JUCÁ, Thiago Lustosa. Estudo proteômico de sementes em desenvolvimento e maduras de pinhão manso (Jatropha curcas L.). 2010. 102 f. Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2010. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-07-13T12:51:05Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_tljuca.pdf: 10957597 bytes, checksum: 3f8772ad2102c447a821263267f58114 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-07-14T22:57:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_tljuca.pdf: 10957597 bytes, checksum: 3f8772ad2102c447a821263267f58114 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-14T22:57:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_tljuca.pdf: 10957597 bytes, checksum: 3f8772ad2102c447a821263267f58114 (MD5) Previous issue date: 2010 / Although the potential of the seed Jatropha as a source of raw material for the production of biodiesel is widely recognized, little is known about the deposition patterns of oil and protein during seed development. The availability of this knowledge will be crucial for the creation of new genotypes to meet the demand from the biodiesel industry. In this study, we performed an initial proteomic analysis of the endosperm in developing and mature in order to identify proteins involved in fatty acid metabolism as well as proteins with allergenic properties / toxic / antinutritional that are responsible for marking the residue of oil extraction unsuitable for consumption animal. Through two-dimensional electrophoresis (2DE) were established reference maps of protein fractions from the endosperm of the seed development (ESD) and mature (ESM), which were obtained by exploring the properties of differential solubility of proteins in the endosperm. These reference maps, 1480 spots in total were selected (712 "ESD" and 768 "ESM"), removed from the 2DE gel and digested with trypsin for subsequent analysis by mass spectrometry. Were used for searching the databases NCBInr and a local database of ESTs from developing seeds and during germination of Jatropha. A total of 525 spots were identified and classified functionally. Although most of the proteins identified were related reservation function, proteins involved in biosynthetic pathways of fatty acids were identified and diterpenes, as well as various metabolic-related proteins, protease inhibitors and curcina toxic protein. The relatively low rate of identification obtained in this study may in part be attributed to the fact that there is extensive databases for this species. The results presented here represent the first in-depth analysis of the deposition pattern and identification of proteins from seeds of Jatropha and lay the foundations on which the complete proteome of seeds of Jatropha can be established. / Embora o potencial das sementes de pinhão manso como fonte de matéria prima para a produção de biodiesel seja amplamente reconhecido, pouco se sabe sobre os padrões de deposição de óleo e proteína durante o desenvolvimento da semente. A disponibilidade deste conhecimento será de fundamental importância para a criação de novos genótipos que atendam a demanda das indústrias do biodiesel. Neste trabalho, foi realizada uma análise proteômica inicial do endosperma em desenvolvimento e maduro, objetivando identificar proteínas envolvidas no metabolismo de ácidos graxos assim como proteínas com propriedades alergênicas/tóxicas/antinutricionais que são responsáveis por tornar o resíduo da extração do óleo inadequado para o consumo animal. Através de eletroforese bidimensional (2DE) foram estabelecidos mapas de referência das frações protéicas do endosperma de sementes em desenvolvimento (ESD) e maduras (ESM), que foram obtidas explorando as propriedades de solubilidade diferencial das proteínas do endosperma. Desses mapas de referência, um total 1480 spots foram selecionados (712 “ESD” e 768 “ESM”), retirados dos géis 2DE e digeridos com tripsina para posterior análise por espectrometria de massa. Foram utilizados para as buscas, os bancos de dados do NCBInr e um banco de dados local de ESTs de sementes em desenvolvimento e durante a germinação de sementes de pinhão manso. Um total de 525 spots foram identificados e classificados funcionalmente. Embora a maioria das proteínas identificadas fosse relacionadas com função de reserva, proteínas envolvidas em vias biossintéticas dos ácidos graxos e dos diterpenos foram identificadas, assim como várias proteínas relacionadas com metabolismo, inibidores de protease e a proteína tóxica curcina. A taxa de identificação relativamente baixa obtida neste estudo pode em parte ser atribuída ao fato de não existir bancos de dados extensos para esta espécie. Os resultados aqui apresentados representam a primeira análise em profundidade do padrão de deposição e identificação das proteínas de sementes de pinhão manso e fixam as bases sobre as quais o proteoma completo de sementes de pinhão manso poderá ser estabelecido.

