GE Healthcare i Boländerna, Uppsala producerar årligen 88 000 m3 vatten för medicinsk användning. Särskilda krav på hög kvalitet ställs på vattnet, internationellt klassificerat som purified water, PW. Utöver gränsvärden för en bakteriell halt ställer GE krav på halter av endotoxin, giftiga ämnen genererade från fettämnen hos gramnegativa bakterier. Under en längre period har det rena vattnet producerats genom destillation, en process där den utgående produkten har en temperatur på 90 –95 C, varpå de höga temperaturerna håller vattnet steriliserat från mikrobiell tillväxt. I huvudslingor på upp till 300 m distribueras vattnet ut till olika byggnader på anläggningen, varpå vattnet kyls ned till 20 C, där 7 l dricksvatten går åt för att kyla 1 l PW. Från och med år 2018 kommer GE att börja producera PW genom omvänd osmos och elektriska jonbytare, vilket medför den stora skillnaden att kallt vatten på 20 C bildas. Syftet med det här projektet var att hitta ett energibesparande sätt att sterilisera distributionssystemet för kallt renat vatten, vilket uppfyller kriterier för implementering i GE:s anläggning. Projektet genomfördes i huvudsak som en litteraturstudie av vetenskapliga artiklar från en rad olika databaser. Av tillgängliga metoder som analyserats, rekommenderades ozon i GE:s distributionssystem. Detta eftersom ozon är ett starkt oxiderande ämne som lämpar sig väl i PW-system samt inte kräver något stopp i GE:s produktion. Ozon kan bildas direkt från syret i luften alternativt från vattnet själv. De starka oxiderande egenskaperna gör att endast en liten mängd ozon behövs för steriliseringen, vilket genererar låga driftkostnader. Halveringstiden på ungefär 20 minuter i PW gör att det mesta ozonet bryts ned naturligt under distributionen, varpå den resterande delen kan omvandlas tillbaka till syrgas genom strålning med UV-ljus. Ozon är en säker metod som enkelt kan implementeras i GE:s nuvarande distributionssystem, med endast ett fåtal ombyggnationer och skulle vid planerad utbyggnad i framtiden spara in ytterligare kostnader genom enklare rörkonstruktioner. Om GE väljer att använda ozon som steriliseringsmetod uppskattas investeringskostnaden vara intjänad på mindre än ett år.

A água é, sem dúvida, a matéria-prima de maior volume empregada, considerando de forma global, na produção farmacêutica. Pode ser usada direta ou indiretamente, com profundo potencial de impacto na qualidade do produto e na segurança do paciente. Consiste em meio de crescimento que, embora não rico, apresenta variações em suas características microbianas. Sendo assim, os métodos tradicionais utilizados em sua análise, apesar de simples, exigem vários dias para obtenção de resultados e muitas vezes não são sensíveis o suficiente para recuperar microrganismos em determinados estados fisiológicos, como por exemplo, biofilmes ou em estado viável não cultivável. Em virtude disso, o presente trabalho foi elaborado com intuito de desenvolver pesquisas para inovar no controle de qualidade microbiológico da água utilizada para fins farmacêuticos e, além de agregar novas técnicas, visa que os produtos farmacêuticos estejam disponíveis no mercado de modo rápido, seguro, eficaz e com a qualidade desejada. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial das tecnologias alternativas, em específico a citometria de fluxo, no monitoramento microbiano da água purificada, de forma a assegurar a manutenção de baixo risco de falha microbiana. O estudo foi conduzido em três etapas: a primeira etapa foi denominada de prova de conceito e teve por objetivo avaliar se existia alguma correlação entre os resultados obtidos com o método alternativo com aqueles obtidos com o método tradicional; a segunda etapa foi a validação da metodologia alternativa, etapa na qual foram avaliados todos os parâmetros de validação exigidos pelas principais normas e compêndios farmacêuticos; a terceira e última etapa foi denominada de equivalência, etapa na qual foi demonstrada a equivalência entre o método alternativo e os métodos farmacopeicos quando desafiados com amostras de água purificada coletadas de reservatórios da Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF/USP). Os resultados obtidos no presente estudo demonstraram que a citometria de fluxo é não só uma opção válida em relação ao método tradicional por semeadura em profundidade como também oferece como principal vantagem a possibilidade de se ter resultados em tempo real, possibilitando efetuar qualquer correção no processo produtivo a tempo. / Water certainly is the most used raw material used in pharmaceutical industry, considering volume of material and manufacturing process. It may be used either directly or indirectly, causing a considerable impact on product quality and patient safety. It may be considered a poor culture media that presents variable microbiologic characteristics. Even though the traditional microbiological methods used for water evaluation are simple, data obtainment requires several days. In addition, these methods are unable to recover microorganisms from determined physiological conditions, such as those observed in biofilms or in a viable but non-culturable state. Therefore, the present work aimed to research innovative methods for microbiologic quality control of water for pharmaceutical use. The new techniques intend to provide pharmaceutical product to market more rapidly, while maintaining its safety and quality. Specifically, the objective of this work was to evaluate alternative technologies, namely flow cytometry, and their application on microbiological assessment of purified water ensuring the low risk of microbiological fail. This study was conducted in three steps: the first, named as proof of concept, aimed to determine whether occurred any correlation between results obtained from traditional methods and results obtained from alternative method. Validation of alternative method was performed in the second step. This step was executed considering all validation parameters required for main pharmaceuticals norms and compendia. The last step was named equivalency, in which was showed the equivalence between traditional and alternative methods when challenged against purified water sampled from School of Pharmaceutical Sciences (FCF/USP) reservoirs. Results showed that flow citometry is equivalent to traditional methods and was also able to provide real-time evaluation, which enables to adjust the manufacturing process as soon as a deviation is detected.

