Diss. (sammanfattning) Uppsala : Univ., 2001. / Härtill 4 uppsatser.

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Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karolinska institutet, 2002. / Härtill 5 uppsatser.

Diss. (sammanfattning) Uppsala : Univ., 2004. / Härtill 4 uppsatser.

Orientador: Lea Rodrigues Simioni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T12:36:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Camargo_ThiagoMagalhaes_M.pdf: 3717453 bytes, checksum: 7f1985b88491433917e7fdf3c88dbfc7 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A espécie Micrurus pyrrhocryptus, classificada anteriormente como subespécie da Micrurus frontalis, foi recentemente classificada como espécie plena baseada nas diferenças morfológicas. Esta serpente é especialmente encontrada no continente Sul Americano. No presente trabalho foram analisados os efeitos farmacológicos do veneno de M. pyrrhocryptus sob métodos para caracterização de efeitos neurotóxico e miotóxico em preparações biventer cervicis de pintainho (BCP) (0,5, 1, 5, 10, 20, 30 e 50 µg/mL, n=6 para cada concentração) e nervo frênicodiafragma de camundongo (NFD) (1, 5, 10, 20, 30 e 50 µg/mL, n=6 para cada concentração). Também foram realizados estudos sobre a capacidade de neutralização do antiveneno específico e comercial. O veneno induziu um irreversível bloqueio neuromuscular (pós-sináptico, como demonstrado pela resposta contrátil sob estímulo de alta frequência - 50 Hz, n=6 em NFD), tempo e concentração-dependente em ambas as preparações (10 µg/mL induziu 50% de bloqueio neuromuscular em 22±3 min vs 62±4 min em BCP e NFD respectivamente, n=6 para cada preparação); as contraturas em resposta a adição exógena de KCl (20 mM) não foram afetadas significativamente depois da incubação com o veneno, bem como, a determinação da atividade de CK quando comparados com os valores controle (25,8±1,75 U/L vs 24,3±2,2 U/L) ou também com o registro da resposta contrátil em preparações curarizadas (n=6). O veneno apresentou um baixo valor de atividade fosfolipásica quando comparado com o veneno de Crotalus durissus terrificus em 37ºC. Nos testes de neutralização, os antivenenos específico e comercial foram eficientes, contra o efeito bloqueador neuromuscular induzido pelo veneno, quando usados na concentração recomendada pelo fabricante (1,5 mg de veneno para 1,0 mL de antiveneno). A análise histológica mostrou apenas uma discreta alteração mesmo quando usado em alta concentração (50 µg/mL - n=5; 3,5±0,8% em mamífero e 4,3±1,5% em ave vs 1,2±0,5% em mamífero e 1,1±0,7% em ave do controle, ambos p<0,05 em relação ao controle), corroborando com as características de outros venenos de Micrurus. A razão da potência do veneno vs sensibilidade de receptores colinérgicos presentes no sítio extra juncional da preparação do músculo biventer, foi demonstrada quando usado em baixa concentração (0,5 µg/mL) aboliu totalmente em 30 min a contratura induzida pela adição ACh exógena (110 µM). O conjunto dos resultados indica que o veneno de M. pyrrhocryptus causa bloqueio pós-sináptico envolvendo os receptores nicotínicos, como as ?- neurotoxinas, sem determinar alteração significativa na membrana da fibra muscular / Abstract: Micrurus pyrrhocryptus, originally known as a Micrurus frontalis subspecies, was recently classified as a species based on selected morphological features. It can be found in the South America. Only two studies are apparently available on its venom effects. Herein, pharmacological approaches were used to characterize the neurotoxic and myotoxic effects of M. pyrrhocryptus venom in chick biventer cervicis (BC, 0.5, 1, 5, 10 and 50 µg/mL, n=6 for each concentration) and mouse phrenic nerve-diaphragm preparations (NFD, 1, 5, 10 and 50 µg/mL, n=6 for each concentration). In addition, studies on neutralization capacity of specific and commercial antivenom were performed. The venom induced an irreversible, time and concentrationdependent neuromuscular blockade (postsynaptic, as demonstrated by the high frequency twitch tension response - 50Hz, n=6 in NFD) in both preparations (10 µg/mL induced 