O mofo cinzento é causado pelo fungo Botrytis cinerea (Pers.: Fr.), causador de grandes perdas econômicas em várias culturas. Este patógeno é de difícil controle, devido à ampla gama de hospedeiros, sua atividade saprófita e por formar estruturas de resistência (escleródios). Uma das formas de controle deste patógeno é a utilização de produtos químicos, no entanto, principalmente na pós-colheita de frutos, a tolerância por resíduos químicos nos alimentos, é cada vez menos desejável do ponto de vista ecológico e de saúde pública. Os tratamentos alternativos, como a utilização de extratos de plantas, vêm sendo pesquisados na fitopatologia, para reduzir o uso dos fungicidas sintéticos. A canola (Brassica napus) é uma planta que possui compostos biocidas, com potencial de controle de pragas e doenças. Este trabalho teve como objetivos avaliar o efeito de diferentes extratos da canola (alcoólico, macerado, aquoso sem tempo de reserva e infusão) no controle de Botrytis cinerea in vitro e em pós-colheita de morangos. Foram realizados dois experimentos in vitro, sendo um para avaliar o crescimento micelial e outro a germinação de conídios. O delineamento experimental para os dois experimentos foi inteiramente casualizado, em esquema fatorial 4 x 5, sendo o fator modos de extração de extratos e concentrações (0, 3, 6, 9 e 12%), em 4 repetições. No ensaio de crescimento micelial, a unidade experimental foi uma placa de Petri, e um tubo de ensaio no teste de germinação de conídios. Em pós-colheita foram testados os quatro tipos de extratos na concentração de 16%. O delineamento foi inteiramente casualizado, com 4 repetições por tratamento, sendo a parcela composta por 10 frutos/bandeja. Os parâmetros físico-quimicos avaliados foram podridões, perda de massa, firmeza de polpa e acidez titulável. As análises bioquímicas avaliadas foram proteínas totais, antocianinas e flavonóides, e a atividade da enzima fenilalanina amônia-liase (FAL) e peroxidases. Os resultados obtidos permitiram concluir que houve redução do crescimento micelial e da germinação de conídios, em função das concentrações, mas não ocorreram diferenças entre os extratos. A maior eficiência dos extratos ocorreu na concentração de 8,31%, na avaliação com 96horas. Para a germinação o comportamento foi linear decrescente, ou seja, o aumento das concentrações influenciou na menor germinação dos conídios. Os extratos: alcoólico, maceração e infusão reduziram as podridões causadas por B. cinerea em pós-colheita de morangos. Os extratos atuaram na alteração do teor de acidez dos frutos, e no comportamento das peroxidases, mas não apresentaram efeito sobre sólidos solúveis totais (SST), firmeza de polpa, perda de massa, antocianinas, flavonoides,e atividade da FAL. Os resultados obtidos neste trabalho, comprovam o potencial da canola no controle do mofo cinzento em pós-colheita de morangos, bem como do fungo Botrytis cinerea. / The gray mold is caused by the fungus Botrytis cinerea (Pers.: Fr.), causer of great economic losses in various cultures. This pathogen is difficult to control, due to the wide range of hosts, its saprophytic activity and by forming structures of resistance (esclerodios). One of the ways to control this pathogen is the use of chemical products, however, mainly in post-harvest fruit, tolerance by chemical residues in foods is increasingly less desirable from an ecological and public health point of view. The alternative treatments, such as the use of plant extracts, are being probed in phytopathology, to reduce the use of synthetic fungicides. The canola (Brassica napus) is a plant that has biocidal compounds, with potential to control pests and diseases. This study aimed to evaluate the effect of different extracts of canola (alcoholic, macerate, aqueous without reserve time and infusion) in the control of Botrytis cinerea in vitro and in post-harvest of strawberries. Two experiments were conducted in vitro, being one to evaluate the mycelial growth and another the germination of conidia. The experimental design for the two experiments was completely randomized, in a 4 x 5 factorial scheme, and the modes of extraction of extracts and concentrations (0, 3, 6, 9 and 12 %), in 4 repetitions. In the trial mycelial growth, the experimental unit was a Petri dish, and a test tube in germination test of conidia. In post-harvest were tested four types of extracts at a concentration of 16 %. The experimental design was completely randomized, with 4 repetitions per treatment, being the plot composed by10 fruits/tray. The physico-chemical parameters evaluated were rotting, weight loss, firmness and titratable acidity. The biochemical analyzes were evaluated total proteins, anthocyanins and flavonoids, and the activity of the enzyme phenylalanine ammonia-lyase (PAL) and peroxidases. The results obtained allowed us to conclude that there was a reduction of mycelial growth and germination of conidia, as a function of the concentrations, but there were no differences between the extracts. The greater efficiency of extracts occurred at a concentration of 8.31 %, in evaluation with 96 hours. For germination, the behavior was decreasing linear, in other words, the increase of concentrations influenced the lower germination of conidia. The extracts: alcoholic, maceration and infusion reduced the rot caused by B. cinerea in post-harvest of strawberries. The extracts operate in fruits acidity modification, and in the behavior of peroxidases, but they had no effect on total soluble solids (TSS), pulp firmness, weight loss, anthocyanins, flavonoids,and activity of the PAL. The results obtained in this work, have demonstrate the potential of canola in the control of gray mold on post-harvest of strawberries, as well as the fungus Botrytis cinerea.