In the book of Lau Tzu, there is a chapter saying that ¡§The highest goodness is like water¡¨. It¡¦s known that the earth is the only blue planet because of water. Water breeds infinite life and vitality and now it is experiencing a fatal moment due to human abuse in last fifty years while the human history moves into a new era. In the current days, the most important natural living elements including water need be further purified before daily usage. Water itself is now becoming an evaporating and scarce resource in the earth which affects the life of hundred million people. China economy has been growing dramatically in past decades accompanied with remarkably improvement of the living standard of people¡¦s life and income level. The beauty treatment and spa business has been developing its market in almost every province in China. Water is playing a crucial role in the treatment effectiveness and an elementary ingredient to ensure the final result of beauty treatment. The research purposes are to fist analyze the market status of the beauty treatment and functional water; secondly, is to investigate the feasibility and sales synergy in combining these two product and service lines (beauty treatment and functional water); Thirdly, is to conduct an in-depth case study for company T¡¦s marketing strategy in entering this new mixed product market. The whole research structure is divided into three sections. Section one is to collate the available academic research report and theory including market segmentation, goal setting, 4P in marketing, SWOT and competitive analysis in forming a framework of marketing strategy applied in the China beauty and functional water market. Last section is trying to leverage, verify and refine the theory framework against a series of in-depth interview and secondary data in the market. It¡¦s still in an infant stage of China beauty treatment business with an estimated size of three hundred billion RMB dollars market in year 2010. The demand of purified and functional water is soaring up with limited supply due to increasing contamination of water resources. It¡¦s foreseen a gold mine business of functional water as a means in pursuit of healthy, youth-looking and eco-compliance life. This research result also unveils the differentiation created in the beauty treatment market by introducing the functional water. It not only brings in a new profitable product lines, advances the revenues but also improve the bottom line by increasing the economical scale. The finding, last but not least, is the integration of functional water product and beauty treatment is meeting the macro trend of consumers¡¦ perception of living in a healthy, youth looking and sustaining life. On the other hand, the beauty treatment agencies will be able to increase their competitiveness, grow the business, concrete the sales channel and win the customer loyalty in a traditional fierce competition market. The objective of this research is to provide a marketing strategy in merging two product and service markets in achieving a long term business goal. Ultimately, purified and functional water are not only for the beauty treatment sales business but also targeting the consumers¡¦ daily life in preventing illness by accessing the purified water and treasuring the invaluable water resources in sustaining the earth and lives.

A água é, sem dúvida, a matéria-prima de maior volume empregada, considerando de forma global, na produção farmacêutica. Pode ser usada direta ou indiretamente, com profundo potencial de impacto na qualidade do produto e na segurança do paciente. Consiste em meio de crescimento que, embora não rico, apresenta variações em suas características microbianas. Sendo assim, os métodos tradicionais utilizados em sua análise, apesar de simples, exigem vários dias para obtenção de resultados e muitas vezes não são sensíveis o suficiente para recuperar microrganismos em determinados estados fisiológicos, como por exemplo, biofilmes ou em estado viável não cultivável. Em virtude disso, o presente trabalho foi elaborado com intuito de desenvolver pesquisas para inovar no controle de qualidade microbiológico da água utilizada para fins farmacêuticos e, além de agregar novas técnicas, visa que os produtos farmacêuticos estejam disponíveis no mercado de modo rápido, seguro, eficaz e com a qualidade desejada. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial das tecnologias alternativas, em específico a citometria de fluxo, no monitoramento microbiano da água purificada, de forma a assegurar a manutenção de baixo risco de falha microbiana. O estudo foi conduzido em três etapas: a primeira etapa foi denominada de prova de conceito e teve por objetivo avaliar se existia alguma correlação entre os resultados obtidos com o método alternativo com aqueles obtidos com o método tradicional; a segunda etapa foi a validação da metodologia alternativa, etapa na qual foram avaliados todos os parâmetros de validação exigidos pelas principais normas e compêndios farmacêuticos; a terceira e última etapa foi denominada de equivalência, etapa na qual foi demonstrada a equivalência entre o método alternativo e os métodos farmacopeicos quando desafiados com amostras de água purificada coletadas de