Thèse (Ph. D.)--Université Laval, 2004. / Bibliogr. Publié aussi en version électronique.

Les prostaglandins (PGs) sont des régulateurs importants de la physiologie humaine et médient, entre autres, l'inflammation, diverses fonctions vasculaires ainsi que la reproduction. Elles sont également impliquées dans de multiples désordres gynécologiques. L'objectif principal de notre laboratoire est d'étudier l'implication des PGs en reproduction humaine. Pour ce faire, des lignées cellulaires immortalisées de l'endomètre humain ont été créées. Dans mon projet de recherche, j'ai caractérisé ces lignées et analysé les processus de biosynthèse des PGs dans les cellules d'endomètre humain. L'expression des enzymes de biosynthèse et des protéines a également été étudiée dans le tissu provenant de biopsies de femmes souffrant de ménorragies. Cela nous a permis d'observer l'expression des PGs synthases dans l'endomètre de femmes souffrant d'hyperménorrhées et de quantifier l'expression d'une nouvelle PGF synthase dans l'endomètre humain. Les résultats de ces travaux devraient faciliter la mise en place de nouvelles études en reproduction et permettre de mieux comprendre l'impact des PGs chez la femme.

L’apoptose est un processus dont l’importance physiologique et pathophysiologique est de mieux en mieux appréciée. Si plusieurs mécanismes expliquant son initiation et son exécution ont été décrits, les détails de sa régulation fine restent à être précisés. Par ces travaux, nous démontrons une interaction directe entre la protéine pro-apoptotique Siva1 et la queue C-terminale de plusieurs récepteurs couplés aux protéines G, incluant TP, IP, PAF, AT?R et CHRM3. Pour TP, nous prouvons que la stimulation du récepteur par le U46619 entraîne une translocation et une accumulation cytoplasmique de Sival, ainsi qu’une modulation de ses interactions avec Mdm2, XIAP et TRAF2, résultant en une induction de l’apoptose. Nous rapportons également que l’expression de Siva1 potentialise l’ubiquitinylation de TP en réponse à une stimulation et que cette ubiquitinylation n’affecte ni la dégradation, ni l’internalisation du récepteur. Nous démontrons par ailleurs que la stimulation de TP diminue l’expression totale d’i?B?, l’inhibiteur principal de la voie NF?B et que cet effet corrèle avec le niveau d’expression de Siva1. En démontrant l’existence d’un complexe entre TP et TRAF2 suite à une stimulation réceptorielle, nous proposons que la modulation NF?B par TP pourrait résulter d’une signalisation dépendant de l’ubiquitine et analogue à celle des TNFR. D’autre part, nous présentons une interaction entre Siva1 et l’arrestine et apportons des données suggérant que l’expression de Siva1 pourrait moduler l’activation des MAPK. Nous proposons finalement un modèle réconciliant les fonctions anti- et pro-apoptotiques de TP et dans lequel le phénotype final d’une stimulation dépendrait de l’expression relative de Siva1. Les corolaires de ce modèle pourraient possiblement bonifier la prise en charge d’incidents ischémiques comme l’infarctus du myocarde ou l’accident vasculaire cérébral, et améliorer le traitement du cancer par une diminution de la toxicité d’agents chimiothérapeutiques et l’amélioration de la sensibilité tumorale.[symboles non conformes]

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

Thèse doctorat : Aspects Moléculaires et Cellulaires de la Biologie : Strasbourg 1 : 2006. / Thèse soutenue sur un ensemble de travaux. Titre provenant de l'écran-titre. Bibliogr. 33 p.

Reproduction de : Thèse d'exercice : Médecine : Nancy 1 : 2003. / Titre provenant de l'écran-titre.

