O objetivo do estudo realizado no Laboratório de Pesquisa em Suínos, da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, Pirassununga – SP, foi verificar os efeitos combinados de gonadotrofinas exógenas, (eCG e LH) e flushing sobre a duração e dispersão da manifestação do primeiro e segundo estros, ciclicidade das fêmeas, número de ovulações, viabilidade embrionária e freqüência de cistos ovarianos. Foram utilizadas 72 marrãs pré-púberes da linhagem Pen Ar Lan NAIMA®, com idade média de 157,49±5,01 dias, e 96,65±7,70kgs de peso, distribuidas em quatro tratamentos, em arranjo fatorial, com e sem flushing , e com e sem hormônio. A ração utilizada continha 16% de PB e 3.286,73 kcal/kg ME. A partir do 7º dia do primeiro estro, induzido com hormônio, as fêmeas do tratamento com flushing receberam 50% de incremento da mesma ração. No 16º dia, após o primeiro estro, as marrãs no tratamento hormonal receberam aplicação de 600 UI de eCG (Novormon®) e 2,5 mg de LH (Lutropin®), 72 horas após. Todas as marrãs foram expostas ao macho duas vezes ao dia, a partir do 10º dia e inseminadas ao segundo estro com sêmem heterospérmico contendo 4 x 109 espermatozóides. Ao abate, realizado no 5º dia após a inseminação, os genitais foram colhidos para exame dos ovários e coleta dos embriões. Não se observou interação entre os fatores. Os efeitos analisados em separado, não evidenciaram diferença significativa no Número de ovulações (14,28±5,06 vs 13,47±5,57 com e sem Flushing e 14,60±5,78 vs 13,23±4,83 com e sem Hormônio, respectivamente, P>0,05), na freqüência de cistos ovarianos (22,86% vs 11,11%, com e sem Flushing e 15,15% vs 18,42%, com e sem Hormônio, respectivamente,. P>0,05), na Manifestação do 2º estro (85,71% vs 91,43% com e sem Flushing e 90,63% vs 86,84% com e sem Hormônio, respectivamente, P>0,05), no Peso Final (115,35±8,23 vs 111,56±8,30kg, com e sem Hormônio, respectivamente, P>0,05), na Espessura de toucinho (10,0±2,0 vs 10,2±1,8mm com e sem Hormônio, respectivamente, P>0,05), e na Duração dos estros (57,68±20,02 vs 59,68±14,76 horas, com e sem Hormônio e 57,75±14,99 vs 59,62±19,43 horas, com e sem Flushing, respectivamente, P>0,05). Constatou-se diferença significativa na Viabilidade embrionária (11,55±4,81 vs 8,50±5,32 embriões viáveis, com e sem Flushing e 8,39±5,66 vs 11,25±4,58 embriões viáveis, com e sem Hormônio, respectivamente P=0,02), indicando valor superior para o tratamento com Flushing e inferior no grupo com Hormônio. No Peso final (117,48±9,82 vs 109,28±7,57kg, com e sem Flushing, respectivamente, P=0,0001) e na Espessura de toucinho (10,7±2,2 vs 9,5±1,9kg, com e sem Flushing, respectivamente, P=0,03) o valor superior ficou para o grupo com Flushing. Concluiu-se no estudo a não interação dos efeitos, entre os fatores Hormônio e Flushing . O uso das gonadotrofinas (eCG e LH) reduziu a dispersão de manifestação do segundo estro, sendo efetiva a sua sincronização. O emprego do Flushing no primeiro ciclo estral em marrãs influenciou positivamente a viabilidade embrionária e na associação do eCG e LH mais Flushing não notou-se efeito interativo, identificando-se diminuição da viabilidade embrionária, pela ação hormonal. / The objective of this study, held at the Swine Research Laboratory of the School of Veterinary Medicine and Zootechnology of the Univ. of São Paulo in Pirassununga, São Paulo, was to verify the combined effects of exogenic gonadotropin (eCG and LH) and flushing on the duration and dispersion of the manifestation of initial and second estruses, cyclicity of females, number of ovulations, embryonic viability, and frequency of ovarian cysts. Used for the experiment were 72 pubertal gilts of Pen Ar Lan NAIMA® lineage, with an average age of 157.49±5.01 days, and weight of 96.65±7.70kg. They were distributed in four treatments in a factorial arrangement, with and without flushing, and with and without hormone treatment. The feed used contained 16% CP and 3,286.73 kcal/kg ME. Starting on the seven day of the first estrus, induced with homone, the females with flushing treament received a 50% increase in the amount of the same type feed that they had been receiving. On the sixteenth day of the first estrus the gilts that received hormone treatment were given 600 UI of eCG (Novormon®) and 2.5 mg of LH (Lutopin®), 72 hours later. All the gilts were exposed to boar twice at day, starting on the tenth day and inseminated during the second estrus with heterospermic semen containing 4 x 109 spermatozoon. At slaughter on the fifth day after insemination, the genitals were removed to examine the ovaries and collect the embryos. Interaction between the factors were not observed. The effects that were analyzed separately did not show significant differences in the number of ovulations (14.28±5.06 vs 13.47±5.57 with and without flushing, and 14.60±5.78 vs 13.23±4.83 with and without hormones, respectively, P>0.05), in the frequency of ovarian cysts (22.86% vs 11.11%, with and without flushing and 15.15% vs 18.42% with and without hormones, respectively, P>0.05), during the second estrus (85.71% vs 91.43% with and without flushing and 90.63% vs 86.84% with and without hormones respectively, P>0.05), at final weight (115.35 ± 8.23 vs 111.56 ± 8.30kg, with and without hormones, respectively, P>0.05), in the backfat (10.0±2.0 vs 10.2±1.8mm with and without hormones, respectively, P>0.05), and in the duration of the estruses (57.68±20.02 vs 59.68±14.76 hours, with and without hormones and 57.75±14.99 vs 59.62±19.43 hours, with and without flushing, respectively, P>0.05). A significant difference was found in embryonic viability (11.55±4.81 vs 8.50±5.32 viable embryos, with and without flushing and 8.39±5.66 vs 11.25±4.58 viable embryos with and without hormones, respectively P=0.02), which indicated higher numbers when treated with flushing and lower numbers when treated with hormones. At the final weight (117.48±9.82kg vs. 109.28±7.57kg with and without flushing respectively, P=0.0001) and in the backfat (10.7±12.2 vs 9.5±1.9kg, with and without flushing, respectively, P=0.03) flushing resulted in a higher number. It is concluded in this study that there is a lack of interactive effects between treaments with hormones and flushing. Utilization of gonadotropins (eCG e LH) reduced the dispersion of the second estrus within an effective synchronization. The utilization of flushing in the first estrous cycle in gilts gave positive results as regards to embryonic viability. The association of eCG and LH, plus flushing did not show an interactive effect, and a reduction was identified in embryonic viability based the action of hormones.