reservatórios da Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF/USP). Os resultados obtidos no presente estudo demonstraram que a citometria de fluxo é não só uma opção válida em relação ao método tradicional por semeadura em profundidade como também oferece como principal vantagem a possibilidade de se ter resultados em tempo real, possibilitando efetuar qualquer correção no processo produtivo a tempo. / Water certainly is the most used raw material used in pharmaceutical industry, considering volume of material and manufacturing process. It may be used either directly or indirectly, causing a considerable impact on product quality and patient safety. It may be considered a poor culture media that presents variable microbiologic characteristics. Even though the traditional microbiological methods used for water evaluation are simple, data obtainment requires several days. In addition, these methods are unable to recover microorganisms from determined physiological conditions, such as those observed in biofilms or in a viable but non-culturable state. Therefore, the present work aimed to research innovative methods for microbiologic quality control of water for pharmaceutical use. The new techniques intend to provide pharmaceutical product to market more rapidly, while maintaining its safety and quality. Specifically, the objective of this work was to evaluate alternative technologies, namely flow cytometry, and their application on microbiological assessment of purified water ensuring the low risk of microbiological fail. This study was conducted in three steps: the first, named as proof of concept, aimed to determine whether occurred any correlation between results obtained from traditional methods and results obtained from alternative method. Validation of alternative method was performed in the second step. This step was executed considering all validation parameters required for main pharmaceuticals norms and compendia. The last step was named equivalency, in which was showed the equivalence between traditional and alternative methods when challenged against purified water sampled from School of Pharmaceutical Sciences (FCF/USP) reservoirs. Results showed that flow citometry is equivalent to traditional methods and was also able to provide real-time evaluation, which enables to adjust the manufacturing process as soon as a deviation is detected.

A água exerce papel fundamental nas diferentes fases do processo de fabricação de artigos para saúde (médico-hospitalares, farmacêuticos, e clínicos), exigindo elevado grau de pureza, que certifique a sua inocuidade. Portanto, se faz necessário maior controle dos sistemas de purificação de água e suas etapas de tratamento, onde a formação de biofilmes pode contaminar os artigos para saúde e, consequentemente, causar injúria a pacientes submetidos à aplicação dos mesmos. Embora os artigos médicos sejam esterilizados por óxido de etileno (ETO), seu processo de manufatura deve prever o mínimo acréscimo possível de contaminantes. Considerando que a água purificada e a esterilização dos artigos para saúde são fatores determinantes para o sucesso de sua aplicação, este trabalho foi dividido em duas partes distintas. A primeira parte aborda o controle das etapas de purificação da água, que é destinada à lavagem de componentes termoplásticos, que são utilizados na fabricação de artigos para saúde. Os níveis máximos de carga microbiana (expressos em ciclos de log10 UFC/100mL) encontrados ao longo do sistema de purificação de água foram: 3,48 log10 na água de entrada; 3,57 log10 nos filtros multimeios; 3,75 log10 nos abrandadores; 4,97 log10 no filtro de carvão ativado; 2,53 log10 na osmose reversa; 2,70 log10 no tanque de estocagem e distribuição; 2,56 log10 na lâmpada ultravioleta; 2,53 log10 nos filtros 0,05 µm; 1,98 log10 nos pontos de uso. Flavimonas oryzihabitans e Micrococcus luteus foram as bactérias Gram-negativa e Grampositiva, respectivamente, isoladas e identificadas com maior freqüência na água, em diferentes estágios do sistema, inclusive após a passagem dessa através das membranas de osmose reversa. A segunda parte do estudo teve como objetivo determinar o tempo de aeração necessário para que os oxigenadores de sangue e conjuntos de tubos de PVC, após esterilização por ETO, permaneçam em aeração, para dissipação dos resíduos de ETO. Avaliou-se também a potencialidade da proteína verde fluorescente (GFP) como biossensor no processo de esterilização. O processo de esterilização destes artigos médicos foi monitorado com indicadores biológicos Bacillus atrophaeus, proteína verde fluorescente (GFP) e controles de temperatura, pressão e umidade em ciclos de 2 h (ciclo curto), 4 h (meio ciclo) e 8 h (ciclo longo). As curvas de dissipação, determinadas por cromatografia gasosa, confirmaram níveis residuais menores que 25 ppm para ETO e etileno cloridrina (EC); e inferiores a 250 ppm para etileno glicol (EG), ao final do processo de esterilização para os oxigenadores; e, após 221 horas de aeração, para os conjuntos de tubos de PVC. Nos ciclos de esterilização, as reduções na intensidade de fluorescência da GFP ocorreram em função do tempo de exposição ao ETO; enquanto germinação de esporos e/ou crescimento de B. atrophaeus não foi observado. / The