INTRODUCCIÓN: Los isoprostanos son compuestos similares a las Prostaglandinas (PGs) que se producen mediante una peroxidación no enzimática del ácido araquidónico inducida por radicales libres (Roberts & Morrow, 1997; Morrow y cols., 1999). Debido a su semejanza estructural con las PGs, se postula que no sean simples marcadores de la peroxidación lipídica, sino que también posean actividad específica. Se ha investigado la función biológica de los isoprostanos en animales adultos, en donde ejercen un efecto dual de predominio vasoconstrictor a nivel pulmonar y coronario. Sin embargo son muy pocos los referentes en este campo durante el período neonatal.OBJETIVOS: 1.- Estudiar los efectos contráctiles y relajantes de diversos isoprostanos sobre vasos pulmonares y sistémicos de lechones recién nacidos (12-24 h) comparado con lechones de 2 semanas (15-18 días). 2.- Dilucidar los mecanismos de transducción de las respuestas vasculares a los isoprostanos en estos tejidos.ANIMALES DE EXPERIMENTACION, MATERIAL Y MÉTODOS: Se estudió las respuestas contráctil y relajante de algunos isoprostanos (8-iso PGE1, 8-iso PGE2, 8-iso PGF1α, 8-iso PGF1β, 8-iso PGF2α, 8-iso PGF2β) y del mimético del tromboxano A2 -U46619- usando para ello el miógrafo mediante la técnica del baño de órganos. Se utilizaron anillos vasculares de la tercera rama de la arteria pulmonar (AP) y de la vena pulmonar (VP), del tronco principal de la arteria mesentérica (AM) y de la coronaria descendente anterior izquierda (AC). RRESULTADOS: - Contracción: Los isoprostanos producen una potente vasoconstricción dependiente de la concentración en AP, VP y AM (magnitudes 1,5-2 veces superiores a la respuesta de KCl 62,5 mM), pero ésta resulta ser muy inferior a la vasoconstricción desarrollada por U46619. La AP del lechón recién nacido resulta ser más sensible a la acción de 8-iso PGE2, 8-iso PGF1α, 8-iso PGF1β y 8-iso PGF2β que la AP del lechón de 2 semanas, sin que se observe un patrón ontogénico claro para el resto de los compuestos. La VP del recién nacido resulta más sensible a la acción de 8-iso PGE2 y 8-iso PGF1α y la AM del recién nacido a la acción 8-iso PGE2, 8-iso PGF1α, 8-iso PGF2α y 8-iso PGF2β que los correspondientes vasos de los animales de 2 semanas. La respuesta contráctil de todos los isoprostanos y del U46619 se revierte por SQ 29,548 (antagonista del receptor del tromboxano A2 -TP-), lo que indica que indica que la respuesta mediada por los isoprostanos implica al receptor TP. La contracción mediada por los isoprostanos se reduce en presencia de inhibidores de la tirosina cinasa (genisteína) y de la Rho cinasa (Y 27632 e hidroxifasudilo) pero no en presencia de inhibidores de la proteína cinasa C (queleritrina), de la cinasa de la proteína activadora del mitógeno (PD 98059) o de la p-38 cinasa (SB 203580). -Relajación: 8-iso PGE2 induce una relajación en AP de lechones de dos semanas precontraídas con U46619 (máxima 60.1±8,7%) superior a la obtenida tras precontraer la AP con ET-1 en presencia de SQ 29,548 o en AC precontraídas con U46619. A diferencia de otros vasos, se observa también efecto relajante en AC para los siguientes isoprostanos: 8-iso PGE1 y 8-iso PGF2α. La relajación mediada por 8-iso PGE2 en la AP se redujo en presencia del inhibidor de la óxido nítrico sintetasa (L-NAME) y del inhibidor de la guanilato ciclasa soluble (ODQ). El Misoprostol, la PGE1 y la PGE2 indujeron relajación en la AP, pero no lo hicieron ni la PGD2 ni el iloprost.CONCLUSIONES: 1.