Submitted by DAMAZIO CAMPOS DE SOUZA null (damazio.souza@hotmail.com) on 2016-04-12T23:12:27Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Damazio_Campos_de_Souza.pdf: 898877 bytes, checksum: a0045eafafbd10a58da0402659d73135 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-04-15T19:09:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 souza_dc_me_jabo.pdf: 898877 bytes, checksum: a0045eafafbd10a58da0402659d73135 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-15T19:09:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 souza_dc_me_jabo.pdf: 898877 bytes, checksum: a0045eafafbd10a58da0402659d73135 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A determinação do perfil bioquímico sérico é uma excelente ferramenta para identificar eventuais alterações fisiológicas pertinentes à saúde e ao bem-estar do bezerro, sobretudo no período neonatal. Deste modo objetivou-se com o presente estudo avaliar o perfil bioquímico sérico de bezerros bubalinos sadios no período neonatal. Foram examinadas amostras de soro sanguíneo de 50 animais da raça Murrah oriundos de fazenda produtora de leite situada no município de Alambari - SP. Os animais foram distribuídos em três grupos experimentais, de acordo com o número de parições de suas mães, sendo 15 bezerros filhos de búfalas primíparas (G1), 19 bezerros filhos de búfalas multíparas com duas a quatro parições (G2) e 16 bezerros filhos de búfalas multíparas com cinco a 14 parições (G3). As colheitas de amostras de sangue venoso foram realizadas nos seguintes momentos: ao nascimento, antes da ingestão do colostro (M0), às 24h (M1), 48h (M2) e 72h após o nascimento (M3) e aos 7 (M4), 14 (M5), 21 (M6) e 30 dias de idade (M7), para determinação das atividades séricas das enzimas gamaglutamiltransferase (GGT), fosfatase alcalina (ALP), aspartato aminotransferase (AST) e creatina quinase (CK) e das concentrações séricas de proteína total, albumina, globulinas, ferro, cálcio total, cálcio ionizado, fósforo, sódio e potássio. As concentrações séricas de imunoglobulina G (IgG), foram determinadas pela técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Os resultados foram avaliados por análise de variância (ANOVA), usando o teste de Tukey para comparação entre as médias, a significância foi verificada a 5% de probabilidade. O fator etário influenciou todos os parâmetros bioquímicos estudados, com exceção das concentrações séricas de cálcio ionizado e de potássio somente nos bezerros dos grupos G1 e G3. A ordem de parições das búfalas influenciou as atividades séricas de AST e GGT e as concentrações séricas de proteína total, albumina, globulinas e IgG dos bezerros bubalinos. A atividade sérica elevada de ALP nos dois primeiros dias após o nascimento indica a possível utilização desse parâmetro como método indireto de avaliação da transferência de imunidade passiva (TIP). As concentrações de ferro sérico dos bezerros bubalinos apresentaram valores elevados, contraindicando-se a suplementação do ferro na espécie na fase neonatal. / The serum biochemical profile is an excellent tool to identify any relevant physiological changes to health and calf welfare, especially in the neonatal period. This study aimed to evaluate serum biochemical profile of healthy buffalo calves in the neonatal period. Serum samples from 50 Murrah animals from a milk farm in the city of Alambari – SP were examinated. The animals were divided into three groups according to the number of parities of their mothers, 15 calves born from primiparous buffaloes (G1), 19 calves born from multiparous buffaloes with two to four parities (G2) and 16 calves from multiparous buffaloes with five to 14 parities (G3). The venous blood samples were taken at the following times: at birth, before the ingestion of colostrum (M0) at 24h (M1), 48h (M2) and 72h after birth (M3) and 7 (M4), 14 (M5), 21 (M6) and 30 days of age (M7) for determination of serum activities of gamma glutamyl transferase enzymes (GGT), alkaline phosphatase (ALP), aspartate aminotransferase (AST), creatine kinase (CK), and serum concentrations of total protein, albumin, globulin, iron, total calcium, ionized calcium, phosphorus, sodium, potassium. Serum concentrations of immunoglobulin G (IgG) were determined by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The results were evaluated by analysis of variance (ANOVA) using the Tukey’s test to compare means, significance was observed at 5% probability. The age factor influenced all biochemical parameters, except for ionized calcium and potassium concentrations only from calves of G1 and G3 groups. The calving order of buffalo influenced AST, GGT, serum total protein, albumin, globulin and IgG of buffalo calves. The high serum ALP activity in the first two days after birth indicates the possible use of this parameter as an indirect method of assessing the passive immunity transfer. The serum iron concentrations of buffalo calves showed high values, the supplementation of this mineral is contraindicated in buffalo calves on the neonatal period. / FAPESP: 2014/09246-5

