Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En el presente trabajo se analizó el desarrollo de la infección con 2000 trypomastigotes sanguíneos de las cepas Munantá, San Antonio y Tulahuén de Trypanosoma cruzi , en ratones de la cepa ACA. Los resultados mostraron que el 100 % de los animales infectados fueron altamente susceptibles a la infección con las cepas San Antonio y Tulahuén, muriendo todos los ratones alrededor de las tres semanas post-infección. El grupo de ratones infectados con la cepa Munantá se comportaron como resistentes, sobreviviendo el 90 % de los animales infectados. A pesar de lo anterior, este grupo de ratones presentó los más altos niveles de parasitemia y la cepa San Antonio los niveles más bajos. Se realizó un estudio histopatológico de tejido cardíaco de los animales infectados. Los resultados mostraron que sólo en animales infectados con la cepa Tulahuén se observa correlación entre nivel de parasitemia, daño tisular, infección celular y muerte. La infección con la cepa San Antonio mostró gran cantidad de parásitos intracelulares y daño tisular pero con una baja parasitemia y de corta duración. Por el contrario, los ratones infectados con la cepa Munantá mostraron altos niveles de parasitemia, pero en los tejidos se encontró una escasa cantidad de pseudoquistes. Es probable que el lugar de multiplicación de esta cepa de parásito sea un tejido distinto al corazón. Estos resultados apoyan la idea que los niveles de parasitemia alcanzados durante una infección con T. cruzi , no siempre se correlacionan con la susceptibilidad o resistencia, al menos en el modelo murino

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Las hormonas tiroideas T3 y T4 son fundamentales para el desarrollo del SNC del feto y del recién nacido. La hipotiroxinemia materna es una patología asintomática caracterizada por la reducción de los niveles plasmáticos de T4 de la madre. Se ha demostrado en los humanos que cuando la hipotiroxinemia materna ocurre durante los primeros 5 meses de gestación conduce posteriormente a daño cognitivo irreversible en su hijo. Este daño es observado como déficit atencional hasta retardo mental severo. Existe abundante evidencia en la literatura que demuestra la participación de la neurotransmisión glutamatérgica y la acción de las neurotrofinas del telencéfalo en procesos que subyacen fenómenos cognitivos complejos, como son la memoria y el aprendizaje. Según estas evidencias se basó la hipótesis de mi memoria que propone que la hipotiroxinemia materna durante el primer período de gestación, afecta la composición proteica de la densidad postsináptica (DPS) de las neuronas glutamatérgicas del teléncefalo de ratas Sprague-Dawley. Por lo tanto, el objetivo general de la presente memoria fue estudiar la composición de las principales proteínas que forman parte de la DPS. La hipotiroxinemia materna se indujo a ratas preñadas, mediante la administración de Metimazol al 0,02% en el agua de beber durante los días E12-E15 de gestación. Se determinaron las concentraciones plasmáticas de hormonas tiroideas y TSH con la finalidad de corroborar que se indujo hipotiroxinemia. Los telencéfalos de las camadas obtenidas fueron analizados a los 2 meses de edad. Se procedió a analizar la expresión total y su presencia en la DPS de los receptores glutamatérgicos y de los receptores para las neurotrofinas. Los resultados obtenidos muestran que la hipotiroxinemia materna temprana aumenta en la descendencia la expresión del receptor tirosina kinasa B (TrkB) en el telencéfalo y el contenido de éste en el complejo de proteínas que conforma la DPS. Consecuente con este resultado se observó un aumento de neuronas 6 con migración aberrante en el hipocampo que marcaban positivo para TrkB. Además, se observó cambio significativo en la expresión total en el telencéfalo de la subunidad del receptor N–metil–D-aspartato (NMDA), NR1 y de la proteína estructural de la densidad postsináptica PSD95, sin observarse cambios significativos en el contenido de estas proteínas en la DPS. Todos estos resultados que fueron significativamente diferentes con respecto al control, fueron revertidos cuando a las ratas madres que se les indujo