water exerts important paper in different phases of critical items manufacture in the health care units, pharmaceutical industries, hospitals and clinics, becoming necessary a rigorous control of the water purification systems, storage and distribution, in order to prevent biofilms formation and cross-contamination between devices and patients, who are submitted to critical articles and parenteral solution application. The sterilization of critical devices by ethylene oxide (ETO) should predict minimum addition of possible contaminants and residues. Considering that the purified water and the sterilization are crucial factors for medical devices, this work was divided in two parts. The first part evaluated continuously the stages of the system for the purification of the water, which purity level is critical and determines the quality of the washing of thermoplastic components used in the manufacture of critical items. The maximum levels of heterotrophic load (log10 UFC/100mL) found throughout the water purification system were: 3.48 log10 in the water inlet; 3.57 log10 in the multimedium filters; 3.75 log10 in the softeners; 4.97 log10 in the activated carbon filter; 2.53 log10 in the reverse osmosis; 2.70 log10 in the tank of storage and distribution; 2.56 log10 in the UV lamp; 2.53 log10 in the 0.05µm filters; 1.98 log10 in the consumption points. Flavimonas oryzihabitans and Micrococcus luteus were the main Gram-negative and Grampositive bacteria, respectively found in the purified water after reverse osmosis. The second part of this study had as objective the determination of the needed aeration time for blood oxygenators and sets of PVC tubing must be kept in aeration room for dissipation of ETO residues; and also evaluated the possibility of GFP as biosensor. ETO is used as in a mixture (10% ETO and 90% CO2). Residual levels of ETO and its derivatives, ethylene chloridrin (ECH) and ethylene glycol (EG), which remain in these devices, must be controlled to prevent serious injuries to the patients. The sterilization process of the oxygenators and sets of PVC tubing was monitored with Bacillus atrophaeus and fluorescent green protein (GFP). The temperature, pressure and humidity were controlled in the sterilization cycles of 2 h (short cycle), 4 h (half cycle) and 8 h (long cycle). The dissipation curves of the residues were determined by gaseous chromatography and the residual concentrations were lower than 25 ppm of ETO and ECH and lower than 250 ppm of EG immediately after the sterilization processes for oxygenators and after 221 hours of aeration for the sets of PVC tubing. Reductions in the fluorescence intensity of GFP were observed as a function of the exposition time to the ETO. No growth of B. atrophaeus spores was observed after cycles.

A água exerce papel fundamental nas diferentes fases do processo de fabricação de artigos para saúde (médico-hospitalares, farmacêuticos, e clínicos), exigindo elevado grau de pureza, que certifique a sua inocuidade. Portanto, se faz necessário maior controle dos sistemas de purificação de água e suas etapas de tratamento, onde a formação de biofilmes pode contaminar os artigos para saúde e, consequentemente, causar injúria a pacientes submetidos à aplicação dos mesmos. Embora os artigos médicos sejam esterilizados por óxido de etileno (ETO), seu processo de manufatura deve prever o mínimo acréscimo possível de contaminantes. Considerando que a água purificada e a esterilização dos artigos para saúde são fatores determinantes para o sucesso de sua aplicação, este trabalho foi dividido em duas partes distintas. A primeira parte aborda o controle das etapas de purificação da água, que é destinada à lavagem de componentes termoplásticos, que são utilizados na fabricação de artigos para saúde. Os níveis máximos de carga microbiana (expressos em ciclos de log10 UFC/100mL) encontrados ao longo do sistema de purificação de água foram: 3,48 log10 na água de entrada; 3,57 log10 nos filtros multimeios; 3,75 log10 nos abrandadores; 4,97 log10 no filtro de carvão ativado; 2,53 log10 na osmose reversa; 2,70 log10 no tanque de estocagem e distribuição; 2,56 log10 na lâmpada ultravioleta; 2,53 log10 nos filtros 0,05 µm; 1,98 log10 nos pontos de uso. Flavimonas oryzihabitans e Micrococcus luteus foram as bactérias Gram-negativa e Grampositiva, respectivamente, isoladas e identificadas com maior freqüência na água, em diferentes estágios do sistema, inclusive após a passagem dessa através das membranas de osmose reversa. A segunda parte do estudo teve como objetivo determinar o tempo de aeração necessário para que os oxigenadores de sangue e conjuntos de tubos de PVC, após esterilização por ETO, permaneçam em aeração, para dissipação dos resíduos de ETO. Avaliou-se também a potencialidade da proteína verde fluorescente (GFP) como biossensor no processo de esterilização. O processo de esterilização destes artigos médicos foi monitorado com indicadores biológicos Bacillus atrophaeus, proteína verde fluorescente (GFP) e controles de temperatura, pressão e umidade em ciclos de 2 h (ciclo curto), 4 h (meio ciclo) e 8 h (ciclo longo). As curvas de dissipação, determinadas por cromatografia gasosa, confirmaram níveis residuais menores que 25 ppm para ETO e etileno