Com o crescimento populacional acelerado e a diminuição das áreas para cultivo, o aumento da produtividade de gêneros alimentícios de todos os tipos é essencial para o atendimento da população mundial, no entanto as perdas desde o momento de colheita até a chegada ao consumidor limita a oferta de frutas ao consumidor. Estas perdas na pós-colheita de maçã, morango e pêssego, são na sua maioria causadas por fitopatógenos causando podridões. Estas podridões são causadas por vários fungos, dentre estes estão o Colletotrichum sp., causador da podridão amarga em maçãs, Botrytis cinerea agente causador do mofo cinzento em morangos e Monilinia fructicola em pêssegos o qual causa a podridão parda. Usualmente o controle destes fungos é efetivado com a utilização de fungicidas, no entanto, a utilização de químicos neste processo preocupa os consumidores, pois, podem existir resíduos nas frutas e no ambiente. Desta forma métodos alternativos como a indução de resistência podem ser alternativas para o controle dos microrganismos causadores de doenças na pós-colheita de frutos. A indução de resistência consiste em estimular através de moléculas elicitoras (indutoras) as defesas vegetais, ou seja, a síntese de composto que atuem diretamente sobre o fitopatógeno como as proteínas-RPs, ou que promovam o reforço estrutural nos tecidos adjacentes ao sítio de infecção do fungo. A quitosana retirada da carapaça de crustáceos é uma alternativa de molécula elicitora de baixo custo e sem riscos ao consumidor que vem sendo utilizada na indução de resistência em frutos na pós-colheita. Esse biopolímero apresenta a capacidade de desencadear as respostas defensivas dos frutos; maçã, morango e pêssego contra os fungos, Colletotrichum sp., Botrytis cinerea e Monilinia fructicola respectivamente. Foram desenvolvidos experimentos na Universidade Tecnológica Fededral do Paraná durante os anos de 2013 e 2014, com objetivo de verificar a capacidade da quitosana de induzir as defesas dos frutos da maçãs, morangos e pêssegos em pós-colheita, bem como , a atividade fungistática sobre os fungos Colletotrichum sp., Botrytis cinerea e Monilinia fructicola em condições in vitro. Para os experimentos com os frutos o indutor foi aplicado nas concentrações 0,25; 0,5; 1,0 e 2,0% e a testemunha (água destilada), os tratamentos foram organizados em delineamento inteiramente casualizado com quatro repetições de 20 frutos de maçã, 20 frutos de morango e 15 frutos de pêssego. Os frutos foram selecionados e padronizados, sendo em seguida as maçãs e os pêssegos submetidos ao tratamento por imersão em soluções de quitosana, já os morangos foram tratados pulverizando a solução contendo quitosana diretamente sobre os frutos. Após 24horas, os frutos foram inoculados, com uma suspensão contendo conídios do patógeno Colletotrichum sp. nas maçãs, B. cinerea em morangos e M. fructicola em pêssegos na concentração 5.10-3 conídios/ml diretamente sobre os frutos com auxílio de um borrifador e de uma micropipeta. Após a realização dos tratamentos os frutos foram acondicionados em B.O.D. a 26 ± 1 °C para maçãs e pêssegos e a 10 ± 1 °C para os morangos. Foram realizadas avaliações periódicas após a implantação e no término dos experimentos para os seguintes parâmetros, físicoquímicas (perda de massa, sólidos e solúveis totais, acidez titulável, firmeza de polpa, incidência de podridões) e bioquímicas (proteínas, açúcares redutores, açúcares totais, antocianinas, flavonoides, e a atividade das enzimas fenilalanina mônia-liase(FAL), peroxidases, quitinases e β-glucanases). Nos experimentos in vitro avaliou-se o efeito da quitosana sobre os patógenos (Colletotrichum sp, B. cinerea e M. fructicola) Os fungos previamente cultivados em placas puras forma transferidos para placas contendo meio B.D.A. com as concentrações de quitosana (0; 0,25; 0,5, 1 e 2%). Sendo após 24 e 48 horas realizadas as medições perpendiculares do diâmetro da colônia pra verificar o crescimento micelial. Os dados dos experimentos foram submetidos à análises de normalidade e de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey e de regressão (p=0,05), com auxílio do software Assistat. Os resultados demonstraram a interferência da quitosana sobre a indução de resistência ao controle da incidência da podridão amarga em pós-colheita de maçãs Gala, ativando a PRPs B-1-3 Glucanase e no controle de Colletotrichum sp in vitro com ação fungistática. Já em morango o indutor controlou o mofo cinzento ativando as peroxidases e quitinases e β-1-3-Glucanase e diretamente o fungo B. cinerea in vitro. Em pêssegos a atuação foi sobre a manutenção da qualidade dos frutos, na indução ativando os genes da quitinase, β 1-3 Glucanase e da mesma forma em in vitro sobre M. fructicola. Conclui-se então que a quitosana apresenta um grande potencial na indução de resistência de frutos na pós-colheita, ativando as defesa contra fungos fitopatogênicos e diretamente sobre os mesmo com atividade fungistática e fungitóxica in vitro. Sendo que nos frutos de maçã cv. Gala atuou diretamente sobre os parâmetros físico-químicos reduzindo a perda de massa, mantendo a firmeza de polpa e reduzindo capacidade de esporulação de Colletotrichum sp. confirmando também o efeito indutor pela ativação da enzima β-1,3 glucanase e a atividade fungistática sobre Colletotrichum sp. in vitro com redução do crescimento micelial. Já em morangos cv. Camarosa, ativa a síntese das proteínas-RPs quitinases e β-1-3 glucanases