hipotiroxinemia recibieron una inyección de T4. Nuestros resultados muestran que efectivamente la hipotiroxinemia que ocurre en el periodo de gestación afecta la expresión de proteínas importantes para la sinapsis glutamatérgica y afecta la composición de la DPS posteriormente en el estado adulto de la descendencia. Basados en el análisis de nuestros resultados podemos sugerir que el deterioro cognitivo observado en estos animales puede deberse en parte a la alteración de la expresión y/o composición de los receptores glutamatérgicos y neurotrofinas en el telencéfalo. Palabras clave: Hormonas tiroideas, sinapsis glutamatérgica, neurotrofina, telencéfalo / Proyecto FONDECYT 1040349.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Una de las principales consecuencias producidas por la diabetes mellitus en personas, es el desarrollo de heridas crónicas. Hoy en día, constituyen un problema de salud pública, debido a que son cada vez más frecuentes y se asocian con altos costos de tratamiento, por lo que se han estudiado diversos agentes terapéuticos. La Calreticulina (CRT) es una proteína chaperona y ligadora de calcio del retículo endoplásmico, ampliamente distribuida en las células eucariotas que se expresa en las células de diferentes mamíferos. Esta proteína, mediante estudios in vivo e in vitro, ha demostrado tener un importante rol en la cicatrización de heridas cutáneas y diversos procesos asociados con la reparación cutánea, mejorando la migración y proliferación celular. La aplicación tópica de CRT produjo un marcado aumento de la tasa y calidad de la cicatrización de heridas en modelos experimentales en porcinos, y una disminución significativa en el tiempo para completar el cierre de heridas en ratones genéticamente diabéticos tratados con CRT humana y de conejo. Por otro lado, la calreticulina de Trypanosoma cruzi (TcCRT), además de ser altamente homóloga a su contraparte humana, ha demostrado ser más eficiente que la calreticulina de humano en la aceleración de la cicatrización de heridas. Sin embargo, no hay información con respecto a la aplicación tópica de TcCRT en heridas de pacientes diabéticos. El objetivo principal de esta memoria de título fue analizar el efecto de la proteína TcCRT en dos concentraciones diferentes en la cicatrización de heridas in vivo en ratas diabéticas. Una concentración baja de 2.5 ng/μl fue más efectiva estimulando el proceso de reepitelización, la formación de tejido de granulación y la maduración de la dermis. Estos resultados reafirman el efecto de TcCRT sobre la cicatrización en un modelo experimental realizado en ratas diabéticas, augurando su potencial uso como agente terapéutico tópico en el tratamiento de heridas crónicas. / One of the main consequences produced by diabetes mellitus in people is the development of chronic wounds. Nowadays, they constitute a public health problem, because they are increasingly frequent and are associated with high cost of treatment, thus several therapeutic alternatives have been studied. Calreticulin (CRT) is a calcium-binding, chaperone protein of the endoplasmic reticulum, widely distributed in eukaryotic cells, and expressed in the cells of different mammals. This protein has shown to play an important role in healing of cutaneous wounds and diverse processes associated with skin repair through in vivo and in vitro studies, improving cell migration and proliferation. The topical application of CRT produced a marked increase in the rate and quality of wound healing in pig experimental models, and a significant decrease in time to complete the closure of wounds in genetically diabetic mice treated with human and rabbit CRT. On the other hand, Trypanosoma cruzi calreticulin (TcCRT), in addition to being highly homologous to its human counterpart, has shown to be more efficient than human calreticulin in accelerating wound healing. However, there is no information regarding the topical application of TcCRT in diabetic wounds. The main aim of this research was to analyze the effect of the TcCRT protein in two different concentrations on the in vivo wound healing process in diabetic rats. A low concentration of 2.5 ng/μl was more effective in stimulating the reepithelialization process, the granulation tissue formation and the dermis maturation. These results reaffirm the effect of TcCRT on the healing process in an experimental model performed in diabetic rats, augurating its potential use as a topical therapeutic agent in the treatment of chronic wounds. / Proyecto FONDECYT 11130257

