Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. / La infección por parvovirus canino tipo 2 (CPV-2) es una de las principales causas de enteritis hemorrágica en perros de todo el mundo y contar con una técnica de diagnóstico que sea altamente sensible es fundamental para Médicos Veterinarios, dueños y criadores de perros. En este trabajo se implementó un protocolo que utiliza la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) convencional para detectar un fragmento del ADN de CPV-2 a partir de heces de perros con signología clínica correspondiente a parvovirosis canina. En total se recolectaron y analizaron 12 muestras de heces que resultaron positivas con la PCR convencional, lo que fue confirmado mediante la secuenciación de los fragmentos obtenidos y contrastados con las secuencias de las distintas variantes de CPV-2 descritas en la base de datos GenBank. Las mismas muestras fueron analizadas con una prueba rápida, que corresponde a una técnica de inmunocromatografía (IC) de uso rutinario en la consulta veterinaria. En este caso de las 12 muestras analizadas, sólo un 41,7% resultaron positivas, evidenciando una menor sensibilidad que la técnica molecular para el diagnóstico de parvovirus canino. Adicionalmente, se hizo un análisis de las secuencias nucleotídicas obtenidas arrojando una variabilidad promedio de 0,7%. Los resultados de este trabajo permiten establecer que la PCR convencional es una técnica de diagnóstico recomendable para la detección de parvovirus canino, no así las pruebas rápidas utilizadas en la consulta veterinaria que en este y otros estudios han mostrado constantemente su baja sensibilidad. Es importante destacar que el presente trabajo es la primera aproximación molecular al parvovirus canino tipo 2 en Chile / Infection with canine parvovirus type 2 (CPV-2) is one of the main causes of hemorrhagic enteritis in dogs worldwide and having a diagnostic technique that is highly sensitive is essential for veterinarians, dog owners and breeders. In this work, a protocol was implemented that uses the conventional Polymerase Chain Reaction (PCR) to detect a CPV-2 DNA fragment from feces of dogs with clinical signology corresponding to canine parvovirus. In total, 12 stool samples that were positive with conventional PCR were collected and analyzed, which was confirmed by sequencing the fragments obtained and contrasted with the sequences of the different variants of CPV-2 described in the GenBank database. The same samples were analyzed with a rapid test, which corresponds to a routine immunochromatography (IC) technique in the veterinary practice. In this case of the 12 samples analyzed, only 41.7% were positive, showing a lower sensitivity than the molecular technique for the diagnosis of canine parvovirus. Additionally, an analysis of the nucleotide sequences obtained was made, yielding an average variability of 0.7%. The results of this work allow to establish that conventional PCR is a recommended diagnostic technique for the detection of canine parvovirus, but not the rapid tests used in the veterinary practice that in this and other studies have consistently shown low sensitivity. It is important to note that the present work is the first molecular approach to canine parvovirus type 2 in Chile

A parvovirose canina é uma doença causada pelo parvovírus canino, um vírus pertencente à família Parvoviridae. A doença causa quadros agudos de gastroenterite hemorrágica altamente contagiosa, e é responsável por altas taxas de morbidade e mortalidade, principalmente, em cães jovens. O principal agente etiológico desencadeador da doença é o parvovírus canino tipo 2 (CPV 2). As vacinas parenterais comercializadas contra esse vírus não são adequadas para filhotes com menos de 45 dias de idade. Além disso, essa doença não apresenta um tratamento especifico, sendo a profilaxia de grande importância. O objetivo desse trabalho foi desenvolver um antígeno de entrega vacinal de modo a proteger o animal antes do seu desenvolvimento imunológico. Através do aumento da produção de IgA total a partir da primeira imunização e da resposta sistêmica de IgG especifica a partir da segunda imunização em camundongos, foi possível verificar que as superfícies de mucosa são ativas imunologicamente, desde o nascimento do animal como também capazes de estimular tanto a resposta local quanto a sistêmica em camundongos imaturos e adultos. No intuito de proteger também esses jovens animais, a imunização por via sublingual