Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-09-08T16:35:24Z No. of bitstreams: 1 2017_VitorDalmazoMelotti.pdf: 1969669 bytes, checksum: 912d95a74094658277c52193ea240ffb (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-09-08T19:26:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_VitorDalmazoMelotti.pdf: 1969669 bytes, checksum: 912d95a74094658277c52193ea240ffb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-08T19:26:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_VitorDalmazoMelotti.pdf: 1969669 bytes, checksum: 912d95a74094658277c52193ea240ffb (MD5) Previous issue date: 2017-09-08 / As úlceras de abomaso têm apresentado ocorrência crescente em bovinos de produção intensiva. No tratamento, utilizam-se medicamentos que aumentam o pH intraluminal do abomaso. Um desses fármacos é o omeprazol. Em bezerros, ainda pré-ruminantes, o efeito benéfico desse medicamento já foi bem evidenciado. Objetivou-se mensurar o pH intraluminal do abomaso em bovinos hígidos com 12 meses de idade recebendo omeprazol administrado via oral em duas apresentações, pasta e granulado. Foram utilizados 5 bovinos hígidos, com aproximadamente 12 meses de idade. O experimento consistiu em três grupos: grupo controle (GC), grupo pasta (GP) animais que receberam omeprazol na dose de (4 mg/kg) pela via oral em excipiente pasta cada 24 horas, e grupo granulado (GG) animais que receberam omeprazol na dose de (4 mg/kg) pela via oral em excipiente granulado cada 24 horas. Os tratamentos perduraram por 15 dias em cada grupo, com intervalos de 14 dias entre eles. As analises entre os três grupos, revelam que administração do omeprazol nos grupos GP e GG, proporcionou aumento dos valores de pH intraluminal do abomaso com diferença estatística no tocante ao GC, contudo esse acréscimo não foi observado no primeiro dia nos dois grupos tratamentos: GP (p = 0.100) e GG (p = 0.790), e também não foi notado no 14º dia do GP (p = 0.060). O presente estudo demonstrou que ocorreu um aumento significativo no pH intraluminal do abomaso dos animais que receberam o omeprazol, porém há a necessidade de realização de mais estudos terapêuticos com animais acometidos de abomasite e ulcera de abomaso. / Abomasal ulcers have been shown to be an increasing occurrence in cattle of intensive production. In the treatment, drugs are used that increase the intraluminal pH of the abomasum. One such drug is omeprazole. In calves, still pre-ruminants, the beneficial effect of this medicine has already been well evidenced. The objective of this study was to measure the intraluminal pH of the abomasum in healthy cattle at 12 months of age receiving omeprazole administered orally in two presentations, paste and granulate. Five healthy cattle, approximately 12 months old, were used. The experiment consisted of three groups: control group (CG), paste group (PG) animals that received omeprazole at the dose of (4 mg / kg) by oral route in pasta excipient every 24 hours, and granular group (GG) animals that received Omeprazole at the dose of (4 mg / kg) orally in granular excipient every 24 hours. The treatments lasted for 15 days in each group, with intervals of 14 days between them. Analyzes between the three groups revealed that administration of omeprazole in the PG and GG groups resulted in an increase in the intraluminal pH values of the abomasum with a statistical difference regarding CG, but this increase was not observed on the first day in the two treatments: GP (P = 0.100) and GG (p = 0.790), and it was also not noticed on the 14th day of PG (p = 0.060). The present study demonstrated that there was a significant increase in the intraluminal pH of the abomasum of the animals that received omeprazole, but it is necessary to carry out further therapeutic studies with animals affected by abomasitis and abomasal ulcer.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-08T17:53:40Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 813997 bytes, checksum: 0903aab3693f5e8e4c8dfbc15a001d07 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-08T17:53:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 813997 bytes, checksum: 0903aab3693f5e8e4c8dfbc15a001d07 (MD5) Previous issue date: 2007-12-20 / O objetivo deste trabalho foi avaliar a ocorrência de efeitos colaterais ocasionados pela monofenilbutazona nos tratos digestório e renal de pôneis, assim como verificar a relação do omeprazol com a inibição da formação de úlceras gástricas. O experimento foi executado em duas etapas. Na primeira foram utilizados seis pôneis hígidos, sendo três deles tratados diariamente por via intravenosa (IV) com as doses de 3, 4,5 ou 6 mg kg -1 de monofenilbutazona durante 12 dias. Os demais, além do antiinflamatório também receberam 3 mg kg -1 de omeprazol. Já na segunda etapa foram incluídos quatro pôneis, sendo dois tratados com doses diárias de 4,5 mg kg -1 de monofenilbutazona durante 12 dias, e os demais com 5 mL de NaCl a 0,9 %, por via IV. Todos os pôneis foram submetidos à endoscopia antes e após cada etapa experimental. Adicionalmente, na primeira etapa foram realizadas urinálise e determinação dos valores de variáveis sangüíneas (volume globular, leucócitos totais, proteínas plasmáticas totais) e séricas (uréia e creatinina, aspartato aminotransferase, Ca +2 , P +3 , Cl - , Na + e K + ) antes, durante e após experimento. Na primeira etapa apenas os dois pôneis tratados com 6 mg kg -1 de monofenilbutazona apresentaram úlceras na região aglandular, ao longo da margo plicatus, sendo mais grave no animal que não recebeu omeprazol. Na segunda etapa dois animais também apresentaram úlceras gástricas sendo que, um deles, havia recebido apenas solução fisiológica. Análise estatística demonstrou que a ocorrência das úlceras não foi influenciada (P>0,05) pela administração e dose da monofenilbutazona, nem pela presença do omeprazol. O efeito da monofenilbutazona sobre