaldoi s.s. através de marcadores morfológicos e moleculares. Os resultados das análises morfométricas demonstraram que é possível separar as cinco espécies do complexo An. albitarsis e que os espécimes de An. marajoara podem pertencer a duas espécies distintas. / Introduction The Anopheles oswaldoi and An. albitarsis complexes contain morphologically cryptic species, including some important vectors of human malaria. Species diagnosis within each complex is problematic due to polymorphisms and overlapping morphological characters in identification keys and many times must employ molecular biology methods. Although correct identification is necessary to evaluate the respective epidemiological importance of each species, there exist few studies that have characterized the morphological characters of the An. oswaldoi and An. albitarsis complexes. Objectives Morphologically and molecularly characterize An. oswaldoi s.s.; morphologically characterize five species of the An. albitarsis complex; establish morphological characters that separate species of the An. albitarsis complex; resolve nomenclature problems within An. marajoara. Methods- Specimens used originated from the entomological collections of the Departamento de Epidemiologia of the Faculdade de Saúde Pública (Universidade de São Paulo), from the Museu Nacional do Rio de Janeiro and from Instituto Oswaldo Cruz (Rio de Janeiro) in Brazil and of the National Museum of Natural History (USA). The adult females, male genitalia, fourthinstar larvae and pupae from six species of Nyssorhynchus and the firstinstar larva of An. albitarsis s.s. were described and illustrated. Forty adult female characters were identified form five species of the An. albitarsis complex. Multivariate statistics were used in the morphometric analyses. Results Adult males and females, fourth-instar larvae and pupae of An.oswaldoi s.s., An. albitarsis s.s., An. marajoara and An. deaneorum were redescribed. Those of An. albitarsis B and An. albitarsis E were described.Results from multivariate analyses of morphological characters separated the five species of the An. albitarsis complex. To promote the nomenclature stability of An. marajoara, the male-genitalia slide associated with the holotype was invalidated. Conclusions It was possible to characterize An. oswaldoi s.s. using both morphological characters and molecular markers. Results from morphometric analyses showed that it is possible a morphological distinction among all five species, and that the specimens of An. marajoara may belong to two distinct species.

Introdução – Anopheles (Nyssorhynchus) lanei foi descrito por Galvão e Amaral em 1938, a partir de espécimes coletados em Campos do Jordão, na Serra da Mantiqueira, Estado de São Paulo, sendo provável espécie endêmica desta região. Linthicum (1988) redescreveu An. lanei baseando-se em um espécime adulto fêmea e duas genitálias masculinas de Campos do Jordão; porém, a ilustração de genitália masculina foi feita a partir de um espécime coletado na cidade de Estância, Estado de Sergipe, Brasil. Evidências morfológicas somadas a diferenças ambientais entre estas localidades indicam que os espécimes analisados por Linthicum não correspondem a An. lanei. Culex (Culex) dolosus foi descrito por Lynch Arribálzaga em 1891 com base em espécimes coletados na Província de Buenos Aires, Argentina. O último trabalho a tratar de aspectos da morfologia de Cx. dolosus é anterior à descrição de Culex eduardoi Casal & García, espécie similar a esta. Dados de literatura apontam para a existência de formas morfológicas diferenciadas em populações de Cx. dolosus, o que parece ser o caso dos espécimes que ocorrem na região de Campos do Jordão. Objetivos – Este estudo visa contribuir para o conhecimento taxonômico de espécies pertencentes aos subgêneros Nyssorhynchus e Culex, que ocorrem na Serra da Mantiqueira, por meio da redescrição de An. lanei e Cx. dolosus, e também da identificação de fauna de Culicidae associada. Métodos – As redescrições foram baseadas na análise de exemplares coletados na região de Campos do Jordão e implicaram em etapas de quetotaxia das larvas e pupas, biometria dos adultos e formas imaturas e elaboração de ilustrações das estruturas anatômicas da morfologia externa. Resultados – Deste trabalho resultaram redescrições morfológicas detalhadas, tabelas de quetotaxia das formas imaturas e ilustrações das larvas, pupas e estruturas das genitálias masculinas. Considerações finais - Espera-se que os resultados alcançados possam ampliar e dar continuidade a estudos taxonômicos de Culicidae e também contribuir para a correta identificação de espécies de Anopheles e Culex. / Introduction – Anopheles (Nyssorhynchus) lanei was described by Galvão and Amaral in 1938, based on specimens collected in the Campos do Jordão, in Serra da Mantiqueira, State of São Paulo, being a probable endemic