Made available in DSpace on 2016-03-28T12:49:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 juliana_borges_ioc_dout_2014.pd: 2349301 bytes, checksum: b550a4f2f1d76e63939f364df742e2b7 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Sabe-se que o exercício físico agudo reduz a lesão tecidual e a morte celular decorrentes de eventos de isquemia e reperfusão (IR) e infarto agudo do miocárdio. Porém, os mecanismos envolvidos nessa resposta cardioprotetora não são claros. Evidências recentes indicam que os receptores opióides podem estar envolvidos nesse processo. No entanto, além de não se saber especificamente o subtipo de receptor opióide envolvido, são escassos estudos que se debruçaram sobre a relação entre a cardioproteção induzida pelo exercício e opióides. Dessa forma o objetivo da tese foi investigar a participação dos receptores opióides e seus subtipos na cardioproteção induzida pelo exercício físico aeróbio após lesão de IR em ratos. Além disso, buscou-se estabelecer de que forma outros possíveis mecanismos estariam relacionados com a cardioproteção. Para tal, ratos wistar foram submetidos a dois protocolos de isquemia reperfusão: in vivo e ex vivo (Langendorff). Em ambos os protocolos, animais realizaram 4 sessões de exercício físico (60 min/sessão a 70% do VO2máx). Foram medidos os parâmetros hemodinâmicos, área de infarto, densidade capilar estrutural, a expressão proteica de cada subtipo de receptor opióide, e a expressão gênica da capacidade antioxidativa e da proteína de choque térmico 72 (HSP 72). Foi verificado tanto no protocolo ex vivo quanto no in vivo, que o grupo que se exercitou apresentou menor área de infarto e melhor função hemodinâmica comparado ao grupo controle Após o tratamento com naloxona, um antagonista não \2013 seletivo para receptores opióides, o efeito cardioprotetor do exercício foi parcialmente bloqueado. Além disso, no protocolo in vivo, foi demonstrado que o exercício não alterou a densidade capilar estrutural do ventrículo esquerdo e a expressão gênica de enzimas antioxidantes, medida através de RT-PCR quantitativo. Os níveis de RNAm de HSP 72 estavam reduzidos no grupo exercitado. Foi verificado também que o bloqueio farmacológico dos receptores opióides delta, mas não do kappa e do mu, aboliu o efeito cardioprotetor do exercício físico. No entanto, a expressão proteica dos receptores opióides delta e kappa do grupo exercitado estavam reduzidas em relação ao grupo controle. Em conclusão, nossos resultados sugerem que mesmo poucas sessões de exercício físico podem proporcionar cardioproteção contra lesões por IR, que não está relacionada a angiogênese, aumento na expressão gênica miocárdica de HSP 72 e enzimas antioxidantes, mas sim ao sistema de opióides, e mais especificamente aos receptores delta / t is known that acute exercise reduces tissue dama ge and cell death resulting from events of ischemia and reperfusion (IR) and acute myocardial infarction. H owever, the mechanisms involved in this cardioprote ctive effect are unclear. Recent evidences indicate that opioid receptors may be involved in this response. Nevertheless, besides not knowing specifically what subtype of opioid receptor are associated to cardioprotection, there are few studies which have examined the relationship between exercise-induced cardioprotection and opioids. So, the objective of the thesis was to investigate the involvement of op ioid receptors and its subtypes in exercise-induced card ioprotection after IR injury in rats. Furthermore, w e aimed to establish how other possible mechanisms would be re lated to cardioprotection. To do so, wistar rats were submitted to two different protocols of IR: in vivo and ex vivo (Langendorff). In both, animals performed 4 sessions of aerobic exercise (60 min/session at 70% of VO 2max ). Hemodynamics, infarct size, structural capillary density, protein expression of each opioid receptor subtype and gene expression of antioxidant capacit y and heat shock protein 72 (HSP 72) were measured. It was obs erved in both in vivo and ex vivo protocols that the exercised group presented significant smaller infarc t size and greater hemodynamic function compared to control group. After the treatment with naloxone, a non-sel ective opioid receptor antagonist, the cardioprotect ive effect of exercise was partially annulled. Furthermore, in vivo protocol showed that exercise did not alter left ve ntricle structural capillary density and gene expression of antioxidant enzymes, measured through quantitative RT-PCR. The HSP 72 mRNA levels were reduced in exercised gr oup. It was also shown that pharmacological blockad e of delta opioid receptors, but not kappa and mu, aboli shed the exercise-induced cardioprotection. However , protein expression of delta and kappa opioid receptors in e xercised group was significant reduced compared to control group. In conclusion, our results suggest that even short-term aerobic exercise promotes cardioprotect ion against IR injury, which is not associated to angiogenesis, increased myocardial gene expression of HSP 72 and antioxidant enzymes, but to opioid system, and more sp ecifically to delta opioid receptors.