Orientadores: Sebastião Roberto Taboga, Fernanda Cristina Alcântara dos Santos / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-25T18:00:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Perez_AnaPauladaSilva_D.pdf: 9263858 bytes, checksum: 6ed11b7c4d0102ec555e0f333c5a35e7 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Os disruptores endócrinos (DE) são agentes exógenos que interferem no funcionamento do sistema endócrino. O 17?-etinilestradiol (EE), um importante componente dos contraceptivos orais é um exemplo de DE. Alguns estudos com roedores machos e fêmeas relataram que a exposição aos DE durante o período pré-natal foi capaz de eliciar proliferações patológicas no sistema reprodutor, incluindo a próstata do animal adulto. Entretanto, pouco se sabe sobre a real ação do estrógeno nas próstatas de machos e fêmeas, principalmente quando se leva em consideração o comportamento de ambas às próstatas durante o desequilíbrio dos níveis de hormônios esteroides que ocorre na puberdade e durante o envelhecimento dessas glândulas. Assim o presente estudo, teve como objetivos avaliar por análises morfológicas, sorológicas e imunohistoquímica quais foram os efeitos da exposição à baixa dose de EE durante os períodos pré-natal e puberal sobre a próstata ventral masculina e na próstata feminina de gerbilo senil. Deste modo, nós dividimos os grupos experimentais de acordo com o período de exposição ao EE (15µg/kg/dia). EE/PRÉ durante o período pré-natal, EE/PUB durante a puberdade e o EE/PRÉ-PUB durante o período pré-natal e puberdade. A exposição à estrógenos sintéticos durante o desenvolvimento afeta o eixo hipotálamo-pituitária gonadal, alterando a produção de hormônios esteroides. Os resultados revelaram que a exposição ao EE durante o desenvolvimento prostático alterou os níveis de hormônios esteroides, diminuindo os níveis de testosterona nos machos senis dos grupos EE/PRÉ e EE-PRÉ/PUB e aumento, nas fêmeas senis do grupo EE/PRÉ. Os níveis de estradiol aumentaram nas fêmeas do grupo EE/PRÉ-PUB. A interação epitélio-estroma também foi afetada pela exposição ao EE durante o desenvolvimento, dado evidenciado pela diminuição da imunorreatividade de ?-actina de músculo liso em regiões com presença de lesões invasivas, principalmente na próstata ventral de macho senil. A frequência de células positivas de p63 diminuiu na próstata ventral masculina do grupo EE/PRÉ, provavelmente a camada basal diminui em locais onde se observa foco com NIP e, aumentou na próstata feminina do grupo EE/PUB. Entretanto, esses dados mostraram que a próstata ventral de machos senil foi mais sensível aos efeitos da exposição ao EE, comparado à próstata de fêmeas senis. A senescência é caracterizada pela queda dos hormônios sexuais¸ e nessa fase aumenta as doenças prostáticas em machos e fêmeas. A exposição ao EE durante fases críticas como o pré-natal e a puberdade acentuaram as alterações na estrutura glandular da próstata e aumentaram o desenvolvimento de lesões prostáticas na senescência. Assim como o período pré-natal, o puberal também foi considerado uma fase crítica na exposição ao EE sobre a próstata de gerbilos machos e fêmeas senis. O consumo de EE durante a gestação ou na puberdade altera significativamente a saúde prostática masculina e feminina durante o envelhecimento, e o gerbilo foi considerado um bom modelo para esse estudo / Abstract: Endocrine disruptor (ED) are exogenous agents that interfere in the endocrine system function. 17?-ethinylestradiol, an important component of oral contraceptives is an example of ED. Studies with male and female rodents have reported that exposure to ED during the prenatal period is able to elicit aberrant pathological proliferations in the reproductive system, inclusive in the prostate of the adult animal. However, the amount known about the actual action of estrogen on male and female prostate, mainly as is the behavior of both prostates during imbalance between androgen and estrogen that occurs in pubertal period and during senescence of these glands. Thus the present study aimed to evaluate by morphological, serological, histopathological and immunohistochemical methods, as the exposure to low dose of ethinylestradiol during the prenatal and pubertal periods acts on ventral male prostate and female prostate of senile gerbil. Thus, we divided the experimental groups according to the period of exposure to EE (15?g/kg/day). EE/PRE during the prenatal period, EE/PUB during puberty and EE/PRE-PUB during the prenatal period and puberty. Exposure to synthetic estrogens during development affects the hypothalamic-pituitary-gonadal axis this alters the production of steroid hormones. The results showed that exposure to EE during developing prostate changed steroid hormones levels, decreasing testosterone levels in senile male of EE/PRE and EE-PRE/PUB groups and increased in senile female of EE/PRE group. The estradiol levels enhanced in females of EE /PRE-PUB group. In addition, EE exposure during the prenatal and pubertal periods altered the immunoreactivity of AR, ER? and ER?, as the function of these receptors are critical for prostate development, changes these signaling pathways contributed to increase of development of lesion and inflammation prostate in males and females during senescence. The stromal-epithelium interaction was also affected by exposure to EE during developing, was observed by decreased immunoreactivity of smooth muscle ?-actin in regions where noted invasive lesions, mainly in the ventral male prostate of senile gerbil. Frequencies positive cells of p63 decreased in the ventral male prostate of EE/PRE group, the basal layer decreases in locals with NIP focus, and these frequencies increased the female prostate EE/PUB group. However, these data showed that the ventral male prostate of senile gerbil was more sensible to effects of exposure to EE compared to female prostate. Senescence is characterized by reducing of sexual hormones, in this phase increases the prostatic diseases in males and females. Exposure to EE during critical periods as prenatal and puberty accentuated the changes in prostate glandular structure and increased the developing prostatic lesions in senescence. As prenatal period, pubertal was also considered a critical phase during the exposure to EE on male and female prostate of senile gerbil. The use of EE during gestational or puberty phases significantly alters male and female prostate health during aging, and the gerbil was considered a good model for this study / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