50% neuromuscular blockade in 22±3 min vs 62±4 min in BC and NFD respectively, n=6 for each preparation); the contractures in response to exogenous KCl (20 mM) were not significant after venom incubation as well as the value of CK released when compared with control values (25.8±1.75 U/L vs 24.3±2.2 U/L) or also twitch tension record in curarized preparations (n=6). The venom showed a very low PLA2 activity when compared with c. d. terrificus venom at 37ºC. In neutralization test the specific and Brazilian commercial antielapidic serum were efficient when used in concentration recommended by the producer (1.5 of venom to 1.0 mL of antivenom). The histological analysis showed a mild myotoxic effect, even using high venom concentration (50 µg/mL - n=5, 3.5±0.8% in mammalian and 4.3±1.5% on avian vs 1.2±0.5% in mammalian and 1.1±0.7% in avian of control), corroborating characteristics of other Micrurus venoms). The ratio venom potency vs preparation sensitivity was shown when a concentration as low as 0.5 µg/mL totally abolished within only 30 min the contracture induced by the exogenously added ACh (110µM) to chick preparation. Altogether the results indicate that M. pyrrhocryptus venom has a postsynaptic blocking effect involving nicotinic receptors as does the ?-neurotoxins, and without any significant myotoxic effect / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Lea Rodrigues Simioni / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T09:48:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Abreu_ValdemirAparecidode_D.pdf: 2741527 bytes, checksum: 8d40cb65f4500adbbbd0961f047f41b1 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: Neste trabalho, foi estudada a ação do veneno de Micrurus altirostris (cobra coral Uruguaiana) nas concentrações de 0,1; 0,5; 1; 5 e 10 µg/mL sobre a junção neuromuscular em preparações isoladas de ave (biventer cervicis de pintainho) e de mamífero (nervo frênico-diafragma de camundongo) e também a habilidade do antiveneno comercial produzido pelo Instituto Butantan e do anti-soro específico, produzido em coelhos em neutralizar a neurotoxicidade e a letalidade em pintainhos e camundongos (DL50 0,042 e 0,255 mg/kg), injetados i.m. e i.p., respectivamente, com misturas de veneno (5 DL50): antiveneno ou anti-soro específico (n=6), na razão de 1:1; 1:2,5; 1:5; 1:10 e 1:20. Somente a razão de 1:20 do veneno: antiveneno ou anti-soro neutralizou o bloqueio neuromuscular in vitro e protegeu pintainhos e camundongos contra 5 DL50 do veneno. O veneno causou um completo bloqueio neuromuscular em ambas as preparações, ligando-se aos receptores colinérgicos sub-sinápticos, de maneira irreversível. Inibiu as contraturas causadas por ação da acetilcolina e do carbacol, sem interferir nas respostas ao KCl. O bloqueio neuromuscular causado pelo veneno não apresentou qualquer alteração na ausência de íons Ca2+ ou com a diminuição da temperatura, tampouco foi revertido por ação da neostigmina. A resposta ao estímulo direto não foi afetada na vigência do bloqueio neuromuscular completo, indicando pela perfeita resposta muscular, que a membrana manteve-se íntegra, o que sugere a ausência de uma atividade miotóxica. Os resultados indicaram que o veneno de Micrurus altirostris interfere com a neurotransmissão pós-sináptica e que o antiveneno comercial, bem como o anti-soro específico, produzido em coelhos, possuem baixa eficácia em neutralizar a neurotoxicidade e a letalidade deste veneno. A neutralização da ação neurotóxica e também da letalidade do veneno foi obtida apenas quando a proporção de 1:20 (veneno:antiveneno) foi utilizada / Abstract: In this work, we studied the neuromuscular blockade caused by Micrurus altirostris venom (0.1-10 µg/mL) in indirect stimulated chick biventer cervicis and mouse phrenic nerve-diaphragm preparations and the ability of commercial antivenom (Instituto Butantan) and antiserum raised in rabbits to neutralize neurotoxicity and lethality in chicks and mice (LD50 0.042 and 0.255 mg/kg), injected i.m. and i.p., respectively, with venom (5 LD50):antivenom or antiserum mixtures (n=6) of 1:1, 1:2.5, 1:5, 1:10 and 1:20. The venom