contra o mofo cinzento, mantém a firmeza de polpa em níveis mais elevados e interfere no metabolismo dos açúcares totais e redutores e das flavonoides. E ainda atua diretamente sobre B. cinerea diminuindo crescimento micelial in vitro em relação controle. Nos frutos de pêssego a quitosana atua na indução de resistência a podridão parda em pós-colheita de pêssegos “delicioso” ativando as enzimas FAL, quitinase e β-1-3-glucanases. E Atua sobre M. fructicola in vitro com ação fungistática. / With the rapid population growth and the reduction of areas for cultivation, the increased productivity of foods of all kinds is essential to meet the world's population demand. However post-harvest losses from the time of harvest until the arrival to the consumer, limits the supply of fruits to the consumer. The losses in the post-harvest of apples, strawberries and peaches, caused by the incidence of rot led by phytopathogenic fungi, is responsible for most of the losses. These rots are caused by various fungi, among these are the Colletotrichum sp., cause of bitter rot on apples, Botrytis cinerea causative agent of gray mold on strawberries and M. fructicola on peaches which causes brown rot. These phytopathogens are fungi with high ability to spread infection and therefore cause serious damage to fruits, generating losses in post-harvest. Usually the fungi control is conducted with the use of fungicides. However, the use of chemicals in the process concerns consumers, since there may be residues in fruits and the environment. Therefore, alternative methods like the resistance induction can be used to control the disease-causing microorganisms in the postharvest fruits. The induction consists on stimulating the plants defenses through (inducing) elicitor molecules, specifically the synthesis of compounds that act directly on the pathogen as phenols, protein-RPs, or producing structural reinforcement of tissues adjacent to the site of infection of the fungus. Currently, chitosan extracted from crustacean shells is an alternative elicitor molecule of low cost and no risk to the consumer that has been used in the induction of the resistance in postharvest fruits. This biopolymer has the ability to trigger the defensive responses of the fruits; apple, peach, and strawberry against fungi Colletotrichum sp., Botrytis cinerea and Monilinia fructicola, respectively. The inductor was applied at concentrations of 0.25, 0.5; 1.0 and 2.0% and on the control (distilled water). The treatments were arranged in a completely randomized design with four replications of 20 apple fruits, 20 strawberry fruits and 15 peach fruits. The fruits were selected and standardized, and subsequently the apples and peaches were subjected to treatment by immersion in solutions of chitosan, and strawberries were treated by spraying the chitosan-containing solution directly onto the fruits. After 24 hours, the fruits were inoculated with a solution containing conidia of the phytopathogen Colletotrichum sp. on apples, B. cinerea on strawberries and M. fructicola on peaches, in concentrations of [5.10]^(-3) conidia/ml directly on the fruit, with the help of a spray bottle or with a micropipette in the case of apples, directly inoculating the solution in an wound to the 2 mm bark. After completion of the treatments, the fruits were placed in BOD at 26 ± 1 ° C for apples and peaches, and 10 ± 1 ° C for strawberries, and evaluated after 24 hours to determine the following parameters; weight loss, physical and chemical analysis (solids and total soluble, titratable acidity, firmness, decay incidence) and biochemical (protein, reducing sugars, total sugars, anthocyanins, flavonoids, FAL, peroxidase, chitinase and β-glucanase). An initial sample of the fruits was taken to carry out the initial analyzes, using this data as comparative parameters. In a second experiment, the fungus (Colletotrichum sp, Botrytis cinerea and M. fructicola) were grown in the middle of culture containing the different concentrations of chitosan, to verify the existence of fungitoxic or fungistatic effect of the biomolecule in vitro. The fungi were previously cultivated in clean plates, and subsequently transferred to plates containing PDA medium with the chitosan concentrations (0, 0.25, 0.5, 1 and 2), and after 24 and 48 hours, were performed perpendicular measurements of the diameter of the colony to verify its mycelial growth. Data from experiments were submitted to analysis of normality and variance, and measures were compared by Tukey test and regression test (p = 0.05), with the assistance of Assistat software. The results demonstrated the interference of chitosan on the induction of resistance to control the incidence of bitter rot in postharvest Gala apple, activating the PRPs B-1-3 glucanase and control of Colletotrichum sp in vitro with fungistatic action. On strawberries, the inductor controlled the gray mold by activating the peroxidase, chitinase and β-1-3-glucanase, directly under the fungus B. cinerea in vitro. On peaches, the action was on the maintenance of fruit quality, on the induction, activating genes of chitinase, β 1-3 glucanase, and on the same way, on the in vitro of M. fructicola. Therefere, it has been concluded that chitosan has great potential in the induction of fruit resistance in post-harvest, activating the defense against pathogenic fungi, and directly over the latter with fungistatic activity and in vitro fungitoxic activity.