O pré e pós-condicionamento isquêmico são fenômenos cardioprotetores que limitam o dano tecidual no infarto agudo do miocárdio. Seus efeitos benéficos ocorrem através da ativação de complexas vias sinalizadoras intracelulares, que têm a inibição da formação do poro de transição de permeabilidade mitocondrial como efetor final comum. A presença de fatores de risco, como a hipercolesterolemia, pode interferir nos resultados finais quando se lança mão de tais medidas cardioprotetoras. Entretanto, há na literatura achados contraditórios que não mostram interferência do colesterol elevado sobre a cardioproteção do pré-condicionamento isquêmico. No pós-condicionamento isquêmico, mais recentemente descrito, as primeiras evidências também mostram resultados conflitantes, que carecem de mais estudos. A baixa disponibilidade do óxido nítrico presente na hipercolesterolemia está associada a níveis elevados de dimetilarginina assimétrica, um inibidor da óxido nítrico sintetase, e pode ser o responsável por abolir os benefícios de ambas as medidas cardioprotetoras aqui estudadas. Procuramos, neste trabalho, avaliar a influência da hipercolesterolemia sobre o pré e pós-condicionamento isquêmico, e correlacionar os níveis de colesterol total e dimetilarginina assimétrica com o tamanho do infarto do miocárdio experimental em ratos anestesiados. Nós encontramos um maior tamanho do infarto nos animais hipercolesterolêmicos apesar do uso destas medidas cardioprotetoras. / Ischemic pre and postconditioning are cardioprotective phenomena that limit heart tissue damage in acute myocardial infarction. Its beneficial effects occur through the activation of complex intracellular signaling pathways, which have the inhibition of the formation of the mitochondria permeability transition pore as common final effector. The presence of risk factors such as hypercholesterolemia may interfere with final results when it makes use of such cardioprotective measures. However, there are contradictory findings in the literature which show no interference of high cholesterol on cardioprotection of ischemic preconditioning. In ischemic postconditioning, more recently described, the initial evidences also shows conflicting results, which require further studies. The low availability of nitric oxide present in hypercholesterolemia is associated with high levels of asymmetric dimethylarginine, an inhibitor of nitric oxide synthase, and may be responsible for removing the benefits of both cardioprotective measures studied here. The objective of our study was to assess the effect of hypercholesterolemia on ischemic pre and postconditioning and correlate the levels of total cholesterol and asymmetric dimethylarginine with the size of experimental myocardial infarction in anesthetized rats. We found a larger myocardial infarction in the hypercholesterolemic animals despite the use of these cardioprotective measures.

Submitted by Viviane Lima da Cunha (viviane@biblioteca.ufpb.br) on 2017-03-30T13:07:06Z No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3105346 bytes, checksum: 743a49eb2c327b5bb4a178343286d03e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-30T13:07:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 3105346 bytes, checksum: 743a49eb2c327b5bb4a178343286d03e (MD5) Previous issue date: 2016-06-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Ouabain (OUA), a potent Na+/K+ ATPase inhibitor, was identified as an endogenous substance present in human plasma. It was shown that OUA is able to interfere in several aspects of the immune system and inflammation, but the effect of this substance in allergic lung inflammation had not been previously investigated. Lower airways inflammation process is characterized by cell migration and bronchial hyperresponsiveness, as a result of sensitization by protein antigens such as ovalbumin (OVA). Aim: Evaluate the effect of ouabain on the model of allergic pulmonary inflammation induced by OVA. Methods: BALB/c mice (n = 6) were sensitized and challenged with OVA and pretreated intraperitoneally (ip) with OUA (0.56 mg/kg) two days before the sensitization and one hour before them, or dexamethasone (2 mg/kg) subcutaneously 1 hour before to each challenge. Allergic inflammation parameters, such as cell migration, and production of cytokines in bronchoalveolar lavage fluid (BALF), mucus production and pulmonary histopathologic remodeling, and IgE quantitation were analyzed posteriorly. Results: Ouabain reduced (60%) BALF cells as a reflex of polymorphonuclear leukocyte inhibition and T CD3+ lymphocytes, as well as it reduced the production of Th2 profile cytokines, IL-4 and IL-13. Furthermore, ouabain also reduced histopathologic parameters of inflammation, such as hyperplasia of goblet cells and with consequent mucus decrease, besides it reduced OVA-specific IgE