as variáveis sangüíneas e séricas foi pequeno ou inexpressivo. Os resultados obtidos permitem concluir que: o aparecimento de úlcera gástrica na região aglandular de pôneis não sofre a influência da aplicação e da dose de monofenilbutazona, quando administrada durante 12 dias; úlceras vina região aglandular de pôneis não se acompanham de sintomatologia clínica; pôneis toleram a aplicação de 6 mg kg -1 de monofenilbutazona durante 12 dias sem o aparecimento de lesão renal; o efeito da monofenilbutazona sobre variáveis sangüíneas e séricas é pequeno ou ausente, pois em geral as mesmas se mantêm dentro dos valores considerados como de referência para a espécie; não foi comprovada a relação do omeprazol com a presença ou ausência de úlcera. Palavras-chave: antiinflamatórios não esteroidais, eqüinos, úlceras gástricas, lesão renal, omeprazol. / This work aimed to evaluate the occurrence of side effects caused by monophenylbutazone on the digestive and kidney tract of ponies, and to verify the relation between omeprazole with inhibition of the formation of gastric ulcers. The experiment was carried out in two phases. In the first, six normal ponies were used, with three being treated daily via intravenous (IV) monophenylbutazone doses of 3, 4.5 or 6 mg kg -1 during 12 days. The other ponies were also given 3 mg kg -1 of omeprazole, besides the anti- inflamatory drug. In the second phase, four ponies were included, with two being treated with daily doses of 4.5 mg kg -1 of monophenylbutazone during 12 days, and the remainder with 5 mL of NaCl at 0.9 %, via the IV route. All ponies were submitted to endoscopy before and after each experimental phase. Additionally, in the first phase, urine analysis and determination of blood (globular volume, total leucocytes, total plasma proteins) and serum (urea and creatinine, aspartate aminotransferase, Ca +2 , P +3 , Cl - , Na + and K + ) variable values were performed before, during and after the experiment. In the first phase, only the two ponies treated with 6 mg kg -1 of monophenylbutazone presented ulcers in the aglandular region, along the margo plicatus, being more serious in the animal not given omeprazole. In the second phase, two animals also presented gastric ulcers, with one having received only the physiological solution. Statistical analysis showed that the appearance of ulcers was not influenced (P>0.05) by administration and dose of monophenylbutazone, nor by the presence of omeprazole. The effect of the former on the blood and serum variables was small or inexpressive. The results obtained allowed to conclude that the occurrence of gastric ulcer in the aglandular region of ponies was not influenced by application and dose of monophenylbutazone when administered during 12 days; ulcers in the aglandular region of ponies do not present clinical symptomatology; viiiponies tolerate the application of 6 mg kg -1 of monophenylbutazone during 12 days without the appearance of kidney lesion; the effect of monophenylbutazone on the blood and serum variables is small or absent, since, in general, such variables are kept within values considered as reference for the species; the relation of omeprazole with the presence or absence of ulcer was not confirmed. Keywords: nonsteroidal anti- inflammatory drugs, equine, gastric ulcers, kidney lesion, omeprazole.

Orientadores: Nelci Fenalti Hoehr, Alessandra Gambero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T07:18:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marostica_MartaContieri_M.pdf: 4600757 bytes, checksum: 4c8d07137661d1c9c63647c1959bc5bf (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O mecanismo pelo qual o H. pylori provoca a inflamação gástrica inclui a secreção de substâncias pró-inflamatórias pela bactéria e a estimulação da liberação de citocinas induzida pelo contato direto entre a bactéria e as células epiteliais gástricas. A resposta inicial à infecção por H. pylori é predominantemente neutrofílica e estes, liberam mediadores inflamatórios e enzimas proteolíticas que induzem o dano gástrico. Estresse oxidativo ocorre em pacientes infectados com H. pylori onde a expressão de enzimas como a óxido nítrico sintase induzida (iNOS), superóxido dismutase e catalase encontram-se aumentadas. A iNOS participa da resposta inflamatória e promove a apoptose de células na mucosa gástrica. Durante a infecção por H. pylori, observa-se níveis reduzidos da expressão de Bcl-2 e o aumento da expressão de Bax na mucosa gástrica, sugerindo que uma tendência pró-apoptótica na infecção. A erradicação pode ser alcançada pela combinação de antibióticos associada a uma droga anti-ácida. As duas maiores classes de inibidores de secreção ácida são: os inibidores de bomba protônica, como o omeprazol, e os antagonistas de receptor de histamina H2, como a ranitidina. Várias evidências experimentais têm mostrado que o omeprazol apresenta efeitos anti-ulcerogênicos adicionais. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do tratamento com omeprazol e ranitidina em um modelo animal de infecção por H. pylori, enfocando possíveis propriedades adicionais destes fármacos Para este estudo foram utilizados camundongos machos C57BL/6 com 4 semanas de idade. Os camundongos receberam por via oro-gástrica suspensão de H. pylori. Na 11ª semana de inóculo, os animais foram tratados (i.p.) com omeprazol (100 mg/kg), ranitidina (100 mg/kg) ou veículo (PBS) durante 7 dias sempre no mesmo horário. As duas drogas inibiram a produção de ácido gástrico no tratamento agudo, porém no tratamento por uma semana, apenas o omeprazol inibiu a secreção ácida. Os animais tratados com omeprazol apresentaram um aumento significativo nos níveis de colonização gástrica e elevado nível de MPO. Ambas as drogas diminuíram as lesões da mucosa provocada pela infecção. O tratamento com omeprazol restaurou a produção de Bcl-2 na mucosa gástrica e não alterou