- Los isoprostanos tienen efectos contráctiles, los cuales son mayores en el recién nacido y se median por el receptor TP acoplado a la tirosina cinasa y Rho cinasa. 2.- Los isoprostanos tienen efectos relajantes que son mayores en animales de 2 semanas y que se median a través de la vía NO-GMPc. / "Effects of Isoprostanes in Pulmonary and Sistemic Vascular Reactivity during Neonatal Period".BACKGROUND: Isoprostanes are prostaglandin (PG)-like compounds produced non enzymatically by free radical-catalyzed peroxidation of arachidonic acid. The vascular effects of these compounds in neonatal vasculature are poorly known.OBJECTIVE: We aimed to study the effects of several E-ring and F-ring isoprostanes on mechanical activity in pulmonary arteries (PA), pulmonary veins (PV) and in mesenteric arteries (MA) from newborn and 2-week-old piglets. DESIGN/METHODS: The contractile and relaxant responses to 8-iso PGE1, 8-iso PGE2, 8-iso PGF1α, 8-iso PGF1β, 8-iso PGF2α, 8-iso PGF2β, and the thromboxane A2 mimetic U46619 were studied using organ bath techniques. RESULTS: Isoprostanes produced powerful concentration-dependent contractions of PA, PV and MA. Neonatal PA were more sensitive to 8-iso PGE2, 8-iso PGF1α, 8-iso PGF1β and 8-iso PGF2β than 2- week-old PA, but a clear ontogenic pattern was not observed for the rest of the compounds. Neonatal PV were more sensitive to 8-iso PGE2 and 8-iso PGF1α, and neonatal MA were more sensitive to 8-iso PGE2, 8-iso PGF1α, 8-iso PGF2α and 8-iso PGF2β than the corresponding 2-week-old vessels. The sensitivity to U46619-decraesed with postnatal age in MA but did not change in PA and PV. The contractile responses to all the isoprostanes and to U46619 were reverted by the thromboxane A2 receptor (TP) antagonist SQ 29,548. Moreover, isoprostanes-evoked contractions were blocked by inhibitors of tyrosine kinase (genistein) and Rho kinase (Y 27632 and hydroxy-fasudil). 8-iso-PGE2 induced modest dose-dependent relaxations (maximal relaxation of 60.1±8,7%) in 2-week-old PA. In CA, 8-iso PGE2 was the most potent vasodilator but relaxant responses evoked by 8-iso PGE1 y 8-iso PGF2α were also observed. 8-iso PGE2 -evoked PA relaxation was markedly impaired by the nitric oxide (NO) synthase inhibitor L-NAME and the soluble guanylate cyclase inhibitor ODQ. Misoprostol, PGE1 and PGE2 fully relaxed U46619-contracted PA, while no relaxation was observed in response to PGD2 or iloprost.CONCLUSIONS: 1. Isoprostanes produce constriction of neonatal porcine pulmonary and mesenteric vascular smooth muscle which involve TP receptors coupled to tyrosine kinases and Rho kinases. 2. Isoprostanes produce modest or absent relaxant responses in piglet vascular smooth muscles. 8-iso-PGE2-evoked relaxation of piglet PA is likely to be mediated by NO.