species from this region. Linthicum (1988) re-described An. lanei based on one adult female and two male genitalia from Campos do Jordão; however, the illustration of the male genitalia was generated from a specimen collected in Estância municipality, State of Sergipe, Brazil. Morphologic evidences, in addiction to environmental differences between both localities, suggest that the specimens examined by Linthicum (1988) do not belong to An. lanei. Culex (Culex) dolosus was described by Lynch Arribálzaga in 1891 based in exemplars from the Buenos Aires Province, in Argentina. The last work to deal with morphologic aspects of Cx. dolosus precedes the description of Culex eduardoi Casal & García, a similar species to the former. Literature records point to the existence of differentiate morphologic forms of Cx. dolosus, what seems to be the case of the specimens that occur in Campos do Jordão region. Objectives – This study aim to contribute to the knowledge about species from the subgenera Nyssorhynchus and Culex, that occur in the Serra da Mantiqueira, by the re-description of An. lanei and Cx. dolosus and also by the identification of the Culicidae associated fauna. Methods – The redescriptions were based in the analyzes specimens collected in the region of Campos do Jordão and implied in stages of chaetotaxy of the larvae and pupae, biometry of the adults and immature forms, and elaboration of illustrations of the anatomic structures of the external morphology. Results – This work resulted in detailed morphologic redescriptions, chaetotaxy tables of the immature forms and illustrations of the larvae, pupae and male genitalia structures. Final considerations – It is expected that the reached results might expand and continuity taxonomic studies on Culicidae and also contribute to the correct identification of Anopheles and Culex.

Introdução – Anopheles (Nyssorhynchus) lanei foi descrito por Galvão e Amaral em 1938, a partir de espécimes coletados em Campos do Jordão, na Serra da Mantiqueira, Estado de São Paulo, sendo provável espécie endêmica desta região. Linthicum (1988) redescreveu An. lanei baseando-se em um espécime adulto fêmea e duas genitálias masculinas de Campos do Jordão; porém, a ilustração de genitália masculina foi feita a partir de um espécime coletado na cidade de Estância, Estado de Sergipe, Brasil. Evidências morfológicas somadas a diferenças ambientais entre estas localidades indicam que os espécimes analisados por Linthicum não correspondem a An. lanei. Culex (Culex) dolosus foi descrito por Lynch Arribálzaga em 1891 com base em espécimes coletados na Província de Buenos Aires, Argentina. O último trabalho a tratar de aspectos da morfologia de Cx. dolosus é anterior à descrição de Culex eduardoi Casal & García, espécie similar a esta. Dados de literatura apontam para a existência de formas morfológicas diferenciadas em populações de Cx. dolosus, o que parece ser o caso dos espécimes que ocorrem na região de Campos do Jordão. Objetivos – Este estudo visa contribuir para o conhecimento taxonômico de espécies pertencentes aos subgêneros Nyssorhynchus e Culex, que ocorrem na Serra da Mantiqueira, por meio da redescrição de An. lanei e Cx. dolosus, e também da identificação de fauna de Culicidae associada. Métodos – As redescrições foram baseadas na análise de exemplares coletados na região de Campos do Jordão e implicaram em etapas de quetotaxia das larvas e pupas, biometria dos adultos e formas imaturas e elaboração de ilustrações das estruturas anatômicas da morfologia externa. Resultados – Deste trabalho resultaram redescrições morfológicas detalhadas, tabelas de quetotaxia das formas imaturas e ilustrações das larvas, pupas e estruturas das genitálias masculinas. Considerações finais - Espera-se que os resultados alcançados possam ampliar e dar continuidade a estudos taxonômicos de Culicidae e também contribuir para a correta identificação de espécies de Anopheles e Culex. / Introduction – Anopheles (Nyssorhynchus) lanei was described by Galvão and Amaral in 1938, based on specimens collected in the Campos do Jordão, in Serra da Mantiqueira, State of São Paulo, being a probable endemic species from this region. Linthicum (1988) re-described An. lanei based on one adult female and two male genitalia from Campos do Jordão; however, the illustration of the male genitalia was generated from a specimen collected in Estância municipality, State of Sergipe, Brazil. Morphologic evidences, in addiction to environmental differences between both localities, suggest that the specimens examined by Linthicum (1988) do not belong to An. lanei. Culex (Culex) dolosus was described by Lynch Arribálzaga in 1891 based in exemplars from the Buenos Aires Province, in Argentina. The last work to deal with morphologic aspects of Cx. dolosus precedes the description of Culex eduardoi Casal & García, a similar species