a produção de Bax. O omeprazol não protegeu a mucosa gástrica contra o dano ao DNA gerado pela infecção e o tratamento com ranitidina aumentou os níveis de dano oxidativo ao DNA. Não observamos a presença de propriedades anti-neutrofílicas, atribuídas ao omeprazol, após uma semana de tratamento, sugerindo que essas propriedades são restrita a ensaios in vitro. Entretanto, o omeprazol restaurou a produção de Bcl-2 na mucosa gástrica, sugerindo uma atividade anti-apoptótica dessa droga / Abstract: H. pylori induces gastric inflammation characterized by secretion of pro-inflammatory substances by bacteria and the stimulation of cytokine release by the gastric epithelial cells. The initial response to the H. pylori infection is predominantly by neutrophils and these cells liberate inflammatory mediators and enzymes that induce the gastric damage. Oxidative stress also occurs in infected patients where induced nitric oxide sintase (iNOS), superoxide dismutase and catalase expression were increased. Nitric oxide participates in the inflammatory response and promotes apoptosis of gastric mucosa cells. Eradication therapy can be achieved with antibacterial agents in association with anti-acid drugs. There are two major classes of gastric acid inhibitors: the proton pump inhibitors, such as omeprazole, and the histamine H2 receptor antagonists, such as ranitidine. Some experimental evidence demonstrates that omeprazole has additional pharmacological properties. Thus, the aim of this study was to evaluate the effect of omeprazole and ranitidine treatment on H. pylori-infected mice, focusing on possible additional pharmacological properties. For this study, male C57BL/6 mice that received H. pylori suspension were used. After the 11th week, the mice were treated intraperitoneally (i.p.) with omeprazole (100 mg/kg), ranitidine (100 mg/kg) or vehicle (PBS) for 7 days. Both drugs inhibited the gastric acid production after acute administration; however after one week of treatment just omeprazole inhibited gastric acid secretion. Omeprazole-treated mice presented an increase in H. pylori and MPO levels in gastric mucosa. Both drugs reduced the mucosa damage provoked by H. pylori infection. Omeprazole treatment restored the Bcl-2 production in the gastric mucosa and did not modify Bax production. Omeprazole did not reduce the DNA damage in the gastric mucosa while ranitidine treatment increased it. We conclude that some additional omeprazole-related properties, such as antineutrophil properties, were not observed in H. pylori-infected mice after one week of treatment. However, the antiapoptotic activity of omeprazole could be attributed to an ability to modify the protein expression of Bcl-2, decreased by H. pylori infection / Mestrado / Patologia Clinica / Mestre em Ciências Médicas

Introduction: Tacrolimus (TCR) is an immunosuppressant drug widely used in post-transplant organ recipients. Its absorption occurs principally in the duodenum and jejunum, its peak serum concentration is reached between 0.5 and 4 hours after ingestion (average 2 hours), and its absorption may be facilitated by an alkaline medium. Omeprazole (OMP) is a proton pump inhibitor in the parietal cells of the stomach that reaches maximum concentration between 0.5 and 3.5 hours after ingestion (average 2 hours), and because it reduces gastric acidity, it is capable of releasing more alkaline content into the duodenum. Pharmacological interactions between TCR and OMP are always described primarily with respect, to the common metabolic pathway (CYP3A4 and P-gp) used by both medications which may result in elevations of the TCR plasma concentration. The objectives of this study are to identify if there is an increase or decrease in the concentration of tacrolimus when administered after omeprazole and determine the frequency of subjects who increased in two hours, the bioavailability of tacrolimus after using omeprazole. Subjects and Methods: To that end, a double blind, placebo-controlled pilot study was performed in 28 post-renal transplant subjects regularly using TCR (mean: 0.08 ± 0.05 mg/kg/day BID) and OMP (20 mg/day MID). OMP or a placebo was ingested every morning at 6 am after fasting, and TCR was ingested 2 hours later at the doses reported above. Blood samples were taken 2 hours after the ingestion of TCR over 4 consecutive days under both the OMP and placebo regimes, being the subject the control same its. Serum concentrations of TCR were obtained using the chemiluminescent microparticle in human whole blood immunoassay method (CMIA, Abbott Lab., Brazil) after the subjects fasted for 3.5 hours. Results: Of the subjects evaluated, 18 (64.3%) were male, and 10 (35.7%) were female. In total, 8 (28.6%) of subjects received living donor kidneys, and 20 (71.4%) of subjects received cadaveric donor kidneys. The mean age of the subjects was 43 ± 13 years, and the average time since transplant was 41 ± 32 months. The mean serum creatinine and urea levels were 1.6 ± 0.5 mg/dL and 59 ± 27 mg/dL, respectively, and the mean hemoglobin level was 13.7 ± 1.9 g/dL. Conclusion: We found no significant difference in the mean serum TCR concentrations measured under the placebo or OMP regime (15.8 ± 8.7 ng/mL versus 15.7 ± 6.8 ng/mL, respectively, P=0.92). Compared with the placebo period, there was an increase in the serum TCR concentration greater than 10% in 13 subjects and greater than 20% in 10 subjects, which corresponded respectively, to 46.4% and 35.7% of the studied subjects. These data infer that OMP may increase the serum TCR concentration if ingested 2 hours before TCR ingestion, likely through alkalization of the intestinal contents. These frequency rates should be used to calculate the sample sizes needed for future studies with larger numbers of subjects. / Introdução: Tacrolimo (TCR) é uma droga imunossupressora amplamente utilizada em receptores