mostrou-se uma técnica promissora. Em comparação com os grupos de camundongos imunizados com a amostra vacinal e o hidrogel líquido, o grupo que recebeu o hidrogel liofilizado teve uma melhor resposta imunológica, uma vez que a técnica de liofilização aumentou a característica de mucoadesividade da quitosana e consequentemente aumentou o tempo de permanência do hidrogel na mucosa sublingual. / Canine parvovirus is a virus that belongs to the Parvoviridae family. The disease causes acute hemorrhagic gastroenteritis, which is highly contagious and responsible for high rates of morbidity and mortality, especially in puppies. The main etiologic agent of this disease is canine parvovirus type 2 (CPV 2). Nowadays, there is a commercial parenteral vaccine against this virus, but it is not suitable for puppies under 45 days old. This disease has no specific treatment and the prophylaxis has a great importance. The aim of this study was to develop a sublingual delivery vaccine that protect the animals before their 45 days. By increasing the total IgA production from the first immunization and systemic specific IgG response after the second immunization in mice, it demonstrated that mucosal surfaces are immunologically active since birth and capable of stimulating both systemic and local response in puppies and adults. In order to protect these puppies, mucosal immunization is a promising technique. The group that received lyophilized hydrogel had a better immune response, since the lyophilization technique increased the mucoadhesive of chitosan and consequently the residence time of the lyophilized hydrogel at sublingual mucosa.

A parvovirose canina é uma doença causada pelo parvovírus canino, um vírus pertencente à família Parvoviridae. A doença causa quadros agudos de gastroenterite hemorrágica altamente contagiosa, e é responsável por altas taxas de morbidade e mortalidade, principalmente, em cães jovens. O principal agente etiológico desencadeador da doença é o parvovírus canino tipo 2 (CPV 2). As vacinas parenterais comercializadas contra esse vírus não são adequadas para filhotes com menos de 45 dias de idade. Além disso, essa doença não apresenta um tratamento especifico, sendo a profilaxia de grande importância. O objetivo desse trabalho foi desenvolver um antígeno de entrega vacinal de modo a proteger o animal antes do seu desenvolvimento imunológico. Através do aumento da produção de IgA total a partir da primeira imunização e da resposta sistêmica de IgG especifica a partir da segunda imunização em camundongos, foi possível verificar que as superfícies de mucosa são ativas imunologicamente, desde o nascimento do animal como também capazes de estimular tanto a resposta local quanto a sistêmica em camundongos imaturos e adultos. No intuito de proteger também esses jovens animais, a imunização por via sublingual mostrou-se uma técnica promissora. Em comparação com os grupos de camundongos imunizados com a amostra vacinal e o hidrogel líquido, o grupo que recebeu o hidrogel liofilizado teve uma melhor resposta imunológica, uma vez que a técnica de liofilização aumentou a característica de mucoadesividade da quitosana e consequentemente aumentou o tempo de permanência do hidrogel na mucosa sublingual. / Canine parvovirus is a virus that belongs to the Parvoviridae family. The disease causes acute hemorrhagic gastroenteritis, which is highly contagious and responsible for high rates of morbidity and mortality, especially in puppies. The main etiologic agent of this disease is canine parvovirus type 2 (CPV 2). Nowadays, there is a commercial parenteral vaccine against this virus, but it is not suitable for puppies under 45 days old. This disease has no specific treatment and the prophylaxis has a great importance. The aim of this study was to develop a sublingual delivery vaccine that protect the animals before their 45 days. By increasing the total IgA production from the first immunization and systemic specific IgG response after the second immunization in mice, it demonstrated that mucosal surfaces are immunologically active since birth and capable of stimulating both systemic and local response in puppies and adults. In order to protect these puppies, mucosal immunization is a promising technique. The group that received lyophilized hydrogel had a better immune response, since the lyophilization technique increased the mucoadhesive of chitosan and consequently the residence time of the lyophilized hydrogel at sublingual mucosa.