caused a complete and irreversible neuromuscular blockade in both preparations, binding in the subsynaptics colynergic receptors; inhibited the acetylcholine and carbachol contractures, without interfering on KCl response. The neuromuscular blockade was not Ca2+ or temperature-dependent and did not affect the response to direct stimulation. Only a venom:antivenom or antiserum ratio of 1:20 neutralized the neuromuscular blockade in vitro and protected chicks and mice against 5 LD50 of venom. Our results indicated that Micrurus altirostris venom interferes with postsynaptic neurotransmission and that commercial antivenom and rabbit antiserum have low efficacy in neutralizing the neurotoxicity and lethality of this venom / Doutorado / Doutor em Farmacologia

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Avaliou-se a atividade de Bothrops marajoensis (Bmj) e suas fraÃÃes no sistema cardiorrenal. A resposta pressora do veneno bruto demonstrou uma diminuiÃÃo da pressÃo arterial mÃdia e da freqÃÃncia cardÃaca, sem alteraÃÃes significativas na freqÃÃncia respiratÃria. Em ratos atropinizados demonstrou a permanÃncia dos efeitos. Na perfusÃo de coraÃÃo isolado de ratos observou-se uma diminuiÃÃo na forÃa de contraÃÃo miocÃrdica acompanhada de um aumento da pressÃo de perfusÃo, sem alteraÃÃes no fluxo coronariano. A anÃlise eletrocardiogrÃfica em ratos apÃs injeÃÃo de Bmj provocou um bloqueio Ãtrio ventricular gradual atà um bloqueio completo indicando arritmia e dificuldade de conduÃÃo atrial. Em leito vascular mesentÃrio prÃ-contraÃdo com fenilefrina nÃo houve alteraÃÃes significativas. No sistema de perfusÃo renal em ratos apresentou decrÃscimo significativo na pressÃo de perfusÃo, resistÃncia vascular, fluxo urinÃrio, ritmo de filtraÃÃo e transportes de sÃdio e de cloreto. Fosfolipase miotÃxica (tipo 1) demonstrou alteraÃÃes somente no transporte de Ãons. A atividade de Bmj em doses crescentes em nervo FrÃnico Diafragma de rato mostrou um bloqueio na forÃa de contraÃÃo dose dependente, com efeito significante nas maiores doses. Em canal deferente de camundongos induziu a uma inibiÃÃo dose dependente da contraÃÃo estimulada por campo elÃtrico. Este feito nÃo foi revertido pela Ioimbina nem por naloxone. Em outro estudo a adiÃÃo do veneno bruto de Bmj inibiu a contraÃÃo neurogÃnica,quando comparado com nenhuma queda significante pela contraÃÃo com Cch, NA ou ATP (em Krebs normal ou enriquecido com guanetidina e fentolamina. A ausÃncia de efeito do veneno bruto de Bothrops marajoensis sobre a contraÃÃo induzida pelos principais agonistas purinÃrgicos demonstra provÃvel atividade a nÃvel prÃ-sinÃptico. FraÃÃes de fosfolipases miotÃxicas (tipo 1 e tipo 2) demonstraram uma inibiÃÃo da contraÃÃo dose dependente. / In this article we evaluated the activity of Bothrops marajoensis (Bmj) and its fractions in the cardio-renal system. The results of the total venom in blood pressure experiments showed a decrease in the mean arterial pressure and heart rate without significant changes in respiratory rate. The same experiments performed in rats atropinized showed the permanence of falling blood pressure and heart rate. After administration of Bmj used in infusion of isolated rats heart of there was a decrease in myocardial force of contraction accompanied by an increase in perfusion pressure, without changes in coronary flow. The electrocardiographic analysis after injection of Bmj in rats causes a progressive atrioventricular block until a complete blockage and difficulty in atrial conduction. The assessment in the mesenteric vascular bed Bmj did not produce significant changes. The system renal perfusion in rats caused significant decrease in perfusion pressure, renal vascular resistance, urinary flow, filtration rate, transport of sodium and chloride. The phospholipase (PLA2) type 1 showed only an alteration in the transport of electrolytes. The Bmj fractions neurotoxicity in rat phrenic nerve diaphragm increasing showed a blockage dose-dependent in the strength of contraction. In mice vas deferens we observed an induced of a dose-dependent inhibition of contraction stimulated by electric field. This fact was not reversed by yohimbine or by naloxone. In another study the addition of the total venom of Bmj inhibited the neurogenic contraction, compared with no significant decrease in contraction by Cch, NA or ATP (in normal Krebs solution or with enriched with guanethidine and phentolamine). The fractions, PLA2 (type 1 and type 2) showed a dose-dependent inhibition of contraction.