de órgãos pós-transplantes. Sua absorção ocorre principalmente no duodeno e jejuno, sua concentração sérica máxima é atingida entre 0,5 e 4 horas após a ingestão (média de 2 horas) e sua absorção pode ser facilitada em meio alcalino. Omeprazol (OMP) é um inibidor da bomba de protóns das células parietais do estômago e atinge sua concentração máxima entre 0,5 e 3,5 horas após a ingestão (média de 2 horas) e uma vez que reduz a acidez gástrica, é capaz de libertar o conteúdo mais alcalino para o duodeno. Interações farmacológicas entre TCR e OMP são descritas principalmente com relação à via metabólica comum (CYP3A4 e P-gp) utilizadas por ambos medicamentos, que pode resultar em elevações da concentração plasmática do TCR. Os objetivos deste trabalho são: identificar se há aumento ou diminuição da concentração de tacrolimo quando administrado após o omeprazol e determinar a frequência de sujeitos que aumentaram, em 2 horas, a biodisponibilidade de tacrolimo após o uso do omeprazol. Sujeitos e Métodos: Foi realizado um estudo piloto, duplo cego, cruzado contra placebo em 28 sujeitos pós transplante renal em uso regular de TCR (média: 0,08 ± 0,05 mg/kg de peso/dia BID) e OMP (20 mg/dia MID). Diariamente o OMP ou placebo foram ingeridos em jejum pela manhã às 6:00 horas e, após 2 horas, o TCR foi ingerido nas doses relatadas anteriormente. As coletas de sangue foram realizadas 2 horas após a ingestão do TCR ao final de 4 dias consecutivos, tanto em regime de OMP quanto placebo, sendo o sujeito o controle dele mesmo. As concentrações séricas do TCR foram obtidas pelo método de imunoensaio quimioluminescente por micropartículas em sangue total humano (CMIA, Abbott Lab. do Brasil) em jejum alimentar de 3,5 horas. Resultados: Dos sujeitos avaliados: 18 (64,3%) eram do sexo masculino e 10 (35,7%) feminino; 8 (28,6%) obtiveram rim de doador vivo e 20 (71,4%) de doador cadáver. A idade média dos sujeitos foi 43 ± 13 anos e o tempo pós transplante de 41 ± 32 meses. As dosagens médias de creatinina e ureia séricas foram de 1,6 ± 0,5 mg/dL e 59 ± 27 mg/dL, respectivamente, e hemoglobina de 13,7 ± 1,9 g%. Quanto às médias das concentrações séricas de TCR obtidas em uso de placebo ou OMP não mostraram diferenças significativas (15,8 ± 8,7 ng/mL versus 15,7 ± 6,8 ng/mL; respectivamente; P=0,92). Conclusão: Em nosso estudo foi possível observar que a ingestão do OMP, previamente ao TCR, não alterou as concentrações séricas médias do referido imunossupressor; entretanto, em relação ao período placebo houve aumento na concentração sérica do TCR acima de 10% em 13 sujeitos e acima de 20% em 10 sujeitos, o que correspondeu a 46,4% e 35,7%, respectivamente, dos sujeitos de pesquisa. Estes dados inferem que o OMP, se ingerido 2 horas antes do TCR, pode aumentar a concentração sérica deste imunossupressor por provável alcalinização do conteúdo intestinal. Estes dados serão utilizados nos cálculos de tamanho amostral, para futuros estudos com maior número de sujeitos. / Mestre em Ciências da Saúde

Orientadores: Cesar Costapinto Santana, Quezia Bezerra Cass / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-13T23:12:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Freitas_AlessandraFerraiolode_D.pdf: 3156949 bytes, checksum: bbcb73e35f211a07f6b4ff3c0740867c (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi a síntese, em larga escala, da fase estacionária quiral tris(3,5-dimetilfenilcarbamato) de amilose e posterior investigação desta na separação preparativa dos enantiômeros do omeprazol por cromatografia líquida de alta eficiência. O carbamato de amilose, caracterizado por análise elementar e espectroscopia na região do infravermelho, apresentou valores experimentais de CHN próximos aos valores teóricos e absorções no infravermelho próximas a 1720 cm-1, referente ao grupo C=O, a 1220 cm-1, referente à ligação C-N e em 3294 cm-1, referente à ligação N-H. Experimentos de pulsos com soluções do traçador e da mistura racêmica, em diferentes temperaturas e vazões da fase móvel, foram realizados para avaliar a homogeneidade das colunas e sua influência no processo de separação, os coeficientes de dispersão axial e de tranferência de massa e o comportamento termodinâmico da adsorção. Uma análise estatística dos dados de porosidade foi realizada através dos testes t e F mostrando que, com um nível de confiança de 95%, apenas algumas colunas apresentam porosidades equivalentes embora os erros cometidos na determinação da porosidade total e no processo de empacotamento sejam os mesmos. A recuperação do enantiômero de interesse, S-(-)-omeprazol, variou de 10-100% quando a porosidade total sofreu variações da ordem de 3%. Os gráficos de van Deemter mostraram uma relação linear entre a altura equivalente a um prato e a velocidade superficial da fase móvel. O enantiômero S-(-)- apresentou maiores coeficientes de transferência de massa e o enantiômero R-(+)- maiores constantes de Henry. O fator de separação e a resolução apresentaram valores iguais a 1,30 e 1,96, respectivamente, a 40 °C e 1,0 mL/min. Observou-se um decréscimo nos valores desses parâmetros após um determinado tempo de uso da coluna. Os valores negativos de 0 S D e 0 H D indicam um aumento na ordem do sistema cromatográfico e que a adsorção dos enantiômeros da fase móvel na fase estacionária é entalpicamente favorável. O modelo de isoterma de Langmuir foi bem correlacionado aos dados experimentais de equilíbrio no intervalo de concentração analisado. Palavras-chave: fase estacionária quiral, omeprazol, cromatografia líquida de alta eficiência / Abstract: The aim of this work was the synthesis, in large scale, of the amylose tris(3,5- dimethylphenylcarbamate) chiral stationary phase and further evaluate in the omeprazole enantiomer preparative separation by high performance liquid chromatography. The amylose carbamate, characterized by elemental analysis and infrared