In this study a biosensor based on real time quartz crystal microbalance (QCM) monitoring is optimized and characterized for the application in the Norosensor. This biosensor is aimed to recognise, capture and amplify Norovirus (NoV). In an initial step a simplified bioassay was developed that focuses on the latter parts of the assay which consists of DNA-guided probing and amplification of the captured virus and includes the development of an amplification model assay directly to the functionalised crystal surface. A padlock probe with matching sequence to the conjugated oligonucleotide on the quartz crystal surface is used as target in the model assay. Although a number of studies have been carried out based on padlock probe ligation and rolling circle amplification (RCA) based QCM sensing, these studies utilize the entire crystal surface to capture and amplify the biomolecule. In this research work the QCM monitoring is explored on a centrally functionalised electrode surface through conjugation only at the centre of the electrode for increased mass sensitivity. Thus, allowing capture and amplification of the padlock probe only at the centre of the quartz crystal. A 14mm diameter, thermoncompensated AT-cut, nonpolished quartz crystal with a 10mm diameter gold surface coating acting as electrode was utilized for QCM measurements. The detection system is based on mass binding and amplification on the QCM to produce a negative frequency shift in the fundamental frequency of the vibrating quartz crystal. The amplification products were additionally fluorescently labelled and fluorescent microscopy images were also obtained at the end of every experiment to verify the presence or absence of DNA capture and amplification. Experimental findings show that the current flow chamber with a 15ul capacity is able to detect a specific padlock probe concentration of 1nM on a conjugated region of ~2.5mm diameter. RCA amplified the mass with an average frequency shift of -80Hz in 60mins RCA incubation time. Further, the specificity and sensitivity of the QCM system was explored. However, the system has limitations where sensor binding of reaction proteins, such as DNA ligase and BSA, to some extent is observed. The storage stability of the functionalized self-assembled monolayer (SAM) on the QCM is also observed to deteriorate and thus, is of concern. Nevertheless the combination of RCA based amplification with QCM real-time monitoring has the potential for rapid and simple, low cost detection of the Norovirus. / I det här arbetet har vi optimerat och karateriserat en biosensor för detektion av Norovirus som orsakar häftiga utbrott av kräksjuka under vinterhalvåret vilket leder till både försämrad vård samt stora ekonomiska förluster för samhället. Målet inom EU projektet “Norosensor” är att utveckla ett snabbtest som kan tillämpas efter ett utbrott på till exempel en vårdavdelning och som ska mäta mängden virus i luften vilket kan fungera som riktlinje för om en avdelning är säker att användas eller ej. Tekniskt är målet med testet att fånga in viruspartiklar från luften som specifikt binds till sensorytan. Därefter ökar vi känsligheten från bundna partiklar genom en DNA-baserad amplifiering. Detta genererar specifik, viruskorrelerad massa som mäts med en kvartskristall mikrovågs sensor. När massan ökar minskar frekvenser vid vilken kristallen vibrerar och detta mäts i realtid. Det här arbetet har inte behandlat infångande eller inbindning av virus utan har fokuserat på den senare delen av protokollet som omfattar amplifieringen på sensorytan. En modell-assay har därför utvecklats där viruspartikeln istället representeras av en så kallad “padlock probe” (hänglås probe). Då sensorn är mycket känslig har först olika protokoll testats för effektiv rengöring av ytan med hjälp av ultraljud. I nästa steg har ytan funktionaliserats med thiol-modifierade syntetiska DNA molekyler som används för infångningen av målmolekylen på sensorytan (virus eller i detta fall padlock proben). Det har tidigare uppskattats att för att få maximal känslighet i massmätningen så är det fördelaktigt att binda viruset endast i mitten på en mycket liten yta av kristallen. Den här avhandlingen har därför fokuserat på att utveckla protokoll för detta där ytan först funtionaliserats i mitten innan resten av ytan blockats för att undvika ospecific inbindning. Resultaten visar att vi kan generera en centrerad funtionalisering och att vi får låg ospecifik binding. Protokollet består av flera biokemiska reakionssteg såsom (i) inbindning och lingering av padlock probe och (ii) amplifiering av den ligerade proben genom “rolling circle amplification”. För att kunna verifiera att vi fått amplifieringsprodukter på ytan har vi dels mätt frekvensändringen på grund av ökad massa men också märkt in dem med fluorescerande molekyler och detekterat dem i microskop. Under arbetets gång har ett flertal olika typer av kristaller testats. Det visade sig att om en polerad yta används (1μm grovhet) så migrerade molekylerna iväg från mitten när vi oscillerade kristallen medan vi fick bättre resultat om något grövre (3μm) ytor användes. Vi testade även ett flertal olika flödesceller av olika material och med olika reaktionsvolymer. Eftersom kristallen är mycket känslig så påverkar faktorer som flödeshastigheter och eventuella luftbubblor frekvensen. Vi optimerade därför detta och körde mätningarna vi6konstant flöde men med alternerande, låga hastigheter när vi tillsatte nya reagens eller inkuberade reaktionerna. Vi förvärmde även reaktionsmixarna för att minska ospeficika effekter och konstaterade att den funktionaliserade ytan påverkades av lagring över tid. I våra försök såg vi att protein såsom ligeringsenzymet och albumin, vilka har förhållandevis stor massa, hade effekter på frekvensen redan i sig genom att binda till ytan. Ytterligare optimeringar måste därför göras framöver för att minska denna inbinding bland annat genom bättre tvättsteg. Vi kunde dock påvisa linjär massökning med ökad amplifieringstid och har bevisad hög specificitet. Slutligen utvecklades ett litet mjukvaruprogram för att automatisera analysen och minska bruset. Sammanfattingsvis har vi lyckats utveckla ett enkelt och snabbt system för specifik massamplifering av Norovirus.