O grapsídeo Pachygrapsus transversus apresenta uma estratégia reprodutiva alternativa entre os braquiúros. A espécie atinge a maturidade sexual muito cedo, poucos meses após recrutar no entre-marés, e as fêmeas podem sofrer uma muda, após o principal período de reprodução, para um estágio no qual a morfologia do abdômen e seus apêndices difere claramente tanto da característica adulta como da juvenil. Nessa condição não ocorre atividade reprodutiva. Devido ao fato dessa dinâmica responder a um ciclo sazonal, foi testado o efeito da temperatura, do fotoperíodo e da interação de ambos na incidência da muda da puberdade, na manutenção da atividade reprodutiva e na muda para o estágio de inatividade. Para tal, foram mantidos lotes de animais em cativeiro em quatro diferentes combinações de fotoperíodo e temperatura durante dois períodos. Os resultados do primeiro período demonstram que o crescimento, a alometria abdominal e a proporção de indivíduos que realizaram a muda da puberdade foram mais elevados em condições de temperatura condizentes ao inverno. No segundo período, fêmeas adultas apresentaram crescimento superior sob condições de fotoperíodo e temperatura de inverno, enquanto que a proporção de fêmeas em repouso sexual foi elevada, porém indistinta, em todas as condições experimentais. Não foram verificadas diferenças de crescimento entre fêmeas em atividade sexual e indivíduos em repouso reprodutivo. Posteriormente, foi realizado um experimento para analisar a dinâmica da alteração morfotípica na presença de conspecíficos (fêmea sozinha, fêmea na presença de macho e fêmea na presença de outra fêmea) em diferentes níveis de interação (química, visual, táctil). Nesse experimento não foi registrada regressão abdominal para nenhuma das fêmeas, não havendo quaisquer diferenças entre crescimento e alometria abdominal entre os tratamentos. Por fim, foi analisado o comportamento de machos frente a fêmeas de diferentes morfótipos. Os resultados demonstraram que machos conseguem discriminar fêmeas em repouso daquelas aptas à reprodução, passando mais tempo em atividades de contato físico, incluindo cópula, com as últimas. Os resultados obtidos mostram que o crescimento é influenciado por variáveis físicas (temperatura e fotoperíodo), e que a manutenção da atividade reprodutiva, limitada pela ocorrência de mudas para estágios de repouso reprodutivo, parece estar relacionada à presença de conspecíficos. Essa estratégia permitiria uma segregação temporal eficiente de atividades de reprodução e crescimento (em longo prazo), crucial para esta espécie que apresenta maturidade sexual precoce. / The grapsid crab Pachygrapsus transversus undergoes an alternative reproductive strategy compared to other brachyurans. This species reaches maturity early in its ontogeny, few months after recruiting to the rocky intertidal. After the main breeding period, females may molt to a stage, marked by a regression of the abdomen and its appendages, which are easily distinguished from both the juvenile and adult form. In this condition, there is no reproductive activity. Because the frequency of different adult morphotypes changes in a seasonal basis, the effect of temperature, photoperiod and their interaction on the incidence of the puberty molt (for juveniles), the maintenance of reproductive activity and the proportion of females molting to a resting stage (adults) was tested. With this purpose, different female groups were kept in captivity under four different combinations of photoperiod and temperature, during two experimental trials. The results of the first experiment show that growth, abdominal allometry and the proportion of females molting to maturity were all higher under winter temperature. In the second experiment, adult females exhibited higher growth rate under winter conditions of photoperiod and temperature, while the proportion of females molting to a resting stage was generally high, with no significant differences among treatments. Growth did not differ between females exhibiting abdominal regression and females holding the adult breeding condition. A third experiment was conducted to examine the dynamics of morphotypic shift under the presence of conspecifics (isolated females, females held with another female, and females held with a male) in different interaction levels (chemical, visual, tactile). In this experiment, no females undergone abdominal regression, and no differences were observed in growth rate and abdominal allometry among treatments. In a final experiment, the behavioral response of males facing resting and active females was compared. Results demonstrated that males can discriminate these morphotypes. Physical contact, including copula, took longer when males were confronted with the reproductive morphotype. It is concluded that growth is mostly influenced by physical variables (temperature and photoperiod), while holding or not reproductive activity, dictated by the incidence of females molting to a resting stage, is apparently related to the presence of conspecifics. This strategy would allow an efficient temporal segregation between reproduction and growth (in the long run), which might be crucial for a species undergoing precocious sexual maturity.

