Submitted by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-14T18:24:22Z No. of bitstreams: 1 Publico-tese_noujaim.pdf: 2146495 bytes, checksum: b1240b89a7f24795fa03d7aeba0b14b5 (MD5) / Approved for entry into archive by Diogo Misoguti (diogo.misoguti@gmail.com) on 2016-06-14T18:26:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Publico-tese_noujaim.pdf: 2146495 bytes, checksum: b1240b89a7f24795fa03d7aeba0b14b5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-14T18:26:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Publico-tese_noujaim.pdf: 2146495 bytes, checksum: b1240b89a7f24795fa03d7aeba0b14b5 (MD5) Previous issue date: 2007 / Introdução: vários fatores estão associados à lesão de isquemia fria (IF) e referfusão quente (RQ) no transplante hepático (TxH), tais como infiltrado de neutrófilos e linfo-plasmocitário, liberação de citoquinas inflamatórias e apoptose. Porém, pouco se conhece sobre o papel da IF/RQ em enxertos esteatóticos. Objetivo: avaliar o papel da lesão de IF/RQ no TxH em humanos comparando enxertos esteatóticos e não esteatóticos. Métodos: entre maio/02 e março/07 foram realizadas 84 biópsias pós reperfusão (2hs após RQ) e 18 pré reperfusão, totalizando-se 84 TxH em 82 pacientes. As biópsias foram agrupadas em 5 grupos, de acordo com o grau de macro e microesteatose: GEL – leve (<30%), GEM – moderada (30-59%), GEG - grave (≥60%), GEA - sem esteatose, GPR-pré-reperfusão. Nas 102 biópsias foram analisadas: porcentagens de macro e microesteatose, graus de exudato de neutrófilos (0-3) e infiltrado linfo-plasmocitário portal (0-3), índices de apoptose (métodos de Túnel e Caspase- 3) e de ICAM-1. As esteatoses macro (n=49) e microvesicular (n=74) foram individualmente analisadas e classificadas em graus leve (G1), moderado (G2) e grave (G3) e ausente (G4). Resultados: o índice de apoptose (TUNEL) foi: GEL=0.262±0.111, GEM=0.278±0.113, GEG=0.244±0.117, GEA=0,275±0.094 e GPR=0.181±0.123, p-0.07. No grupo macroesteatose índice de apoptose (TUNEL) foi: G1=0.284± 0.106, G2+3=0.160±0.109, G4=0,275±0.094, p-0.05; e no grupo microesteatose, G1=0.222±0.123, G2+3=0.293±0.108, G4=0.275±0.094, p-0.049. O GEG expressou o ICAM-1 em 83% dos casos de forma difusa. Não existiu diferença estatística entre os grupos ao analisarmos os índices de apoptose (caspase-3) e ICAM-1. Conclusão: o GEG e o grupo macroesteatose (moderado e grave) apresentaram significante redução no índice de apoptose, enquanto o grupo microesteatose (moderado e grave), significante aumento. E o GEG apresentou expressão de ICAM-1 difusamente, podendo ser estes marcadores envolvidos na lesão de I/R hepática dos enxertos esteatóticos. / Introduction: many factors are responsable for ischemic/reperfusion (I/R) injury in liver transplant (LTx) as apoptosis. However, the role of I/R injury in steatotic grafts is still unclear. Mains: to analyze the role of I/R in LTx comparing steatotic vs non steatotic graft. Methods: between May/02 and march/07 we performed 84 liver biopsies (2hours) after arterial reperfusion of grafts. Overall we performed 84 LTx in 82 patients.The liver biopsies were divided in 5 groups according with degree of macro and microvesicular steatosis in mild (<30%)-MSG, moderate (30-59%)-MoSG, severe (≥60%) – SSG, absent stetatosis – ASG, before reperfusion – BRG. In 102 liver biopsies were analyzed: percentage of macro and micro steatosis, degree of neutrophils, apoptosis index (TUNEL and Caspase-3) and ICAM-1. Also were analyzed macro and micro steatosis alone and they were classified in different degree MILD (G1), moderate (G2), severe (G3) and absent (G4). Results: the apoptosis index (TUNEL) was: MSG=0.262±0.111, MoSG=0.278±0.113, SSG=0.244±0.117, ASG=0,275±0.094 e BPR=0.181±0.123, p-0.07. The macrosteatosis’ apoptosis index (TUNEL) was G1=0.284± 0.106, G2+3=0.160±0.109, G4=0,275±0.094, p-0.05; and in microsteatosis group - G1=0.222±0.123, G2+3=0.293±0.108, G4=0.275±0.094, p-0.049. There are no statistic difference among the groups when we analyzed apoptosis (caspase-3) and ICAM-1 index. Conclusion: the SSG and macrosteatosis (degree moderate and severe) presented significantly decrease of apoptosis index, probable because these cells died before start apoptotic process. However the microsteatosis (degree moderate and severe) increased apoptotic index associated with I/R injury.