cloridrina (EC); e inferiores a 250 ppm para etileno glicol (EG), ao final do processo de esterilização para os oxigenadores; e, após 221 horas de aeração, para os conjuntos de tubos de PVC. Nos ciclos de esterilização, as reduções na intensidade de fluorescência da GFP ocorreram em função do tempo de exposição ao ETO; enquanto germinação de esporos e/ou crescimento de B. atrophaeus não foi observado. / The water exerts important paper in different phases of critical items manufacture in the health care units, pharmaceutical industries, hospitals and clinics, becoming necessary a rigorous control of the water purification systems, storage and distribution, in order to prevent biofilms formation and cross-contamination between devices and patients, who are submitted to critical articles and parenteral solution application. The sterilization of critical devices by ethylene oxide (ETO) should predict minimum addition of possible contaminants and residues. Considering that the purified water and the sterilization are crucial factors for medical devices, this work was divided in two parts. The first part evaluated continuously the stages of the system for the purification of the water, which purity level is critical and determines the quality of the washing of thermoplastic components used in the manufacture of critical items. The maximum levels of heterotrophic load (log10 UFC/100mL) found throughout the water purification system were: 3.48 log10 in the water inlet; 3.57 log10 in the multimedium filters; 3.75 log10 in the softeners; 4.97 log10 in the activated carbon filter; 2.53 log10 in the reverse osmosis; 2.70 log10 in the tank of storage and distribution; 2.56 log10 in the UV lamp; 2.53 log10 in the 0.05µm filters; 1.98 log10 in the consumption points. Flavimonas oryzihabitans and Micrococcus luteus were the main Gram-negative and Grampositive bacteria, respectively found in the purified water after reverse osmosis. The second part of this study had as objective the determination of the needed aeration time for blood oxygenators and sets of PVC tubing must be kept in aeration room for dissipation of ETO residues; and also evaluated the possibility of GFP as biosensor. ETO is used as in a mixture (10% ETO and 90% CO2). Residual levels of ETO and its derivatives, ethylene chloridrin (ECH) and ethylene glycol (EG), which remain in these devices, must be controlled to prevent serious injuries to the patients. The sterilization process of the oxygenators and sets of PVC tubing was monitored with Bacillus atrophaeus and fluorescent green protein (GFP). The temperature, pressure and humidity were controlled in the sterilization cycles of 2 h (short cycle), 4 h (half cycle) and 8 h (long cycle). The dissipation curves of the residues were determined by gaseous chromatography and the residual concentrations were lower than 25 ppm of ETO and ECH and lower than 250 ppm of EG immediately after the sterilization processes for oxygenators and after 221 hours of aeration for the sets of PVC tubing. Reductions in the fluorescence intensity of GFP were observed as a function of the exposition time to the ETO. No growth of B. atrophaeus spores was observed after cycles.

This master thesis explored washing with water grades and lipase as environmentally friendly alternatives to conventional detergents containing surfactants. On hydrophilic surfaces, purified water can remove fat through roll-up mechanism, initiated by electrostatic repulsion forces. On hydrophobic surfaces, purified water alone cannot remove fat as there are no electrostatic repulsion forces. However, addition of lipase might promote degreasing through solubilization. Lipases are only activated when encountering an oil-water interface. Once activated, lipases can hydrolyze carboxylic ester bonds in fats. The aim of this project was to evaluate if addition of lipase from Rhizopus niveus (RNL) to water grades (such as ultrapure water, DIRO, and tap water) can enhance their cleaning efficiency to remove fat-based stains from hydrophilic and hydrophobic surfaces. An interesting phenomenon was observed in contact angle measurements. On hydrophilic surface, some solutions with high RNL concentration caused the oil droplet to divide into several droplets. The involved mechanisms are yet unknown. Gravimetric analysis showed a significant increase in cleaning efficiency in most samples (except tap water) after addition of RNL. Also, the effect of interfacial changes became significant. Multiple cycle washing, with repeated interfacial changes and high rate of fat removal, was more efficient than single cycle washing. In the quartz crystal microbalance with dissipation (QCM-D) measurements, RNL had a significant effect on the frequency and dissipation data. Observed changes when washing with RNL, suggest that apart from the cleaning promoted by interfacial changes, also enzymatic cleaning was occurring. Unfortunately, the calculated cleaning efficiencies reveal that addition of RNL did not increase the cleaning efficiency in this specific washing test. To obtain extensive understanding of RNL’s behavior and activity in water grades, as well as the effect of RNL on different surfaces (without or with fats involved), further experiments are necessary.