Objetivou-se no presente estudo, avaliar o efeito da nutrição proteica no terço final da gestação de vacas Nelore, seguido de estratégias de suplementação e/ou alimentação de suas crias fêmeas sobre a idade à puberdade até os 18 meses. O delineamento utilizado foi o inteiramente casualizado em esquema fatorial 2x2x2; constituindo-se de: 2 manejos suplementar das vacas no pré-parto (Fase I); 2 manejos suplementar das crias (Fase II) e 2 manejos alimentar na recria (Fase IIIA). Na Fase I, 241 vacas foram suplementadas com farelos de soja na proporção de 0,5kg/vaca/dia (Tratamento 1) e 258 vacas foram mantidas sem acesso a suplementação Tratamento 2 (controle - Fase I). Cerca de metade do número de vacas e suas crias fêmeas, nascidas na Fase I, foram distribuídas em dois tratamentos na Fase II-(suplementação das crias) aos 110 dias de idade das crias, as quais passaram receber ou não uma mistura mineral proteica energética em creep-feeding, constituindo assim, os tratamentos suplementação de bezerras em creep-feeding (n =119) e controle (sem suplementação, n =122 ) na Fase II até os 205 dias de idade (desmama). Na fase III A, metade das bezerras de cada grupo na fase II foram manejados em confinamentos (n=119) e a outra metade permaneceu no pasto (Grupo controle, n = 122), até os 320 dias de idade. Na fase IIIB, todas as novilhas foram manejados juntos a pasto e submetidas a estação de monta a partir dos 440 dias aos 560 dias de idade. Os sistemas de suplementação das vacas e bezerras na fase de cria não afetaram o peso corporal, concentração de IGF-1 e percentual de peso adulto das novilhas no início da estação de monta (P > 0,05). O manejo das novilhas em confinamento na fase IIIA, aumentou o número de novilhas púberes (31,9% vs 13,9%; P < 0,01), para as novilhas alimentadas ou não em confinamento, respectivamente. Entretanto, a alimentação em confinamento não ocasionou diferença na idade que estas atingiram a puberdade. Considerando apenas as novilhas que atingiram à puberdade (n = 55) houve efeito de interação entre as fases de suplementação/alimentação e a idade à puberdade (P < 0,05). Para as vacas manejadas na Fase I, a suplementação influenciou a ciclicidade das mesmas no momento da IATF (68,9% vs 55,4%; P < 0,05), porém não ocasionou diferença no número de vacas prenhes (60,1 vs 55,3%; P > 0,05), vacas suplementadas e não suplementadas, respectivamente. Similarmente, a suplementação das novilhas em creep-feeding, não influenciou a taxa de prenhez das vacas (P > 0,05). Em conclusão, a suplementação das vacas com fontes proteicas não influenciou a idade a puberdade de novilhas até os 18 meses, sendo que o manejo alimentar em confinamento aumentou o número de novilhas púberes em relação com as manejadas no pasto. / The aim of the present study was to evaluate the effect of protein nutrition in the final third of gestation of Nelore cows, followed by supplementation strategies and / or feed their young females over the age of puberty until 18 months. The experimental design was a completely randomized factorial 2x2x2; constituting of: 2 suplementary managements of cows in pre-partum (Phase I); 2 supplementary managements of offspring (Phase II) and 2 alimentary managements during rearing (Phase IIIA). In Phase I, 241 cows were supplemented with soybean meal at the rate of 0.5 kg / cow / day (Treatment 1) and 258 cows were kept without access to supplemental Treatment 2 (control - phase I). About half of the cows and their female offspring, born in Phase I, were assigned to two treatments in Phase-II (supplementation of cubs) at 110 days of age of the offsprings, which now receive or not a mineral mix protein energy in creep-feeding, constituting, treatments supplementation in calves creep-feeding (n = 119) and control group (without supplementation, n = 122) in Phase II until 205 days of age (weaning). In phase III A, half of each group of calves in phase II were managed in feedlots (n = 119) and the other half remained in the pasture (control group, n = 122), up to 320 days of age. In stage IIIB, all heifers were managed together and submitted to the pasture breeding season from 440 days to 560 days old. Supplementation systems of cows and calves during the growing period did not affect body weight, concentration of IGF-1 and percentage of mature weight of heifers at the beginning of the breeding season (P> 0.05). The management of heifers in the feedlot phase IIIA, increased the number of pubertal heifers (31.9% vs 13.9%, P <0.01) for heifers fed in confinement or not, respectively. However, feeding in confinement caused no difference in age they reached puberty. Considering only heifers reached puberty (n = 55) there was an interaction effect between phases of supplementation / nutrition and age at puberty (P <0.05). For cows managed in Phase I, supplementation influenced the cyclicality of the same at the time of TAI (68.9% vs 55.4%, P <0.05), but caused no difference in the number of pregnant cows (60.1 vs 55.3%, P> 0.05), supplemented and nonsupplemented cows, respectively. Similarly, the addition of heifers in creep-feeding did not influence the rate of pregnancy in cows (P> 0.05). In conclusion, supplementation of cows with protein sources did not influence the age at puberty in heifers up to 18 months, and feeding management in confinement increased the number of pubertal compared with those managed on pasture.

