Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-02-20T11:52:01Z No. of bitstreams: 1 Renata Cristina da Penha Franca.pdf: 1679353 bytes, checksum: 9703d2a013a1d783ae4e0d394ef6d0f9 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-20T11:52:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Renata Cristina da Penha Franca.pdf: 1679353 bytes, checksum: 9703d2a013a1d783ae4e0d394ef6d0f9 (MD5) Previous issue date: 2007-05-08 / Tisbe biminiensis is a potential live prey for many species of aquatic animals since its nutritional value is better than those found in other feed organisms commonly used in crustacean and fish larvivultures. Live food seems to be a source of exogenous enzymes which eases food digestion of fish and crustacean early life stages. The aim of this work was to study alkaline proteases from the harpacticoida copepod Tisbe biminiensis by evaluating the effects of pH, temperature and specific inhibitors on the proteolytic activity. Proteases were also studied by SDS-PAGE and zymograms. Crude extract from T. biminiensis showed a total proteolytic activity of 0.39 mU/mg of protein and tryptic activity of 2.33 mU/mg. Optima pH and temperature were 9.0 and 55oC, respectively. The enzymes were thermostable at temperature ranging from 25 to 50oC. The enzymatic activity was strongly inhibited by the trypsin specific inhibitors TLCK (100%), SBTI (100%) and benzamidine (91%).However, EDTA, PMSF and b mercaptoethanol caused only a slight inhibition (35, 35 and 7%, respectively). The results show that alkaline proteases are present on crude extract of Tisbe biminiensis. The highest effects of trypsin inhibitors on enzyme activity suggest that this enzyme plays an important role in protein digestion. T. biminiensis is an important source of live prey to fish and crustacean larvae in nature and partially replace others live food commonly used in aquaculture because they contribute with both exogenous enzymes for the digestion processes and other nutrients required during development of aquatic animals and contribute to development of aquaculture. / Os copépodos harpacticóides são microcrustáceos que servem como alimento vivo preferencial na natureza para diversas espécies de larvas de organismos aquáticos sendo nutricionalmente superiores quando comparados a outros alimentos vivos comumente utilizados nas larviculturas. O alimento vivo é uma importante fonte de enzimas exógenas que contribui para o processo digestivo dessas larvas que por não estarem com o sistema digestivo completamente formado, dependem das enzimas provenientes do alimento vivo para um melhor aproveitamento dos ingredientes da dieta,apresentando consequentemente melhores desempenhos na taxa de crescimento e sobrevivência. Este trabalho teve como objetivo caracterizar as proteases alcalinas do copépodo harpacticóide Tisbe biminiensis através de parâmetros cinéticos e físico-químicos como: pH e temperatura ótima, efeito de inibidores, estabilidade térmica, além da caracterização eletroforética por SDS-PAGE e zimograma. O extrato bruto do T. biminiensis apresentou uma atividade proteolítica total de 0,39 U/mg de proteínas sendo a atividade tríptica de 2,33 U/mg. A atividade enzimática apresentou uma temperatura ótima de 55ºC e pH ótimo de 9,0 e mostrou-se estável termicamente no intervalo de 25 a 50ºC. A atividade enzimática foi fortemente inibida por inibidores específicos de tripsina, TLCK (100±1%), SBTI (100±2%), benzamidina (91±10%), e não houve inibição significativa com os inibidores: EDTA (35±1%), PMSF (35±1%), b- mercaptoetanol (7±11%). Estes resultados demonstraram que a principal protease alcalina presente no extrato bruto do T. biminiensis foi a tripsina, exercendo importante papel na digestão protéica destes animais e este copépodo pode contribuir como fonte de enzimas exógenas para o processo digestivo nas larvas de organismos aquáticos.