O colostro bovino contém fatores imunológicos, como imunoglobulinas, leucócitos e citocinas, absorvidos pela mucosa intestinal do neonato até 48 horas de vida, no entanto, pouco se conhece sobre a função de alguns desses componentes, como as citocinas, participantes da resposta imune inata e adaptativa. Acredita-se que estas substâncias possuem papel importante na imunidade dos neonatos nos seus primeiros dias de vida. Assim, os objetivos específicos desta pesquisa foram: determinar as concentrações das citocinas IL-1&#946, IL-6, IFN-γ e TNF-α no soro sanguíneo e colostro de fêmeas bovinas da raça Holandesa; verificar a liberação de citocinas pelas células mononucleares do colostro e sangue bovino "in vitro" antes e após a estimulação com Escherichia coli enterotoxigênica (ECET); avaliar a transferência das citocinas IL-1β, IL-6 e TNF-α do colostro aos bezerros neonatos, por meio da determinação das concentrações destas citocinas no soro sanguíneo dos bezerros, durante os quinze primeiros dias de vida. O trabalho foi realizado em duas etapas, em duas propriedades distintas: (1) avaliação do soro sanguíneo e colostro de primeira ordenha proveniente de 22 fêmeas; (2) avaliação das citocinas sanguíneas de 11 bezerros, antes e após a mamada de colostro. Nesta pesquisa foi possível determinar as medianas da concentração de citocinas IL-1β, IL-6, IFN-γ e TNF-α no colostro bovino e soro sanguíneo, correspondente a 70,5 e 41,5; 86,1 e 13,5; 41 e 57,9; 139,9 e 20,8 pg/mL, respectivamente, verificando menores valores de IFN-γ no colostro e TNF-α e IL-6 no soro sanguíneo. Observou-se diferença entre as citocinas no colostro e soro sanguíneo para a TNF-α. Observou-se produção de citocinas pelas células do colostro e sangue das mães mediante liberação espontânea e pela ECET com tendência ao aumento dessa produção entre os períodos de incubação celular e pela estimulação com ECET. A avaliação do soro dos bezerros mostrou ausência das citocinas IL-1β, IL-6 e TNF-α antes da ingestão de colostro, que atingiram pico após 48 horas de vida. Os valores médios das concentrações de citocinas presentes no soro das vacas e novilhas foram de 98,3; 88,4; 53,5 e 235,9 pg/mL e 144,5; 94,5; 83,9 e 116,2 pg/mL, para IL-1β, IL-6, IFN-γ e TNF-α, respectivamente. Os valores médios das concentrações de citocinas (pg/mL) presentes no colostro das vacas e novilhas foram de 97,4; 21,3; 143,3 e 35,1 pg/mL e 69,5; 6,4; 51,9 e 16,32 pg/mL, para as citocinas IL-1β, IL-6, IFN-γ e TNF-α, respectivamente. Quando se comparou os dois grupos analisados verificou-se que os valores médios de IFN-γ e TNF-α foram significativamente maiores nas vacas. Assim, com base nos resultados desta pesquisa foi possível: (a) determinar a concentração de citocinas do soro sanguíneo e colostro de fêmeas bovinas; (b) verificar a produção de citocinas pelas células do soro e colostro das vacas, verificando-se diferentes perfis nestas duas regiões; (c) verificar a absorção das citocinas do colostro pelo neonato bovino; (d) verificar que as vacas possuem maiores concentrações de citocinas IFN-γ e TNF-α no colostro, quando comparadas às novilhas; (e) não há diferenças entre a concentração das citocinas do colostro obtidas em diferentes quartos mamários. / Bovine colostrum contains immunological factors, such as immunoglobulins, leukocytes and cytokines, which are absorbed by the intestinal mucous membrane of the neonate up to 48 hours of life. However, little is known about the function of some of these components, such as cytokines, which take part in innate and adaptive immune responses. It is believed that these substances have important roles in neonate immunity on their first days of life. Therefore, the specific objectives of this study were: to determine the concentration of cytokines IL-1β, IL-6, IFN-γ and TNF-α in serum and colostrum of Holstein cows; to assess the in vitro release of cytokines by mononuclear cells of colostrum and blood before and after stimulation with enterotoxigenic Escherichia coli (ECET); to evaluate IL-1β, IL-6 and TNF-α transfer from colostrum to neonate calves by determining cytokine concentrations in calf blood during the first 15 days of life. The study was carried out in two stages, in different farms: (1) evaluation of blood and first milking colostrum in 22 females; (2) evaluation of blood cytokines of 11 calves, before and after colostrum intake. In this study, it was possible to determine the medians of IL-1β, IL-6, IFN-γ and TNF-α concentration in blood and colostrum as equal to 70.5 and 41.5; 86.1 and 13.5; 41 and 57.9; 139.9 and 20.8 pg/mL, respectively. The lowest values of IFN-γ were observed in colostrum, and of TNF-α and IL-6, in serum. TNF-α concentration was different in serum and in blood. It was observed colostrum and blood cells of the cows produced cytokines spontaneously and by means of ECET, with a tendency to increase production in periods of cell incubation and stimulation with ECET. Evaluation of calf serum showed absence of cytokines IL-1β, IL-6 and TNF-α before colostrum ingestion, and these cytokines reached a peak after 48 hours of life. Mean values for cytokine concentration in the serum of cows and heifers were 98.3; 88.4; 53.5 and 235.9 pg/mL, and 144.5; 94.5; 83.9 and 116.2 pg/mL, for IL-1β, IL-6, IFN-γ and TNF-α, respectively. Mean values for cytokine concentration in the colostrum of cows and heifers were 97.4; 21.3; 143.3 and 35.1 pg/mL, and 69.5; 6.4; 51.9 and 16.32 pg/mL, for IL-1β, IL-6, IFN-γ and TNF-α, respectively. When the two groups were analyzed, it was observed that mean de IFN-γ and TNF-α were significantly greater in the cows. Thus, based on the results of this study, it was possible to: (a) determine the concentration of cytokines in serum and colostrum of cows; (b) assess cytokine production by cells of cow serum and colostrum, observing different profiles in the two samples; (c) observe cytokine absorption from colostrum by the calves; (d) assess that cows show greater concentrations of IFN-γ and TNF-α in the colostrum, when compared with heifers; (e) that there are no differences between cytokine concentrations observed in the different quarters.

