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Desenvolvimento de cultura de células aderentes em peixes neotropicais e sua aplicação em estudos citogenéticos

Paim, Fabilene Gomes January 2018 (has links)
Orientador: Claudio de Oliveira / Resumo: Embora a ictiofauna Neotropical seja considerada a mais diversa do mundo, apenas 12,2% das espécies de peixes tiveram cariótipos descritos. A dificuldade de se obter preparações cromossômicas de boa qualidade para algumas espécies de peixes Neotropicais ainda é um dos grandes desafios na área de Citogenética, principalmente para peixes de pequeno e grande porte. Uma alternativa é uso de metodologias indiretas, tais como cultura de células, amplamente utilizada e estabelecida em mamíferos, entretanto para peixes ainda é pouco empregada pela dificuldade de padronização da técnica de isolamento e manutenção das culturas celulares. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo o desenvolvimento de uma metodologia de cultura de células aderentes para obtenção de cromossomos mitóticos em peixes neotropicais, estabelecendo linhagens celulares de diferentes espécies e a determinação de suas características citogenéticas. Seis espécies de peixes Neotropicais da ordem Characiformes foram utilizadas para obtenção das culturas primárias, desenvolvimento e criopreservação das linhagens celulares e analise citogeneticamente. Para obtenção das linhagens, células de tecido muscular foram isoladas usando enzimas proteolíticas. As células isoladas foram cultivadas em frascos ou placas tratadas com um filme à base de gelatina e mantidas à 27,5ºC, 5% CO2 em meio completo (DMEM+soro fetal bovino+antibióticos+antimicóticos). Quando as células cobriram toda a superfície do substrato, elas foram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Although Neotropical ichthyofauna is considered the most diverse in the world, only 12.2% had karyotypes described. The difficulty of obtaining good quality chromosome preparations for some Neotropical fish species is still one of the major challenges in the area of cytogenetics, especially for small and large fish. An alternative is the use of indirect methodologies, such as cell culture, widely used and established in mammals, however for fish is still little used for the difficulty of standardization of the technique of isolation and maintenance of cell culture. Thus, the present study aimed to develop a methodology for adherent cell culture to obtain mitotic chromosomes in Neotropical fish, establishmenting cell lines of different species and the cytogenetic characteristics of these lines. Six species of Neotropical fish of the order Characiformes were used to obtain primary cell, development and cryopreservation of the cell lines and cytogenetic analysis. To obtain the cell lines, muscle tissue were isolated using proteolytic enzymes. The isolated cells were cultured in flasks or plates treated with a gelatin-based film and maintained at 27.5 °C, 5% CO2 in complete medium (DMEM + fetal bovine serum + antibiotics + antimycotics). When the cells covered almost all surface of the substrate, they were transferred to new flasks to obtain chromosome preparations and cryopreservation. The chromosome preparations of the cell lines were performed in different passages in the spec... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Biodiversidade de parasitas de peixes da família Loricariidae (Teleostei Siluriformes) procedentes do rio Sapucaí-Mirim, Brasil /

Franceschini, Lidiane. January 2016 (has links)
Orientador: Reinaldo José da Silva / Resumo: Peixes da família Loricariidae (Siluriformes) apresentam grande plasticidade fenotípicaintraespecífica durante toda sua ontogenia. O conhecimento limitado sobre os aspectosbiológicos, padrões biogeográficos e elevada variabilidade morfológica destes peixesdificultam estudos sobre a biodiversidade acerca deste grupo, incluindo estudos sobre afauna parasitária. Assim, o objetivo deste estudo foi realizar levantamento dabiodiversidade de parasitas de peixes da família Loricariidae em áreas sob a influência daconstrução de Pequenas Centrais Hidrelétricas (PCHs) no rio Sapucaí-Mirim, Estado deSão Paulo, Brasil. Ademais, avaliar a estrutura das comunidades parasitárias doshospedeiros analisados (ao nível de infracomunidade e comunidade componente) epossíveis mudanças na abundância das infracomunidades baseadas em variáveisexplanatórias (espaciais, temporais e fatores intrínsecos ao hospedeiro). Para tanto, duranteos anos de 2012 e 2013 foram realizadas duas amostragens anuais (período seco/chuvoso),em oito áreas amostrais situadas nos reservatórios de três PCHs: Palmeiras, Anhanguera eRetiro. Foram necropsiados 334 loricarídeos pertencentes a 10 espécies: Loricaria prolixa,Hypostomus margaritifer, Hypostomus heraldoi, Hypostomus strigaticeps, Hypostomusregani, Hypostomus ancistroides, Hypostomus cf. margaritifer, Hypostomus topavae,Hypostomus aff. topavae, além de uma espécie não identificada pertencente ao gêneroHypostomus. Foram encontrados 29 ta... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Loricariid fishes (Siluriformes) presents great intraspecific phenotypic plasticity throughouttheir ontogeny. The limited knowledge about the biological aspects, biogeographic patternsof distribution and high morphological variability of these fishes make the studies onbiodiversity of this group difficult, including that about parasites. Therefore, the aim of thisstudy was to survey the biodiversity of parasites of Loricariidae fishes from an area underthe influence of the construction of Small Hydro Power Plants (SHPPs) in the Sapucaí-Mirim River, São Paulo State, Brazil. Moreover, the study evaluated the structure ofparasitic communities of these hosts (at both the component community andinfracommunity levels), assessing the possible variation in infracommunity abundanceamong sites and fish species based on explanatory variables (spatial, temporal, and hosttraits). During 2012 and 2013, two annual samples (dry/rainy seasons) were carried out, ineight sampling sites situated in the reservoirs of three SHPPs: Palmeiras, Anhanguera, andRetiro. Specimens of Loricaria prolixa, Hypostomus regani, Hypostomus ancistroides,Hypostomus strigaticeps, Hypostomus heraldoi, Hypostomus margaritifer, Hypostomus cf.margaritifer; Hypostomus topavae; Hypostomus aff. topavae and Hypostomus sp., wereanalyzed, totaling 334 fishes. Twenty-nine taxa were found, totaling 15,957 parasitespecimens, and Monogena was the dominant group, which showed the greatest richness ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Diversificação e evolução fenotípica em peixes cascudos (Siluriformes: Loricariidae: Loricariinae)

Souza, Laura Barreto de Paula 22 February 2018 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / One of the major causes of the phylogenetic, temporal and spatial variation of species richness is attributed to the processes of differential speciation and extinction of lineages, named diversification. There is also a great phenotypic diversity among species that may be related to diversification. The development of phylogenetic comparative methods allowed the study of the diversification and evolution of species traits. The aim of this study is to investigate the pattern of diversification and trait evolution of the suckermouth armored catfish, Loricariinae subfamily, and to investigate if these attributes are related to the diversification rates within the clade. We used a phylogeny containing 114 representatives of subfamily species and their attributes body size, climatic niche and microhabitat (substrate) - position and width for both - to evaluate the evolutionary rates and test the relationship between these different axes of the species niche and their evolutionary rates. We estimated diversification rates with BAMM and performed phylogenetic correlation analyzes (STRAPP) to address the question of whether the attributes are related to the diversification process in the subfamily. We also performed analyzes of disparity through time (DTT) to explore the temporal pattern of phenotypic evolution. The diversification analysis showed that the subfamily had high rates of diversification. Body size presented heterogeneous rates among clades, presenting a shift of diversification in which the specie Paraloricaria agastor had the smallest size of the clade. Climatic niche position presented a heterogeneous pattern of diversification rates, with a shift involving six species of Rineloricaria that retained their niche position. Diversification of the climatic niche width revealed the most heterogeneous pattern, presenting four shifts occurring in clades in which some species possessed greater climatic niche widths. However, the rates of diversification of both micro-habitat position and width did not show any shift. The STRAPP test revealed no correlation between any of the traits studied with diversification, showing that evolutionary process of Loricariinae seems to be independent of the phenotypic attributes investigated. The DTT revealed that in most of the Loricariinae’s evolutionary history, the averages of disparity of the studied attributes evolved under neutral evolution, although they presented peaks of phenotypic disparity within the clades in the most recent time. The results showed that Loricarinae evolved through a non-adaptive radiation where vicariant