titer. Conclusion: These results suggests that OUA presents anti-inflammatory effect on pulmonary allergic inflammation, modulating Th2 phenotype parameters. / A ouabaína (OUA), um potente inibidor da Na+/K+ ATPase, foi identificada como uma substância endógena presente no plasma humano. Nos últimos anos, foi evidenciado que a OUA é capaz de interferir em diversos aspectos do sistema imunológico e em diferentes modelos de inflamação, porém o seu efeito na inflamação alérgica pulmonar não tinha sido investigado previamente. Processos inflamatórios alérgicos das vias aéreas inferiores são caracterizados por migração celular e hiperresponsividade brônquica, em decorrência da sensibilização por antígenos proteicos como a ovalbumina (OVA). Objetivo: Avaliar o efeito da ouabaína no modelo de inflamação alérgica pulmonar induzida por OVA. Métodos: Camundongos BALB/c fêmeas (n = 6) foram sensibilizados e desafiados com OVA e pré-tratados via intraperitoneal (i.p.) com OUA (0,56 mg/kg) dois dias antes das sensibilizações e uma hora antes destas, ou com dexametasona (2 mg/kg) subcutânea 1 hora antes de cada desafio. Parâmetros da inflamação alérgica, como migração celular e produção de citocinas no fluido do lavado broncoalveolar (BALF), produção de muco e remodelamento histopatológico pulmonar quantificação de IgE sérica, foram analisados posteriormente. Resultados: A ouabaína reduziu em 60% o número total de células presentes no BALF como um reflexo da inibição de leucócitos polimorfonucleares e linfócitos T CD3+, bem como a produção de citocinas do fenótipo Th2, IL-4 e IL-13. Ademais, a ouabaína reduziu os parâmetros inflamatórios histopatológicos, como hiperplasia das células caliciformes com consequente diminuição de muco, além de reduzir o título de OVA-IgE específica. Conclusão: Estes dados sugerem que a OUA apresenta efeito anti-inflamatória no modelo de inflamação alérgica pulmonar, modulando parâmetros do fenótipo Th2.

O pré e pós-condicionamento isquêmico são fenômenos cardioprotetores que limitam o dano tecidual no infarto agudo do miocárdio. Seus efeitos benéficos ocorrem através da ativação de complexas vias sinalizadoras intracelulares, que têm a inibição da formação do poro de transição de permeabilidade mitocondrial como efetor final comum. A presença de fatores de risco, como a hipercolesterolemia, pode interferir nos resultados finais quando se lança mão de tais medidas cardioprotetoras. Entretanto, há na literatura achados contraditórios que não mostram interferência do colesterol elevado sobre a cardioproteção do pré-condicionamento isquêmico. No pós-condicionamento isquêmico, mais recentemente descrito, as primeiras evidências também mostram resultados conflitantes, que carecem de mais estudos. A baixa disponibilidade do óxido nítrico presente na hipercolesterolemia está associada a níveis elevados de dimetilarginina assimétrica, um inibidor da óxido nítrico sintetase, e pode ser o responsável por abolir os benefícios de ambas as medidas cardioprotetoras aqui estudadas. Procuramos, neste trabalho, avaliar a influência da hipercolesterolemia sobre o pré e pós-condicionamento isquêmico, e correlacionar os níveis de colesterol total e dimetilarginina assimétrica com o tamanho do infarto do miocárdio experimental em ratos anestesiados. Nós encontramos um maior tamanho do infarto nos animais hipercolesterolêmicos apesar do uso destas medidas cardioprotetoras. / Ischemic pre and postconditioning are cardioprotective phenomena that limit heart tissue damage in acute myocardial infarction. Its beneficial effects occur through the activation of complex intracellular signaling pathways, which have the inhibition of the formation of the mitochondria permeability transition pore as common final effector. The presence of risk factors such as hypercholesterolemia may interfere with final results when it makes use of such cardioprotective measures. However, there are contradictory findings in the literature which show no interference of high cholesterol on cardioprotection of ischemic preconditioning. In ischemic postconditioning, more recently described, the initial evidences also shows conflicting results, which require further studies. The low availability of nitric oxide present in hypercholesterolemia is associated with high levels of asymmetric dimethylarginine, an inhibitor of nitric oxide synthase, and may be responsible for removing the benefits of both cardioprotective measures studied here. The objective of our study was to assess the effect of hypercholesterolemia on ischemic pre and postconditioning and correlate the levels of total cholesterol and asymmetric dimethylarginine with the size of experimental myocardial infarction in anesthetized rats. We found a larger myocardial infarction in the hypercholesterolemic animals despite the use of these cardioprotective measures.