Orientador: José Luiz Moraes Vasconcelos / Resumo: O objetivo dessa tese foi avaliar o desempenho reprodutivo de novilhas Bos indicus (BI) e Bos taurus x Bos indicus (CR) submetidas a protocolos de sincronização da ovulação. No Capitulo 2, novilhas BI e CR púberes e pré-púberes foram submetidas a estratégia reprodutiva proposta por Rodrigues et al. (2014) e um grupo de novilhas púberes foram sincronizadas com o protocolo de IATF padrão. No Capítulo 3, novilhas BI e CR foram submetidas a estratégia reprodutiva aos 12 meses de idade. No Capítulo 4, foi avaliado o efeito da concentração circulante de P4 no Dia 9 do protocolo de IATF e tratamento com eCG em novilhas BI e CR. No experimento do Capítulo 2 uma maior porcentagem de novilhas BI estavam pré-púberes no início do experimento comparadas as novilhas do grupo CR. A taxa de indução não foi diferente entre novilhas BI e novilhas CR. A raça interferiu na prenhez à IATF na Fazenda 1, mas não interferiu na Fazenda 2. Novilhas que não responderam ao protocolo de indução tiveram menor taxa de prenhez à IATF em relação aos demais grupos experimentais. No experimento do Capítulo 3, a presença de CL no D0 não diferiu entre os grupos genéticos. Animais mais pesados apresentaram maior presença de CL, independentemente de raça. Houve efeito de CL no D0 na taxa de prenhez à IATF. Não foi detectada interação entre presença de CL e raça na prenhez, sendo que novilhas BI tiveram menor P/IA do que as novilhas CR. Houve interação entre peso e CL no D0 na P/IA, sendo que em novilhas com CL no... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Not available / Doutor

Orientador: Francisco Eduardo Martinez / Resumo: Introdução: O alcoolismo é doença relacionada a fatores hereditários. Seu consumo pode prejudicar à saúde reprodutiva do consumidor. Alterações observadas na prole pelo consumo parental ascendem os mecanismos epigenéticos, contudo, ainda são limitadas as investigações da ingestão precoce e a influência na vida adulta. Nós avaliamos se os parâmetros reprodutivos de ratos predispostos ao consumo e expostos ao etanol diferem de ratos não predispostos, com resposta dose-dependente, se o consumo é proporcional entre os sexos e se consumo parental pós-púbere interfere no desenvolvimento da prole não exposta. Material e métodos: Ratos das variedades Wistar e Wistar UCh (consumidores voluntários de etanol) foram divididos em: Controle - Wistar (C), pouco bebedor - UChA (A), bebedor - UChB (B) e sem etanol - UChB não exposto (SE). Os ratos A e B foram expostos ao etanol (10%) dos 65 aos 80 dias. Os UChA ingerem entre 0,1 a 1,9 g etanol/kg/dia e os UChB mais que 2 g etanol/kg/dia. Os casais C, A, B e SE foram acasalados aos 100 dias. O estudo foi conduzido em duas fases: 1ª) análise dos efeitos da predisposição genética e da dose alcoólica na reprodução, constituída por C, A e B. O consumo de etanol, a massa corpórea, o tamanho da ninhada, a proporção sexual, os parâmetros gestacionais, os órgãos reprodutivos e a morfologia espermática foram verificados; 2ª) análise dos efeitos do consumo alcoólico parental pós-púbere na prole não exposta, sendo os ratos UChB divididos em: grupo parent... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Background: Alcoholism is characterized as a disease to hereditary factors. The consumption can impairs the consumer reproductive health. Changes in offspring due to parental consumption highlights epigenetic mechanism, however, investigations of early consumption and the influence on reproductive parameters in adulthood are limited. We evaluated the reproducers parameters of rats predisposed to low and high consumption and exposed to post-puberty ethanol differs from non-predisposed rats, with the dose-dependent response, if alcohol consumption is proportional between sexes and if high consumption parental impairs the development somatic and reproductive function on unexposed offspring. Material and methods: Rats Wistar and Wistar UCh (voluntary consumers) were distributed in Control - Wistar (C), low drinker - UChA (A), drinker - UChB (B) and no exposed to ethanol- unexposed UChB (SE). The A and B were exposed to 10% ethanol from 65 to 80 days of age. The UChA drink between 0.1 and 1.9 g ethanol/kg/day and the UChB more than 2 g ethanol/kg/day. The animals C, A, B, and SE were mated on 100 days. This study was conducted in two phases: 1st: analyzed of the effects of genetic predisposition and alcoholic dose on reproduction, in C, A, and B. Ethanol consumption, body weight, litter size, sex ratio of offspring, gestational parameters, reproductive organs, and sperm morphology were observed. 2nd: analyzed the effects of parental alcohol consumption on unexposed offspring. For ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Avanços recentes na etiologia da puberdade precoce foram obtidos a partir da análise do genoma por sequenciamento global. Mutações inativadoras do gene MKRN3 representam uma causa importante de puberdade precoce central (PPC) familial (33-46% dos casos). O objetivo do estudo foi a análise do DNA genômico de pacientes com PPC de origem familial ou esporádica sem mutações deletérias no gene MKRN3. Foram selecionados 68 indivíduos com PPC (37 com a forma familial e 31, aparentemente, esporádicos). O DNA genômico foi extraído do sangue periférico ou da saliva dos pacientes com PPC. A técnica de sequenciamento genômico em larga escala (ILLUMNA -Clonal Single Molecule Array Technology - CSMA) foi usada na busca de novos genes implicados com o desenvolvimento puberal prematuro em seis indivíduos, sendo três afetados e três não afetados, pertencentes a uma grande família brasileira com PPC (Família 1). Mutações em um gene candidato foram pesquisadas em 64 pacientes por sequenciamento automático direto (método de Sanger). Em um subgrupo de pacientes, foi realizada a técnica de MLPA com sondas customizadas na busca de deleções. Por sequenciamento genômico global, foi identificado um novo complexo rearranjo no gene DLK1, caracterizado por uma deleção de, aproximadamente, 14.000 pb na região 5\' não traduzida (5\'UTR), englobando o início do exon 1, associada a uma duplicação de uma região do intron 3 de 269 pb. O gene DLK1 está localizado no braço longo do cromossomo 14 (14q32.2) e sofre imprinting materno. Este lócus está associado à síndrome de Temple, uma doença complexa com