Made available in DSpace on 2016-03-04T13:55:12Z (GMT). No. of bitstreams: 2 7.pdf: 2671790 bytes, checksum: 3ea789720d5aa831716c6bfe2ca4f9b6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Fármacos/Farmanguinhos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / O Instituto de Tecnologia em Fármacos (Farmanguinhos), unidade técnico-científica da Fundação Oswaldo Cruz, representa o maior laboratório farmacêutico oficial vinculado ao Ministério da Saúde brasileiro responsável pela produção de mais de um bilhão de medicamentos por ano. As legislações sanitárias vigentes definem que devem ser utilizadas instalações segregadas e dedicadas para a produção de medicamentos, como penicilinas, minimizando os riscos de contaminação cruzada, que consequentemente possam gerar danos à saúde. Por isso, Farmanguinhos possui, atualmente, uma área dedicada à produção de amoxicilina, assim como o sistema gerador de água purificada, que atende à referida fabricação, também é dedicado à mesma. A água é a matéria-prima de mais elevado volume empregada na produção farmacêutica, exercendo profundo impacto na qualidade do produto e na segurança do paciente. O controle microbiológico da qualidade da água utilizada em processos farmacêuticos torna-se fundamental, já que micro-organismos podem sobreviver e proliferar em sistemas de água, tornando-se fontes de contaminação microbiana e pirogênica. A identificação destes micro-organismos e as informações obtidas sobre os mesmos podem ser extremamente úteis na identificação da fonte de contaminação microbiana de um produto ou processo, alem de direcionar ações corretivas, se necessário. O objetivo deste trabalho foi avaliar a diversidade microbiana presente em sistema gerador de água purificada, dedicado à produção de penicilínicos, de Farmanguinhos. Para isto, as amostras de água coletadas a partir do ponto de entrada, ponto de água potável, e do ponto de saída do sistema, ponto de água purificada, foram analisadas microbiologicamente quanto à contagem de micro-organismos mesófilos e quanto à presença de patógenos: Escherichia coli; coliformes totais e Pseudomonas aeruginosa. As amostras foram analisadas entre janeiro e maio de 2013. Todas as colônias obtidas foram isoladas e submetidas à identificação, através de equipamento MALDI-TOF. Não foram observados resultados acima da especificação para ambos os pontos, no período analisado. Do ponto de água potável foram isoladas apenas três espécies bacterianas: Bacillus cereus, Delftia acidovorans e Acinetobacter sp. Uma diversidade microbiana maior foi isolada a partir do ponto de água purificada, como: Burkholderia sp, Delftia acidovorans, Stenotrophomonas maltophilia, Bacillus cereus, Pseudomonas oryzihabitans e Pseudomonas putida. A espécie Delftia acidovorans, associada a fenômenos de biocorrosão foi o micro-organismo mais encontrado, sendo identificado em cerca de 1/3 do total de isolados. O sistema de água de Farmanguinhos é sanitizado mensalmente com sanitizante à base de glutaraldeído. Pode-se concluir que a sanitização está sendo eficiente para manter a contagem total de micro-organismos mesófilos dentro dos limites especificados. No entanto, algumas ações podem ser tomadas para evitar a presença de biofilmes, o que aprimorará ainda mais a qualidade da água purificada gerada. / The Instituto de Tecnologia em Fármacos (Farmaguinhos), technical- scientific unit of Fundação Oswaldo Cruz, is the largest official pharmaceutical laboratory under the Brazilian Ministry of Health responsible for producing more than one billion drugs per year. The current sanitary laws define that segregated facilities must be dedicated and used for the production of drugs such as penicillin, thus the risk of serious damage to health, due to crosscontamination, can be minimized. Because of this, Farmanguinhos has a dedicated production of amoxicillin, as well as a purified water generator system that caters to such manufacturing is also dedicated to this area. Water is the raw material of the highest volume used in pharmaceutical production so that it has a profound impact on the product quality and patient safety. Therefore, the microbiological quality control of water used in pharmaceutical processes becomes crucial, since microorganisms can survive and proliferate in water systems, becoming sources of microbial and pyrogenic contamination. The identification of these microorganisms and the information obtained about them can be extremely useful in identifying the source of microbial contamination of a product or process, in addition to direct corrective actions, if necessary. The objective of this study was to evaluate the microbial diversity present in the purified water generator system, dedicated to the area of manufacturing penicillin-based drugs of Farmanguinhos. To aim this objective, water samples collected from the entry point of the system, point of drinking water, and the point of departure, point of purified water, were analyzed microbiologically for the count of mesophilic and for the presence of pathogens: Escherichia coli; coliforms and Pseudomonas aeruginosa, respectively. The samples were analyzed between January and May of 2013. All colonies obtained were isolated and subjected to identification by MALDI - TOF equipment. No results above specification for both points were observed in the analyzed period. From the point of drinking water only three bacterial species were isolated: Bacillus cereus, Acinetobacter sp and Delftia acidorovans. A higher microbial diversity was observed from the purified water source, such as Burkholderia sp, Delftia acidovorans, Stenotrophomonas maltophilia, Bacillus cereus, Pseudomonas putida and Pseudomonas oryzihabitans. The species Delftia acidovorans associated with biocorrosion phenomena was the microorganism most frequently found and was identified in about 1/3 of the total isolates. The water system of Farmaguinhos water is sanitized monthly with sanitizing agent comprising glutaraldehyde. It can be concluded that sanitization is being effective to maintain the total count of mesophilic within the specified limits. However, some actions can be taken to avoid the presence of biofilms, which will improve even more the quality of purified water generated.