Orientador: Roberto Calderon Gonçalves / Banca: Nereu Carlos Prestes / Banca: Francisco Leydson Formiga Feitosa / Resumo: O Brasil é líder mundial na produção de embriões por fertilização in vitro (FIV). A FIV contribui para o melhoramento genético do rebanho, contudo, alguns trabalhos indicam que os bezerros nascidos por FIV são mais susceptíveis à doença neonatal e têm maiores taxas de mortalidade neonatal quando comparados a outras técnicas de produção de bezerros como a inseminação artificial (IA) e monta natural. Portanto, o objetivo desta pesquisa foi avaliar a influência da forma de concepção, FIV e IA, na sanidade e desenvolvimento de bezerros Brahman nascidos por FIV (Grupo FIV, n = 80) e IA (Grupo IA, n = 20) do nascimento à desmama. Todos os bezerros amostrados eram provenientes de uma mesma propriedade e mamaram o colostro de forma direta ou indireta até seis horas após o nascimento. Amostras sanguíneas destinadas à determinação da atividade sérica da gamaglutamiltransferase (GGT), da gamaglobulina e da concentração sérica de proteína total (PT) foram colhidas de todos os bezerros às 24 horas de vida com o objetivo de avaliar a transferência de imunidade passiva. A duração da gestação e o peso ao nascimento foram significantemente maiores nos bezerros do grupo FIV. Contudo, não foi observada diferença estatística no peso à desmama nos bezerros dois grupos estudados. Também não foi evidenciada diferença significante na ocorrência de partos distócicos, de assistência à ingestão do colostro, de falha de transferência de imunidade passiva (FTIP) e de enfermidades do nascimento à desmama entre os bezerros dos grupos FIV e IA. O peso ao nascimento, a forma de ingestão do colostro e a ocorrência de distocia não foram correlacionados com a FTIP em nenhum dos grupos estudados. Portanto, nas condições estudadas a forma de concepção, FIV ou IA, não influenciou a sanidade e desenvolvimento de bezerros da raça Brahman, e nem interferiu na aquisição de imunidade passiva / Abstract: Recent data ranked Brazil as the leading country in the production of in vitro-fertilization (IVF) bovine embryos. IVF embryos contributes to the genetic improvement, however, some reports indicate that calves derived from IVF embryos are more susceptible to neonatal disease and have higher rates of neonatal mortality than calves produced through artificial insemination (AI) or natural mating. Therefore the goal of the present study was to evaluate the influence of conception method, IVF embryos and AI, in health and development of Brahman calves derived from IVF (Group IVF, n = 80) and from AI (Group AI, n = 20) from birth to weaning. All of the calves were from same farm and received colostrum within 6 hours of birth. Blood samples were obtained from calves at 24 hours of life to determine the activity gammaglutamyltransferase (GGT) and gammaglobulin and serum total protein (PT) concentration to evaluate passive transfer of maternal immunity. Gestation period and birth weight were significantly higher in claves from IVF group. However, there was no statistically difference in the weaning weight calves in both groups. The occurrence of dystocia, to assistance to provide colostrums, passive transfer of maternal immunity and of diseases from birth to weaning was not significantly different in the two groups. No correlation was observed among birth weight, the form of colostrum ingestion and dystocia occurrence, and passive immunity failure in both groups. Therefore, under study conditions the conception method, IVF or AI, did not influence the health and performance of Brahman calves, and not interfere with the acquisition of passive immunity / Mestre

Foi avaliado o desempenho de vacina de subunidade e bactéria completa antileptospirose em matrizes suínas analisando-se os níveis de anticorpos aglutinantes e neutralizantes. A intensidade e duração da imunidade passiva nos leitões, e ativa nas matrizes suínas foi investigada pela soroaglutinação microscópica (SAM) e teste de inibição de crescimento de leptospiras (ICL) em grupos de animais tratados com vacina experimental de subunidade e leptospira completa produzida com a mesma estirpe e com duas bacterinas comerciais. O experimento foi realizado em duas fases, na primeira, sendo utilizadas 33 matrizes. Os animais foram divididos em três grupos: grupo 1 (n=11):controle; grupo 2 (n=11): recebeu duas doses, em intervalo de 30 dias, de vacina anti-leptospirose constituída da subunidade de lipopolissacarídeo (LPS) de leptospira sorovar Canicola. Grupo 3 (n=11): recebeu duas doses, em intervalo de 30 dias, de uma bacterina de bactérias completas antileptospirose. Na segunda fase foram utilizadas 24 matrizes. Os animais foram divididos em três grupos: Grupo A (n=08): recebeu duas doses, em intervalo de 30 dias, de bacterina comercial anti-leptospirose A. Grupo B (n=08): recebeu duas doses, em intervalo de 30 dias, de bacterina comercial antileptospirose B e Grupo C (n=08): controle. Tanto na primeira fase como na segunda, foram realizados exames de SAM e de ICL nas matrizes e nos seus leitões, a fim de se avaliar títulos de aglutininas e de anticorpos neutralizantes obtidos respectivamente com a imunidade ativa e passiva. Os resultados das comparações dos títulos de anticorpos aglutinantes dos grupos tratados, 2 e 3, na primeira fase, apresentaram diferença aos 32 e 68 dias pós-vacinação. Não houve diferença para os anticorpos neutralizantes. No 30º dia de vida não foram detectados anticorpos aglutinantes nos leitões das matrizes vacinadas com LPS, e para anticorpos neutralizantes, os títulos médios foram de 0,832 no grupo 2 e 0,930 no grupo 3. Os títulos de anticorpos aglutinantes dos grupos A e B, na segunda fase, apresentaram diferença entre os sorovares das bacterinas comerciais, aos 60, 90 e 120 dias pós-vacinação. Aos 60 dias, houve