múltiplas manifestações, incluindo puberdade precoce central em até 90% dos casos. Para investigar o efeito dessa deleção genômica, as concentrações séricas da proteína DLK1 pelo método ELISA foram medidas nas pacientes afetadas da Família 1. Valores indetectáveis de DLK1 foram encontrados nestas pacientes. O fenótipo das pacientes afetadas da Família 1 caracterizou-se por uma PPC típica, sem sinais sindrômicos (excluída a síndrome de Temple). Posteriormente, por meio do sequenciamento direto, duas novas mutações inativadoras no gene DLK1 foram identificadas (p.Val272Cysfs*14 e p.Pro160Leufs*50) em duas famílias (Famílias 2 e 3) com PPC ou história de menarca precoce. O estudo de segregação nas Famílias 1 e 2 confirmou o padrão de herança autossômico dominante com penetrância completa e transmissão exclusiva pelo alelo paterno. A média de idade de início da puberdade nas pacientes afetadas do sexo feminino foi de 5,4 anos. A técnica de MLPA com sondas customizadas para o gene DLK1 não encontrou outras deleções no subgrupo estudado. Em conclusão, foram identificadas três mutações inativadoras no gene DLK1 associadas à PPC familial de origem paterna. O DLK1 é o segundo gene imprintado associado a distúrbios puberais em humanos. Este achado sugere um papel dos genes imprintados no controle da puberdade. O mecanismo pelo qual esse gene afeta a puberdade ainda é desconhecido / Recent advances in the etiology of precocious puberty were obtained from the whole-genome sequencing analysis. Inactivating mutations of the MKRN3 gene represent a major cause of familial central precocious puberty (CPP) (33%- 46% of the cases). The objective of the study was to analyze the genomic DNA of patients with familial or sporadic CPP without deleterious mutations in the MKRN3 gene. Sixty-eight individuals with CPP (37 with familial form and 31 apparently sporadic cases) were selected. The genomic DNA was extracted from the peripheral blood or saliva of patients with CPP. We used the whole-genomic sequencing technique (ILLUMNA - Clonal Single Molecule Array Technology - CSMA) searching for a new candidate genes implicated in premature pubertal development in 6 individuals, 3 affected and 3 non-affected, belonging to a large Brazilian family with CPP (Family 1). Mutations in one candidate gene were investigated in 64 patients through automatic sequencing (Sanger\'s method). In a subgroup of patients, MLPA using synthetic MLPA probes was performed to search for deletions. A new complex rearrangement in the DLK1 gene characterized by a deletion of approximately 14.000pb in the 5\' untranslated (5\'UTR), encompassing the start of exon 1, associated with a duplication of a region of intron 3 of 269 bp was identified by whole-genomic sequencing. The DLK1 gene is located on the long arm of chromosome 14 (14q32.2) and it is maternally imprinted gene. This locus is associated with Temple syndrome, a complex disorder with multiple alterations, including central precocious puberty in up to 90% of cases. To investigate the effect of this genomic deletion, a serum measurement of DKL1 protein using ELISA method was performed in the affected patients from Family 1. Undetectable serum DLK1 levels were found in these patients. The phenotype of affected patients from Family 1 was characterized by a typical CPP, without syndromic signs (excluding Temple syndrome). Posteriorly, two new inactivating mutations in the gene DLK1 were identified (p.Val272Cysfs*14 and p.Pro160Leufs*50) through direct sequencing in two families (Families 2 and 3) with CPP or precocious menarche history. The segregation studies in Families 1 and 2 confirmed the pattern of dominant autosomal inheritance with complete penetrance and exclusive transmission by the paternal allele. The average age of puberty onset in the affected female patients was 5.4 years. The MLPA technique with synthetic MLPA probes for the DLK1 gene did not find other deletions in the studied subgroup. In conclusion, we identified 3 paternally inherited inactivating mutations in the DLK1 gene associated with familial CPP. The DLK1 is the second imprinted gene associated with pubertal disorders in humans. This finding suggests a role of the imprinted genes in puberty control. The mechanism through which this gene affects puberty is still unknown

Avanços recentes na etiologia da puberdade precoce foram obtidos a partir da análise do genoma por sequenciamento global. Mutações inativadoras do gene MKRN3 representam uma causa importante de puberdade precoce central (PPC) familial (33-46% dos casos). O objetivo do estudo foi a análise do DNA genômico de pacientes com PPC de origem familial ou esporádica sem mutações deletérias no gene MKRN3. Foram selecionados 68 indivíduos com PPC (37 com a forma familial e 31, aparentemente, esporádicos). O DNA genômico foi extraído do sangue periférico ou da saliva dos pacientes com PPC. A técnica de sequenciamento genômico em larga escala (ILLUMNA -Clonal Single Molecule Array Technology - CSMA) foi usada na busca de novos genes implicados com o desenvolvimento puberal prematuro em seis indivíduos, sendo três afetados e três não afetados, pertencentes a uma grande família brasileira com PPC (Família 1). Mutações em um gene candidato foram pesquisadas em 64 pacientes por sequenciamento automático direto (método de Sanger). Em um subgrupo de pacientes, foi realizada a técnica de MLPA com sondas customizadas na busca de deleções. Por sequenciamento genômico global, foi identificado um novo complexo rearranjo no gene DLK1, caracterizado por uma deleção de, aproximadamente, 14.000 pb na região 5\' não traduzida (5\'UTR), englobando o início do exon 1, associada a uma duplicação de uma região do intron 3 de 269 pb. O gene DLK1 está localizado no braço longo do cromossomo 14 (14q32.2) e sofre imprinting materno. Este lócus está associado à síndrome de Temple, uma doença complexa com múltiplas manifestações, incluindo puberdade precoce central em até 90% dos casos. Para investigar o efeito dessa deleção genômica, as concentrações séricas da proteína DLK1 pelo método ELISA foram medidas nas pacientes afetadas da Família 1. Valores indetectáveis de DLK1 foram encontrados nestas pacientes. O fenótipo das pacientes afetadas da Família 1 caracterizou-se por uma PPC típica, sem sinais sindrômicos (excluída a síndrome de Temple). Posteriormente, por