spectroscopy, showed CHN experimental values close to theoretical values and infrared absorptions at 1720 cm-1 which is assigned to C=O group, at 1220 cm-1 which is assigned to C-N bond and at 3294 cm-1 which is assigned to N-H bond. Pulse experiments with solutions of the inert and racemic mixture at different flow rates and temperature were carried out to evaluate column homogeneity and its influence on separation process, axial dispersion and mass transfer coefficients and adsorption thermodynamic behavior. A statistical analysis of the porosity data was performed through of the t and F tests showing that with 95% confidence level only some columns presented equivalent porosities although the errors made in the total porosity determination and packing process are equal. The recovery of the interest enantiomer, S-(-)-omeprazole, varied of 10 until 100% when total porosity varied in the order of 3%. The van Deemter plots showed a linear dependence between height equivalent to a theoretical plate and mobile phase superficial velocity. S-(-)- enantiomer presented higher values of mass transfer coefficients and the enantiomer R-(+)-omeprazole presented higher values of Henry constants. The separation factor and resolution values were 1.30 and 1.96 at 40 °C and 1.0 mL/min, respectively. It was observed a decrease of these parameter values after a use time of the column. The negative values of 0 S D and 0 H D indicates an increase in the order of chromatographic system and that the enantiomer adsorption from the mobile phase to stationary phase is enthalpically favorable. The Langmuir isotherm model was well correlated to equilibrium experimental data in the range of investigated concentration. Key-words: chiral stationary phase, omeprazole, high performance liquid chromatography / Doutorado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Doutor em Engenharia Química

O citalopram (CITA), inibidor seletivo da recaptação da serotonina, é disponível na clínica como mistura racêmica dos enantiômeros (+)-(S) e (-)-(R) ou como enantiômero puro (+)-(S)-CITA. O CITA é metabolizado pelo CYP2C19, CYP2D6 e CYP3A ao desmetilcitalopram (DCITA) e pelo CYP2D6 ao didesmetilcitalopram. O estudo investiga a influência de inibidores enzimáticos no metabolismo enantiosseletivo do CITA em ratos e em voluntários sadios. Os ratos machos Wistar (n=6 para cada grupo) foram tratados com dose única de 20 mg/Kg de CITA (grupo controle) ou pré-tratados com 80 mg/Kg de quinidina (grupo quinidina), 10 mg/Kg de fluvoxamina (grupo fluvoxamina) ou 50 mg/Kg de cetoconazol (grupo cetoconazol). As amostras de sangue foram colhidas dos ratos até 20 h após a administração do CITA. Os voluntários sadios fenotipados como metabolizadores extensivos (EM) do CYP2C19 (omeprazol como fármaco marcador), EM do CYP2D6 (debrisoquina como fármaco marcador) e com atividade normal do CYP3A (midazolam como fármaco marcador) receberam dose única p.o. de 20 mg de CITA racêmico associado ou não ao omeprazol (20 mg/dia durante 18 dias). Os enantiômeros do CITA e do DCITA foram analisados no sistema LC-MS/MS, com a coluna quiral Chiralcel OD-R e fase móvel constituída por acetonitrila:metanol:água (30:30:40 v/v/v) contendo 0,05 % de dietilamina. O método foi linear no intervalo de concentrações de 0,1 20 ng de cada enantiômero do CITA e DCITA/mL de plasma humano e de de 0,1 500 ng de cada enantiômero do CITA e DCITA/mL de plasma de rato. Os coeficientes de variação obtidos nos estudos da precisão e a inexatidão foram inferiores a 15 % para plasma humano e plasma de ratos. A disposição cinética do CITA é enantiosseletiva nos ratos dos grupos controle (razão de AUCS/R de 0,4), quinidina (razão de AUCS/R de 0,5) e cetoconazol (razão de AUCS/R de 0,8). A inibição do CYP2D pela quinidina resultou em inibição do metabolismo do CITA e do DCITA de maneira não enantiosseletiva. A inibição do CYP2C pela fluvoxamina e do CYP3A pelo cetoconazol resultou em inibição somente do metabolismo do (+)-(S)-CITA. A disposição cinética do CITA em voluntários sadios é enantiosseletiva na ausência de tratamento com o omeprazol com observação de maior proporção plasmática do enantiômero (-)-(R)-CITA. A razão de AUCS/R obtida para o CITA foi de 0,56 e para o metabólito DCITA foi de 1,06. A administração de CITA racêmico a voluntários sadios em tratamento com o omeprazol exibe perda da enantiosseletividade na farmacocinética do CITA. A razão de AUCS/R foi de 0,96 para o CITA e de 0,92 para o DCITA. A administração de omeprazol em doses múltiplas a voluntários sadios inibe de maneira enantiosseletiva o metabolismo do eutômero (+)-(S)-CITA com aumento das concentrações plasmáticas em aproximadamente 140%. / Citalopram (CITA), a selective serotonin reuptake inhibitor, is available for clinical use as a racemic mixture of the (+)-(S) and (-)-(R) enantiomers or as the pure (+)-(S)-CITA enantiomer. CITA is metabolized by CYP2C19, CYP2D6 and CYP3A to demethylcitalopram (DCITA) and by CYP2D6 to didemethylcitalopram. The present study investigated the influence of enzyme inhibitors on the enantioselective metabolism of CITA in rats and healthy volunteers. Male Wistar rats (n=6 for each group) received a single dose of 20 mg/kg CITA (control group) or were pretreated with 80 mg/kg quinidine (quinidine group), 10 mg/kg fluvoxamine (fluvoxamine group), or 50 mg/kg ketoconazole (ketoconazole group). Blood samples were collected from the animals up to 20 h after the administration of CITA. Healthy volunteers phenotyped as extensive metabolizers of CYP2C19 (omeprazole as marker drug) and of CYP2D6 (debrisoquine as marker drug) and those with normal CYP3A activity (midazolam as marker drug) received a single oral dose of 20 mg racemic CITA combined or not with omeprazole (20 mg/day for 18 days). The CITA and DCITA enantiomers were analyzed by LC-MS/MS using a Chiralcel OD-R chiral column and a mobile phase of