diferença para o sorovares Copenhageni e Icterohaemorrhagiae. Em relação aos níveis de anticorpos neutralizantes das matrizes para o sorovar Hardjo, houve persistência de títulos de anticorpos neutralizantes nas sete avaliações realizadas nas duas bacterinas comerciais empregadas, e, em títulos baixos. Nos leitões foi constatada a transferência da imunidade colostral, somente com a bacterina comercial B confirmada pela presença de anticorpos aglutinantes, aos três e oito dias de vida. A vacina de LPS de bactéria completa apresentou perspectivas para emprego na prevenção da leptospirose suína. Houve diferença e baixa resposta imunológica nas bacterinas comerciais A e B anti-leptospirose, principalmente, para os sorovares Canicola, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae e Pomona, Copenhageni para a bacterina comercial B. A imunidade passiva, medida por anticorpos aglutinantes conferida pelas bacterinas comerciais A e B, foi de curta duração. / It was evaluated the performance of a subunit and whole culture bacterin vaccines against leptospirosis in sows by the analysis of agglutinating and neutralizing antibodies level. The intensity and duration of passive immunity in the offspring and active immunity in sows were investigated with microscopic agglutination test (MAT) and leptospira growth inhibition (LGI) in groups of animals treated with experimental subunit vaccine and whole bacterin produced with the same serotype and with two commercial bacterin vaccines. The experiment was performed in two phases. First, 33 sows were divided into three groups of eleven animals each: group 1 was the control and group 2 received two doses with 30 days interval of anti-leptospirosis lipopolysaccharid (LPS) subunit vaccine serovar Canicola and group 3 received two doses with 30 days interval of whole leptospira bacterin. On a second phase 24 sows were divided into three groups of eight animals each: group A received two doses with 30 days interval of the commercial leptospira bacterin A. Group B received two doses with 30 days interval of a commercial leptospira bacterin B and group C was the control. Either in the first phase as in the second one, MAT and LGI were performed in the sows and its piglets in order to evaluate titers of agglutinins and neutralizing antibodies obtained with active and passive immunities respectively. The comparison of agglutinating titers of groups 2 and 3 at the first phase showed differences on days 32 and 68 post vaccination. There was no difference in relation to neutralizing antibodies. Agglutinating antibodies were not detected on thirty days old piglets, born from sows vaccinated with LPS, and for neutralizing antibodies, mean titers were 0.832 on group 2 and 0.930 on group 3. Agglutinating antibodies titers of groups A and B, on the second phase, presented differences between the commercial vaccines serovars at 60, 90 and 120 post vaccination days. At 60 days, there were differences for serovars Copenhageni and Icterohaemorrhagiae. There was persistency of low titers of neutralizing antibodies to serovar Hardjo in the sows, for the seven measurements performed with the two commercial bacterins. It was observed colostral immunity transfer to piglets with three and eight days old only for commercial vaccine B, with detectable agglutinating antibodies. LPS bacteria vaccine presented perspectives to prevent swine leptospirosis. There was difference and low immunological response for commercial vaccines A and B, especially for serovars Canicola, Grippotyphosa, Icterohaemorrhagiae and Pomona; and for serovar Copenhageni only for commercial vaccine B. The passive immunity conferred by commercial vaccines A and B and measured by agglutinating antibodies had low duration.

O nascimento de um bezerro é marcado pela passagem de um meio estéril, para um ambiente contaminado, aliado o fato da placentação (sindesmocorial), que não permite a passagem de anticorpos durante a gestação e sem um sistema imunológico desenvolvido funcionalmente, o neonato necessita da ingestão do colostro para lhe conferir imunidade nos primeiros dias de vida. Além das imunoglobulinas o colostro possui leucócitos, e citocinas que parecem participar do estabelecimento da imunidade neonatal. Apesar da potencial importância desses componentes do colostro, poucos são os estudos que avaliaram a transferência das citocinas do colostro bovino e seu papel na imunidade neonatal, razão pelo qual esse projeto teve como seguintes objetivos: mensurar as concentrações das citocinas IL-1&#946, IL-6, TNF-α e IFN-y presentes no soro de bezerros neonatos da raça Holandesa e avaliar a interferência do manejo do colostro bovino e do seu oferecimento, ou não, sobre as concentrações dessas citocinas no soro desses bezerros, durante os 15 primeiros dias pós-nascimento. Utilizaram-se bezerros nascidos de parto eutócico e distribuídos igualmente por três grupos experimentais (n=5): G1- receberam 4 litros de colostro fresco provenientes de suas próprias mães; G2- receberam 4 litros de colostro provenientes de pool de colostro congelado e o G3- foram alimentados apenas com leite. Para a avaliação das citocinas referidas no soro dos bezerros, foram feitas cinco coletas de sangue durante os quinze primeiros dias de vida pós-nascimento (p.n.): T0 (antes da primeira ingestão de colostro ou leite); T1 (1 a 2 dias p.n.); T2 (3 a 4 dias p.n.); T3 (5 a 6 dias p.n.) e T4 (10 a 15 dias p.n.). Também mensurou-se as citocinas TNF-α, IL-1β e IL-6 no sobrenadante do colostro fornecido aos bezerros do grupo G1, e citocinas TNF-α, IL-1β, IFN-y e IL-6 no sobrenadante do pool de colostro fornecido aos bezerros do grupo G2. Os bezerros do grupo G1 apresentaram valores detectáveis para as citocinas referidas, atingindo picos nos tempos T1(2 a 3 dias p.n.) ou T2 (3 a 4 dias p.n.) enquanto que os bezerros do grupo G2 