COSTA, Washington Luiz Gomes. Análise espacial e temporal da expressão de genes relacionados ao metabolismo de lipídios em sementes de pinhão manso (Jatropha curcas L.). 2013. 87 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2013. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-07-19T12:29:04Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_wlgcosta.pdf: 2152820 bytes, checksum: afc16b51f6d293f4d04a7abbf8fdca67 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T20:28:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_wlgcosta.pdf: 2152820 bytes, checksum: afc16b51f6d293f4d04a7abbf8fdca67 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T20:28:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_wlgcosta.pdf: 2152820 bytes, checksum: afc16b51f6d293f4d04a7abbf8fdca67 (MD5) Previous issue date: 2013 / The depletion of non-renewable energy such as oil, coal and natural gas, has stimulated the search for alternative sources of energy generation. In this context, physic nut (Jatropha curcas L.) has received special attention from researchers due to the presence of large amounts of oil in its seeds that can be converted into biodiesel. The objective of this study was to investigate the behavior of genes related to lipid metabolism during the development and germination of physic nut seeds. To accurately quantify the levels of gene expression by RT-qPCR, a selection of nine candidates for reference genes was performed. Our results showed that the GAPDH, UCP, ACT11, PP2A2 and CICLOF were the most stable genes during the development of the seeds. In germinating seeds, EF1-α, PP2A2, GAPDH, PUB3 and ACT11 were considered the most stable genes. To validate our findings with reference genes, we used the expression profile of the gene encoding the oleosin protein in which that was similar to those observed in the literature evaluated, indicating that they were suitable reference genes for data normalization by RT-qPCR. After obtaining these data, we performed a gene expression study by RT-qPCR of 20 genes involved in lipid metabolism. Our results revealed that the oleosin, β-ketoacyl-ACP Synthase I and II, thioesterase A and triacylglycerol lipase I genes, as well as other genes involved in lipid biosynthesis, achieved high expression levels in developing seeds. Acyl-CoA synthetase, thiolase and triacylglycerol lipase II, genes related to the degradation of lipids, showed high transcript levels in germinating seeds. The data obtained in this study contribute to the understanding of the metabolic pathways studied, providing subsidies for production of improved varieties of physic nut via genetic engineering. / O esgotamento das reservas de energia não-renovável, como petróleo, carvão e gás natural, têm estimulado a busca por fontes alternativas geradoras de energia. Neste contexto, o pinhão manso (Jatropha curcas L.) tem recebido especial atenção por parte dos pesquisadores, devido à presença de grande quantidade de óleo em suas sementes, que pode ser convertida em biodiesel. O objetivo deste trabalho foi investigar o comportamento de genes relacionados ao metabolismo de lipídios durante os processos de desenvolvimento e germinação da semente de pinhão manso. Para quantificar com exatidão os níveis de expressão gênica por RT-qPCR foi feita uma seleção entre nove candidatos a genes de referência. Nossos resultados mostraram que na análise de sementes em desenvolvimento, os genes GAPDH, UCP, ACT11, PP2A2 e CICLOF foram os mais estáveis. Para as sementes em germinação, os genes considerados mais estáveis foram EF1-α, PP2A2, GAPDH, PUB3 e ACT11. Para validar nossos resultados com genes de referência, foi utilizado o padrão de expressão do gene que codifica a proteína oleosina no qual foi observado que o mesmo foi similar aos observados em artigos científicos pesquisados, indicando que os genes de referência estavam apropriados para normalização dos dados de RT-qPCR. Após obtenção desses dados, efetuou-se um estudo da expressão por RT-qPCR de 20 genes envolvidos com o metabolismo de lipídios. Nossos resultados revelaram que os genes oleosina, β-cetoacil-ACP Sintase I e II, tioesterase A e triacilglicerol lipase I, bem como outros genes envolvidos na biossíntese de lipídios, alcançaram altos níveis de expressão no desenvolvimento da semente. Os genes acil-CoA sintetase, tiolase e triacilglicerol lipase II, relacionados com a degradação de lipídios apresentaram altos níveis de transcritos na germinação da semente. Os dados obtidos neste trabalho contribuem para o entendimento das vias metabólicas estudadas, fornecendo subsídios para a produção, via engenharia genética, de variedades melhoradas do pinhão manso.