acetonitrile:methanol:water (30:30:40, v/v/v) containing 0.05% diethylamine. The method was linear in the concentration range of 0.1-20 ng of each CITA and DCITA enantiomer/mL human plasma and of 0.1-500 ng of each CITA and DCITA enantiomer/mL rat plasma. Accuracy and precision were below the acceptance limits of 15% for human and rat plasma. The kinetic disposition of CITA was enantioselective in rats of the control (AUCS/R ratio = 0.4), quinidine (AUCS/R ratio = 0.5) and ketoconazole (AUCS/R ratio = 0.8) groups. The inhibition of CYP2D by quinidine resulted in the non-enantioselective inhibition of the metabolism of CITA and DCITA. The inhibition of CYP2C by fluvoxamine and of CYP3A by ketoconazole only inhibited the metabolism of (+)-(S)-CITA. The kinetic disposition of CITA in healthy volunteers was enantioselective in the absence of treatment with omeprazole, with the observation of a higher plasma proportion of the (-)-(R)-CITA enantiomer. The AUCS/R ratio was 0.56 for CITA and 1.06 for the DCITA metabolite. The administration of racemic CITA to healthy volunteers treated with omeprazole showed a loss of enantioselectivity in the pharmacokinetics of CITA. The AUCS/R ratio was 0.96 for CITA and 0.92 for DCITA. The administration of multiple doses of omeprazole to healthy volunteers enantioselectively inhibited the metabolism of the (+)-(S)-CITA eutomer, with an approximately 140% increase of plasma concentrations

O nitrito pode ser reduzido a NO de forma dependente do pH ácido do estômago ou por enzimas com atividade nitrito-redutase. O tratamento com omeprazol, previne parte dos efeitos anti-hipertensivos do nitrito administrado por via oral por aumentar o pH gástrico. Contudo, nenhum estudo até o momento avaliou se, assim como o omeprazol, a ranitidina também é capaz de atenuar os efeitos anti-hipertensivos do nitrito de sódio por aumentar o pH gástrico. Nesse estudo, examinamos se a administração oral de ranitidina poderia prejudicar os efeitos anti-hipertensivos do nitrito de sódio administrados por via oral, por interferir na formação de NO e espécies nitrosiladas a partir do nitrito. A fim de verificar a influência da ranitidina no efeito hipotensor do nitrito de sódio, utilizamos animais tratados agudamente com LNAME pré-tratados com ranitidina, omeprazol e veículo e, posteriormente, com nitrito de sódio 15mg/kg. Como esperado, o tratamento com L-NAME resultou em aumento na pressão arterial média (PAM). O pH gástrico foi diferente entre os grupos, tendo um aumento no pH dos animais tratados com ranitidina e omeprazol, quando comparado ao veículo, e os tampões tinham o mesmo pH do veículo e das drogas. O nitrito de sódio exerceu efeitos anti-hipertensivos significativos nos grupos estudados. No entanto, foram observadas menores diminuições na PAM em ratos tratados com omeprazol e ranitidina em comparação aos ratos que receberam veículo. Esses achados foram associados a diminuições nas concentrações gástricas de NO e diminuições nos níveis plasmáticos de espécies nitrosiladas. Além disso, houve aumento nas concentrações de nitrito no estômago. Não foram observadas diferenças nas concentrações de nitrito no plasma. Além disso, não foram observadas diferenças nos níveis de NOx no plasma e estômago entre os grupos do estudo. Os animais tratados com tampão apresentaram resultados similares aos tratados com as drogas. Nossos resultados sugerem que a ranitidina, ao aumentar o pH gástrico, afeta as respostas anti-hipertensivas ao nitrito de sódio oral por diminuir a formação de NO e espécies nitrosiladas. Este fato é reforçado pelo aumento do nitrito no estômago, sugerindo uma diminuição na conversão de nitrito a NO e espécies nitrosiladas no ambiente gástrico. / Nitrite can be reduced to NO depending on acidic pH of the stomach or by enzymes with nitrite reductase activity. Treatment with omeprazole attenuates the antihypertensive effects of oral nitrite by increasing of gastric pH. However, studies are still necessary to further evaluate wheter ranitidine is also able to attenuate the antihypertensive effects of sodium nitrite by increasing gastric pH. In this study, we examined whether oral administration of ranitidine could impair oral antihypertensive effects of sodium nitrite by interfering with the formation of NO and nitrosylated species from nitrite. In order to analyze the influence of ranitidine under hypotensive effect of sodium nitrite, rats were treated with L-NAME and pretreated with ranitidine, omeprazole, vehicle or buffer, subsequently all the groups were treated with sodium nitrite 15 mg/kg. The L-NAME treatment increase mean arterial pressure (MAP). The gastric pH was different among the groups, there was an increased in rats gastric pH treated with ranitidine and omeprazole compared to the vehicle. The buffer group had the same pH of vehicle and drugs treatment. Sodium nitrite exerted significant antihypertensive effects in the groups studied. However, lesser decreases in MAP were observed in rats treated with omeprazole and ranitidine compared to rats that received vehicle. These findings were associated with a lower NO gastric concentrations as well as nitrosylated species plasma levels. In addition, there was an increased in nitrite concentrations in the stomach. No differences were observed in plasma nitrite levels. Moreover, there was not any significant difference in plasma and stomach NOx levels among the studied groups. The rats treated with buffer showed similar results to those treated with the drugs. Together these data demonstrated that ranitidine, through increased gastric pH, affects antihypertensive responses to oral sodium nitrite by reducing the formation of NO and nitrosylated species. This fact is reinforced by higher levels in nitrite concentrations in the stomach, thereby it suggests a lower conversion of nitrite to NO and nitrosylated species in the gastric environment.