O nervo depressor aórtico (NDA) é, primariamente, um conjunto de fibras aferentes que transmitem informações oriundas de alterações da pressão arterial (PA) a partir dos barorreceptores arteriais (mecanorreceptores localizados no arco da aorta ou seio carótico) aos centros de controle cardiovascular localizados no sistema nervoso central (SNC). Este mecanismo é responsável pela regulação reflexa da função cardíaca e vascular, promovendo ajustes nos centros vasoconstritor e vasodilatador, atuando simultaneamente sobre os sistemas simpático e parassimpático. Fato este que, contribui para o aumento da atividade vagal cardíaca e inibição de descargas simpáticas para vasos e coração, garantindo a manutenção dos níveis pressóricos dentro de uma faixa de normalidade. Diversos neurotransmissores foram descritos atuando nos centros de controle cardiocirculatório localizados no tronco encefálico, mais especificamente no bulbo, participando da regulação da PA. Nestas regiões centrais, os neurotransmissores glutamato, GABA (Àcido Gama Aminobutírico) e substância P (SP) foram amplamente investigados. Entretanto, em nenhum destes trabalhos foi realizado um estudo detalhado, investigando a presença da SP em nervos depressores aórticos de forma direta, sendo esta informação ainda desconhecida. Acredita-se que a SP seja um transmissor do reflexo barorreceptor, atuando na modulação deste circuito, na tentativa de atenuar elevações da pressão sanguínea. Existe portanto a necessidade de uma investigação morfológica e imunohistoquímica com o intuito de promover o esclarecimento sobre os neurotransmissores presentes no NDA. Os nervos frênicos foram utilizados como controle positivo, já que neste território a SP já se encontra caracterizada. Inúmeros são os estudos que descrevem a existência da SP em nervos frênicos, fato este que justifica a aplicação do referido nervo como controle do NDA, foco de estudo deste projeto. Baseados nestas necessidades, o objetivo do presente estudo foi primeiramente o de promover a padronização da técnica imunohistoquímica (IHQ), bem como a verificação da viabilidade de utilização do glutaraldeído à 2,5% como um fixativo primário, auxiliando na identificação de neurotransmissores dentro do sistema nervoso periférico. Em seguida, a identificação e quantificação da SP em NDA de ratos normotensos através do método imunohistoquímico indireto (3,3\'- Diaminobenzidina \"DAB\") foram realizados. O referido estudo foi desenvolvido em duas etapas. A primeira parte corresponde a padronização e otimização da técnica de imunohistoquímica em nervos frênicos de ratos Wistar através da localização e caracterização da SP e da enzima colina acetiltransferase (CAT). A segunda fase, trata-se da identificação e quantificação da SP no NDA, sendo este, um possível neurotransmissor ou neuromodulador do reflexo barorreceptor. Para este estudo foram utilizados no total 38 ratos da linhagem Wistar (Rattus Norvegicus), normotensos, com 20 semanas de idade, machos e fêmeas. Deste total, 16 animais machos foram destinados à padronização da técnica de IHQ em nervos frênicos. E para a caracterização e quantificação da SP no NDA foram utilizados 22 ratos Wistar, sendo 12 machos e 10 fêmeas. Nossos resultados demonstram de forma inédita a presença da SP em fibras amielínicas (tipo C) e fibras de pequeno diâmetro (A-delta) no NDA de forma bastante pontualizada em segmentos proximais e difusa distalmente, sugerindo a existência de subpopulações de fibras amielínicas do tipo C. Estes achados confirmam inúmeras suposições de que a SP atue como um dos neurotransmissores de aferências barorreceptoras, podendo participar na modulação do Sistema Nervoso Autônomo (SNA), uma vez que encontra-se localizada em