A cultura do citros é produzida mundialmente, sendo consumidos in natura ou na forma de produtos industrializados. Os frutos cítricos são hospedeiros de muitos patógenos. A pinta preta é uma doença que afeta a citricultura, e tem como agente causal Guignardia citricarpa Kiely. A pinta preta dos citros é controlada mais comumente com defensivos sintéticos, mas esta prática tem acarretado em consequências indesejáveis, tais como, aumento do custo de produção, contaminação do meio ambiente, envenenamento de produtores e consumidores. Em vista disso, faz-se necessário a procura por novos defensivos agrícolas alternativos de baixo impacto ambiental. Desde muito tempo, diversos estudos têm mostrado a ação antagônica de inúmeras linhagens dos fungos do gênero Trichoderma sobre outros fungos. Embora existam estudos sobre o controle de Guignardia citricarpa kiely com espécies de Trichoderma, é sabido que a variabilidade genética entre linhagens do antagonista e do patógeno apresentam uma consequência diferencial na eficiência do controle. Este trabalho teve por objetivo avaliar a capacidade antagonista de quatro linhagens de Trichoderma spp sobre Guignardia citricarpa, buscando identificar os isolados que possam ser aplicadas nos cultivos de citros no Rio Grande do Sul, com incidência da pinta preta. Para tal estudo foram feitos teste de antagonismo e teste de compostos voláteis com as linhagens T1A, T4, T17 e T8 de Tricodema spp. Avaliação da atividade enzimática quitinolítica com as linhagens T1A e T17 e avaliação da sobrevivência dos conídeos dos isolados T1A e T17 de Trichoderma spp. na parte aérea das mudas de laranjeira da variedade valência. Os isolados T8, T4, T1A e T17 de Trichoderma spp. em cultura dupla apresentam maior velocidade de crescimento que o isolado A49/11 de Guignardia citricarpa, estas mesmas linhagens em cultura dupla desenvolveram micoparasitismo sobre o isolado A49/11 de Guignardia citricarpa. Os isolados T8, T4, T1A e T17 de Trichoderma spp. foram capazes de inibir o crescimento micelial do isolado A49/11 de Guignardia citricarpa por emissão de metabólitos voláteis. Os isolados T1A e T17 de Trichoderma spp. liberaram quitinases ativas na presença de micélio desativado de G. citricarpa e Trichoderma spp. A população de Trichoderma spp. aspergida na parte aérea das plantas reduz acentuadamente no período de trinta dias, porém ainda mantém uma concentração que possivelmente pode agir como agente de controle biológico. Sendo assim as linhagens de Trichoderma utilizadas neste trabalho podem ser uma alternativa aos defensivos sintéticos para o controle da pinta preta dos citros. / The culture of citrus is produced worldwide, being consumed in natura or as industrialized products. The citric fruits, such as the orange trees, host many pathogens. The black spot is one disease that affects the citrus culture and has as its usual cause agent Guignardia citricarpa Kiely. The black spot of citrus is more commonly controlled with synthetic pesticides, but this measure has caused undesirable consequences such as the increase of production costs, environment contamination, producers and consumer poisoning. Due to this fact, it is necessary the search for new alternatives of agricultural pesticides of low environmental impact. Since long time ago, several studies have shown the opposite action of several lineages of fungi of genre Trichoderma over other fungi. Although there are studies about the control of Guignardia citricarpa kiely with species of Trichoderma, it is known that the genetic variability of the antagonist and the pathogens show a significant consequence in the efficiency control. This paper has as its objective to evaluate the antagonist capacity of four lineages of Trichoderma spp in controlling Guignardia citricarpa, looking for the identification of isolated ones that could be applied in the citrus cropping in Rio Grande do Sul, with incidence of the black spot. For this study, antagonism tests and volatile compounds tests were carried out with lineages T1A, T4, T17 and T8 of Tricodema spp. Evaluation of enzyme chitinolytic with lineages T1A and T17and evaluation survival of conidium of isolated T1A and T17 de Trichoderma spp in the top part of seedling of orange trees of the Valencia type. The isolated T8, T4, T1A and T17 of Trichoderma spp. in coupled culture show faster speed growing than the isolated A49/11 of Guignardia citricarpa, the same lineages of coupled culture have developed mycoparasitism over the isolated A49/11 of Guignardia citricarpa. The isolated T8, T4, T1A and T17 of Trichoderma spp were capable of inhibiting the mycelia growing of isolated A49/11 of Guignardia citricarpa by emission of volatile metabolites. The isolated T1A and T17 of Trichoderma spp released active chitinases in the presence of non active mycelium of G. citricarpa and Trichoderma spp. The population of Trichoderma spp. sprayed in the top parts of plants sharply reduces in the period of thirty day, however it still maintains a concentration that can possibly acts as a biologic control agent. As a consequence the lineages of Trichoderma spp. used in this paper can be an alternative to synthetic pesticides to control the citrus black spot.

Piper aduncum naturalmente encontrada na Amazônia e no sudeste do Brasil e Piper hispidinervum nativa do Acre são conhecidas pelos seus metabólitos secundários com atividade sobre insetos. Dentre os principais insetos-praga associados à produção agrícola, destacam-se Anticarsia gemmatalis e Spodoptera frugiperda. Este estudo objetivou avaliar os efeitos dos extratos hexânico, acetato de etila e etanólico de folhas de P. aduncum e P. hispidinervum sobre a mortalidade, duração dos períodos larval e pupal, peso, largura e comprimento das pupas de A. gemmatalis e S. frugiperda. A mortalidade larval de A. gemmatalis e S. frugiperda foi afetada pelos extratos de P. aduncum e P. hispidinervum. As taxas de mortalidade de A. gemmatalis nos ensaios com P. hispidinervum foram de 100% (hexano e acetato de etila) com CL50 de 2,34 e 4,93 mg/mL, respectivamente, seguido pelos extratos de P. aduncum com 93,3% (hexano) e 90% (acetato de etila) com CL50 de 6,35 e 5,79 mg/mL, respectivamente. Com o extrato etanólico de ambas as plantas, houve baixas taxas de mortalidade variando de 10,0% a 23,3%. A duração da fase larval foi afetada em todos os extratos testados, tanto em A. gemmatalis quanto em S. frugiperda. A duração da fase pupal de S. frugiperda não foi afetada nos extratos acetato de etila de P. aduncum e etanólico de P. hispidinervum. O peso das pupas de ambos os insetos foi reduzido em todos os extratos das duas plantas. Alterações no comprimento e na largura das pupas foram observadas apenas em extratos de P. hispidinervum. Malformações em pupas e adultos de A. gemmatalis ocorreram em extrato hexânico de P. hispidnervum. Esses efeitos podem ser explicados pela presença de fenilpropanóides e sesquiterpenos nos extratos de P. aduncum e de fenilpropanóides, sesquiterpenos, um monoterpeno e um flavonóide nos extratos de P. hispidinervum, identificados por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas. Assim, essas plantas podem apresentar potencial inseticida no controle de A. gemmatalis e S. frugiperda. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES. / Piper aduncum found naturally in the Amazon and in southeastern Brazil and Piper hispidinervum Acre native are known for their secondary metabolites with biological activity on insects. Among the main insect pests associated with agricultural production, stand out Anticarsia gemmatalis and Spodoptera frugiperda. This study evaluated the effects of extracts hexane, ethyl acetate and ethanol leaves of P. aduncum and P. hispidinervum on mortality, length of larval and pupal periods, weight, width and length of the pupae of A. gemmatalis and S. frugiperda. The larval mortality A. gemmatalis and S. frugiperda was affected by the extracts P. aduncum and P. hispidinervum. Mortality rates in A. gemmatalis with P. hispidinervum assays were 100% (hexane and ethyl acetate) to LC50 of 2.34 and 4.93 mg / mL, respectively, followed by P. aduncum extracts 93,3% (hexane) and 90% (ethyl acetate) LC50 of 6.35 and 5.79 mg / mL, respectively. With the ethanolic extracts of both plants was low mortality rates ranging from 10% to 23.3%. The larval stage was affected in all the extracts tested, both in A. gemmatalis as in S. frugiperda. The duration of the pupal stage of S. frugiperda was not affected in ethyl acetate extracts of P. aduncum and ethanol of P. hispidinervum. The weight of the pupae of both insects was reduced by all extracts of the two plants. Changes in the length and width of the pupae were observed only in P. hispidinervum extracts. Malformations in pupae and adults of A. gemmatalis occurred in hexane extract of P. hispidnervum. These effects can be explained by the presence of phenylpropanoids and sesquiterpenes in P. aduncum extracts and phenylpropanoids, sesquiterpenes, a monoterpene and a flavonoid in P. hispidinervum identified by gas chromatography coupled to mass spectrometry. Thus, these plants could present potential insecticide in control of A. gemmatalis and S. frugiperda.

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No. of bitstreams: 1 Tese - Girlene Soares de Figueirêdo.pdf: 7458867 bytes, checksum: 0a95aefc0abe9034ecaa3b1fed6cda3b (MD5) Previous issue date: 2010-08-25 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Guaran´a is one of the most important crops in the state of Amazonas. Commercially, their use is as refrigerant, however, the industry of Guaran´a has been growing and diversifying its products, including the foreign market. The main disease that affects the culture of guarana is anthracnose, and its etiologic agent, is the pathogen Colletotrichum guaranicola. The main form of anthracnose control is the use of chemical fungicides, but in some regions, which have gained the recognition of organic agriculture, this control measure is not appropriate to the needs of production. Several species of genus Trichoderma, are antagonists used effectively in biological control of some plant pathogens, including the genus Colletotrichum. The presence of dsRNAs is common in fungi, being reported in the literature many studies associating them with various aspects of these hosts: hipovirulence morphological changes, the phenotype “ killer”in yeast, and others changes in these microorganisms. The main objective of this research was investigate the presence and influence of dsRNA on the antagonistic potential of Trichoderma spp. against C. guaranicola. We analyzed 100 isolates of Trichoderma spp., and only one presented dsRNA. The species was determined by sequencing the ITS region of rDNA and its micromorphological aspects (optical and electron microscopy) as Trichoderma asperellum. We proceeded to purify this material by column chromatography on cellulose and digestion with nucleases (DNase I and nuclease S1). To analyze the possible interference of these particles in the antagonistic potential of Trichoderma, the dsRNA was eliminated with sodium deoxycholate, added to PDA medium at a concentration of 200 mg / mL. Tests of antagonism in vitro (by the method of pairing in Petri dishes), showed a difference between inbred strains (with and without dsRNA) against the pathogen. In vivo tests, in plants of Mucuna aterrima, showed no statistical difference between the isolates with and without dsRNA. Morphological alterations were observed betweem isolates with and without dsRNA, the absence of dsRNA showed higher mycelial growth and higher production of spores. Based on these results it was concluded that dsRNA present in T. asperellum interfere in its potential antagonist in vitro tests, but not to its performance in vivo tests. / O guaran´a (Paulinia cupana) ´e uma das mais importantes culturas do Estado do Amazonas. Comercialmente, sua utilizac¸ ˜ao ´e maior nos refrigerantes gaseificados, no entanto, a ind´ustria do guaran´a vem crescendo e diversificando seus produtos, inclusive no mercado internacional. A principal doenc¸a que afeta a cultura do guaran´a ´e a antracnose, sendo seu agente etiol´ogico o fitopat´ogeno Colletotrichum guaranicola. A principal forma de controle da antracnose ´e o emprego de fungicidas qu´ımicos, por´em, em algumas regi˜oes, que adquiriram o reconhecimento de cultura orgˆanica, esta medida de controle n˜ao se adequa `as necessidades da produc¸ ˜ao. As esp´ecies do gˆenero Trichoderma, s˜ao antagonistas utilizadas eficazmente no controle biol´ogico de algumas esp´ecies fitopatogˆenicas, incluindo o gˆenero Colletotrichum. A presenc¸a de dsRNAs ´e frequente em fungos, sendo relatada na literatura muitas pesquisas associando-os com v´arios aspectos nestes hospedeiros: fen´otipos hipovirulentos, alterac¸ ˜oes morfol´ogicas, o fen´otipo “killer” em leveduras, ou ainda, a nenhuma alterac¸ ˜ao nestes microrganismos. Esta pesquisa teve por objetivos investigar a presenc¸a e influˆencia de dsRNA sobre o potencial antagˆonico de Trichoderma spp. contra C. guaranicola. Foram analisados 100 isolados de Trichoderma spp., sendo que apenas um apresentou dsRNA. A esp´ecie foi determinada por sequenciamento da regi˜ao ITS do rDNA e seus aspectos micromorfol´ogicos (microscopia ´optica e eletrˆonica de varredura) como Trichoderma asperellum. Procedeu-se a purificac¸ ˜ao deste material por meio de cromatografia em coluna de celulose e a digest˜ao com nucleases (DNAse I e nuclease S1). Para analisar a poss´ıvel interferˆencia destas part´ıculas no potencial antagˆonico dos isolados de Trichoderma, eliminou-se o dsRNA do isolado infectado com a substˆancia desoxicolato de s´odio, adicionada ao meio BDA na concentrac¸ ˜ao de 200 mg/mL. Testes de antagonismo in vitro (pelo m´etodo de pareamento em placa), revelaram diferenc¸a entre as linhagens is´ogenas (com e sem dsRNA) contra o fitopat´ogeno. O teste in vivo, pelo m´etodo de adic¸ ˜ao de esporos de antagonista e fitopat´ogenos em plantas de Mucuna aterrima, n˜ao apresentou diferenc¸a estat´ıstica entre as li-nhagens. Morfologicamente houve alterac¸ ˜oes entre os isolados com e sem dsRNA, sendo que os sem dsRNA, apresentaram maior crescimento micelial e maior produc¸ ˜ao de esporos. Diante dos resultados obtidos concluiu-se que o dsRNA presente em T. asperellum interfere no seu potencial antagonista em testes in vitro, mas n˜ao no seu desempenho em testes in vivo.