LANDIM, Emanuel Rocha. Efeito do pré-tratamento com l-alanil glutamina e precondicionamento isquêmico em modelo de isquemia : reperfusão de membros pélvicos em ratos. 2008. 70 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2008. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-02-19T12:59:47Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_erlandim.pdf: 1157065 bytes, checksum: 4ba937a67654703c28d10fa02319c253 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-02-19T13:00:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_erlandim.pdf: 1157065 bytes, checksum: 4ba937a67654703c28d10fa02319c253 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-19T13:00:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_erlandim.pdf: 1157065 bytes, checksum: 4ba937a67654703c28d10fa02319c253 (MD5) Previous issue date: 2008 / The present work determined the effects of pre-treatment with L-alanyl glutamine (Ala-Gln) and ischemic preconditioning (IPC), alone and in combination, against lesions caused by I/R by clamping the infrarenal aorta in rats. Sixty Wistar rats were distributed into five groups (n = 12) divided into two times (n = 6): Control, Group I/R, Group IPC + I/R, Group Ala-Gln + I/R, Group Ala-Gln + IPC + I/R. Times: T1 (infrarenal-aorta clamping ischemia-4h); T2 (ischemia-4h plus reperfusion-1h). Pulmonary myeloperoxidase (MPO) and plasma TBARS concentrations were measured. Data expressed as mean ± standard-deviation, analyzed by Student’s t-test and ANOVA/Tukey’s post-test. P-values < 0,05 were considered significant. Increased MPO concentrations in ischemic group and in I/R group occurred as compared to control. Reduction in MPO concentrations happened in ischemic groups pre-treated with either Ala-Gln or IPC. I/R induced no change in MPO concentrations in groups pre-treated with either Ala-Gln or IPC. Pre-treating with the two procedures showed increased MPO at both times studied. Reduction in TBARS concentrations occurred in Ala-Gln pre-treated group, whereas significant elevation was observed when Ala-Gln and IPC were associated in ischemic animals. Ischemia/reperfusion induced elevation of plasma TBARS. Pre-treatment with either Ala-Gln or IPC protects against distant pulmonary lesion due to ischemia. The same did not occur in I/R lesion. Combining the two procedures aggravated inflammation indicated by increased MPO concentrations. Elevated TBARS concentrations in ischemic animals pre-treated with the two procedures indicate increased lipid peroxidation, whereas pre-treatment with Ala-Gln induced decreased TBARS concentrations. / No presente trabalho, estudaram-se os efeitos da l-alanil glutamina (Ala-Gln), do precondicionamento isquêmico (PCI) e das duas técnicas concomitantemente sobre a lesão pulmonar provocada por isquemia e reperfusão (I/R) causada por pinçamento da aorta infra-renal em ratos. Foram utilizados 60 ratos machos Wistar, randomizados em cinco grupos (n = 12) divididos em dois tempos (n = 6): Grupo Simulado, Grupo I/R, Grupo PCI + I/R, Grupo Ala-Gln + I/R, Grupo Ala-Gln + PCI + I/R. Tempos: T1 (4h de isquemia) e T2 (4 horas de isquemia e 1h de reperfusão). Todos os grupos receberam solução salina previamente, menos os grupos pré-tratados com Ala-Gln que receberam o dipeptídeo e solução salina em igual volume. Foi utilizado o modelo de pinçamento da aorta infra-renal com 4 horas de isquemia e 1 hora de reperfusão. Determinaram-se as concentrações de mieloperoxidase (MPO) pulmonar, substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e glutationa reduzida (GSH) no sangue e pulmão para avaliar os grupos em estudo. O teste de Kolmogorov-Smirnoff mostrou distribuição normal dos dados. Dados expressos como média acompanhada pelo seu desvio padrão (Média ± DPM) sendo realizado teste t de Student. Para análise comparativa simultânea de três grupos utilizou-se o teste Anova com pós-teste de Tukey. Em todos os casos foi adotado o nível de significância de p<0,05. Houve elevação das concentrações de MPO pulmonar tanto no grupo submetido à isquemia quanto no grupo que realizou a I/R. Ocorreu redução significante das concentrações de MPO pulmonar nos grupos submetidos à isquemia pré-tratados com Ala-Gln e com PCI. Na avaliação dos grupos que sofreram I/R não foi observada alteração nas concentrações de MPO nos grupos pré-tratados Ala-Gln ou PCI. O grupo pré-tratado com as duas técnicas apresentou aumento significante da MPO nos tempos estudados. A Ala-Gln como pré-tratamento isolado reduziu TBARS plasmático na isquemia e o aumentou no pulmão na I/R. Já no pulmão durante isquemia e no plasma na I/R houve redução da GSH. O PCI como pré-tratamento isolado elevou o TBARS pulmonar na I/R e reduziu a GSH pulmonar na I/R. A associação da Ala-Gln e PCI acresceu o TBARS plasmático na isquemia, também o elevando no pulmão e músculo na I/R. Já a GSH, com os dois pré-tratamentos, sofre redução plasmática na isquemia e pulmonar na I/R, com elevação plasmática na I/R. O presente estudo demonstra que tanto o pré-tratamento com Ala-Gln como o PCI protegem contra a lesão isquêmica à distância, em modelo murino de pinçamento da aorta infra-renal quando avaliado MPO pulmonar. O mesmo não ocorre na lesão por I/R. Não há benefício, e sim agravamento de lesão à distância pulmonar, na associação dos dois pré-tratamentos ao mensurar a MPO pulmonar.