Objetivo: Determinar si la administración por vía oral del extracto etanólico de la semilla de Persea americana (palta) en ratones hembras tiene efecto anticonceptivo. Diseño: Estudio experimental. Lugar: Bioterio de la Facultad de Medicina y Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Material biológico: Ratones cepa BALB/c-53. Intervenciones: Cuarenta ratones hembras fueron divididos aleatoriamente en 4 grandes grupos, de 10 cada uno. El primero fue control, con Solucion de Goma de Tragacanto (GT) 1% 10mL/kg y los grupos restantes con extracto vía oral a dosis de 25mg/kg, 50mg/kg y 100mg/kg, durante 16 días. Cada grupo consideró 10 hembras y 2 machos juntos, que fueron divididos en 2 sub-grupos de 5 hembras y 1 macho por cada jaula. Al día 17 las ratones hembras fueron sacrificadas, para observar la presencia de fetos en el útero. Así mismo se realizó el estudio fotoquímico y la cromatografía del extracto etanólico de la semilla de Persea americana; y la dosis letal media. Principales medidas de resultados: El efecto anticonceptivo se evaluó mediante la cuantificación del indicador macroscópico preñez. Análisis estadístico: El análisis estadístico fue realizado empleando el software SPSS versión 20.0 y Excel office 2010. Se realizaron análisis descriptivos y pruebas estadísticas de significancia. Resultados: Los saponinas y alcaloides estuvieron en mayor cantidad en el extracto etanólico, pero también hubo presencia de flavonoides y taninos. Se mostró un efecto anticonceptivo con porcentajes de 30%, 20% y 0% a dosis de 25, 50 y 100mg/Kg de peso, respectivamente. Los controles mostraron un 10% de ausencia de preñez. Cabe señalar que el 100% de las ratones hembras que recibieron el extracto etanólico de la planta a máxima dosis resultó grávida y que la evolución de la gestación estuvo altamente avanzada en comparación del grupo control. Conclusiones: En condiciones experimentales, el extracto etanólico de semilla de Persea americana (palta) mostró a menor dosis un pobre efecto anticonceptivo que no fue estadísticamente significativo y a mayor dosis un incremento de la fertilidad en ratones hembras normales debido a las características observadas. / Objective: To determine whether oral administration of ethanolic seed extract of Persea americana (avocado) in female mice has contraceptive effect. Design: Experimental study. Location: Bioterio’s Faculty of Medicine and Faculty of Pharmacy and Biochemistry, Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Biological material: Mice BALB/c-53 strain. Interventions: Forty female mice were randomly divided into 4 main groups of 10 each. The first control group received Gum Tragacanth (GT) Solution 1% 10mL/kg and the others groups received orally extract at doses of 25mg/kg, 5mg/kg and 100mg/kg, for 16 days. Each group considered 10 females and 2 males together; they were divided into 2 sub - groups of 5 females and 1 male per cage. At day 17 the female mice were sacrificed, to observe the presence of fetuses in the uterus. Also the study photochemical and chromatography of the ethanol extract of Persea americana seed was performed. Main outcome measures: The contraceptive effect was assessed by quantifying the macroscopic indicator pregnancy. Statistical analysis: Statistical analysis was performed using the SPSS software version 20.0 and Excel office 2010. Descriptive analyzes and statistical tests of significance were performed. Results: The saponins and alkaloids were in greater amounts in the ethanol extract, but flavonoids and tannins were presents too. Contraceptive effect with percentage of 30%, 20 % and 0 % at doses of 25, 50 and 100mg/kg per corporal weight, respectively showed. Controls showed 10% of absence of pregnancy. It should be noted that 100% of the female mice receiving the ethanolic extract of the plant to maximum dose was pregnant and the course of pregnancy was highly advanced compared the control group. Conclusions: In experimental conditions, the ethanol extract of seed of Persea americana (avocado) showed a poor contraceptive effect with the lowest dose that was not statistically significant; and increase fertility in normal female mice with highest doses due to observed characteristics. Keywords: Contraceptive, Persea americana, Contraceptive plants.