Made available in DSpace on 2017-07-10T18:01:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Eliete Moura de Souza Hurmann.pdf: 819870 bytes, checksum: 4302d144fe2194c2bcd5c074b31e3635 (MD5) Previous issue date: 2016-01-08 / Fundação Araucária / Trichoderma spp. is a promising antagonist, the development and use of products based on this organism gives us the opportunity not only to reduce health risks, but also costs and environmental damage. This work aimed to analyze the efficiency of Trichoderma viride extracts and Trichoderma stromaticum against some microorganisms of interest in clinical medicine, agriculture and fish farming. Among them Colletotrichum musae, banana anthracnose causes, Saprolegnia, which affects fish eggs and some bacteria that cause harm to human health. The dichlorometane extracts were tested at various concentrations, and as positive control a commercial antimicrobial. Inhibition of the pathogen was verified directly by paired cultivation technique. The antimicrobial activity of the extracts was evaluated by disk diffusion and the determination of minimum inhibitory concentration (MIC) by microdilution test broth. In situ tests were done in the fruit inoculating the pathogenic fungus and treated with the extracts and the sensory analysis where it was determined the acceptance of the product. In cultivation paired the Trichoderma spp. inhibited the growth of pathogens being 0.05% significance level. In the disk diffusion test results were positive, and for E. coli and Aeromonas hydrophila gave the best results. MIC against microorganisms of the extracts ranged from 50% to 3,125%. Given the results presented, it is concluded that the extracts were effective in in vitro inhibition of the microorganisms as well as their application in the fruits did not alter the organoleptic characteristics. / O Trichoderma spp. é um antagonista promissor, o desenvolvimento e uso de produtos à base deste microrganismo nos oferece a oportunidade, não apenas de reduzir os riscos da saúde, mas também custos e danos ambientais. Assim, este trabalho teve por objetivo analisar a eficiência dos extratos de Trichoderma viride e Trichoderma stromaticum contra alguns microrganismos de interesse na clínica médica, agricultura e piscicultura. Dentre eles o Colletotrichum musae, causador da antracnose da banana, Saprolegnia, que acomete ovas de peixes e algumas bactérias que causam danos à saúde humana. Os extratos diclorometânicos foram testados em várias concentrações, tendo como controle positivo um antimicrobiano comercial. A inibição do patógeno foi verificada, de forma direta pela técnica de cultivo pareado. A atividade antimicrobiana dos extratos foi avaliada por disco-difusão e pela determinação da concentração inibitória mínima (MIC) por teste de microdiluição em caldo. Foram feitos testes in situ no fruto inoculando o fungo patogênico e tratados com os extratos e a análise sensorial onde foi determinada a aceitação do produto. No cultivo pareado os Trichoderma spp. inibiram o crescimento dos patógenos sendo 0,05% de significância. No teste de disco-difusão os resultados foram positivos, sendo que para Aeromonas hydrophila e E. coli obteve-se os melhores resultados. O MIC (concentração inibitória mínima)dos extratos contra os microrganismos variou de 50% a 3,125 %. Diante dos resultados apresentados, evidenciou-se que, os extratos foram eficientes na inibição in vitrodos microrganismos testados, bem como sua aplicação nos frutos não alterou as características organolépticas dos mesmos.