to the former. Literature records point to the existence of differentiate morphologic forms of Cx. dolosus, what seems to be the case of the specimens that occur in Campos do Jordão region. Objectives – This study aim to contribute to the knowledge about species from the subgenera Nyssorhynchus and Culex, that occur in the Serra da Mantiqueira, by the re-description of An. lanei and Cx. dolosus and also by the identification of the Culicidae associated fauna. Methods – The redescriptions were based in the analyzes specimens collected in the region of Campos do Jordão and implied in stages of chaetotaxy of the larvae and pupae, biometry of the adults and immature forms, and elaboration of illustrations of the anatomic structures of the external morphology. Results – This work resulted in detailed morphologic redescriptions, chaetotaxy tables of the immature forms and illustrations of the larvae, pupae and male genitalia structures. Final considerations – It is expected that the reached results might expand and continuity taxonomic studies on Culicidae and also contribute to the correct identification of Anopheles and Culex.

Introdução Os complexos An. oswaldoi e An. albitarsis são formados por espécies morfologicamente semelhantes e, algumas delas, são importantes vetores de plasmódios que causam a malária humana. A separação das espécies de cada complexo é problemática devido ao polimorfismo e sobreposição dos caracteres morfológicos utilizados em chaves de identificação, que muitas vezes só é alcançada com o uso de marcadores moleculares. No entanto, a identificação correta das espécies se faz necessária para a avaliação adequada da importância epidemiológica das mesmas. Infelizmente, são poucos os estudos que objetivam a caracterização morfológica dos membros do complexo An. oswaldoi e An. albitarsis. Objetivos Caracterizar morfologicamente e molecularmente o An. oswaldoi s.s.; caracterizar morfologicamente cinco espécies do complexo An. albitarsis; estabelecer caracteres morfológicos que permitam a separação entre as espécies do complexo An. albitarsis; solucionar problema de nomenclatura de An. marajoara. Métodos - Foram utilizados espécimes disponíveis nos acervos da Coleção Entomológica do Departamento de Epidemiologia da Faculdade de Saúde Pública (FSP/USP), do Museu Nacional do Rio de Janeiro e do Instituto Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Brasil e do National Museum of Natural History (NMNH), EUA. Foram descritas e ilustradas as fêmeas adultas, genitálias masculinas, larvas de quarto estadio e pupas de seis espécies de Nyssorhynchus, e a larva de primeiro estadio de An. albitarsis s.s. Foram utilizados 40 caracteres de fêmeas adultas das cinco espécies do complexo An. albitarsis. Nas análises morfométricas foram empregadas técnicas de análises estatísticas multivariadas. Resultados Os adultos machos e fêmeas, larvas de quarto estadio e pupas de An. oswaldoi s.s., An. albitarsis s.s., An. marajoara e An.deaneorum foram redescritos, e descritos aqueles de An. albitarsis B e An. albitarsis E. Os resultados das análises multivariadas dos caracteres morfométricos demonstraram que é possível separar as cinco espécies do complexo An. albitarsis. Para promover a estabilidade do nome An. marajoara, a lâmina da genitália masculina que acompanha o holótipo foi invalidada. Conclusões Foi possível caracterizar An. oswaldoi s.s. através de marcadores morfológicos e moleculares. Os resultados das análises morfométricas demonstraram que é possível separar as cinco espécies do complexo An. albitarsis e que os espécimes de An. marajoara podem pertencer a duas espécies distintas. / Introduction The Anopheles oswaldoi and An. albitarsis complexes contain morphologically cryptic species, including some important vectors of human malaria. Species diagnosis within each complex is problematic due to polymorphisms and overlapping morphological characters in identification keys and many times must employ molecular biology methods. Although correct identification is necessary to evaluate the respective epidemiological importance of each species, there exist few studies that have characterized the morphological characters of the An. oswaldoi and An. albitarsis complexes. Objectives Morphologically and molecularly characterize An. oswaldoi s.s.; morphologically characterize five species of the An. albitarsis complex; establish morphological characters that separate species of the An. albitarsis complex; resolve nomenclature problems within An. marajoara. Methods- Specimens used originated from the entomological collections of the Departamento de Epidemiologia of the Faculdade de Saúde Pública (Universidade de São Paulo), from the Museu Nacional do Rio de Janeiro and from Instituto Oswaldo Cruz (Rio de Janeiro) in Brazil and of the National Museum of Natural History (USA). The adult females, male genitalia, fourthinstar