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En el presente trabajo, se analizó la evolución de la infección con Trypanosoma cruzi, en ratones Balb/c experimentalmente infectados con 2.000 trypomastigotes sanguíneos de la cepa Tulahuén o del clon Dm28c del parásito, evaluando no sólo prepatencia y niveles de parasitemia, sino también su correlación con el número de pseudoquistes, la magnitud del daño inflamatorio, en el tejido cardiaco y músculo esquelético y la mortalidad acumulada de los ratones infectados. Los resultados mostraron una prepatencia, similar, de 5 días en ambos grupos de ratones. En relación al nivel máximo de parasitemia, este alcanzó un máximo de 16,23 ± 2,21 x 105 parásitos/mL a los 11 día post infección, en los ratones infectados con la cepa Tulahuén, y que no fue significativamente distinto del nivel máximo de, 19,37 ± 1,78 x 105parásitos/mL, alcanzado por los ratones infectados con el clon Dm28c, a los 19 días post infección (p > 0,05). Todos los ratones sucumbieron a la infección con T. cruzi, alcanzando un 100% de mortalidad acumulada a los 19 días post infección con la cepa Tulahuén y a los 21 días en aquellos infectados con el clon Dm28c. El estudio histopatológico mostró un número similar de pseudoquistes, tanto en el tejido cardiaco, como en músculo esquelético de ambos grupos de ratones infectados con T. cruzi. No se observaron diferencias en la evolución del daño inflamatorio en músculo esquelético de todos los ratones infectados; sólo se observaron diferencias en la evolución del daño inflamatorio en el tejido cardiaco. En los ratones infectados con la cepa Tulahuén, el daño inflamatorio en el tejido cardiaco se inicia tempranamente en la primera semana post infección y alcanza su mayor severidad y magnitud a partir de la segunda semana post infección experimental. En los ratones infectados con el clon Dm28, en cambio, el aumento en el número de pseudoquistes y en la magnitud y severidad del daño cardiaco es de más lenta evolución alcanzando su mayor expresión a los 21 días post infección experimental. / Proyecto LIHBAC-001/13

Memoria para optar al título Profesional de Médico Veterinario / En gatos, ratas y ratones, la cantidad de sueño de movimientos oculares rápidos (MOR) perdido durante una privación de sueño, predice durante la recuperación de sueño, el rebote de sueño MOR. Esto sugiere que el sueño MOR es homeostáticamente regulado y que una presión por sueño MOR se acumula durante su ausencia, por ejemplo: durante vigilia y sueño No-MOR (NMOR). Alternativamente ha sido propuesto que la presión al sueño MOR se acumula exclusivamente durante la ocurrencia de sueño NMOR (Benington, 2002). Para intentar clarificar si la presión al sueño MOR depende exclusivamente de su ausencia o más bien de la expresión del sueño NMOR, se realizaron privaciones de sueño en 15 ratas implantadas con electrodos de registro encefalográfico. Las privaciones fueron parte de 2 protocolos de privación. El primero consistió en 2 horas de privación total de sueño, seguidas de 2 horas de privación selectiva e intermitente de sueño MOR (2T2I). El segundo en 2 horas de privación continua y selectiva de sueño MOR, seguida de 2 horas de privación selectiva e intermitente de sueño MOR. Se logró obtener 2 escenarios diferentes durante la recuperación de sueño de las ratas. Uno con alta presión al sueño NMOR y otro con baja presión. Se realizó un protocolo Control (CL) para descartar posibles efectos inespecíficos producto de las privaciones. Los datos obtenidos permiten concluir que la presión homeostática al sueño MOR se acumula durante la ausencia de este estado y que frente a una alta presión de sueño MOR, tanto como de sueño NMOR, existe prioridad para descargar la presión del sueño NMOR.