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

L'endométriose est une maladie gynécologique, touchant les femmes en âge de procréer. Cette pathologie est caractérisée par la présence de tissu endométrial ectopique, c'est-à-dire en dehors de la cavité utérine. Des dysfonctions du système immunitaire sont de plus en plus souvent suspectées comme étant un des éléments responsables de la pathogenèse de cette maladie. L’objectif général de ce projet a donc été d’étudier les mécanismes cellulaires de molécules pro-inflammatoires aux propriétés variées et à l'expression anormalement élevée dans cette pathologie, que sont MIF et les prostaglandines PGE2 et PGF2α, dans les anomalies inflammatoires et invasives en cause dans cette pathologie. La première partie de nos travaux a porté sur l’étude d’un modèle murin de l’endométriose déficient du gène MIF. Le nombre et le volume des lésions collectées à partir des souris déficientes pour le gène MIF sont significativement inférieurs à ceux mesurés dans des souris sauvages utilisées comme contrôle. L’analyse par PCR des cellules isolées des lésions de souris déficientes du gène MIF a révélé une expression réprimée des protéines d’adhésion, d’inflammation et d’angiogenèse. Ces données démontrent pour la première fois que le MIF agit directement sur la croissance et la progression de lésions d’endométriose in vivo. Une partie de nos travaux a porté sur les molécules nécessaires au métabolisme de PGE2 et PGF2α dans l'endomètre eutopique des femmes normales et l'endomètre eutopique et ectopique des femmes atteintes d'endométriose. Selon nos données, l'expression de certains de ces facteurs est perturbée durant cette maladie, ce qui peut avoir des effets délétères sur la physiologie de la procréation. La stimulation des cellules ectopiques par PGF2α entraîne une libération accrue de VEGF et CXCL-8, ceci via l'induction de COX-2 et des deux variants d’épissage du récepteur FP. De plus, la PKC joue un rôle dans ce phénomène, dépendamment et indépendamment de la PLC. Par son effet inducteur sur la libération de VEGF et CXCL-8, PGF2α pourrait favoriser l'aspect inflammatoire et le développement ectopique des lésions d'endométriose, notamment par des phénomènes d’angiogenèse et de prolifération cellulaire accrus. L'effet de PGF2α sur la libération de VEGF et CXCL-8 par les cellules endométriales ectopiques pourrait également expliquer les quantités élevées de ces cytokines dans le liquide péritonéal des femmes atteintes d'endométriose, un phénomène suspecté dans l'infertilité et les douleurs associées à cette maladie. Nos derniers résultats obtenus à partir du liquide péritonéal montrent un profil cytokinique en faveur de l’angiogenèse et la prolifération des lésions d’endométriose, avec une forte augmentation des facteurs suivants : EGF, FGF-2, IL-1α, MIP-1β, TGFα, PDGF-AA, PDGF-BB, MCP-3, sCD40L, Gro Pan, IL-17α, MDC et Rantes, confortant nos observations préalables redéfinissant la maladie comme étant d’origine angio-inflammatoire. L'endométriose et ses symptômes sont des phénomènes complexes ayant probablement plus qu'une seule origine. Parmi les nombreux facteurs à l'expression altérée dans l'endométriose, notre étude montre que MIF, PGE2 et PGF2α, ainsi qu’une pléthore de facteurs pro-angiogéniques pourraient être de ceux jouant un rôle dans l'infertilité et les douleurs reliées à cette maladie. / Endometriosis is a menstrual disorders, is mainly diagnosed in the peritoneal cavity by the presence of lesions, which are thought to originate from the endometrium. Little is known about the causes of endometriosis and no targeted treatment is available. Our studies were the first to show functional defects involving the immune system in the endometrium, i.e. before this tissue migrates and grows into abnormal locations. Our current main hypothesis is that endometriosis development requires a combination of immune dysfunction involving factors, such as MIF, PGE2 and PGF2α. Using a mouse model where MIF-knock out (KO) mice received intra-peritoneal injection of endometrial tissue from MIF-KO or syngenic wild type (WT) mice and vice versa, we first revealed that MIF genetic depletion resulted in a marked reduction ectopic endometrial tissue growth, a disrupted tissue structure and a significant downregulation of the expression of major inflammatory, cell adhesion, survival and angiogenic factors relevant to endometriosis pathogenesis, whereas MIF add-back to MIF-KO mice significantly restored endometriosis-like lesions number and size. This study provides compelling evidence for the role of MIF in endometriosis development and its possible interest for a targeted treatment of endometriosis. We then revealed for the first time multiple defects in PG biosynthesis and receptivity pathways, which differ between eutopic intrauterine and ectopic endometrial tissues and may, owing to the wide spectrum of PG properties, contribute to the initial steps of endometrial tissue growth and development and have an important role to play in the pathogenesis and symptoms of this disease. Afterward, we focussed on PGF2α which markedly up-regulated PGE2, CXCL-8 and VEGF secretion in endometriotic cells, through COX-2 activation. Such an effect was abolished by AL8810, a specific FP antagonist, and significantly down-regulated after specific inhibition of FP different variants signalling pathways. PGF2α enhanced angiogenesis through endothelial tubal formation and proliferation processes. These results show for the first time that PGF2α exerts an indirect angiogenic effects by interacting with ectopic stromal cells and induces the secretion of major angiogenic factors via FP signalling pathways. This study provides evidence for a new mechanism underlying endometriosis development and pathophysiology. As our last data showed distinct patterns of peritoneal fluid cytokine concentrations in endometriotic women most notably a marked increase in EGF, FGF-2, IL-1α, MIP-1β, TGFα, PDGF-AA, PDGF-BB, MCP-3, sCD40L, Gro Pan, IL-17α, MDC and Rantes. These changes may exacerbate the local peritoneal angiogenic and proliferative reaction observed in women with endometriosis, and contributes to its pathophysiology. Inflammation is a major hallmark of endometriosis and angiogenesis is crucial to ectopic endometrial tissue growth. Once viewed as archetypical mediators of inflammation and pain, prostaglandins and angiogenic cytokines should be now regarded major promoters of endometriotic lesions growth.

La protéine murine AKR1B7 appartient à la famille des aldoses réductases. Par son expression limitée à un petit nombre de tissus et son contrôle hormonal, elle constitue un modèle de choix pour l'étude des fonctions physiologiques de cette famille enzymatique. D'une part, ces travaux de thèse ont permis de démontrer ex vivo le rôle de l'activité prostaglandine F synthase des aldoses réductases murines et humaines dans la glande surrénale. Nous avons mis en évidence une nouvelle boucle de régulation négative des fonctions endocrines surrénaliennes qui utilise la prostaglandine F2alpha comme signal paracrine et/ou autocrine entre le cortex et la medulla. D'autre part, nous avons développé la première lignée de souris transgéniques exprimant spécifiquement la recombinase Cre dans la cortico-surrénale pour réaliser l'invalidation conditionnelle de gènes dans ce tissu. Cette lignée constitue un outil très puissant pour la création de modèles murins de pathologies tumorales surrénaliennes