BEZERRA FILHO, João Evangelista. Dosagem, in vitro, de metabólitos sanguíneos e tissulares de ratos submetidos à isquemia renal e à reperfusão durante a oferta de L-alanil-glutamina. 2004. 117 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2004. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-02-27T15:27:16Z No. of bitstreams: 1 2004_dis_jebezerrafilho.pdf: 2031058 bytes, checksum: 087b24a3d1f775d526e500a7e2608d24 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-02-27T15:28:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2004_dis_jebezerrafilho.pdf: 2031058 bytes, checksum: 087b24a3d1f775d526e500a7e2608d24 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-27T15:28:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2004_dis_jebezerrafilho.pdf: 2031058 bytes, checksum: 087b24a3d1f775d526e500a7e2608d24 (MD5) Previous issue date: 2004 / Renal tranplantation and other operations give rise to kidney ischemia/ reperfusion injuries that may interfere with the final outcome. The purpose of this study is to examine the effects of l-alanil-glutamine pre-treatment in rats subjected to renal ischemia/reperfusion. Twenty -four rats were distributed in 4 subgroups of 6 animals. Half an hour following administation of l-alanil-glutamine (0,75 g/Kg) animals were subjected to kidney ischemia during 30 minutes. Kidney arterial blood samples were collected at the end of the ischemia and 5,15 and 30 minutes later. Glucose pyruvate lactate and cetonic bodies in vivo concentrations were determined in all samples. A second group of 24 animals received i.v.saline solution pre-treatment half an hour prior to the experiment. Laboratory analysis revealed a significant increase in blood concentration of lactate in l-alanil –glutamine group and during reperfusion. The offer of l-alanil-glutamine cause no significant change on concentration of glucose and pyruvate. On the other hand it did induce to significant reduction of cetonemia in the animal group treated with l-alanil-glutamine as compared to that observed in animals from control group. It is concluded that l-alanil –glutamine pre – treatment may enhance glycolysis during ischemia-reperfusion. Activation of malate-aspartate shuttle in glucose oxidative pathway due to increase availabitity of glutamate can explain these changes. / Durante a realização de transplantes renais e outras operações sobre os rins ocorrem os fenômenos de isquemia/reperfusão cujos efeitos nocivos colocam em risco o sucesso dessas intervenções. Pesquisas têm sido feitas no sentido de controlar, ou ao menos diminuir, os efeitos indesejáveis da isquemia/reperfusão. O objetivo desse estudo é avaliar o possível efeito da l-alanil-glutamina sobre a isquemia/reperfusão renal mediante a determinação, in vivo, das concentrações de glicose, piruvato, lactato e corpos cetônicos no sangue e no tecido renal submetido a isquemia/reperfusão. Isquemia de 30 min. foi induzida em dois grupos de animais de experimentação (ratos Wistar). Em seguida, foram determinadas as alterações ocorridas no tempo pós-reperfusão (0 min., 5mi., 15 min., 30 min.) nas concentrações sangüíneas e renais de glicose, piruvato, lactato e corpos cetônicos. Um grupo de 24 animais (6 para cada tempo) foi previamente tratado com l-alanil-glutamina administrada por via venosa e na dose de 0,75g /kg de peso. Em grupo controle com igual número de animais administrou-se, também por via venosa, o mesmo volume de solução salina. Os resultados apontam para aumento significante na concentração sangüínea de lactato nos animais que receberam l-alanil-glutamina, logo após a isquemia (tempo 0 min.) e em todos os tempos após a reperfusão. Não foram constatadas alterações significantes nas concentrações de piruvato e de glicose. No entanto, foi observada redução significante na concentração de corpos cetônicos. Os resultados obtidos sugerem aumento da atividade glicolítica durante o período de reperfusão decorrente da oferta exógena de l-alanil-glutamina. Tal fato deve-se, provavelmente, à ativação do sistema carreador malato-aspartato, em razão da oferta de glutamato, através de seu precursor l-glutamina.

ACIOLI, Porfírio Cezar Passos. Efeitos da acupuntura e da eletroacupuntura sobre o estresse oxidativo e a inflamação decorrentes da torção/distorção do testículo em ratos. 2014. 68 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-08-19T13:51:40Z No. of bitstreams: 1 2014_dis_pcpacioli.pdf: 665441 bytes, checksum: 0f172d512aef8b5ea2384e9ba3fe9d17 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-08-19T13:52:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_dis_pcpacioli.pdf: 665441 bytes, checksum: 0f172d512aef8b5ea2384e9ba3fe9d17 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-19T13:52:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_dis_pcpacioli.pdf: 665441 bytes, checksum: 0f172d512aef8b5ea2384e9ba3fe9d17 (MD5) Previous issue date: 2014 / The efects of acupuncture (Ac) and Electroacupuncture (EAc) were evaluated using an experimental rat model of ischemia/reperfusion (IR) of the testis. In Traditonal Chinese Medicine, these forms of therapies are used in the promotion of organic equilbrium, through stimulation of specifc neurotransmiters producing nerve pathways, resulting in a analgesic and anti-nflammatory autonomic regulatory. response. In the study, 30 male Wistar rats, 279.6g average weight (230-30 g) were randomly divided into five groups. Al rats received intraperitoneal anesthesia (Ketamine 10 90mgKgXilazina mgKg), at the begining of the experiment, before the detorsion and at the end of the experiment. G1 group was submited to torsion of the testicle (TT), two complete turns (720º) with immediate detorsion (sham). The other groups (G2IR, G3Ac, G4EAc2 and G5EAc10) were submited to TT during 3 hours, folowed by detorsion and reperfusion during 4 hours. Five minutes before the detorsion Ac (G3Ac) or EAc (G4EAc2, G5EAc10) was aplied, under anesthesia, for 5 minutes. Next the testis was detorsioned and reperfused for 4 hours. At the end blod samples the right testicle were colected. Evaluated parameters included determination of reduced Glutathione (GSH), Malonaldehyde (MDA), Myeloperoxidase (MPO) and histopathology of the testicle. EAc (2 and 10 Hz) promoted signifcant increase in concentrations of GSH in plasma and in the rat estis of G4-G5, compared to the control G1. Ac did not alter signifcantly the concentrations of GSH in the G3 group compared to the G1. There was signifcant increase of MDA in tisue in groups G4-G5 and plasma MDA in al groups, compared to the G1. EAc (2 Hz and 10 Hz) signifcantly decreased the activity of MPO in the testis of rats subjected to TT (G4-G5), compared to the control G1. No signifcant diferences were observed in the activity of MPO comparing groups G4-G5 to group G1. It is concluded that EAc stimulation (2 and 10 Hz) atenuates oxidative stres and inflammatory response in rats subjected to testicular torsion/detorsion. / Os efeitos da Acupuntura (Ac) e da Eletroacupuntura (EAc) foram avaliados utilzando um modelo experimental de isquemia/reperfusão (I/R) do testículo em rato. Na Medicina Tradicional Chinesa, esas formas de terapias são utilzadas na promoção do equilíbrio orgânico, mediante estímulo de vias nervosas produtoras de neurotransmisores específicos, resultando em uma resposta anti-nflamatória, analgésica e reguladora autonômica. No experimento, 30 ratos Wistar machos, peso médio 279,6 g (230-30g) foram distribuídos aleatoriamente em cinco grupos. Todos os ratos receberam anestesia intraperitonial (Cetamina 90mg/Kg+Xilazina 10 mg/Kg), no inicio do experimento, antes da destorção e ao término do experimento. O grupo G1 foi submetido à torção do testículo (TT), duas voltas completas (720º) com imediata destorção (sham). Os demais grupos (G2IR, G3Ac, G4EAc2 e G5EAc10) foram submetidos à TT durante 3 horas, seguido de destorção e reperfusão durante 4 horas. Cinco minutos antes da destorção procedeu-se à aplicação da Ac (G3Ac) ou EAc (G4EAc2, G5EAc10), sob anestesia por 5 minutos. Findo ese tempo realizou- se à destorção do testículo e permitu-se a reperfusão por 4 horas. Ao término foram coletadas amostras de sangue arterial e de tecido (testículo direito). Parâmetros avaliados incluíram determinação de Glutationa (GSH) reduzida, Malonaldeído (MDA), Mieloperoxidase (MPO) e histopatologia do testículo. A EAc (2 e 10Hz) promoveu aumento signifcante nas concentrações de GSH no plasma e no testículo dos ratos dos grupos G4-G5, comparados ao controle G1. A Ac não alterou signifcativamente as concentrações de GSH no grupo G3 comparado ao G1. Houve aumento signif cante do MDA tecidual nos grupos G4-G5 e do MDA plasmático em todos os grupos, comparados ao G1. A EAc (2Hz e 10Hz) diminuiu signifcativamente a atividade da MPO no testículo dos ratos submetidos à torção do testículo (grupos G4-G5), comparados ao controle G1. Não foram observadas diferenças signifcantes na atividade da MPO comparando-se os grupos G4-G5 ao grupo G1. Conclui-se que a aplicação de EAc de 2/10Hz promove proteção local e sistêmica sobre o estrese oxidativo e diminuição da resposta inflamatória em ratos sadios submetidos a torção/destorção do testículo.