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / Se infectaron ratones de la cepa ACA, machos y hembras, con 200 y 2000 trypomastigotes sanguíneos del clon Dm28c de Trypanosoma cruzi. Todos los animales se comportaron como susceptibles a la infección, independientemente del sexo y la dosis de inóculo inicial. Los animales, tanto machos como hembras, infectados con 2000 parásitos presentaron niveles de parasitemia significativamente más altos que los ratones infectados con la dosis menor. A su vez, los machos desarrollaron niveles de parasitemia más altos que las hembras, tanto al infectar con 200 como con 2000 parásitos. A pesar de comportarse todos los animales experimentales como susceptibles, el período de supervivencia fue significativamente más prolongado en los machos infectados con 200 comparado con lo ocurrido con los machos infectados con 2000 parásitos. Las hembras infectadas con 2000 sobrevivieron más tiempo que los machos infectados con la misma dosis de parásitos. No se observaron diferencias significativas en el tiempo de supervivencia, al comparar hembras infectadas con 200 y 2000 ni tampoco en el caso de machos y hembras infectadas con 200 parásitos. Al parecer, la principal característica afectada por las variables sexo y dosis de inóculo inicial es el nivel de parasitemia

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / Entre los numerosos agentes causantes de enfermedad que los animales pueden transmitir al ser humano, está el Streptobacillus moniliformis, patógeno poco común que parece estar emergiendo en el último tiempo. Esta bacteria, que habita naturalmente en el tracto respiratorio anterior de las ratas, produce en el ser humano dos cuadros de signos y síntomas muy similares, conocidos como fiebre por mordedura de rata y fiebre de Haverhill según el modo de contagio. Además, este microorganismo puede infectar también a otros animales que viven o tienen contacto con ratas. El objetivo de este estudio es determinar la presencia o ausencia de Streptobacillus moniliformis en el tracto nasofaríngeo de ratas provenientes de un bioterio convencional. Para esto se seleccionaron 20 ejemplares adultos de la cepa Sprague- Dawley, sin distinción de sexo y clínicamente sanos. Para la extracción de la muestra clínica los animales fueron previamente sedados y se obtuvo secreción nasofaringea con una tórula fina de pequeño tamaño (torulín). Las muestras fueron sembradas en agar sangre anaerobio durante 72 hrs e incubadas a 36°C con 3% de CO2. Posterior a la siembra el contenido de la tórula se suspendió en tampón sacarosa fosfato que se almacenó a -20°C para utilizarse en el diagnóstico molecular mediante PCR. Para éste último se amplificaron 296 pb del gen 16S rRNA, empleando los partidores descritos por Boot et al., 2002. De las 20 muestras estudiadas, se detectaron 8 muestras positivas a la técnica de PCR y ninguna muestra fue positiva al cultivo microbiológico. Por análisis estadístico se obtuvo que la prevalencia de S. moniliformis en las ratas en estudio se encuentra entre 21.9% a 61.4%. Los resultados de este estudio, permiten concluir que las ratas utilizadas son portadoras de este microorganismo en porcentajes similares a los que se describen en la literatura. La técnica de PCR resultó ser más sensible en el hallazgo del patógeno en comparación con la baja sensibilidad que posee el aislamiento en cultivo para el diagnóstico de S. moniliformis a partir de muestras nasofaríngeas. Se discute la importancia de este primer diagnóstico positivo nacional de S. moniliformis en ratas de bioterio convencional y su relación con la salud humana

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La función reproductiva masculina es conocida por ser altamente sensible a muchos agentes químicos. Cipermetrina (CP) es un pesticida piretroide, cuyos efectos en variables de fertilidad masculina son controversiales. El objetivo de la presente Memoria de Título fue evaluar los efectos tóxicos de CP administrada en dosis única sobre la citología testicular de ratón macho adulto. Utilizando la técnica histológica de tinción hematoxilina (PAS) se cuantificó la celularidad del epitelio germinal de acuerdo a sus características morfológicas y la presencia de espermatozoides; en los mismos preparados, se observó la presencia de alteraciones histológicas como taponamiento tubular, discontinuidad y vacuolización del epitelio seminal. Mediante