centros responsáveis pela regulação reflexa da PA. Adicionalmente, a análise do percentual de marcação positiva à SP entre os gêneros apresentou um aparente predomínio da SP em machos mas sem diferença significativa entre os grupos. De forma semelhante, a padronização imunohistoquímica em cortes transversais e longitudinais de nervos frênicos apresentaram uma imunomarcação positiva e aleatória da SP em conjuntos de fibras amielínicas (tipo C) e em fibras de pequeno diâmetro localizadas próximo a periferia do espaço endoneural, corroborando com a localização relatada em estudos morfológicos e ultraestruturais, assegurando a especificidade e a reprodutibilidade do método. Distintamente, as fibras de grande e médio diâmetro (A-alfa, beta e gama), consideradas fibras mielinizadas de condução rápida, foram imunorreativas à CAT em nervos frênicos. Por fim, espera-se que a identificação deste neuropeptídeo sirva de gatilho para que futuras pesquisas envolvendo a liberação de neurotransmissores em aferências barorreceptoras sejam explorados. Fato este, que contribuirá para a agregação de informações pertinentes à modulação ou transmissão da informação neural, propiciando desta forma melhor entendimento da comunicação e atividades barorreflexas associadas a mecanismos cardiovasculares. / The aortic depressor nerve (ADN) is primarily a set of afferent fibers that transmit derived information of changes in arterial blood pressure (BP) from arterial baroreceptors (mechanoreceptors located in the aortic arch and carotid sinus) to sites of cardiovascular control located into central nervous system (CNS). This mechanism is responsible for the reflex regulation of cardiac and vascular function, promoting adjustments of vasoconstrictor and vasodilator centers, simultaneously acting on the sympathetic and parasympathetic systems. In addition, contributes to increased cardiac vagal activity and inhibition of sympathetic discharges to vessels and heart, ensuring the maintenance of blood pressure levels within the normal range. Many neurotransmitters have been described operating in cardio-circulatory control centers located in the brainstem, more specifically in the bulb, participating in the regulation of BP. In these central regions, the neurotransmitters glutamate, GABA (Gamma Aminobutyric Acid) and substance P (SP) have been widely investigated. However, none of these works was carried out a detailed study, investigating the presence of SP in aortic depressor nerves directly, and this information is still unknown. It is believed that SP can be a transmitter at the synapse of the baroreceptor reflex, operating in the modulation of this circuit in an attempt to attenuate elevation of blood pressure. Therefore, there is a need to investigate a morphological and immunohistochemical approach in order to promote the clarification on the present neurotransmitters into ADN. The phrenic nerves were used as a positive control, already as substance P (SP) is characterized in this territory. There have been numerous studies describing the existence of SP in phrenic nerves, a fact that justifies the application of the nerve as control of the ADN, study focus of this project. Based on these requirements, the aim of the present study is two-fold. Firstly, it attempts to promote the standardization of the immunohistochemical (IHC) technique as well as the verification of the feasibility of using glutaraldehyde fixative as a primary, assisting in the identification of neurotransmitters in the peripheral nervous system (PNS). Subsequently, the identification and quantification of SP immunoreactivity in the ADN of normotensive rats by indirect immunohistochemical method (3,3\'-Diaminobenzidine \"DAB\") were done. The study was developed in two stages. The first part corresponds to standardization and optimization of immunohistochemical technique in phrenic nerves of Wistar rats through location and characterization of the SP and enzyme choline acetyltransferase (ChAT). The second phase is about the identification and quantification of the SP into ADN, being a possible neurotransmitter or neuromodulator from