apresentaram valores detectáveis apenas para o tempo T3(5 a 6 dias p.n.) para a citocina IL-6, enquanto que os bezerros do grupo G3, não apresentaram concentrações detectáveis para nenhuma citocina mensurada com exceção da citocina IL-1beta no tempo 4 (10 a 15 dias p.n.).Com base nos resultados encontrados nesta pesquisa foi possível: (a) verificar a transferência de citocinas IL-6, IL-1β, TNF-α e IFN-y para o soro de bezerros do grupo G1 via ingestão de colostro fresco. (b) verificar a transferência de citocina IL-6, para a circulação de bezerros do grupo G2, via ingestão de pool de colostro. (c) verificar que bezerros recém-nascidos privados de colostro (G3) não apresentaram concentrações detectáveis de citocinas IL-6, IL-1β , TNF-α e IFN-y nos primeiros quinze dias de vida, demonstrando que concentrações detectáveis das citocinas em questão provêm do colostro. (d) verificar que o grupo de bezerros que recebeu colostro de suas próprias mães (G1) obteve maior concentração de citocinas que o grupo que recebeu pool de colostro (G2), demonstrando que as células leucocitárias presentes no colostro fresco são capazes de expressar citocinas no sangue periférico de bezerros recém-nascidos até 15 dias pós-nascimento. / The birth of a calf is marked by the passage of a sterile environment to a contaminated environment, coupled with the fact of placentation (sindesmocorial), which does not allow the passage of antibodies during pregnancy and without an immune system developed functionally, the needs of the neonate ingestion of colostrum to give it immunity during the first days of life. Besides the colostrum immunoglobulin has leukocytes and cytokines that seem to participate in the establishment of neonatal immunity. Despite the potential importance of these components of colostrum , there are few studies evaluating the transfer of cytokines from colostrum and its role in neonatal immunity, reason why this project had the following objectives: to measure the concentrations of IL- 1β, IL- 6, TNF-α and IFN-y in the serum of newborn Holstein calves and evaluate the interference of bovine colostrum management and of his offering , or not , on the concentrations of these cytokines in the serum of these calves during the first 15 days after birth. We used calves born from normal delivery and equally divided into three experimental groups (n = 5): G1 - received 4 liters of fresh colostrum from their mothers; G2- received 4 liters of colostrum from a \"pool\" of frozen colostrum and G3- were fed only milk. For the evaluation of these cytokines in the serum of calves, blood collections were made during the first fifteen days of postnatal life (p.n.): T0 (before the first intake of colostrum or milk), T1 (1st 2 days p.n.), T2 (3 to 4 days p.n.), T3 (5 to 6 days p.n.) and T4 (10 to 15 days p.n.). Also measured is the cytokine TNF-α , IL-1β and IL-6 in the supernatant of colostrum fed to calves in group G1, and cytokines TNF-α , IL- 1β, IFN-y and IL -6 in supernatant \" pool\" of colostrum fed to calves in G2. Calves from G1 group had detectable values for these cytokines, reaching peaks at T1 (2 to 3 days p.n.) or T2 (3 to 4 days p.n.) while calves in G2 showed detectable values only for the period T3 ( 5 to 6 days p.n. ) for the cytokine IL-6, whereas the calves of group G3 did not show any detectable for cytokine concentrations measured with the exception of IL- 1beta 4 time ( 10 to 15 days p.n.). Based on findings of this study it was possible to: (a) verify the transfer of IL- 6, IL- 1β, TNF-&#945 and IFN-y in the serum of calves from G1 via ingestion of fresh colostrum. (b) verify the transfer of cytokine IL -6 into the circulation of calves in G2 via ingestion of \"pool\" of colostrum. (c) verify that deprived newborn calves colostrum (G3) showed no detectable concentrations of IL - 6 , IL- 1β , TNF-α and IFN-y in the first fifteen days of life , demonstrating that detectable concentrations of cytokines in question come from the colostrum. (d) verify that the group of calves that received colostrum from their mothers (G1) had higher cytokine concentrations than the group that received \"pool\" of colostrum (G2), demonstrating that leukocytes present in fresh colostrum are able to express cytokines in peripheral blood of newborns up to 15 days after birth calves.

Esta pesquisa avaliou o efeito da transferência passiva dos leucócitos do colostro na imunidade específica de bezerras recém-nascidas. Foram acompanhadas 20 bezerras Holandesas durante o período neonatal, distribuídas em dois grupos experimentais: grupo COL+ recebeu colostro fresco (4L) proveniente de suas respectivas mães; e grupo COL- recebeu colostro congelado e acelular (4L), oriundo de vacas doadoras de colostro. As avaliações foram realizadas antes da mamada do colostro (M0), 1-2 (M1), 7 (M2), 14 (M3), 21 (M4) e 28 dias pós-nascimento (M5). As bezerras foram submetidas ao exame clínico, seguido da colheita das amostras sanguíneas para realização de hemograma, imunofenotipagem e cultivo celular. Os dois grupos foram colostrados com colostro de igual qualidade com relação à concentração de imunoglobulinas (70-120 g/L). A concentração de células do colostro fresco fornecido ao grupo COL+ foi de 1.895.849 células/mL. Não foi possível encontrar diferenças para as funções vitais em relação aos grupos experimentais. O exame específico dos sistemas revelou um caso de broncopneumonia, três de inflamação umbilical e maior frequência de escore de fezes 3 no COL-. As alterações clínicas foram refletidas no eritrograma das bezerras, sendo encontrado menor valor médio para a taxa de hemoglobina (HGB) no COL- em M3. Em relação à idade, observou-se redução gradativa dos valores médios para He (hemácias), HGB, HCT (hematócrito) e índices hematimétricos no primeiro mês de vida. A frequência de bezerras anêmicas foi maior no grupo