inmunohistoquímica se cuantificaron las células inmunomarcadas utilizando como indicador de proliferación celular el anticuerpo monoclonal antiantígeno Ki-67. El modelo biológico estudiado corresponde a ratones machos adultos cepa CF1, distribuidos en dos grupos: i) experimental, al cual se le administró ⅕ DL50 CP vehiculizada en aceite vegetal, ii) control inoculados solo con aceite vegetal, todos tratados en dosis única vía intraperitoneal, constituyendo el tiempo cero del tratamiento. Durante el periodo experimental se eutanasiaron tres animales de cada grupo según el siguiente calendario: un día después de la inoculación, luego cada 8,6 días, hasta completar 34,4 días. Los resultados indican que CP indujo una disminución estadísticamente significativa de las células en mitosis en el primer ciclo espermatogénico para luego aumentar compensatoriamente en los tres ciclos posteriores. CP indujo alteraciones en la organización histológica testicular aumentando la frecuencia de presentación de discontinuidad, vacuolización del epitelio y, en menor grado, taponamiento del lumen tubular; este último daño fue gradualmente revertido al completarse una onda espermatogénica. La presencia de espermatozoides en lumen tubular disminuyó en relación a los controles. Los recuentos de los distintos tipos celulares demuestran que las células más sensibles a la acción de CP, con valores estadísticamente significativos, las espermatogonias tipo A disminuyeron a partir del primer ciclo, hasta tres ciclos. Las espermatogonias tipo B presentaron un aumento hacia el segundo ciclo. Los espermatocitos en paquiteno y espermátides redondas disminuyeron a las 24 horas post tratamiento y a los 25,8 días que corresponden al tercer ciclo. De estos resultados se concluye que CP ejerce un efecto tóxico manifestándose en la alteración del patrón de proliferación espermatogonial, como también en la organización histológica testicular, y a nivel de las poblaciones celulares del epitelio seminífero afectando su frecuencia y desarrollo.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En los últimos años se han identificado y estudiado funciones del ácido fólico relacionadas con la salud cardiovascular y el desarrollo de enfermedades tumorales en los individuos. El consumo de esta vitamina produce una reducción de los niveles sanguíneos de homocisteína, amino ácido asociado como factor de riesgo de enfermedad cardiovascular. Sin embargo, las últimas investigaciones plantearon la hipótesis que la hiperhomocisteinemia es solo un marcador de deficiencia de ácido fólico y vitamina B12. En consecuencia, se ha planteado que la deficiencia de estas vitaminas podría tener un efecto causal en el desarrollo de enfermedad cardiovascular. El principal candidato podría ser el ácido fólico, debido a sus propiedades antioxidantes y por su participación directa en los procesos de metilación. El objetivo de este estudio fue demostrar en un modelo animal que la deficiencia de ácido fólico, independiente de los niveles de homocisteína, altera la reactividad vascular endotelio dependiente. Metodología: El estudio se realizó con 48 ratas Wistar macho, las cuales se dividieron en 4 grupos de acuerdo a su alimentación durante 8 semanas: A: deficiente en ácido fólico y vitamina B12, B: deficiente en ácido fólico, C: deficiente en vitamina B12 y D: grupo Control. Terminado el período de alimentación las ratas se sacrificaron por dislocación cervical para evaluar la reactividad vascular endotelio dependiente en segmentos de aorta torácica. Se tomaron muestras de sangre para determinación sérica de homocisteína, folato y vitamina B12. Los resultados se analizaron mediante estudios de comparación múltiple (Análisis de varianza y análisis de varianza para series repetidas). Resultados: Los niveles séricos de folato fueron significativamente más bajos en los grupos deficientes (grupo A y B) al compararlos con los suplementados (grupo C y D) (p<0,0001). Los niveles séricos de vitamina B12 fueron significativamente más bajos en los grupos deficientes (grupo A y C) en comparación con los grupos suplementados (grupo B y D) (p<0,0001). Los niveles de homocisteína fueron diferentes entre los grupos (p<0,0001). El estudio de reactividad vascular endotelio dependiente demostró que los anillos aórticos de los 4 grupos de ratas, se relajaban en forma similar, al igual que la respuesta endotelio independiente.