Made available in DSpace on 2016-03-28T12:49:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 juliana_borges_ioc_dout_2014.pd: 2349301 bytes, checksum: b550a4f2f1d76e63939f364df742e2b7 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Sabe-se que o exercício físico agudo reduz a lesão tecidual e a morte celular decorrentes de eventos de isquemia e reperfusão (IR) e infarto agudo do miocárdio. Porém, os mecanismos envolvidos nessa resposta cardioprotetora não são claros. Evidências recentes indicam que os receptores opióides podem estar envolvidos nesse processo. No entanto, além de não se saber especificamente o subtipo de receptor opióide envolvido, são escassos estudos que se debruçaram sobre a relação entre a cardioproteção induzida pelo exercício e opióides. Dessa forma o objetivo da tese foi investigar a participação dos receptores opióides e seus subtipos na cardioproteção induzida pelo exercício físico aeróbio após lesão de IR em ratos. Além disso, buscou-se estabelecer de que forma outros possíveis mecanismos estariam relacionados com a cardioproteção. Para tal, ratos wistar foram submetidos a dois protocolos de isquemia reperfusão: in vivo e ex vivo (Langendorff). Em ambos os protocolos, animais realizaram 4 sessões de exercício físico (60 min/sessão a 70% do VO2máx). Foram medidos os parâmetros hemodinâmicos, área de infarto, densidade capilar estrutural, a expressão proteica de cada subtipo de receptor opióide, e a expressão gênica da capacidade antioxidativa e da proteína de choque térmico 72 (HSP 72). Foi verificado tanto no protocolo ex vivo quanto no in vivo, que o grupo que se exercitou apresentou menor área de infarto e melhor função hemodinâmica comparado ao grupo controle Após o tratamento com naloxona, um antagonista não \2013 seletivo para receptores opióides, o efeito cardioprotetor do exercício foi parcialmente bloqueado. Além disso, no protocolo in vivo, foi demonstrado que o exercício não alterou a densidade capilar estrutural do ventrículo esquerdo e a expressão gênica de enzimas antioxidantes, medida através de RT-PCR quantitativo. Os níveis de RNAm de HSP 72 estavam reduzidos no grupo exercitado. Foi verificado também que o bloqueio farmacológico dos receptores opióides delta, mas não do kappa e do mu, aboliu o efeito cardioprotetor do exercício físico. No entanto, a expressão proteica dos receptores opióides delta e kappa do grupo exercitado estavam reduzidas em relação ao grupo controle. Em conclusão, nossos resultados sugerem que mesmo poucas sessões de exercício físico podem proporcionar cardioproteção contra lesões por IR, que não está relacionada a angiogênese, aumento na expressão gênica miocárdica de HSP 72 e enzimas antioxidantes, mas sim ao sistema de opióides, e mais especificamente aos receptores delta / t is known that acute exercise reduces tissue dama ge and cell death resulting from events of ischemia and reperfusion (IR) and acute myocardial infarction. H owever, the mechanisms involved in this cardioprote ctive effect are unclear. Recent evidences indicate that opioid receptors may be involved in this response. Nevertheless, besides not knowing specifically what subtype of opioid receptor are associated to cardioprotection, there are few studies which have examined the relationship between exercise-induced cardioprotection and opioids. So, the objective of the thesis was to investigate the involvement of op ioid receptors and its subtypes in exercise-induced card ioprotection after IR injury in rats. Furthermore, w e aimed to establish how other possible mechanisms would be re lated to cardioprotection. To do so, wistar rats were submitted to two different protocols of IR: in vivo and ex vivo (Langendorff). In both, animals performed 4 sessions of aerobic exercise (60 min/session at 70% of VO 2max ). Hemodynamics, infarct size, structural capillary density, protein expression of each opioid receptor subtype and gene expression of antioxidant capacit y and heat shock protein 72 (HSP 72) were measured. It was obs erved in both in vivo and ex vivo protocols that the exercised group presented significant smaller infarc t size and greater hemodynamic function compared to control group. After the treatment with naloxone, a non-sel ective opioid receptor antagonist, the cardioprotect ive effect of exercise was partially annulled. Furthermore, in vivo protocol showed that exercise did not alter left ve ntricle structural capillary density and gene expression of antioxidant enzymes, measured through quantitative RT-PCR. The HSP 72 mRNA levels were reduced in exercised gr oup. It was also shown that pharmacological blockad e of delta opioid receptors, but not kappa and mu, aboli shed the exercise-induced cardioprotection. However , protein expression of delta and kappa opioid receptors in e xercised group was significant reduced compared to control group. In conclusion, our results suggest that even short-term aerobic exercise promotes cardioprotect ion against IR injury, which is not associated to angiogenesis, increased myocardial gene expression of HSP 72 and antioxidant enzymes, but to opioid system, and more sp ecifically to delta opioid receptors.