O nitrito pode ser reduzido a NO de forma dependente do pH ácido do estômago ou por enzimas com atividade nitrito-redutase. O tratamento com omeprazol, previne parte dos efeitos anti-hipertensivos do nitrito administrado por via oral por aumentar o pH gástrico. Contudo, nenhum estudo até o momento avaliou se, assim como o omeprazol, a ranitidina também é capaz de atenuar os efeitos anti-hipertensivos do nitrito de sódio por aumentar o pH gástrico. Nesse estudo, examinamos se a administração oral de ranitidina poderia prejudicar os efeitos anti-hipertensivos do nitrito de sódio administrados por via oral, por interferir na formação de NO e espécies nitrosiladas a partir do nitrito. A fim de verificar a influência da ranitidina no efeito hipotensor do nitrito de sódio, utilizamos animais tratados agudamente com LNAME pré-tratados com ranitidina, omeprazol e veículo e, posteriormente, com nitrito de sódio 15mg/kg. Como esperado, o tratamento com L-NAME resultou em aumento na pressão arterial média (PAM). O pH gástrico foi diferente entre os grupos, tendo um aumento no pH dos animais tratados com ranitidina e omeprazol, quando comparado ao veículo, e os tampões tinham o mesmo pH do veículo e das drogas. O nitrito de sódio exerceu efeitos anti-hipertensivos significativos nos grupos estudados. No entanto, foram observadas menores diminuições na PAM em ratos tratados com omeprazol e ranitidina em comparação aos ratos que receberam veículo. Esses achados foram associados a diminuições nas concentrações gástricas de NO e diminuições nos níveis plasmáticos de espécies nitrosiladas. Além disso, houve aumento nas concentrações de nitrito no estômago. Não foram observadas diferenças nas concentrações de nitrito no plasma. Além disso, não foram observadas diferenças nos níveis de NOx no plasma e estômago entre os grupos do estudo. Os animais tratados com tampão apresentaram resultados similares aos tratados com as drogas. Nossos resultados sugerem que a ranitidina, ao aumentar o pH gástrico, afeta as respostas anti-hipertensivas ao nitrito de sódio oral por diminuir a formação de NO e espécies nitrosiladas. Este fato é reforçado pelo aumento do nitrito no estômago, sugerindo uma diminuição na conversão de nitrito a NO e espécies nitrosiladas no ambiente gástrico. / Nitrite can be reduced to NO depending on acidic pH of the stomach or by enzymes with nitrite reductase activity. Treatment with omeprazole attenuates the antihypertensive effects of oral nitrite by increasing of gastric pH. However, studies are still necessary to further evaluate wheter ranitidine is also able to attenuate the antihypertensive effects of sodium nitrite by increasing gastric pH. In this study, we examined whether oral administration of ranitidine could impair oral antihypertensive effects of sodium nitrite by interfering with the formation of NO and nitrosylated species from nitrite. In order to analyze the influence of ranitidine under hypotensive effect of sodium nitrite, rats were treated with L-NAME and pretreated with ranitidine, omeprazole, vehicle or buffer, subsequently all the groups were treated with sodium nitrite 15 mg/kg. The L-NAME treatment increase mean arterial pressure (MAP). The gastric pH was different among the groups, there was an increased in rats gastric pH treated with ranitidine and omeprazole compared to the vehicle. The buffer group had the same pH of vehicle and drugs treatment. Sodium nitrite exerted significant antihypertensive effects in the groups studied. However, lesser decreases in MAP were observed in rats treated with omeprazole and ranitidine compared to rats that received vehicle. These findings were associated with a lower NO gastric concentrations as well as nitrosylated species plasma levels. In addition, there was an increased in nitrite concentrations in the stomach. No differences were observed in plasma nitrite levels. Moreover, there was not any significant difference in plasma and stomach NOx levels among the studied groups. The rats treated with buffer showed similar results to those treated with the drugs. Together these data demonstrated that ranitidine, through increased gastric pH, affects antihypertensive responses to oral sodium nitrite by reducing the formation of NO and nitrosylated species. This fact is reinforced by higher levels in nitrite concentrations in the stomach, thereby it suggests a lower conversion of nitrite to NO and nitrosylated species in the gastric environment.

