Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-08-25T18:05:35Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thiago Dadalto Gimenez - 2016.pdf: 1825933 bytes, checksum: 5a60bb7603f0e0d32606fdd6c1e83d47 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-26T11:38:12Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thiago Dadalto Gimenez - 2016.pdf: 1825933 bytes, checksum: 5a60bb7603f0e0d32606fdd6c1e83d47 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-26T11:38:12Z (GMT). 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Analytical methods were developed for dengue virus detection, to enable RNA based molecular diagnoses in low cost devices. RNA extraction was carried out through a dynamic solid phase extraction (dSPE) methodology, by using magnetic silica particles. Extraction process occurs by performing three steps: RNA adsorption to the magnetic silica particles surface, washing of the beads and elution of purified RNA. PeT microchips used for RNA extraction were produced by printing, cutting and lamination of polyester films. Microchannels were 18 mm length and 1.2 mm width, and the volume of channels were 6.0 μL. High quality RNA, amplifiable by the reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and reverse transcription loopmediated isothermal amplification (RT-LAMP), was obtained by dSPE. In addition to RNA extraction, the RNA detection by RT-LAMP in PeT devices was also demonstrated in this work. Amplified products were separated in agarose gel or detected by naked eye visualization after addition of fluorescent intercalant substances. The success of RNA extraction and amplification by RT-LAMP demonstrates the potential of PeT microdevices in performing molecular diagnosis for detection of pathogens whose genome is consisted by RNA. / Os sistemas analíticos miniaturizados vêm sendo utilizados com sucesso em muitas aplicações analíticas e bioanalíticas. No campo de diagnósticos clínicos, dispositivos microfluídicos podem tornar as análises mais rápidas, baratas, sensíveis, além de possibilitar a realização de exames no point-of-care. Diagnósticos baseados em técnicas de biologia molecular podem ser divididos em três etapas (extração, amplificação e detecção do ácido nucleico), sendo que todas essas etapas podem ser adaptadas para microescala. Este trabalho apresenta o desenvolvimento de métodos de análises de RNA em microdispositivos descartáveis que podem futuramente ser associados em microssistemas para análises totais (μTAS). As metodologias foram desenvolvidas para detecção do vírus dengue, a fim de possibilitar diagnósticos moleculares baseados em RNA viral em dispositivos de baixo custo e com as vantagens associadas à microfluídica. Para a extração do RNA utilizou-se uma metodologia de extração dinâmica em fase sólida (dSPE), com a utilização de partículas magnéticas de sílica. O processo de extração ocorre através da realização de três etapas: adsorção do RNA na superfície das partículas magnéticas de sílica, lavagem das partículas e eluição do RNA purificado. Os microchips de PeT utilizados na extração foram fabricados por impressão, corte dos canais e laminação dos filmes de poliéster. As dimensões dos canais foram 18 mm de comprimento e 1,2 mm de largura, sendo que o volume dos canais foi de 6,0 μL. RNA de alta qualidade, amplificável via reação em cadeia da polimerase pós transcrição reversa (RT-PCR) e amplificação isotérmica mediada por loop pós transcrição reversa (RT-LAMP), foi obtido através da dSPE. Além da extração do RNA, a detecção de RNA via RT-LAMP em dispositivos de PeT também foi demonstrada neste trabalho. Os produtos amplificados foram separados em gel de agarose ou visualizados a olho nu através da adição de intercaladores fluorescentes. O sucesso da extração de RNA e da amplificação via RT-LAMP demonstram o potencial dos microdispositivos de PeT na realização de diagnósticos moleculares para detecção de patógenos cujo genoma consiste de RNA.