OLIVEIRA, Leidelamar Rosário Alves de. Perfil imuno-histoquímico da expressão de ativadores intracelulares com e sem pré-condicionamento com l-alanil-glutamina em modelo de isquemia e reperfusão em cérebros de gerbils. 2012. 100 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-07T13:38:17Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_lraoliveira.pdf: 3711389 bytes, checksum: 0a108b377dd292b83d0b25a1130fe793 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2016-03-07T15:11:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_lraoliveira.pdf: 3711389 bytes, checksum: 0a108b377dd292b83d0b25a1130fe793 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-07T15:11:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_lraoliveira.pdf: 3711389 bytes, checksum: 0a108b377dd292b83d0b25a1130fe793 (MD5) Previous issue date: 2012 / We investigated the protective effects of L-alanyl-Glutamine (L-ALN-GLN) through the immunohistochemical detection of proinflammatory mediators (IL-6, TNF, NF-kB e HO-1). This was achieved by means of a experimental and controlled study. Fifty-four male gerbils with a mean weight of 150g were used. They were divided randomly and equally into 3 groups: saline with ischemia and reperfusion (SIR), saline without ischemia and reperfusion (SSI) and with L-alanyl-glutamine and with ischemia and reperfusion (GIR). They were then redistributed into three subgroups according to time: T0 (maximum time of ischemia), T30 (30 minutes of reperfusion) and T60 (60 minutes of reperfusion), containing 6 animals each. They were pretreated with saline 2.0mL 0,9% intra-venously (iv) or L-ALN-GLN 0.75% G/KG (IV) 30 min before the start of the experiments. Cerebral ischemia was performed by bilateral occlusion of the common carotid arteries (CCAs) for a period of 15 minutes. After all surgical procedures and at the end of the three time periods the animals were sacrificed and brain tissue samples immediately obtained, which were fixed in 10% formalin solution for 24 hours in order being duly processed prior paraffin embedding. The samples (brain tissue) were collected at the end of each time periods. After this and through using a microtome, tissue sections were made at 4 microns and then placed on glass slides covered with L-polylysine, a proper way for performing immunohistochemistry. The streptavivin-biotin-peroxidase method was used. The quantitative analysis was made by means of counting immunocytochemically-stained cells, both neurons and glial cells, as observed at 400X magnification under an optical microscope Olympus model BX41. Ten fields were observed for each section, with a total of 4 sections per sub-group, always at start, looking for the internal pyramidal layer. Comparing the groups (SSI) and (SIR) a significant increase in NFkB-labeled cells in the subgroup SIR T30 (238,25±218,437 versus 1234,75±144,857); p=0,001 and SIR T60 (586,50±141,210 versus 1286,25±84,968); p=0,002 was observed. There was also a significant increase in the (SIR) subgroup, of the TNF immunostaining at T30 and T60 (263,75±42,906 versus 1015,50±102,796); p=0,01 in comparison to the SSI group. Regarding the cells expressing IL-6 positive labeling, comparing the groups (SIR) and (GIR), it was observed a significant decrease at T30 and T60 in the GIR group (536,25±119,837 versus 9,00±18,000); p=0,033. Comparing the groups (SIR) and (GIR), in relation to the NFkB immunolabeling, there was a significant decrease in group T30 in the GIR group (1234,75±144,857 versus 247,50±495); p=0,001 as well as at T60 (1286,25±84,968 versus 217,75±435,500); p=0,001. There was also a significant decrease, comparing the groups (SIR) and (GIR), of the TNF expression in (GIR) group at all time periods, chiefly at T60 (1015,50±102,796 versus 3,50±7,000); p=0,001. Regarding the immunostaining of the enzyme HO-1, there has been, comparing the groups (SSI) and (SIR), a significant decrease in the expression of this anti-oxidant protein in the SIR group. In the contrary, comparing the groups SIR and GIR, a substantial and significant expression of HO-1 was documented in the group treated previously by the L-alanil-glutamina, at times T30 and T60. In conclusion, the prior administration of L-alanil-glutamina in experiments of ischemia-reperfusion in Gerbils, disclosed a protective outcome, by promoting an in situ reduction in the expression of pro-inflammatory cytokines (TNF and IL-6) and nuclear transcription factor NFkB. At the same time, there has been an increase in the induction of the expression of the anti-oxidative enzyme HO-1, supporting a protective role of this preconditioning agent, chiefly against the inflammatory-oxidative stress. caused by the ischemia reperfusion brain injury model, in Gerbils / Foi investigado o efeito da administração prévia de L-alanil-glutamina (L-ALN-GLN) nas lesões de isquemia e reperfusão em cérebros de gerbils através da detecção imunohistoquímica da expressão de mediadores pró-inflamatórios e da defesa anti-oxidante (IL-6, TNF, NF-kB e HO-1). Trata-se de um estudo experimental, controlado, utilizando 54 gerbils machos, com peso médio de 150g, distribuídos aleatoriamente em 3 grupos: salina sem isquemia e reperfusão (SSI), salina com isquemia e reperfusão (SIR), L-alanil-glutamina com isquemia e reperfusão (GIR), redistribuídos em 3 subgrupos: T0 (tempo máximo de isquemia), T30 (30 min de reperfusão) e T60 (60 min de reperfusão), com 6 animais por subgrupo. Foram pré-tratados com solução salina 2,0 mL 0,9% via endovenosa (e.v.) ou L-ALN-GLN 0,75g/Kg (e.v.), 30 min antes do início dos experimentos. A isquemia cerebral foi induzida pela oclusão bilateral das artérias carótidas comuns (ACCs), por um período de 15 minutos. Após todos os procedimentos cirúrgicos e ao final dos três tempos 0, 30, 60 minutos, os animais foram sacrificados e tiveram os tecidos cerebrais removidos e fixados em formol a 10% por 24 horas, a