events would have promoted allopatric speciation and the high diversification rates. In fact, it is known that the radiation of Neotropical fishes was closely related to geological processes of basin formation (hydrogeological hypothesis). DTTs analyzes reinforces this claim, because in most of the evolutionary history the attributes evolved neutrally, without association with diversification, as expected in non-adaptive radiation. Although the subfamily evolved under non-adaptive radiation, divergent selection processes possibly occurred in species independently, promoting significant disparity of attributes within the clades at the present time. The results obtained highlights a peculiar evolutionary history for Loricariinae and a unique known example of nonadaptive radiation for the Neotropics, which can be enlighten the understanding of the yet little known processes that led to the extraordinary diversification of the Neotropical fishes. / Uma das causas da variação filogenética, temporal e espacial da riqueza das espécies são atribuídas aos processos de especiação e extinção diferencial das linhagens, chamado de diversificação. Existe também uma grande diversidade fenotípica entre as espécies que pode estar relacionada à diversificação. O desenvolvimento de métodos filogenéticos comparativos permitiu o estudo da diversificação e evolução de atributos das espécies. O objetivo do presente estudo é investigar os padrões de diversificação e evolução de atributos de peixes Cascudos da subfamília Loricariinae, e investigar se esses atributos estão correlacionados com as taxas de diversificação. Foi utilizada uma filogenia contendo 114 representantes de espécies da subfamília e os atributos tamanho corporal, posição e largura de nicho climático de microhábitat (substrato), para avaliar as taxas evolutivas e relação entre esses diferentes eixos do nicho das espécies e as taxas evolutivas da subfamília. As taxas de diversificação da subfamília e dos atributos foram estimadas através do BAMM e foram realizadas análises de correlação filogenética (STRAPP) a fim de detectar se os atributos estão moldando o processo de diversificação na subfamília. Foram realizadas também análises de disparidade ao longo do tempo (DTT) para explorar o padrão temporal de evolução fenotípica. A análise de diversificação mostrou que a subfamília possui altas taxas de diversificação. O tamanho corporal apresentou taxas heterogêneas entre os subclados, apresentando um shift de diversificação no clado em que a espécie Paraloricaria agastor apresentou o menor tamanho do clado. A posição de nicho climático apresentou um padrão heterogêneo de taxas de diversificação, apresentando um shift envolvendo seis espécies de Rineloricaria que conservaram sua posição de nicho. A diversificação da largura de nicho climático revelou o padrão mais heterogêneo, apresentando quatro shifts que ocorreram em clados que contém espécies com maiores larguras de nicho climático. Já as taxas de diversificação da posição e largura de micro-hábitat não apresentaram shifts. Os testes STRAPP revelaram não haver correlação entre nenhum dos atributos considerados no presente estudo e a diversificação, mostrando que o processo evolutivo de Loricariinae parece ser independente dos atributos fenotípicos investigados. O DTT revelou que na maior parte da história evolutiva da subfamília as médias de disparidade dos atributos estudados evoluíram de forma neutra, porém apresentaram picos de disparidade fenotípica dentro dos clados no tempo mais recente. Os resultados mostram que provavelmente os Loricaríneos evoluíram através de uma radiação não adaptativa onde eventos vicariantes teriam promovido especiação alopátrica e as altas taxas de diversificação. De fato, acredita-se que a radiação dos peixes Neotropicais esteve intimamente relacionada aos processos geológicos de formação de bacias (hipótese hidrogeológica). O DTT reforça essa conclusão, pois em boa parte da história evolutiva os atributos evoluíram neutramente, sem associação com a diversificação, como seria esperado em uma radiação não adaptativa. Entretanto, apesar de a subfamília ter evoluído sob radiação não adaptativa, processos de seleção divergente possivelmente ocorreram em espécies independentemente, promovendo disparidade significativa dos atributos dentro dos clados no tempo presente. Os resultados obtidos revelam uma história evolutiva peculiar para os Loricaríneos e um exemplo raro de radiação não adaptativa nos Neotrópicos, que pode elucidar o entendimento dos processos que levaram a extraordinária diversificação dos peixes Neotropicais, ainda pouco conhecidos. / São Cristóvão, SE

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