COL- nos momentos M4 e M5. Em relação ao leucograma, observou-se diferença entre os grupos para linfócitos no M0 e M2 com valores superiores no COL-. Em relação aos momentos foi possível detectar leucocitose por neutrofilia no M0 e M1, observando-se inversão da relação neutrófilo:linfócito a partir desses momentos. Os valores de CD45+CD45RO- foram maiores em M0 no COL-, além disso, observou-se aumento da expressão do marcador de memória celular CD45RO+ do M0 ao M1 nos dois grupos experimentais. O CD3+gamma-delta- aumentou no decorrer do estudo, em contrapartida as células CD3+gamma-delta+ foram menores em M5 com relação ao M0-M3. Foi detectado também aumento dos valores de CD14+MHCII+ no primeiro mês de vida indicando maturação das células apresentadoras de antígeno. Em relação à produção de citocinas pelas células mononucleares sanguíneas, foi possível identificar maior concentração de IFN-gamma em M4, quando as células do COL- foram estimuladas com S. aureus (1 mononuclear:10 bactérias inativadas). A concentração de IL-17 detectada a partir das células do COL+ foi maior em M3, quando as células foram estimuladas com ConA. Com base nos resultados obtidos, pode-se concluir que: a) bezerras COL- apresentaram maior frequência e intensidade de doenças que evoluíram para anemia da inflamação; b) bezerras COL- apresentaram maior número absoluto de linfócitos, representadas especialmente pela subpopulação CD3+gamma-delta+ nos episódios de maior frequência de diarreias; c) Linfócitos de memória CD45RO+ aumentaram após a colostragem em ambos os grupos, sugerindo que outros componentes acelulares do colostro podem apresentar papel fundamental no desenvolvimento da resposta imunológica de bezerras recém-nascidas; d) a subpopulação CD3+gamma-delta- e as células CD14+MHCII- e CD14+MHCII+ aumentaram durante o primeiro mês de vida, indicando maturação imunológica; e) as células mononucleares das bezerras não responderam ao Herpesvírus Bovino tipo 1, porém responderam aos estímulos bacterianos, especialmente para a Escherichia coli; a interpretação do leucograma em conjunto com a análise das variações apresentadas para as citocinas inflamatórias IFN-gamma e IL-17 permitem afirmar que as bezerras apresentaram resposta inflamatória retardada e de menor magnitude no COL-. / This study evaluated the effect of leukocytes passive transference from bovine colostrum in specific immunity of newborn calves. During neonatal period, 20 Holstein calves were followed. Animals were distributed in two experimental groups: COL+ which received fresh colostrum (4L) from their mothers, and COL- which received frozen and acellular colostrum (4L) that came from donor cows. The evaluations were performed in the following moments: before colostrum intake (M0), 1-2 (M1), 7 (M2), 14 (M3), 21 (M4) and 28 days after birth (M5). Heifers were submitted to clinical examination. Then, blood samples were harvested for hemogram, immunophenotyping and cell culture. Both groups were fed with the same quality of colostrum (immunoglobulin concentration 70-120 g/L). The cell concentration of fresh colostrum that was provided to COL+ group was 1.895.849 cells/mL. It was not possible to detect differences in vital functions concerning the experimental groups. The system specific examination reveled one case of bronchopneumonia, three cases of umbilical inflammation and major rates of diarrhea score 3 in group COL-. Clinical alterations were reflected in calves erythrogram. It was found lower mean value for hemoglobin (HGB) in M3 for COL-. Regarding age, a gradual reduction in mean values for erythrocytes, HGB, HCT (hematocrit) and hematimetric rates were observed in the first month of life. The frequency of anemic heifers was higher in COL- group at moments M4 and M5. Regarding leukogram, it was observed difference between groups for lymphocytes in M0 and M2 with higher values in COL-. Concerning moments, it was possible to detect leukocytosis by neutrophilia from M0 up to M1 and inversion of neutrophil:lymphocyte relation from this moment. Values of CD45+CD45RO- was higher in M0 for COL-, furthermore, increase of cellular memory marker expression CD45RO+ was observed from M0 to M1 in both groups. The CD3+gamma-delta- increased during the study. On the other hand, CD3+gamma-delta+ were lower in M5 in relation to M0-M3. Increase of CD14+MHCII+ values were also detected in the first month of life, indicating maturation of antigen presenting cells. Regarding cytokine production by mononuclear cells of heifers blood, it was possible to identify higher concentration of IFN-gamma in M4 when cells of COL- were stimulated with S. aureus (1 mononuclear: 10 inactivated bacteria). The concentration of IL-17 detected from COL+ cells was higher in M3, when cells were stimulated with ConA. Based on these results, it can be concluded that: a) COL- heifers presented higher frequency and intensity of diseases that evolved to anemia of inflammation; b) COL- heifers presented higher lymphocyte absolute number, represented specially by CD3+gamma-delta+ subsets in episodes of higher frequency of diarrhea; c) memory lymphocytes CD45RO+ increased after colostrum intake in both groups, suggesting that other acellular colostrum components can present fundamental role in development of immunological response in newborn heifers; d) the subset of CD3+gamma-delta- and the cells CD14+MHCII- and CD14+MHCII+ increased during the first month of life, indicating immunological maturation; e) heifers mononuclear cells did not respond for herpes virus bovine type 1, however, responded for bacterial stimulus, specially Escherichia coli. The interpretation of leukogram with the variation of presented analyses for inflammatory cytokines IFN-gamma and IL-17, allow to state that heifers presented delayed inflammatory response and of lesser magnitude in COL-.