Orientador : Gil Martins Felippe / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T04:14:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Polo_Marcelo_M.pdf: 9736800 bytes, checksum: b78c4e4964e9d86ab7994f23dd97e22e (MD5) Previous issue date: 1982 / Resumo: Foi acompanhado o crescimento de milho de três culturas realizadas em 1979, 1980 e 1981. Observou-se que durante estes três anos houve uma variação no tempo de duração do ciclo do milho. Esta variação deve ter sido devido às diferentes condições climáticas presentes em cada ano. As características morfológicas das plantas de milho, bem como as práticas utilizadas no seu cultivo (espaçamento), permitem que haja incidência de luz solar direta no interior da campo, mesmo quando totalmente desenvolvido. Isto facilita muito a germinação das sementes e o desenvolvimento das plântulas de ervas invasoras. Durante os três anos foram observadas a época de aparecimento das plântulas de ervas invasoras bem como o local onde apareciam, isto é, se ocorriam no interior ou nas margens do campo ou ocorriam indiferentemente. A maioria das espécies apareceu tanto no interior como nas margens do campo. Poucas espécies apareceram sempre em um mesmo local. Com isto pode ser feito um levantamento das espécies invasoras que ocorriam no campo de cultura. Foi constatada então a presença de um total de 48 espécies, sendo que apareceram 30 em 1989, 38 em 1980 e 43 em 1981, a maioria repetindo-se durante os três anos. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-11-25T07:11:38Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1723831 bytes, checksum: cf2815d4e6da475d371abe6dea9ab071 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-25T07:11:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1723831 bytes, checksum: cf2815d4e6da475d371abe6dea9ab071 (MD5) Previous issue date: 2015-02-19 / O café constitui um dos principais produtos agrícolas mundiais devido às grandes rendas econômicas que gera nos países onde é cultivado. Nesta cultura, comumente podemos observar pragas como Brevipalpus phoenicis e doenças como Hemileia vastatrix que podem ocasionar grandes perdas econômicas, caso medidas de controle não sejam tomadas. O controle destas pragas e doenças usualmente é feito com a aplicação de agrotóxicos, que podem ocasionar problemas tanto nas pragas que se deseja atingir (resistência) como nos inimigos naturais que podem ser afetados indiretamente. O controle biológico torna-se uma opção viável para a diminuição do uso de agrotóxicos e o ácaros predadores fitoseídeos são objeto de muitas pesquisas sobre sua capacidade de explorar diversos recursos na sua alimentação e sua aplicabilidade nesse tipo de controle. O predador Ricoseius loxocheles (Ácari: Phytoseiidae) tem a capacidade de se alimentar e carregar esporos de ferrugem do cafeeiro e por ser membro de uma família de ácaros predadores possui potencial para agente de controle biológico. No entanto, pouca informação existe sobre sua função ecológica no sistema cafeeiro. Nesse contexto, o objetivo do estudo foi determinar a capacidade predatória de R. loxocheles sobre B. phoenicis e o desempenho do fitoseídeo em diferentes fontes alternativas de alimento avaliando sua sobrevivência e reprodução. Os resultados mostraram que o ácaro B. phoenicis não representa uma presa potencial para o fitoseídeo R. loxocheles, já que o sucesso reprodutivo desse ácaro predador foi negativo quando unicamente tinha a presença da praga, ocasionando a morte do fitoseídeo. O crescimento populacional (ri) de R. loxocheles foi positivo em mudas de café infectadas por ferrugem. Adicionalmente, foi demonstrado que o ácaro aproveita diversos recursos alimentícios alternativos, como ferrugem de café, ferrugem de trevo e o pólen de taboa para seu sucesso reprodutivo. Das fontes testadas, apenas o pólen apícola foi o único recurso não viável que reduziu a oviposição e ocasionou a sua morte. / Coffee is one of the main crops in the world, due to the large economic importance that generates in the countries where it is cultivated. This culture is commonly attacked by some pests and diseases, such as Brevipalpus phoenicis and Hemileia vastatrix, respectively, that can produce great economic losses if a not appropriate control is used. The control of these pests and diseases is usually done applying chemicals products that can cause several problems: the target pests can become resistant and the natural enemies can be also indirectly affected. So, biological control becomes a viable option for the reduction of pesticide use, considering that the phytoseiids has been the subject of many studies due their ability to explore various food sources. The phytoseiid mite Ricoseius loxocheles (Acari: Phytoseiidae) has the ability to feed and carry coffee leaf rust spores. However, the little information about this behavior limits to understand their role in agricultural systems, especially in the coffee crops. Then, the objective of this study was to evaluate the predatory ability of R. loxocheles on B. phoenicis and the performance (survival and reproduction) of this phytoseiid on different food sources. The results showed that B. phoenicis does not represent a potential prey for R. loxocheles, considering that the reproductive success of this predatory mite was negative when this pest was the diet, resulting in the death of the phytoseiid. Population growth (ri) of R. loxocheles was positive on coffee plants infected by the rust, but the mite had also good population performance on several alternative food resources, such as coffee rust, rust clover and the cattail pollen for their reproductive success. However, from all alternative food sources tested bee pollen was the only non-viable resource that reduced oviposition of R. loxocheles and caused the death of the phytoseiid mite.