A água empregada na produção de doses inseminantes (DIs) de suínos pode ser um dos veículos de introdução de bactérias contaminantes, podendo levar à perda de qualidade das mesmas. O objetivo do presente estudo foi avaliar o número de mesófilos aeróbios totais (MAT) na água utilizada em centrais de inseminação de suínos e sua influência nas contagens bacterianas das DIs produzidas. Foram conduzidos três ciclos de amostragem em seis centrais de inseminação (A-F), intencionalmente incluídas no estudo de acordo com os critérios: estar localizada no sul do Brasil; produzir >1.000 DIs mensais; e concordar em participar do estudo. A cada ciclo, eram colhidas amostras de água antes da purificação, água após a passagem pelo sistema de purificação, água após armazenamento, diluente, sêmen in natura de três machos distintos de fertilidade comprovada; e das respectivas doses inseminantes preparadas com sêmen e diluente amostrados. A água colhida antes do sistema de purificação foi avaliada quanto ao número mais provável (NMP) de coliformes totais e Escherichia coli, em 100 mL. pela técnica dos tubos múltiplos. Todas as amostras colhidas foram avaliadas quanto ao número de mesófilos aeróbios totais (MAT), por meio da semeadura em profundidade em Ágar para Contagem (PCA). Todas as 18 amostras de água colhidas antes da purificação apresentaram <1,1 NMP.100 mL-1 de Escherichia coli. A média de MAT nas amostras de água variou entre 0,1 log UFC.mL-1 na água após-purificação da central E e 3,5 log.UFC.mL-1 na água antes da purificação da central F. Não houve diferença significativa (P>0,05) entre as contagens médias de MAT obtidas em diferentes tipos de amostra de água e entre as centrais de inseminação. A média de MAT nas amostras de diluente variou de 0,16 log UFC. mL-1 à 2,78 log UFC.mL-1. As centrais D e F apresentaram diluentes significativamente (P<0,05) mais contaminados. No sêmen, a média de MAT variou de 1,75 log. UFC.mL-1 à 3,79 log UFC.mL-1 e nas DIs entre 0,73 log.UFC.mL-1 e 2,88 log UFC.mL-1. A central de inseminação F apresentou média de MAT significativamente (P<0,05) maior que as demais centrais. Considerando os padrões existentes, conclui-se que a água captada, purificada e armazenada apresentou boa qualidade microbiológica em todas as centrais de inseminação e não influenciou a média de mesófilos aeróbios totais das DIs preparadas. O incremento de bactérias, quando observado, foi provavelmente resultante da contaminação de origem ambiental durante o preparo do diluente e das doses inseminantes. / The water employed in the production of insemination doses (IDs) of swine may be one of the vehicles for introduction of contaminant bacteria, and can lead to their quality loss. The objective of this study was to assess the number of total aerobic mesophilic (TAM) in water used in swine artificial insemination centers (SAIC) and its influence in the total bacterial counting of the IDs produced. Three cycles of sampling were conducted in six SAIC (A-F) intentionally included in the study according to the following criteria: to be located in the south of Brazil, to produce > 1.000 (IDs) monthly, and to agree in participating of the study. At each cycle, samples were collected from water before the purification, water after passage through the purification system, water after storage, extenders, fresh semen collected from three different boars and the respective (ID) prepared with the semen and extender sampled. The water collected before the purification system was evaluated for total coliforms and Escherichia coli most probable number (NMP) in 100 mL using the multiple tubes technic. All samples collected were evaluated for the number of total aerobic mesophilic (TAM) by the pour plate technic. All the 18 samples of water collected before the purification presented < 1.1 NMP. 100 mL-1 of Escherichia coli. The average of TAM in the water samples varied between 0.1 log.CFU. ml-1 in the water after purification of the central E and 3.5 log. CFU.mL-1 in the water before purification of the central F. There was no significant difference (P>0.05) among the average counting of TAM obtained in different water samples types and among SAICs. The average TAM in samples of diluents varied from 0.16 log.CFU.mL-1 to 2.78 log.CFU.mL-1; the SAICs D and F presented diluents significantly (P< 0.05) more contaminated. Among the semen samples, the TAM average varied from 1.75 log.CFU.mL-1 to 3.79 log CFU.mL-1 and in the DIs between 0.73 log.CFU.mL-1 and 2.88 log.CFU.mL-1. The SAIC F presented average of TAM significantly (P<0.05) higher than the others SAICs. Considering the available standards, it was concluded that water collected, purified and stored presented a good microbiological quality in all insemination centers and did not influence the number of TAM in the prepared IDs. The increase on bacterial population may have resulted from contamination of environmental origin during the preparation of the extender and insemination doses.