Com o objetivo de estudar a morfologia e a ultra-estrutura do intestino delgado de bezerros durante o processo de aquisição de imunidade passiva, foram coletadas amostras de tecido de 15 animais machos em três idades: ao nascer sem que houvesse a ingestão de colostro; três horas após a ingestão da primeira refeição de colostro e aos três dias de idade. Observou-se a presença de células vacuoladas do duodeno ao íleo no animal recém-nascido, que apresentaram material absorvido após a ingestão de colostro. Foi detectada a reação de fosfatase ácida nas células absortivas do jejuno distal e íleo de bezerros recém-nascidos, antes e após a ingestão de colostro. Na região proximal, foram verificadas mudanças nas características morfológicas aos três dias de idade, com o início da detecção de reação da fosfatase ácida em lisossomos. A morfologia aos três dias de idade pode representar um diferente estágio de maturação das células epiteliais do intestino delgado de bezerros. / The morphology and the ultra-structure of the small intestine during the passive immunity acquisition were investigated on intestinal tissues of fifteen male dairy calves aged: unsuckled neonatal, three hours after colostrum ingestion and three days old. Vacuolate cells from duodenum to ileum were observed in newborn calves, which shown material absorved after colostrum ingestion. The phosphatase acid reaction was detected in the vacuoles in distal jejunum and ileum of suckled and unsuckled newborn calves. Changes at the morphological characteristics and the initiation of phosphatase acid reaction in lysosomes were observed in calves aged three days old. The three days old calves small intestine morphology can represent a different phase of epithelium cells maturation of calves small intestine.

As afecções umbilicais merecem destaque entre as enfermidades que acometem bezerros no primeiro mês de vida, pela alta incidência durante essa fase da vida dos neonatos e pelas relevantes perdas econômicas, decorrentes da mortalidade, custos de tratamento e atendimento veterinário, além de sequelas que poderão determinar menores ganho de peso e produção leiteira. O diagnóstico dessas enfermidades muitas vezes é prejudicado pela dificuldade em se detectar os acometimentos das estruturas intra-abdominais do umbigo, o que afetará negativamente a escolha do tratamento mais adequado e o estabelecimento do real prognóstico para cada animal. O presente estudo determinou as limitações e as vantagens de cada recurso semiológico, e demonstrou uma maior sensibilidade da ultrassonografia na detecção das afecções umbilicais intra-abdominais quando comparada com o método semiológico de rotina (palpação bimanual), com incompatibilidade de 20% dos animais no grupo onfalopatia. A maior exatidão no diagnóstico foi observada principalmente nos acometimentos das veias umbilicais, e também em afecção do úraco que foi erroneamente identificada como sendo alteração de artéria umbilical. Durante a análise com ultrassonografia dos animais com inflamação/infecção dos componentes umbilicais, foi observada que a espessura da parede dos vasos umbilicais é a medida mais adequada para determinar as alterações nesses componentes, quando comparada com aquela do diâmetro dos vasos umbilicais. Ainda, a partir desse estudo foi possível verificar algumas particularidades da involução fisiológica dos componentes intra-abdominais do cordão umbilical em bezerros da raça Holandesa, as quais foram utilizadas no grupo controle para caracterizar o comportamento das estruturas umbilicais com o evoluir da idade dos neonatos. Destaca-se que o confronto desses resultados com aqueles da rara literatura disponível mostrou-se com notáveis diferenças. Por fim validou-se critério para definir o grau de gravidade das inflamações dos componentes umbilicais a partir dos resultados obtidos pelo uso desses recursos diagnósticos, a fim de permitir uma alternativa na classificação dessa enfermidade com vistas à adequada escolha do tratamento e possibilitar uma avaliação da comparação da transferência de imunidade passiva frente às diversas apresentações clínicas das afecções inflamatórias umbilicais. / The umbilical disorders has importance among the illness that affects calves in the first month of life, by the high incidence during the current stage of life of newborns and relevant economic losses stemming due to mortality, treatment costs and veterinary care, and sequelae that may determine lower weight gain and milk production. The diagnosis of these diseases is often hampered by the difficult in detecting the extension of affected navel structures, which negatively affect the choice of the most appropriate treatment and establish a prognosis for calves. The present study verified the limitations and advantages of each semiological resource, and demonstrated a higher sensitivity of ultrasonography in the detection of intra-abdominal umbilical disorders compared with the semiological routine method (bimanual palpation), with 20% incompatibility of animals at navel illness group. The increased accuracy in diagnosis was mainly observed in the affections of the umbilical vein, and also in disease of the urachus which was erroneously identified as alteration of umbilical artery. During the ultrassonography of animals with inflammation/infection of umbilical components was observed that the wall thickness of the umbilical vessels is more appropriate extent for determining amendments in these components, as compared to that diameter of the umbilical vessels. Although, from this study we observed some peculiarities of the physiological involution of intra-abdominal umbilical cord components in Holstein calves, which were used in the control group to characterize the regression of the umbilical structures with increasing age of newborns. It is noteworthy that the comparison of these results with those of rare literature available showed up with notable differences. Finally validated the criterion for defining the severity of inflammation of the umbilical components from the results obtained from the use of these diagnostic methods in order to allow an alternative in the classification of this disease aiming to appropriate treatment choice and enable an assessment of comparison of passive transfer of immunity in front the various clinical presentations of umbilical inflammatory disorders.