meio do sequenciamento direto, duas novas mutações inativadoras no gene DLK1 foram identificadas (p.Val272Cysfs*14 e p.Pro160Leufs*50) em duas famílias (Famílias 2 e 3) com PPC ou história de menarca precoce. O estudo de segregação nas Famílias 1 e 2 confirmou o padrão de herança autossômico dominante com penetrância completa e transmissão exclusiva pelo alelo paterno. A média de idade de início da puberdade nas pacientes afetadas do sexo feminino foi de 5,4 anos. A técnica de MLPA com sondas customizadas para o gene DLK1 não encontrou outras deleções no subgrupo estudado. Em conclusão, foram identificadas três mutações inativadoras no gene DLK1 associadas à PPC familial de origem paterna. O DLK1 é o segundo gene imprintado associado a distúrbios puberais em humanos. Este achado sugere um papel dos genes imprintados no controle da puberdade. O mecanismo pelo qual esse gene afeta a puberdade ainda é desconhecido / Recent advances in the etiology of precocious puberty were obtained from the whole-genome sequencing analysis. Inactivating mutations of the MKRN3 gene represent a major cause of familial central precocious puberty (CPP) (33%- 46% of the cases). The objective of the study was to analyze the genomic DNA of patients with familial or sporadic CPP without deleterious mutations in the MKRN3 gene. Sixty-eight individuals with CPP (37 with familial form and 31 apparently sporadic cases) were selected. The genomic DNA was extracted from the peripheral blood or saliva of patients with CPP. We used the whole-genomic sequencing technique (ILLUMNA - Clonal Single Molecule Array Technology - CSMA) searching for a new candidate genes implicated in premature pubertal development in 6 individuals, 3 affected and 3 non-affected, belonging to a large Brazilian family with CPP (Family 1). Mutations in one candidate gene were investigated in 64 patients through automatic sequencing (Sanger\'s method). In a subgroup of patients, MLPA using synthetic MLPA probes was performed to search for deletions. A new complex rearrangement in the DLK1 gene characterized by a deletion of approximately 14.000pb in the 5\' untranslated (5\'UTR), encompassing the start of exon 1, associated with a duplication of a region of intron 3 of 269 bp was identified by whole-genomic sequencing. The DLK1 gene is located on the long arm of chromosome 14 (14q32.2) and it is maternally imprinted gene. This locus is associated with Temple syndrome, a complex disorder with multiple alterations, including central precocious puberty in up to 90% of cases. To investigate the effect of this genomic deletion, a serum measurement of DKL1 protein using ELISA method was performed in the affected patients from Family 1. Undetectable serum DLK1 levels were found in these patients. The phenotype of affected patients from Family 1 was characterized by a typical CPP, without syndromic signs (excluding Temple syndrome). Posteriorly, two new inactivating mutations in the gene DLK1 were identified (p.Val272Cysfs*14 and p.Pro160Leufs*50) through direct sequencing in two families (Families 2 and 3) with CPP or precocious menarche history. The segregation studies in Families 1 and 2 confirmed the pattern of dominant autosomal inheritance with complete penetrance and exclusive transmission by the paternal allele. The average age of puberty onset in the affected female patients was 5.4 years. The MLPA technique with synthetic MLPA probes for the DLK1 gene did not find other deletions in the studied subgroup. In conclusion, we identified 3 paternally inherited inactivating mutations in the DLK1 gene associated with familial CPP. The DLK1 is the second imprinted gene associated with pubertal disorders in humans. This finding suggests a role of the imprinted genes in puberty control. The mechanism through which this gene affects puberty is still unknown

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Guilherme de Paula Nogueira / Banca: Pietro Sampaio Baruselli / Banca: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo avaliar por ultrassonografia os ovários e suas estruturas e os cornos uterinos, além de quantificar os níveis séricos de progesterona para estudar suas relações com o desenvolvimento e idade à puberdade em novilhas Nelore provenientes de duas linhas de seleção para peso. Em 1980, o rebanho Nelore foi divido em duas linhas de seleção para peso ao sobreano, rebanhos Nelore Controle (NeC) e Nelore Seleção (NeS). No rebanho NeS são selecionados animais com maiores diferenciais de seleção para peso, enquanto no rebanho NeC são selecionados animais com diferenciais próximos de zero. As primeiras novilhas a entrarem na puberdade foram as do rebanho NeS aos 18,4 meses, mas ao final das avaliações (aos 24,4 meses de idade), não foi houve diferença significativa entre os rebanhos (NeC=52% e NeS=48%) na manifestação da puberdade. As novilhas que apresentaram puberdade ao final do trabalho foram aquelas de maior peso ao desmame e à puberdade e com idades menores em relação às não púberes. Não foram encontradas diferenças entre os rebanhos nas medidas reprodutivas estudadas por ultrassonografia, porém quando avaliadas por puberdade, as novilhas púberes comparadas às não púberes apresentaram maior área dos ovários, espessura do endométrio e tônus uterino. Há evidências que apenas o peso a desmama e o peso à puberdade tiveram efeito positivo (P<0,001) na manifestação da puberdade, e a seleção para peso não alterou as características reprodutivas avaliadas em novilhas criadas em um sistema de manejo a pasto. Dentre as medidas reprodutivas avaliadas, a área dos ovários, espessura do endométrio e tônus do útero foram as que apresentaram efeito positivo (P<0,001) na manifestação da puberdade num sistema de manejo a pasto / Abstract: This study aimed to evaluate ovaries, its structures and uterine horns by ultrasound, and to measure serum progesterone levels, correlating them with body development and age at puberty in two Nellore lines of selection for yearling weight. In 1980, the Nellore herd was divided in two selection lines for yearling weight, herds Control Nellore (NeC) and Selection Nellore (NeS). In NeS herd animals are selected based on the greatest selection differential for yearling weight, while in NeC herd animals are selected based on selection differential around zero. Heifers from NeS herd initiated