I värme- och kraftvärmeverk förbränns olika typer av bränslen för produktion av el och fjärrvärme. Vid förbränningen bildas rökgaser som innehåller föroreningar, till exempel tungmetaller, från bränslet. Anläggningarna har ofta krav på utsläpp både via rökgaserna och avloppsvatten. Rökgaserna renas därmed genom olika tekniker var av en vanlig teknik är rökgaskondensering. Vid rökgaskondenseringen bildas en vätska, kallad rökgaskondensat, som delvis innehåller tungmetaller från bränslet. Rökgaskondensatet måste renas innan det kan lämna anläggningen och det görs bland annat med tungmetalljonbytare. Jonbytarmassan i tungmetalljonbytarkolonnerna behöver bytas ungefär två gånger per driftsäsong då den inte längre kan binda mer tungmetaller. Detta är en kostnad för värme- och kraftvärmeverken som de vill minimera. I denna studie undersöktes om lokal provtagning och analys på ett kraftvärmeverk av ett antal utvalda tungmetaller i rökgaskondensat är en bra metod för att optimering av reningssteget med tungmetalljonbytare. Samt om detta kan säkerställa att miljökraven för tungmetaller i det renade rökgaskondensatet uppfylls. Med optimering avses att jonbytarmassornas fulla kapacitet utnyttjas, d.v.s. att byten av jonbytarmassor kan reduceras utan att riskera otillåtna halter av tungmetaller i de renade rökgaskondensatet till följd av att jonbytarmassorna använts för länge. Även tiden som behöver avsättas för lokal provtagning och analys dokumenterades. I dagsläget sker analyser hos ackrediterade laboratorium där det tar drygt två veckor att få resultatet och under väntetiden kan mycket på anläggningen förändras. En verifiering av resultaten från studien gjordes mot resultat från ett sådant. I denna studie undersöktes lokal provtagning och analys med mätinstrumentet FREEDD som bygger på tekniken kvartskristall mikrobalans (QCM-teknik). Andra alternativ för lokal analys har inte undersökts här.  Resultatet visade att det i dagsläget är svårt att med lokal provtagning optimera reningssteget med jonbytarmassor samt kontrollera utsläppen av tungmetaller via det renade rökgaskondensatet. Korrigeringar hos mätinstrumentet och provpunkterna behöver göras för att få pålitligt resultat. Tiden som behöver avsättas för provtagning och analys beror på vilken metall som ska analyseras då tiden för preparering av prov varierar. Men om det kan möjliggöra att anläggningarna kan använda jonbytarmassorna längre samt får kontroll på utsläppen via det renade rökgaskondensatet kan det vara lönsamt att avvara den tiden. / In heating and combined heat and power plants, different types of fuels are burned to produce electricity and district heating. During the combustion flue gases containing pollutants, such as heavy metals, are formed from the flue. The plants have requirements for low emissions, both from the flue gases and the wastewater. The flue gases are purified by various techniques and a common technique is flue gas condensation. During the flue gas condensation, a liquid called flue gas condensate, is formed, which partly contains heavy metals from the flue. The flue gas condensate must be cleaned before it can leave the plant. A step in the purification of the flue gas condensate is usually heavy metal ion-exchanger. The ion-exchange mass in the heavy metal ion-exchange columns needs to be changed approximately twice per operating season as it no longer has room to bind more heavy metals. This is an expensive cost for the heating and combined heat and power plants that they want to minimize. This study investigated whether local sampling and analysis at a cogeneration plant of a number selected heavy metals in flue gas condensate is a good method for optimizing the purifications step with heavy metal ion-exchangers. And if this can ensure that the environmental requirements for the heavy metals in the purified flue gas condensate are met. Optimization means that the full capacity of the ion-exchange masses is utilized, i.e. that the exchange of ion-exchange masses can be reduced without risking unauthorized levels of heavy metals in the purified flue gas condensate as a result of the ion exchange masses being used for too long.  The time needed for local sampling and analysis was also documented. At present, analyzes are done at accredited laboratories where it takes over two weeks to get the result and during that time much can be changes at the plant. A verification of the result of the study was also made against the result of an accredited laboratory. In this study, local analysis was made with the measuring instrument FREEDD which is based on quartz crystal microbalance (QCM-technology). Other options for local sampling and analysis have not been investigated. The result showed that, in the present, it is difficult to optimize the purification step with ion-exchange masses and check emissions of heavy metals with the purified flue gas condensate. To obtain reliable result, corrections to the measuring instrument and test points need to be made. The time that needs to be set aside for sampling and analysis depends on the metal, as the time for sample preparation varies.  But if it can enable the plants to use the ion-exchange masses longer and gain control of the emissions of heavy metals with the purified flue gas condensate, it can be profitable to save that time.