larvae and pupae from six species of Nyssorhynchus and the firstinstar larva of An. albitarsis s.s. were described and illustrated. Forty adult female characters were identified form five species of the An. albitarsis complex. Multivariate statistics were used in the morphometric analyses. Results Adult males and females, fourth-instar larvae and pupae of An.oswaldoi s.s., An. albitarsis s.s., An. marajoara and An. deaneorum were redescribed. Those of An. albitarsis B and An. albitarsis E were described.Results from multivariate analyses of morphological characters separated the five species of the An. albitarsis complex. To promote the nomenclature stability of An. marajoara, the male-genitalia slide associated with the holotype was invalidated. Conclusions It was possible to characterize An. oswaldoi s.s. using both morphological characters and molecular markers. Results from morphometric analyses showed that it is possible a morphological distinction among all five species, and that the specimens of An. marajoara may belong to two distinct species.

As alterações das paisagens promovidas pelo homem, em razão das atividades relacionadas ao uso e ocupação do solo, representam um desafio para as atividades de controle da malária na Amazônia brasileira. Desse modo, buscou-se avaliar o sistema ecológico da malária através da construção de três eixos: desmatamento, uso do solo e diversidade de Culicidae. Esses eixos tiveram a paisagem como centro de conexão, modulados por fatores de pressão (hospedeiro humano), de risco (o vetor) e de causa (o agente infeccioso). A transmissão de patógenos, incluindo espécies de Plasmodium, ocorre na intersecção entre os nichos do hospedeiro humano, dos vetores e dos parasitos, em ambiente que permite a interconexão dos mesmos. Nesse sentido, verificou-se que cada quilômetro quadrado de área impactada pelo desmatamento, entre 2009-2015, produziu 27 novos casos de malária (r² = 0,78; F1,10 = 35,81; P <0,001) na Amazônia Legal brasileira, com uma correlação positiva altamente significativa entre o número de áreas de florestas impactadas com menos de 5 km² e a incidência da doença. Em virtude das relações indiretas com o desmatamento, foi possível verificar que o aumento da produção de soja, madeira, gado e óleo de palma no mundo apresentou alta correlação positiva significativa com a incidência de malária em países tropicais. No cenário brasileiro, a abundância de Nyssorhynchus darlingi respondeu positivamente à perda da cobertura florestal de áreas endêmicas de malária. Ao contrário, a diversidade de Culicidae diminuiu, deixando os vetores como espécies dominantes, favorecendo a taxa de picada e a capacidade de transmissão do Plasmodium. Desse modo, foi possível concluir que a incidência da doença, em áreas rurais, está fortemente associada aos padrões de uso e ocupação do solo. A estrutura da paisagem pode ser indicador de risco para a doença, em virtude das dinâmicas ecológicas do Ny. darlingi. / Changes in the landscapes caused by humans, due to the activities related to the use and occupation of the soil, represent a challenge for malaria control activities in the Brazilian Amazon. Therefore, we evaluated the ecological system of malaria in relation to the construction of three drivers: deforestation, land use and Culicidae diversity. These drivers had in common the landscape, modulated by factors of pressure (human host), risk (the vector) and necessary cause (the infectious agent). The transmission of pathogens, including species of Plasmodium, occurs at the intersection among niches of the human host, the vectors and the parasites, in an environment that allows the interconnection of these organisms. The data analyzed herein verified that every square kilometer of area impacted by deforestation between 2009-2015 produced 27 new cases of malaria (r² = 0.78, F1.10 = 35.81, P <0.001) in the Brazilian Legal Amazon, with a highly significant positive correlation between the number of forest areas with impacted less than 5 km² and the incidence of the disease. Due to the indirect relationship with deforestation, it was possible to verify that the increase in the production of soybean, wood, cattle and palm oil worldwide showed a significant positive correlation with the incidence of malaria in tropical countries. In the Brazilian scenario, the abundance of Nyssorhynchus darlingi responded positively to the loss of forest cover of endemic areas of malaria. In opposite, the Culicidae diversity decreased, leaving vectors as dominant species, favoring the biting rate and the capacity to Plasmodium transmission. Thus, it was possible to conclude that the incidence of the disease in rural areas is strongly associated with the patterns of land use and occupation. The structure of the landscape can be an indicator of risk for the disease, due to the ecological dynamics of the Ny. darlingi.