the baroreceptor reflex. For this study we used a total of 38 Wistar rats (Rattus norvegicus), normotensive, 20 weeks old, male and female. From this total, 16 male animals were used for standardization of IHC technique in the phrenic nerves. Nonetheless, for the characterization and quantification of SP in ADN were used 22 Wistar rats, 12 males and 10 females. Our results showed an unprecedented manner the presence of SP in unmyelinated fibers (type C) and small diameter fibers (A-delta) into ADN, being quite focused on proximal segments and diffuse distally, suggesting the existence of subsets of unmyelinated fibers. These findings confirm numerous assumptions that the SP acts as a neurotransmitter from afferent baroreceptor and may participate in the modulation of the Autonomic Nervous System (ANS), since it is located in centers responsible for regulating reflex of BP. Further, an analysis of the percentage of positive SP staining between genders, presented an apparent predominance of SP in males but no significant difference between the groups were found. Similarly, IHC standardization in transverse and longitudinal sections of phrenic nerves showed a positive random and immunostaining of SP in sets of unmyelinated fibers (type C) and small diameter fibers located near the periphery of endoneural space, corroborating location reported on morphological and ultrastructural studies, ensuring the specificity and reproducibility of the method. Distinctly, the fibers of large and medium diameters (A-alpha, beta and gamma), considered myelinated fibers of fast conducting, were immunoreactive to ChAT in phrenic nerves. Finally, it is expected that the identification of neuropeptide serve as a trigger for that future studies involving the release of neurotransmitters into afferent baroreceptors be explored. These results could contribute to the aggregation of relevant information for the modulation and transmission of neural information, thus providing better understanding of communication and baroreflex activities associated with cardiovascular mechanisms.

<p>The breathing pattern of preterm infants is immature and is associated with a variety of reflexes. In a patient on the ventilator these reflexes interfere with spontaneous breathing. A better understanding of the immature control of breathing could lead to further improvements in ventilatory techniques. This thesis concerns studies of pulmonary stretch receptor (PSR) and phrenic nerve activity as part of the regulation of breathing in an animal model. </p><p>During assist/control ventilation with three different inspiratory pressure waveforms in animals with healthy lungs, squarewave pressure waveform<b> </b>strongly inhibits spontaneous inspiratory activity.</p><p>During partial liquid ventilation (PLV) in animals with healthy lungs, all PSRs studied maintained their phasic character, with increased impulse frequency during inspiration. PSR activity was not higher during PLV than during gas ventilation (GV), indicating that there was no extensive stretching of the lung during PLV.</p><p>During proportional assist ventilation (PAV) the applied airway pressure is servo-controlled proportionally to the ongoing breathing effort, thereby interacting with the activity of PSRs. Peak PSR activity was higher and occurred earlier during PAV than during CPAP. The regulation of breathing is maintained during PAV in surfactant-depleted animals before and early after surfactant instillation, with a higher ventilatory response and a lower breathing effort than during CPAP in both conditions.</p><p>Both lung mechanics and gas exchange influence the regulation of breathing. Inhibition of inspiratory activity occurred at a lower arterial pH and a higher PaCO₂ during PLV than during GV in animals with surfactant-depleted lungs, which might be related to recruitment of a larger number of pulmonary stretch receptors during PLV.</p><p>In summary, selected aspects of the regulation of breathing were studied in an animal model with different ventilatory techniques under different lung conditions similar to those that can occur in infants.</p>