Orientador: Janete Apparecida Desidério / Resumo: O potencial biotecnológico das proteínas Cry e Vip provenientes da bactéria Bacillus thuringiensis é amplamente conhecido. Porém, a evolução da resistência de pragas é a principal ameaça a longo prazo do controle de insetos-praga por plantas transgênicas com toxinas desta bactéria. Estudos relatam a necessidade de se retardar a evolução da resistência e dentre as possibilidades, a utilização de mais de um gene na construção de plantas transgênicas mostra-se eficiente. Dessa forma, é importante buscar novos genes, com diferentes modos de ação, e selecionar os que apresentam atividade entomotóxica diferenciada para Diatraea flavipennella e Elasmopalpus lignosellus, que são pragas secundárias e potenciais da cana-de-açúcar. Para tanto, proteínas Cry1 e Vip3 foram expressas em Escherichia coli e a toxicidade verificada por meio de bioensaios com lagartas neonatas de ambas as espécies de insetos-praga. As proteínas foram purificadas, solubilizadas, ativadas com tripsina e biotiniladas. As BBMVs (Brush Border Membrane Vesicles) foram preparadas a partir dos intestinos de lagartas das duas espécies para realização de ensaios de competição homóloga e heteróloga. Considerando a CL50, as proteínas Cry1Ac e Vip3Aa foram as mais efetivas no controle dos insetos-praga em estudo. O ensaio de ligação mostrou que ocorreu interação entre todas as proteínas e os receptores das duas espécies de lagartas. Os ensaios de competição heteróloga demonstraram não haver competição entre as proteínas Cr... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The biotechnological potential of Cry and Vip proteins from the bacterium Bacillus thuringiensis is widely known. However, the evolution of pest resistance is a major threat to long-term control of insect pests by transgenic plants with toxins of this bacterium. Studies have reported the need to slow down the evolution of resistance and, among the possibilities, the use of more than one gene in the construction of transgenic plants is shown to be efficient. Thus, it is important to look for new genes with different modes of action, and select those with different entomotoxic activity to Diatraea flavipennella and Elasmopalpus lignosellus, which are secondary and potential sugarcane pests. Therefore, Cry1 and Vip3 proteins were expressed in Escherichia coli and the toxicity was verified by bioassays using neonate larvae of both species of the insect pests. The proteins were purified, solubilized, and activated with trypsin and biotinylated. The BBMVs (Brush Border Membrane Vesicles) were prepared using the intestines of the two species to perform the homologous and heterologous competition assays. Considering the LC50, the Cry1Ac and Vip3Aa proteins were the most effective in controlling the insect pests in this study. The binding assays showed that there was interaction between the proteins and the receptors of the two species of larvae. The heterologous competition assays showed no competition between Cry1 and Vip3 proteins for the same binding sites for both species studied... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Arlindo Leal Boiça Júnior / Coorientador: Jacinto de Luna Batista / Banca: Antônio Baldo Geraldo Martins / Banca: Maria José Araújo Wanderley / Banca: Terezinha Monteiro dos Santos Cividanes / Banca: Juliana Altafin Galli / Resumo: A geração de informações sobre o potencial de táticas alternativas no controle de moscas-das-frutas tem despertado crescente interesse, tanto dos produtores quanto dos pesquisadores. Esta pesquisa teve como objetivo avaliar os efeitos de variedades de goiaba e de substâncias de origem vegetal sobre parâmetros biológicos de Anastrepha fraterculus (Wied., 1830) (Diptera:Tephritidae) e sobre o parasitóide Diachasmimorpha longicaudata (Ashmead) (Hymenoptera: Braconidae). A pesquisa foi realizada no Laboratório de Resistência de Plantas do Departamento de Fitossanidade da Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinária - UNESP. Os frutos de goiaba foram adquiridos da Empresa Val frutas, localizada no município de Vista Alegre do Alto-SP. As moscas-das-frutas e os parasitóides foram oriundos de criação mantida em dieta artificial no Laboratório de Radioentomologia do CENA. Foram realizados 6 bioensaios: 1. Determinação do estágio de maturação dos frutos de goiaba preferidos para oviposição de A. fraterculus 2. Não preferência para oviposição de A. fraterculus por frutos de variedades de goiaba; 3. Efeito de produtos naturais aplicados em frutos de goiaba na oviposição de A. fraterculus; 4. Associação dos efeitos dos frutos de variedades de goiaba e de produtos naturais no parasitismo de D. longicaudata; 5. Teste de antibiose em A. fraterculus criadas em frutos de variedades de goiaba e 6. Efeito da resistência extrínseca de frutos de variedades de goiaba sobre o parasitóide D. longicaudata. Os frutos foram tratados com os seguintes produtos: óleo de nim, óleo essencial de erva-doce, óleo essencial de citronela, e teste padrão com água. Foram realizados testes com e sem chance de escolha. Os resultados foram submetidos à análise de variância (ANOVA), as médias foram comparadas pelo teste de Tukey (P = 0,05). Fêmeas de A. fraterculus preferem os estádios ... / Abstract: The generation of information about the potential of alternative tactics in the control of fruit flies has attracted a growing interest, both producing and researchers. This research aimed to evaluate the effects of guava cultivars and substances from plant metabolism on biological parameters of Anastrepha fraterculus (Wied., 1830) (Diptera: Tephritidae) and Diachasmimorpha longicaudata (Ashmead) (Hymenoptera: Braconidae). The study was conducted in the Laboratory of Plant Resistance, Department of Plant Protection, Faculty of Agricultural Sciences and Veterinary Medicine - UNESP. The guava fruits were obtained from Company Val fruits, located in "Vista Alegre do Alto" - SP. The fruit-flies and parasitoids were derived from rearing on artificial diet in the laboratory Radioentomologia - CENA. 6 bioassays were conducted: 1- Determining the maturity stage of guava fruits preferred for egg-laying of A. fraterculus, 2- No preference for egg-laying of A. fraterculus fruits of the guava cultivars, 3- Effect of natural products used in guava fruit on egg-laying of A. fraterculus, 4- Association of the effects of the fruits of guava cultivars and natural products on parasitism of D. longicaudata, 5- Antibiosis test of fruit varieties of guava and on A. fraterculus and 6- Effect of extrinsic resistance of cultivars of guava fruit on the parasitoid D. longicaudata. Fruits were treated with the following products: neem oil, essential oil from fennel and citronella, and controle. Tests with and without choice has been made. The results were subjected to analysis of variance (ANOVA), means were compared by Tukey test (P = 0.05). A. fraterculus female prefer stadiums "semi-ripe" and ripe for egg-laying. The Século XXI cultivar is more susceptible to attack by A. fraterculus. Products which showed the lowest infestation rates were oils of neem and citronella, from the 1.0% concentration. The fruits when ... / Doutor