fim de serem devidamente processados para inclusão em parafina. Após esse procedimento, foram feitos cortes de 4 µm em micrótomo e colocados em lâminas de L-polilisina, apropriadas para a realização da imunohistoquímica. Foi utilizado o método de estreptavidina-biotina-peroxidase. A avaliação quantitativa foi feita por meio da contagem das células nervosas imunomarcadas, tanto neurônios quanto células da neuroglia, observadas com aumento de 400X em microscópio óptico modelo Olympus BX41. Foram observados dez campos de cada corte, com um total de 4 cortes por subgrupo, procurando-se sempre iniciar pela camada piramidal interna. Nas comparações entre os grupos (SSI) e (SIR) houve um aumento significante nas células NFkB-posittivas no grupo SIR nos tempos T30 (238,3±218,4 versus 1234,8±144,9); p=0,000 e T60 (586,5±141,2 versus 1286,3±85,0); p=0,000. Verificou-se também um aumento significante do TN no grupo SIR nos tempos T30 (214,0±17,3 versus 333,0±395,6); p=0,999 e fortemente, em T60 (263,8±42,9 versus 1015,5±102,8); p=0,00 e observou-se um aumento significante da IL-6 no tempo T60 no grupo SIR em comparação ao grupo SSI, (206,8±248,3 versus 316,0±365,4); p=0,999. Entretanto, as células marcadas pela HO-1, no grupo SIR, comparativamente ao grupo SSI, diminuíram significativamente nos tempos T30 (25,8±3,9 versus 11,3±13,0) p=1,000 e T60 (18,5±7,6 versus 9,8±13,7) p=1,000. Para as células expressando marcação para as citocinas IL-6 em T0 (311,0±246,5 versus 14,8±29,5); p=0,817. T30 (536,3±119,8 versus 9,0,3±18,0); p=0,033. T60 (316,0±365,4 versus 28,5±57,0); p=0,591. E TNF em T0 (30,3±36,0 versus 3,5±7,0); p=1,000 e T30 (333,0±395,6 versus 3,5±7,0); p=0,503, T60 (1015,5±102,8 versus 3,5±7,0); p=0,000 comparando-se os grupos (SIR) e (GIR), observou-se uma diminuição significante, em todos os tempos, no grupo GIR, contrariamente à imunomarcação da HO-1, que aumentou significativamente no grupo (GIR) tratado pela L-alanil-glutamina em T0 (32,5±9,7 versus 0,0+0,0); p=1,000. T30 (11,3±13,0 versus 6,8±13,5); p=1,000 e T60 (9,8±13,7 versus 7,5±15,0); p=1,000. Nas comparações entre os grupos (SIR) e (GIR), em relação ao NFkB, houve uma diminuição significante no grupo GIR em T30 (1234,8±144,9 versus 247,5±495,0); p=0,000 e T60 (1286,3±85 versus 217,8±435,5); p=0,000. Em conclusão, a administração prévia de L-alanil-glutamina, no presente experimento de isquemia/reperfusão cerebral, em gerbils, revelou efeito protetor da mesma, ao promover redução in situ na expressão de citocinas e fator de transcrição de genes pró-inflamatórios: TNF, IL-6 e NFkB. Concomitantemente, houve indução aumentada da expressão da enzima antioxidante HO-1, corroborando a ação protetora deste nutracêutico na injúria de isquemia/reperfusão, mormente do estresse inflamatório-oxidativo, em gerbils

Resultados controversos têm sido obtidos em estudos experimentais e clínicos com a infusão de insulina e glicose na lesão isquemia-reperfusão, havendo muito á ser esclarecido sobre os mecanismos deste tratamento. No coração, a insulina tem efeitos sobre a utilização dos substratos, fluxo coronariano, atua como antiinflamatório e, propõem-se efeitos diretos na sobrevivência celular; estes efeitos devem-se a ativação da via fosfatidilinositol 3-cinase (PI3k)-Akt. As interações intracelulares entre os sistemas de sinalização da insulina e da angiotensina-II são muitas, salientando-se a possível importância do cross-talk angiotensina-II/insulina. Apesar da popularidade das preparações em corações isolados no estudo das lesões isquemia-reperfusão, diversos protocolos vêm sendo utilizados quanto a duração da isquemia, dificultanto a escolha do melhor período de isquemia para se testar os efeitos de fármacos sobre a recuperação da função cardíaca. Nesse trabalho objetivamos: determinar o melhor tempo de isquemia para investigar a recuperação funcional e a capacidade de resposta do sistema reninaangiotensina (SRA) tecidual em coração isolado e os efeitos da insulina associada a um inibidor do SRA sobre os mecanismos de cardioproteção à lesão isquemia-reperfusão. No estudo 1 investigamos a recuperação funcional e a capacidade de resposta do SRA tecidual em corações isolados e submetidos a diferentes períodos de isquemia. Os corações foram submetidos a diferentes períodos de isquemia global (20, 25 ou 30 min) e reperfundidos (30 min) com diferentes soluções: Krebs-Henseleit (KH) (grupo KH), KH + angiotensina-I (grupo Angio) ou KH + angiotensina-I + captopril (grupo AC). O índice de contratilidade ventricular (dP/dtmax) e o duplo produto foram reduzidos nos corações expostos à 25 min (~73%) e 30 min de isquemia (~80%) vs 20 min de isquemia. A pressão ventricular diastólica (PVD) e a pressão de perfusão (PP) aumentaram nos corações expostos à 25 min (5,5 e 1,08 vezes, respectivamente) e 30 min de isquemia (6 e 1,10 vezes, respectivamente) vs 20 min de isquemia. A angiotensina-I causou uma diminuição no dP/dtmax e no duplo produto (~85-94%) em todos os períodos isquêmicos, e um aumento na PVD e na PP (6,9 e 1,25 vezes, respectivamente) apenas aos 20 min isquemia. O captopril reverteu parcialmente ou totalmente os efeitos da angiotensina-I sobre a recuperação funcional, somente nos períodos 20 e 25 min de isquemia. Esses dados sugerem que a transição de dano pós-isquêmico leve/moderado para severo ocorre após 20 min de isquemia. Dessa forma, 20 min de isquemia é o melhor período de tempo para se estudar os efeitos de abordagens farmacológicas sobre a recuperação funcional. No estudo 2 investigamos os efeitos da insulina associada a um inibidor do SRA sobre os mecanismos de cardioproteção à lesão isquemia-reperfusão. Os corações foram submetidos a um período de isquemia global (20 min) e reperfundidos (30 min) com diferentes soluções: KH (grupo KH), KH + angiotensina-I (grupo Angio), KH + angiotensina-I + captopril (grupo AC), KH + insulina (grupo Insulina), KH + insulina + angiotensina-I (grupo IA) e KH + insulina + angiotensina-I + captopril (grupo IAC). Durante a recuperação, o grupo Angio apresentou uma redução de ~24% na pressão ventricular desenvolvida (PVDes) e de ~29% no dP/dtmáx vs período basal, e apresentou um aumento de ~2,7 vezes na PVD vs período basal, estes efeitos foram revertidos parcialmente ou totalmente pelos tratamentos AC, IA e IAC. O grupo Angio apresentou uma redução de ~24% no duplo produto vs período basal, este efeito foi revertido pelo tratamento IA, que também foi maior vs grupos KH e AC. Os grupos Angio e IA apresentaram um aumento de ~20% na PP vs período basal, e todos os grupos (exceto o insulina) foram maiores vs grupo KH; os grupos AC e IAC não diferiram dos grupos Angio e insulina. A Akt fosforilada foi maior nos grupos insulina e IA vs grupos KH (~47% e ~42%, respectivamente) e Angio (~60% e ~55%, respectivamente), os grupos AC e IAC não diferem dos demais. A AMPK fosforilada foi ~31% maior nos grupos insulina, IA e IAC vs grupos KH, Angio e AC. Os níveis de TBA-RS no grupo KH foram ~73% maior vs outros grupos; a quimiluminescência também foi maior (~2,2 vezes) no grupo KH vs outros grupos, e o grupo IA foi ~35% menor vs grupo Angio. A atividade da SOD não foi alterada pelos tratamentos, mas a atividade da catalase foi ~28% maior no grupo KH vs outros grupos (exceto o IA, P = 0,058) e a atividade da GST foi menor no grupo insulina vs grupos Angio e AC (~45% e ~50%, respectivamente). Os grupos Angio, AC e IAC apresentaram uma menor concentração da Cu/ZnSOD vs grupo KH (~40%, ~43% e ~27%, respectivamente), os grupos insulina e IA não diferem do grupo KH. Nenhum dos tratamentos alterou a concentração das enzimas GST e eNOS, os níveis de NOX ou a translocação do GLUT-4. Assim, a insulina ativa a via PI3k-Akt e parece exercer uma melhor regulação do estado redox celular, podendo ainda ativar a AMPK e ambas atuarem sinergicamente para um melhor perfil metabólico do miocárdio. Desse modo, a insulina administrada no inicio da reperfusão opõe-se aos efeitos deletérios da angiotensina-II e exerce um efeito cardioprotetor.

Objetivo: Avaliar os efeitos da tadalafila, um inibidor da fosfodiesterase tipo 5, nos valores teciduais renais de malondialdeído (produto da lipoperoxidação celular), nos níveis séricos de uréia e creatinina e na histologia renal em suínos submetidos à isquemia-reperfusão renal em rim único. Material e métodos: Doze suínos Large-White foram submetidos à uninefrectomia seguida por isquemia-reperfusão renal contralateral e separados aleatoriamente em dois grupos com ou sem tratamento com tadalafila 20 mg via oral. Foram analisados os resultados de lipoeroxidação, histologia e função renal. Resultados: Os valores teciduais de Malondialdeído (MDA) foram significativamente superiores no grupo não tratado com tadalafila (p<0,05), quando comparados ao grupo de animais tratados com o fármaco. Houve diferença estatística nos estudos histológicos, tendo ocorrido mais vacuolização e infiltrado polimorfonuclear intersticial no grupo não tratado com tadalafila. Não houve diferença significativa nas dosagens séricas de uréia e creatinina. Conclusão: Nosso estudo sugere, pela primeira vez na literatura, que a tadalafila tem um efeito protetor na isquemia e reperfusão renal em suínos, como evidenciado pelos resultados da lipoperoxidação e pelos estudos histológicos.

INTRODUÇÃO: A ressuscitação volêmica do choque hemorrágico (CH) é um evento que acentua uma série de reações em cascata, com ativação celular generalizada e liberação de potentes agentes pró-inflamatórios que podem contribuir para alterações no fluxo sangüíneo na microcirculação e prejuízos no aporte nutricional aos tecidos. Atualmente muitos resultados têm mostrado os benefícios da ressuscitação com pequenos volumes de solução salina hipertônica a 7,5% (SSH) sobre a microcirculação e na atenuação do dano oxidativo. O objetivo deste estudo foi comparar os efeitos tardios (após 6 horas) da resssuscitação com SSH e com Ringer Lactato (RL) sobre a função, integridade e estresse oxidativo hepático. MATERIAL E MÉTODOS: ratos Wistar foram submetidos a choque hemorrágico controlado com PAM de 45 mmHg. Após 60 minutos de choque os animais foram divididos em dois grupos: Grupo RL: ressuscitado com RL 4 vezes o volume sangüíneo perdido; Grupo SSH: ressuscitado com SSH 7,5 % em 2 minutos, 10% do volume sangüíneo perdido. Após 6 horas de recuperação os animais foram novamente anestesiados, submetidos à laparotomia e o ducto colédoco canulado. Avaliou-se a pressão arterial média (PAM), a freqüência cardíaca (FC) e o hematócrito (HT). As defesas antioxidantes mensuradas no tecido hepático foram a catalase (CAT) e a superóxido dismutase (SOD). A função hepática foi avaliada pela quantificação do fluxo biliar. Bilirrubinas, alanino aminotranferase (ALT) e o escore histopatológico de lesão foram os parâmetros avaliados quanto à integridade hepática. O estresse oxidativo foi determinado através das dosagens da mieloperoxidase (MPO), das substâncias reativas do ácido tiobarbitúrico (TBARS) e da proteína carbonilada. RESULTADOS: após 6 horas de ressuscitação os animais não apresentaram diferenças significativas nos parâmetros macro-hemodinâmicos (PAM, FC, HT). Os níveis de ALT e das bilirrubinas foram significativamente menores no grupo SSH (p<0,001). O fluxo biliar apresentou significativa elevação no grupo SSH (p<0,05). As defesas antioxidantes (CAT e SOD) não apresentaram variações significativas. O grupo SSH apresentou valores menores de mieloperoxidase, de TBARS e da proteína carbonilada (p<0,001) em comparação ao grupo RL. O escore total de lesão histopatológica foi significativamente menor no grupo SSH (p<0,05). CONCLUSÃO: no nosso modelo de CH a SSH atenuou o estresse oxidativo hepático após 6 horas da ressuscitação, assim como induziu a recuperação da função e demonstrou menor dano ao parênquima hepático.