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-02-22T13:18:21Z No. of bitstreams: 1 Talita da Silva Esposito.pdf: 1198598 bytes, checksum: 814b0f7dce6420e7e8723706bb578b48 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-22T13:18:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Talita da Silva Esposito.pdf: 1198598 bytes, checksum: 814b0f7dce6420e7e8723706bb578b48 (MD5) Previous issue date: 2006-02-06 / Alkaline proteases are commercially important group of enzymes and have a large variety of applications, mainly in the detergent and food industries. The proteases currently uses in the market are serine proteases produced by Bacillus strains, principally. Fish viscera have wide biotechnological potential as a source of digestive proteases. Biotechnology provides a means for transforming such materials usually discarded into valuable produts such as enzymes. The objective of this research was to test if alkaline proteases from fish viscera could be used as an additive in commercially available detergent formulations. Viscera from Colossoma macropomum, the most important native fish for Brazilian aquaculture, and Cyprinus carpio, the second exotic fish in importance for Brazilian aquaculture, were extracted and used as a source of enzyme for this research. The crude extract obtained upon the homogenization of the viscera was submitted to a partial purification with ethanol. The protein content,proteolytic activity of the fractions thus obtained was assessed. The fraction presenting the highest proteolytic activity was further studied (30-70% of ethanol) resulting in 74.9% and 142.4% of protein recovery for tambaqui and carpa, respectively. This fraction was assayed at different temperatures and pH aiming to estimate the conditions for higher proteolysis. Temperarture and pH stability experiments were also carried out. Different commercial lyavailable detergents, surfactants and hydrogen peroxide were used to test the compatibility of these proteases with detergent formulations. The results reveal that these alkaline proteases extracted from C. macropomum show desirable characteristics for its use in laundry industry such as: retention of 73% and 63% of its initial activity in the presence of Surf® and 5% H202, respectively, after 1 hour of incubation at 40ºC. In addition to that it was observed a slight increase of the proteolytic activity in the presence of non-ionic (Tween 20 and Tween 80) and ionic surfactants (Saponin and Sodium cholate). On the other hand, the proteases extracted from the intestine of C. carpio were compatible with the surfactants and oxidants tested butdid not present the same property in the presence of commercially available detergents. / As proteases alcalinas são as enzimas de maior importância comercial devido a sua vasta aplicabilidade, sendo empregadas principalmente nas indústrias de detergentes e de alimentos. Atualmente, a maior parte das proteases utilizadas no mercado é produzida por bactérias do gênero Bacillus, no entanto, elas podem ser amplamente encontradas em um dos principais resíduos da indústria pesqueira, as vísceras. Portanto, uma forma de otimizar o aproveitamento do pescado e, conseqüentemente, reduzir o desperdício é reaproveitar esses subprodutos. Neste trabalho testou-se a aplicabilidade das proteases de vísceras de peixes como aditivo de detergentes em pó comerciais. Para extração das enzimas foram utilizadas vísceras de Colossoma macropomum e de Cyprinus carpio, principal peixe nativo e segundo peixe exótico da aqüicultura continental nacional, respectivamente. A partir deste material obteve-se o extrato bruto, que passou por uma semi-purificação fracional com etanol. As frações obtidas deste procedimento tiveram sua atividade enzimática e quantidade de proteínas determinadas para escolha da fração a ser trabalhada. A fração saturada com 30- 70% de etanol apresentou maior atividade específica tanto no tambaqui quanto na carpa, com rendimentos de 74,9% e 142,4%, respectivamente. Nesta fração verificou-se em que temperatura e pH as proteases apresentavam maior atividade, além da sua estabilidade em relação a esses parâmetros. Para testar a compatibilidade com detergentes comerciais, foram utilizados quatro detergentes comerciais, cinco agentes surfactantes e peróxido de hidrogênio em diferentes concentrações. Os resultados obtidos sugerem que as proteases alcalinas encontradas nas vísceras de tambaqui apresentam características ideais para utilização na indústria de detergentes em pó, como: retenção de até 73% da sua atividade na presença de Surf® e de 63% na presença de 5% de H2O2 após 1 hora de incubação a 40ºC. Além disso, a atividade da enzima foi estimulada na presença de surfactantes não-iônicos (Tween 20 e Tween 80) e iônicos (Saponin e Colato de sódio). As proteases obtidas a partir do intestino da carpa, no entanto, só foram estáveis na presença dos diferentes surfactantes e a 5% de H2O2, perdendo estabilidade quando adicionadas aos detergentes comerciais.