As alterações das paisagens promovidas pelo homem, em razão das atividades relacionadas ao uso e ocupação do solo, representam um desafio para as atividades de controle da malária na Amazônia brasileira. Desse modo, buscou-se avaliar o sistema ecológico da malária através da construção de três eixos: desmatamento, uso do solo e diversidade de Culicidae. Esses eixos tiveram a paisagem como centro de conexão, modulados por fatores de pressão (hospedeiro humano), de risco (o vetor) e de causa (o agente infeccioso). A transmissão de patógenos, incluindo espécies de Plasmodium, ocorre na intersecção entre os nichos do hospedeiro humano, dos vetores e dos parasitos, em ambiente que permite a interconexão dos mesmos. Nesse sentido, verificou-se que cada quilômetro quadrado de área impactada pelo desmatamento, entre 2009-2015, produziu 27 novos casos de malária (r² = 0,78; F1,10 = 35,81; P <0,001) na Amazônia Legal brasileira, com uma correlação positiva altamente significativa entre o número de áreas de florestas impactadas com menos de 5 km² e a incidência da doença. Em virtude das relações indiretas com o desmatamento, foi possível verificar que o aumento da produção de soja, madeira, gado e óleo de palma no mundo apresentou alta correlação positiva significativa com a incidência de malária em países tropicais. No cenário brasileiro, a abundância de Nyssorhynchus darlingi respondeu positivamente à perda da cobertura florestal de áreas endêmicas de malária. Ao contrário, a diversidade de Culicidae diminuiu, deixando os vetores como espécies dominantes, favorecendo a taxa de picada e a capacidade de transmissão do Plasmodium. Desse modo, foi possível concluir que a incidência da doença, em áreas rurais, está fortemente associada aos padrões de uso e ocupação do solo. A estrutura da paisagem pode ser indicador de risco para a doença, em virtude das dinâmicas ecológicas do Ny. darlingi. / Changes in the landscapes caused by humans, due to the activities related to the use and occupation of the soil, represent a challenge for malaria control activities in the Brazilian Amazon. Therefore, we evaluated the ecological system of malaria in relation to the construction of three drivers: deforestation, land use and Culicidae diversity. These drivers had in common the landscape, modulated by factors of pressure (human host), risk (the vector) and necessary cause (the infectious agent). The transmission of pathogens, including species of Plasmodium, occurs at the intersection among niches of the human host, the vectors and the parasites, in an environment that allows the interconnection of these organisms. The data analyzed herein verified that every square kilometer of area impacted by deforestation between 2009-2015 produced 27 new cases of malaria (r² = 0.78, F1.10 = 35.81, P <0.001) in the Brazilian Legal Amazon, with a highly significant positive correlation between the number of forest areas with impacted less than 5 km² and the incidence of the disease. Due to the indirect relationship with deforestation, it was possible to verify that the increase in the production of soybean, wood, cattle and palm oil worldwide showed a significant positive correlation with the incidence of malaria in tropical countries. In the Brazilian scenario, the abundance of Nyssorhynchus darlingi responded positively to the loss of forest cover of endemic areas of malaria. In opposite, the Culicidae diversity decreased, leaving vectors as dominant species, favoring the biting rate and the capacity to Plasmodium transmission. Thus, it was possible to conclude that the incidence of the disease in rural areas is strongly associated with the patterns of land use and occupation. The structure of the landscape can be an indicator of risk for the disease, due to the ecological dynamics of the Ny. darlingi.