puberty earlier, (18.4 months of age), however, at the end of the study (at 24.4 months of age), no significant difference was observed between herds (NeC=52% and NeS=48%) in puberty manifestation. Heifers which entered puberty at the end of the study were heavier at weaning and at puberty and presented younger ages than non-puberty heifers. No significant differences were detected on reproductive measures evaluated by ultrasound between herds, but when measured by puberty, pubertal heifers compared to nonpubertal heifers had greater ovaries area, height of uterine horn and uterine tone. There are evidences that weaning weight and weight at puberty had a significant effect (P<0.001) on puberty manifestation and selection for post weaning weight did not change reproductive traits studied in heifers reared in grazing management system. Among reproductive characteristics evaluated, ovaries area, height of uterine horn and uterine tone were the ones that presented significant effect (P<0.001) on puberty manifestation in grazing management system / Doutor

Nos últimos anos o gene da leptina, vem sendo objeto de intensa investigação em bovinos pela sua associação com características econômicas, tais como, metabolismo energético, eficiência e consumo alimentar, deposição de gordura e características reprodutivas. Estudos anteriores apontam que esse gene possa influenciar o início da puberdade tanto em animais como em humanos. Tendo em vista a importância desse gene para a pecuária nacional, os objetivos do presente estudo foram determinar a relação entre expressão do gene da leptina e puberdade em novilhas Nelore; identificar polimorfismos no promotor e no gene da leptina; avaliar os efeitos desses polimorfismos com a puberdade, expressão do gene e diferença esperada na progênie (DEP) para probabilidade de prenhez de novilha aos 14 meses (PP14). Amostras de tecido adiposo subcutâneo foram coletadas de 28 novilhas Nelore com idade em torno de 25 meses, sendo 14 pré-púberes e 14 púberes. Análises foram feitas por RT-PCR quantitativa, utilizando cDNA sintetizado a partir de RNA total extraído das amostras de tecido adiposo. A expressão da leptina foi 2,1 vezes maior (P=0,0337) no tecido adiposo das novilhas púberes, sugerindo que esse gene possa estar influenciando o início da puberdade nestes animais. Amostras de DNA foram extraídas para identificar polimorfismos no gene e no promotor da leptina que poderiam estar associados com a puberdade e a expressão do gene no tecido adiposo subcutâneo. Foram identificados 37 polimorfismos, dos quais 20 não haviam sido reportados previamente. Nenhum dos 37 polimorfismos encontrados ou dos 10 haplótipos formados a partir dos polimorfismos, foram associados (P0,05) com a maior expressão do gene ou com a puberdade nestas novilhas. Aparte disso, o DNA de 96 fêmeas Nelore, sendo 48 com alta DEP para PP14 e 48 com baixa DEP para PP14 pertencentes a outro rebanho, foi extraído a partir de sangue periférico. Uma região de 715 pb do gene da leptina foi seqüenciada nestas 96 amostras. Nenhuns dos 11 polimorfismos identificados apresentaram associação (P0,05) com os valores de alta ou baixa DEP para PP14, entretanto a substituição do haplótipo 1, o mais freqüente, pelo haplótipo 2 revelou uma associação sugestiva (P=0,0923) com a característica, indicando que a substituição possa estar contribuindo para a variação da DEP para PP14. Fêmeas com o haplótipo 2 em média tiveram efeito de -9,51 a DEP para PP14 em relação aquelas com o haplótipo mais freqüente. Este estudo confirma a associação da expressão do gene da leptina com a puberdade, descreve novos polimorfismos identificados neste gene e apresenta resultados iniciais da associação dos polimorfismos com expressão e puberdade em Nelore. / In recent years, the leptin gene has been subject of intense research in cattle, possibly because of its association with economic characteristics, such as, energy metabolism, feed efficiency, feed intake, fat deposition and reproductive characteristics. Previous studies suggest that this gene might be influencing the onset of puberty in both animals and humans. Given the importance of this gene for the national livestock, the goals of this study was to determine the relationship between leptin gene expression and puberty in Nelore heifers; identified polymorphisms in the promoter and leptin gene; evaluate the effect of these polymorphisms on puberty, gene expression and expected progeny difference (EPD) for probability of pregnancy of heifers at 14 months (PP14). Samples of subcutaneous adipose tissue were collected from 28 heifers aged around 25 months, 14 prepubertal and 14 pubertal. Leptin gene expression was determined by quantitative RT-PCR using cDNA synthesized from total RNA extracted from adipose tissue samples. The expression of leptin was 2.1 times higher (P=0,0337) in subcutaneous adipose tissue of pubertal heifers, suggesting that this gene might be influencing the onset of puberty in these animals. DNA from these heifers were extracted to identify polymorphisms in the promoter and leptin gene that could be associated with puberty and gene expression in subcutaneous adipose tissue of these heifers. We identified a total of 37 polymorphisms, 20 of which have not been reported previously. None of the 37 polymorphisms found or the 10 haplotypes formed from the polymorphisms were associated (P0.05) with higher expression of the gene or with puberty in these heifers. Apart from this, DNA of 96 Nelore, being 48 with high EPD for PP14 and 48 with low EPD for PP14 belonging to another herd, was extracted from peripheral blood. A region of 715 bp in the leptin gene was sequenced in these 96 samples. None of the 11 polymorphisms identified were associated (P0.05) with high or low values of EPD for PP14, however replacing the haplotype 1, the most frequent, for haplotype 2 showed a suggestive association (P=0,0923) with the trait, indicating that the replacement can contribute to the variation of EPD for PP14. Females with haplotype 2 had an average effect of -9.51 on EPD for PP14 compared to those with the most frequent haplotype. This study confirms the association of leptin expression on puberty, describes new polymorphisms identified in this gene and presents initial results of the association of polymorphisms with expression and puberty in Nelore.