O NO regula diversos sistemas orgânicos. No sistema cardiovascular participa ativamente na regulação do tônus vascular entre outras funções. Disfunções na produção ou disponibilidade de NO podem comprometer sua atuação fisiológica. No âmbito vascular isto pode participar da hipertensão. Além da produção de NO pelas óxido nítrico sintases, outras vias paralela de produção fisiológica de NO a partir do nitrito tem sido descritas. O nitrito é o produto inicial da oxidação do NO, sendo posteriormente oxidado a nitrato. Sabe-se que estas três moléculas formam um ciclo dentro do organismo, onde o nitrato é excretado na saliva e convertido a nitrito pelas bactérias bucais.Este nitrito é deglutido com a saliva e exerce seus efeitos, através da conversão a NO. A conversão de nitrito a NO pode ocorrer de forma enzimática ou não enzimática. Como forma não enzimática, o nitrito é convertido a NO pela reação com H+. Esta redução ocorre principalmente no estômago. Esta tese visa elucidar possíveis mecanismos responsáveis pelos efeitos anti-hipertensivos do nitrito de sódio. Avaliamos ratos 2 rins 1 clipe (2R1C) tratados com nitrito e nitrato e verificamos os efeitos anti-hipertensivo destes. De forma Interessante, o aumento do pH gástrico com omeprazol impediu o efeito anti-hipertensivo tanto do nitrito quanto do nitrato. O omeprazol não gerou qualquer diferença na concentração plasmática de nitrito e nitrato. Foi verificado que o tratamento com nitrito e nitrato resultou em aumento das espécies nitrosiladas no plasma e este aumento foi impedido pelo omeprazol. Também testamos a influência do ciclo entero-salivar no efeito do nitrito e nitrato. Verificamos que o tratamento com enxaguante bucal levou ao bloqueio do efeito anti-hipertensivo do nitrato, mas não alterou este efeito nos animais tratados com nitrito. Em todas as abordagens experimentais o efeito anti-hipertensivo do nitrito apenas ocorreu quando houve aumento da concentração plasmática de espécies nitrosiladas. / Nitric Oxide plays many functional roles in physiological systems. In the cardiovascular system it participates in a unique way in the regulation of vascular tone among other functions. Dysfunctions in the production or availability of NO may compromise their physiological activity and participate in hypertension. Besides the production of NO by the nitric oxide synthase, other physiological pathways of NO production from nitrite have been described. The nitrite and nitrate are oxidation products of NO. Further nitrite is oxidized to nitrate. These three molecules are known to forma cycle in the body. Nitrate is excreted in saliva and reduced to nitrite by oral bacteria. Nitrite then is swallowed with the saliva and exerts its effects through conversion to NO. The conversion of nitrite to NO may occur by enzymatic or non-enzymatic manner. As a non-enzymatic way nitrite is reduced to NO by reaction with H+.This reaction occurs mainly in the stomach. This thesis aims to elucidate possible mechanisms responsible for the antihypertensive effects of sodium nitrite. We studied 2K1C rats treated with nitrite and nitrate and checked anti-hypertensive effects of these molecules. The increased gastric pH by omeprazole prevented the anti-hypertensive effect of nitrite and nitrate. Omeprazole did not cause any differences in plasma nitrite and nitrate. It was found that treatment with nitrite and nitrate resulted inincreased nitrosylated species in the plasma, and this increase was blocked by omeprazole. We also tested the influence of the entero-salivarycycle effect of nitrite and nitrate. We found that treatment with mouthwash blunted the antihypertensive effect of nitrate but this effect did not change in animals treated with nitrite. Interestingly in all experimental approaches the anti-hypertensive effect of nitrite only occurred when there was an increase in the plasma concentration of nitrosylated species

O NO regula diversos sistemas orgânicos. No sistema cardiovascular participa ativamente na regulação do tônus vascular entre outras funções. Disfunções na produção ou disponibilidade de NO podem comprometer sua atuação fisiológica. No âmbito vascular isto pode participar da hipertensão. Além da produção de NO pelas óxido nítrico sintases, outras vias paralela de produção fisiológica de NO a partir do nitrito tem sido descritas. O nitrito é o produto inicial da oxidação do NO, sendo posteriormente oxidado a nitrato. Sabe-se que estas três moléculas formam um ciclo dentro do organismo, onde o nitrato é excretado na saliva e convertido a nitrito pelas bactérias bucais.Este nitrito é deglutido com a saliva e exerce seus efeitos, através da conversão a NO. A conversão de nitrito a NO pode ocorrer de forma enzimática ou não enzimática. Como forma não enzimática, o nitrito é convertido a NO pela reação com H+. Esta redução ocorre principalmente no estômago. Esta tese visa elucidar possíveis mecanismos responsáveis pelos efeitos anti-hipertensivos do nitrito de sódio. Avaliamos ratos 2 rins 1 clipe (2R1C) tratados com nitrito e nitrato e verificamos os efeitos anti-hipertensivo destes. De forma Interessante, o aumento do pH gástrico com omeprazol impediu o efeito anti-hipertensivo tanto do nitrito quanto do nitrato. O omeprazol não gerou qualquer diferença na concentração plasmática de nitrito e nitrato. Foi verificado que o tratamento com nitrito e nitrato resultou em aumento das espécies nitrosiladas no plasma e este aumento foi impedido pelo omeprazol. Também testamos a influência do ciclo entero-salivar no efeito do nitrito e nitrato. Verificamos que o tratamento com enxaguante bucal levou ao bloqueio do efeito anti-hipertensivo do nitrato, mas não alterou este efeito nos animais tratados com nitrito. Em todas as abordagens experimentais o efeito anti-hipertensivo do nitrito apenas ocorreu quando houve aumento da concentração plasmática de espécies nitrosiladas. / Nitric Oxide plays many functional roles in physiological systems. In the cardiovascular system it participates in a unique way in the regulation of vascular tone among other functions. Dysfunctions in the production or availability of NO may compromise their physiological activity and participate in hypertension. Besides the production of NO by the nitric oxide synthase, other physiological pathways of NO production from nitrite have been described. The nitrite and nitrate are oxidation products of NO. Further nitrite is oxidized to nitrate. These three molecules are known to forma cycle in the body. Nitrate is excreted in saliva and reduced to nitrite by oral bacteria. Nitrite then is swallowed with the saliva and exerts its effects through conversion to NO. The conversion of nitrite to NO may occur by enzymatic or non-enzymatic manner. As a non-enzymatic way nitrite is reduced to NO by reaction with H+.This reaction occurs mainly in the stomach. This thesis aims to elucidate possible mechanisms responsible for the antihypertensive effects of sodium nitrite. We studied 2K1C rats treated with nitrite and nitrate and checked anti-hypertensive effects of these molecules. The increased gastric pH by omeprazole prevented the anti-hypertensive effect of nitrite and nitrate. Omeprazole did not cause any differences in plasma nitrite and nitrate. It was found that treatment with nitrite and nitrate resulted inincreased nitrosylated species in the plasma, and this increase was blocked by omeprazole. We also tested the influence of the entero-salivarycycle effect of nitrite and nitrate. We found that treatment with mouthwash blunted the antihypertensive effect of nitrate but this effect did not change in animals treated with nitrite. Interestingly in all experimental approaches the anti-hypertensive effect of nitrite only occurred when there was an increase in the plasma concentration of nitrosylated species