Introdução e objetivos: O transplante de fígado é o tratamento de escolha para muitas doenças agudas e crônicas do fígado. Embora a sobrevida tenha melhorado consideravelmente, a recidiva é frequente, especialmente na hepatite C. O dano de isquemia-reperfusão (I/R) é uma das principais causas de má-função do enxerto precocemente após um transplante hepático e influencia de forma adversa a sobrevida dos pacientes. Assim, utilizando-se a solução de preservação que propicie maior proteção ao dano de I/R e menos estresse oxidativo, deveremos ter menor produção de citocinas que desencadeiam o processo de fibrogênese,o qual sabemos estar presente na recidiva do vírus C. O emprego de uma solução de preservação que leve a menor dano de I/R deve influenciar no processo de fibrogênese, o que justifica seu estudo. Materiais e métodos: Fígados obtidos de 25 ratos Wistar machos foram divididos em 5 grupos experimentais, conforme a solução de preservação utilizada: solução fisiológica; solução da Universidade de Wisconsin (UW); fructose 1,6- bisfosfato( FBP); solução de SNAC 200 e solução de UW + SNAC (SNAC+UW). Os níveis de AST, ALT e LDH foram determinados em amostras do líquido de preservação em 2, 4 e 6 horas de isquemia a frio. Após 6 h, os fígados foram submetidos ao modelo de reperfusão hepática ex-situ por 15 minutos. AST, ALT, LDH e renina foram determinadas no sangue após a reperfusão. Foram seccionados fragmentos hepáticos para histologia, determinação de TBARS, catalase e glutationa, além da análise da expressão imunohistoquímica de TGF-β1e receptor AT1. Resultados: Em comparação à UW, durante a preservação a frio, AST foi significativamente menor nos grupos SF, FBP e SNAC 200 (p=0,001); ALT foi menor no grupo FBP (p= 0,023) e LDH foi menor nos grupos FBP e SNAC 200 p=(0,007). Após a reperfusão, os níveis séricos de AST, ALT, LDH e TBARS não diferiram entre os grupos. Os valores de catalase foram significativamente mais elevados com SNAC+UW (p= 0,013). Os valores de glutationa foram significativamente mais elevados com UW em relação a SF, FBP e SNAC 200 (p= 0,004). Os níveis de renina foram maiores para SNAC+UW comparando com FBP e SNAC (p=0,014) Não houve sinais histológicos de dano de preservação em nenhuma amostra, assim como não houve expressão hepática de TGF-β1e receptor AT1. Conclusão: neste modelo experimental de dano de reperfusão precoce, o dano de preservação promoveu elevação na atividade da renina,o primeiro passo para a fibrogênese. SNAC 200, um doador de óxido nítrico e FBP demonstraram efeito protetor neste contexto, tendo sido superiores a UW. / Background/aims: Liver transplantation has been the standard treatment for patients suffering from acute and chronic liver disease. Although survival rate has improved considerably, relapses are frequent especially in patients with hepatitis C. Ischemia-reperfusion injury (I/R) is the one of the major causes of poor graft function early after liver transplantation and adversely influences patients’ survival. Therefore, using a preservation solution that shows a higher protective effect from I/R injury and lesser oxidative stress may lower the production of cytokines which are known for their role in fibrogenesis related to the relapse of C virus. Preservation solutions which lesser I/R injury and may prevent from fibrogenesis are an area of clinical interest that should be extensively studied. Materials and methods: Livers from 25 adult male Wistar rats were randomly assigned into five experimental groups according to preservation solution used: saline solution (SS); University of Wisconsin (UW) solution; Fructose 1, 6- biphosphate (FBP), SNAC 200 solution and UW solution + SNAC (SNAC+UW). AST, ALT and LDH were determined in samples in preservation solutions at 2, 4 and 6 hours of cold ischemia. After 6 hours, livers were applied to hepatic reperfusion models ex-situ for 15 minutes. Then, blood samples were taken for screening AST, ALT, LDH and renin levels after the reperfusion. Hepatic fragments were processed for histological studies, determination of TBARS, catalase and glutathione and expression of TGF-β1 and AT1 receptor. Results: Comparing to UW solution during cold storage, AST was significantly lower than in SS, FBP and SNAC 200 groups (p=0.001); ALT was lower in FBP group (p= 0.023) and LDH was lower in FBP and SNAC 200 groups (p=0.007). After reperfusion, serum levels of AST, ALT, LDH and TBARS showed no significant differences among the groups. Catalase was significantly higher in the SNAC+UW group (p=0.013). Compared to UW group, glutathione concentration was significantly higher in SS, FBP e SNAC 200 (p=0.004). Renin levels were higher in SNAC+UW group comparing to FBP and SNAC groups (p=0.014) No histological signs of preservation injury were found in the hepatic samples studied and expressions of TGF-β1and AT1 receptor were not detected either. Conclusion: In this experimental model of early reperfusion injury, preservation damages showed higher levels of renin which is widely known as the first stage of fibrogenesis. SNAC 200, NO donor and FBP showed a higher protective effect than UW in our study.