As afecções umbilicais merecem destaque entre as enfermidades que acometem bezerros no primeiro mês de vida, pela alta incidência durante essa fase da vida dos neonatos e pelas relevantes perdas econômicas, decorrentes da mortalidade, custos de tratamento e atendimento veterinário, além de sequelas que poderão determinar menores ganho de peso e produção leiteira. O diagnóstico dessas enfermidades muitas vezes é prejudicado pela dificuldade em se detectar os acometimentos das estruturas intra-abdominais do umbigo, o que afetará negativamente a escolha do tratamento mais adequado e o estabelecimento do real prognóstico para cada animal. O presente estudo determinou as limitações e as vantagens de cada recurso semiológico, e demonstrou uma maior sensibilidade da ultrassonografia na detecção das afecções umbilicais intra-abdominais quando comparada com o método semiológico de rotina (palpação bimanual), com incompatibilidade de 20% dos animais no grupo onfalopatia. A maior exatidão no diagnóstico foi observada principalmente nos acometimentos das veias umbilicais, e também em afecção do úraco que foi erroneamente identificada como sendo alteração de artéria umbilical. Durante a análise com ultrassonografia dos animais com inflamação/infecção dos componentes umbilicais, foi observada que a espessura da parede dos vasos umbilicais é a medida mais adequada para determinar as alterações nesses componentes, quando comparada com aquela do diâmetro dos vasos umbilicais. Ainda, a partir desse estudo foi possível verificar algumas particularidades da involução fisiológica dos componentes intra-abdominais do cordão umbilical em bezerros da raça Holandesa, as quais foram utilizadas no grupo controle para caracterizar o comportamento das estruturas umbilicais com o evoluir da idade dos neonatos. Destaca-se que o confronto desses resultados com aqueles da rara literatura disponível mostrou-se com notáveis diferenças. Por fim validou-se critério para definir o grau de gravidade das inflamações dos componentes umbilicais a partir dos resultados obtidos pelo uso desses recursos diagnósticos, a fim de permitir uma alternativa na classificação dessa enfermidade com vistas à adequada escolha do tratamento e possibilitar uma avaliação da comparação da transferência de imunidade passiva frente às diversas apresentações clínicas das afecções inflamatórias umbilicais. / The umbilical disorders has importance among the illness that affects calves in the first month of life, by the high incidence during the current stage of life of newborns and relevant economic losses stemming due to mortality, treatment costs and veterinary care, and sequelae that may determine lower weight gain and milk production. The diagnosis of these diseases is often hampered by the difficult in detecting the extension of affected navel structures, which negatively affect the choice of the most appropriate treatment and establish a prognosis for calves. The present study verified the limitations and advantages of each semiological resource, and demonstrated a higher sensitivity of ultrasonography in the detection of intra-abdominal umbilical disorders compared with the semiological routine method (bimanual palpation), with 20% incompatibility of animals at navel illness group. The increased accuracy in diagnosis was mainly observed in the affections of the umbilical vein, and also in disease of the urachus which was erroneously identified as alteration of umbilical artery. During the ultrassonography of animals with inflammation/infection of umbilical components was observed that the wall thickness of the umbilical vessels is more appropriate extent for determining amendments in these components, as compared to that diameter of the umbilical vessels. Although, from this study we observed some peculiarities of the physiological involution of intra-abdominal umbilical cord components in Holstein calves, which were used in the control group to characterize the regression of the umbilical structures with increasing age of newborns. It is noteworthy that the comparison of these results with those of rare literature available showed up with notable differences. Finally validated the criterion for defining the severity of inflammation of the umbilical components from the results obtained from the use of these diagnostic methods in order to allow an alternative in the classification of this disease aiming to appropriate treatment choice and enable an assessment of comparison of passive transfer of immunity in front the various clinical presentations of umbilical inflammatory disorders.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-23Bitstream added on 2014-06-13T20:51:05Z : No. of bitstreams: 1 rocha_tg_me_jabo.pdf: 837046 bytes, checksum: f72346486eb135d1df17c2bfd41fd6ee (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo do estudo foi avaliar a transferência de imunidade passiva (TIP) de vacas Canchim aos seus bezerros. Um grupo experimental foi constituído por 13 vacas primíparas e seus bezerros, e o outro por 13 vacas pluríparas e seus bezerros. Foram coletadas amostras de sangue venoso dos bezerros e secreções lácteas das vacas até 1 hora e 1, 2, 7, 15 e 30 dias após o nascimento/parto. No hemograma, notaram-se alterações características do período neonatal, como redução na contagem de hemácias, teor de hemoglobina e volume globular após a ingestão do colostro, além de aumento na contagem de linfócitos e redução da contagem de neutrófilos segmentados. Os exames bioquímicos séricos revelaram aumento nas atividades de GGT (até 3.746 U/L) e ALP (até 1.030 U/L) e nos teores de proteína total (até 7,77 g/dL), globulinas (até 6,01 g/dL), IgA (até 322 mg/dL) e IgG (até 2.918 mg/dL) após a ingestão do colostro, seguidos por redução gradual nestes parâmetros até os 30 dias de idade. As avaliações bioquímicas das secreções lácteas revelaram alta concentração de todos os componentes colostrais analisados, com redução gradual nos seus teores no decorrer do período experimental, à exceção dos minerais, cujas concentrações oscilaram pouco entre os momentos. A TIP foi eficiente em ambos os grupos de bezerros, e a qualidade das secreções lácteas, embora diferentes entre vacas primíparas e pluríparas, não interferiu na passagem de imunoglobulinas da vaca para o bezerro. / The aim of this study was to evaluate the passive immunity transfer from Canchim cows to its calves. One experimental group comprised 13 primiparous cows and its calves and the other group, 13 multiparous cows and its calves. Samples of calves’ venous blood and cow`s lacteal secretions were collected until 1 hour and 1, 2, 7, 15 and 30 days after birth/parturition. In the hemogram, characteristic alterations of this period, such as reduction in the erytocyte count, hemoglobin concentration and corpuscular volume after colostrum intake and rise in the lymphocyte count and reduction in the neutrophil count were noticed. The serum biochemistry revealed augmentation in the GGT (up to 3,746 U/L) and ALP (up to 1,030 U/L) activities and in the total protein (up to 7.77 g/dL), globulin (up to 6.01 g/dL), IgA (up to 322 mg/dL) and IgG (up to 2,918 mg/dL) concentrations after colostrum intake, followed by a gradual reduction in these parameters until 30 days of age. The biochemical evaluation of the lacteal secretions revealed high concentrations of all the colostral components analysed, with gradual reduction in their concentrations along the experimental period, except for the minerals, which showed little oscillation between the moments. The passive immunity transfer was efficient in both groups of calves, and the quality of the lacteal secretions, although different between primiparous and multiparous cows, did not interfere in the transference of immunoglobulins from the cows to the calves.