A água empregada na produção de doses inseminantes (DIs) de suínos pode ser um dos veículos de introdução de bactérias contaminantes, podendo levar à perda de qualidade das mesmas. O objetivo do presente estudo foi avaliar o número de mesófilos aeróbios totais (MAT) na água utilizada em centrais de inseminação de suínos e sua influência nas contagens bacterianas das DIs produzidas. Foram conduzidos três ciclos de amostragem em seis centrais de inseminação (A-F), intencionalmente incluídas no estudo de acordo com os critérios: estar localizada no sul do Brasil; produzir >1.000 DIs mensais; e concordar em participar do estudo. A cada ciclo, eram colhidas amostras de água antes da purificação, água após a passagem pelo sistema de purificação, água após armazenamento, diluente, sêmen in natura de três machos distintos de fertilidade comprovada; e das respectivas doses inseminantes preparadas com sêmen e diluente amostrados. A água colhida antes do sistema de purificação foi avaliada quanto ao número mais provável (NMP) de coliformes totais e Escherichia coli, em 100 mL. pela técnica dos tubos múltiplos. Todas as amostras colhidas foram avaliadas quanto ao número de mesófilos aeróbios totais (MAT), por meio da semeadura em profundidade em Ágar para Contagem (PCA). Todas as 18 amostras de água colhidas antes da purificação apresentaram <1,1 NMP.100 mL-1 de Escherichia coli. A média de MAT nas amostras de água variou entre 0,1 log UFC.mL-1 na água após-purificação da central E e 3,5 log.UFC.mL-1 na água antes da purificação da central F. Não houve diferença significativa (P>0,05) entre as contagens médias de MAT obtidas em diferentes tipos de amostra de água e entre as centrais de inseminação. A média de MAT nas amostras de diluente variou de 0,16 log UFC. mL-1 à 2,78 log UFC.mL-1. As centrais D e F apresentaram diluentes significativamente (P<0,05) mais contaminados. No sêmen, a média de MAT variou de 1,75 log. UFC.mL-1 à 3,79 log UFC.mL-1 e nas DIs entre 0,73 log.UFC.mL-1 e 2,88 log UFC.mL-1. A central de inseminação F apresentou média de MAT significativamente (P<0,05) maior que as demais centrais. Considerando os padrões existentes, conclui-se que a água captada, purificada e armazenada apresentou boa qualidade microbiológica em todas as centrais de inseminação e não influenciou a média de mesófilos aeróbios totais das DIs preparadas. O incremento de bactérias, quando observado, foi provavelmente resultante da contaminação de origem ambiental durante o preparo do diluente e das doses inseminantes. / The water employed in the production of insemination doses (IDs) of swine may be one of the vehicles for introduction of contaminant bacteria, and can lead to their quality loss. The objective of this study was to assess the number of total aerobic mesophilic (TAM) in water used in swine artificial insemination centers (SAIC) and its influence in the total bacterial counting of the IDs produced. Three cycles of sampling were conducted in six SAIC (A-F) intentionally included in the study according to the following criteria: to be located in the south of Brazil, to produce > 1.000 (IDs) monthly, and to agree in participating of the study. At each cycle, samples were collected from water before the purification, water after passage through the purification system, water after storage, extenders, fresh semen collected from three different boars and the respective (ID) prepared with the semen and extender sampled. The water collected before the purification system was evaluated for total coliforms and Escherichia coli most probable number (NMP) in 100 mL using the multiple tubes technic. All samples collected were evaluated for the number of total aerobic mesophilic (TAM) by the pour plate technic. All the 18 samples of water collected before the purification presented < 1.1 NMP. 100 mL-1 of Escherichia coli. The average of TAM in the water samples varied between 0.1 log.CFU. ml-1 in the water after purification of the central E and 3.5 log. CFU.mL-1 in the water before purification of the central F. There was no significant difference (P>0.05) among the average counting of TAM obtained in different water samples types and among SAICs. The average TAM in samples of diluents varied from 0.16 log.CFU.mL-1 to 2.78 log.CFU.mL-1; the SAICs D and F presented diluents significantly (P< 0.05) more contaminated. Among the semen samples, the TAM average varied from 1.75 log.CFU.mL-1 to 3.79 log CFU.mL-1 and in the DIs between 0.73 log.CFU.mL-1 and 2.88 log.CFU.mL-1. The SAIC F presented average of TAM significantly (P<0.05) higher than the others SAICs. Considering the available standards, it was concluded that water collected, purified and stored presented a good microbiological quality in all insemination centers and did not influence the number of TAM in the prepared IDs. The increase on bacterial population may have resulted from contamination of environmental origin during the preparation of the extender and insemination doses.