Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-22Bitstream added on 2014-06-13T20:14:21Z : No. of bitstreams: 1 lopes_ra_me_araca.pdf: 366303 bytes, checksum: 70287ee04a9c08af3d76c814dfcab439 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os objetivos deste estudo foram detectar a presença e a expressão dos genes supressores p53 e c-Myc em tumores palpebrais, pelas técnicas de PCR, RTPCR, PCR-ELISA E RT-PCR-ELISA que até o então não foram descritas nestes tumores e nesta espécie. Foram utilizadas 10 amostras de tumores que foram fixados em formol e incluídos em parafina. O material foi obtido junto aos arquivos do Serviço de Patologia Veterinária, sendo nove amostras de tumores localizados nas pálpebras e terceira pálpebra e uma de tumor mamário para controle. Todos os tumores tiveram o seu diagnóstico firmado empregando-se a coloração de H.E e imunoistoquímica para citoqueratina AE1/AE3 e vimentina (V9), marcadores de tecido epitelial e mesenquimal, respectivamente. Os resultados indicaram que os tumores palpebrais e da terceira pálpebra aqui estudados verificou-se a presença do gene supressor p53 em 8 amostras (88,8%, n=8), e entre as amostras positivas (n=8), ele esteve expresso em 75 % delas. O gene supressor c-Myc esteve presente em 5 amostras (55,5%) e com expressão em 100% delas (n=5). Foi possível concluir que os tumores palpebrais e da terceira pálpebra de cães expressam o p-53 e c-Myc identificados pelas técnicas de PCR e RT-PCR, no entanto, as técnicas de PCR ELISA e RT-PCR ELISA foram mais importantes para avaliação da presença e expressão do oncogenes estudados, pois permitiram identificar produtos amplificados que não foram visualizados em gel de agarose. / The aims of this study were to detect the presence and the expression of p53 and c-Myc suppressor genes in eyelid tumors of dogs, by the PCR, RT-PCR, PCR-ELISA and RT-PCR-ELISA techniques, which until then they were not described in these tumors and in this specie. Ten samples of tumors were fixed in formalin and included in paraffin. The material was obtained from the archives of the Department of Veterinary Pathology, being nine samples of epithelial tumors located in the eyelids and the third eyelid, and a breast tumor which was used as a positive control of the reactions. All the samples had reached their diagnosis employing up the HE technique, and the immunohistochemistry for cytokeratin AE1/AE3 and vimentin (V9). The results showed that the eyelid and the third eyelid tumors, here studied, (88.8%, n=8) of them demonstrated the presence of the p53 gene and between the positive samples (n=8), the expression was around 75%. The c-Myc gene was present in 55.5% (n=5) of the samples, with 100% of expression (n=5). Thus, it was possible to conclude that the eyelid and the third eyelid tumors of dogs express the p53 and c-Myc genes, identified by the techniques of PCR and RT-PCR, however, the PCR ELISA and RT-PCR ELISA techniques were of extreme importance for assessing the presence and expression of these studied genes, and they allowed to identify amplified products that were not visible on the electrophoresis on the agarose gel.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-20Bitstream added on 2014-06-13T18:29:20Z : No. of bitstreams: 1 silva_jr_me_botib.pdf: 572070 bytes, checksum: 91e0d84d7ce9e5bd73020942f3c5e9df (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Grande parte do genoma dos eucariotos é composta de múltiplas cópias de DNA, conhecidas como DNAs repetitivos, cuja função em relação à manutenção, estrutura e funcionamento do genoma ainda precisa ser melhor investigada. Os DNAs repetitivos classificados como elementos transponíveis vêm sendo considerados como um dos principais representantes do genoma de vertebrados e, de maneira particular, os peixes têm chamado atenção em relação à grande diversidade de classes destes elementos encontradas em seus genomas. Visando ampliar os dados acerca de elementos transponíveis em peixes, o presente trabalho teve como objetivos o isolamento e a caracterização de retrotransposons da família Rex em duas espécies de Characidae - Brycon amazonicus e B. orbignyanus - e realizar inferências acerca de sua organização e dinâmica evolutiva. Desta forma, amostras de DNA foram utilizadas em PCR (Polymerase Chain Reaction) para amplificar segmentos dos retroelementos Rex1, Rex3 e Rex6 e os fragmentos obtidos foram clonados e sequenciados. Adicionalmente, estes segmentos de DNA foram utilizados como sondas em experimentos de hibridação in situ visando identificar a localização cromossômica destes retrotransposons. A identificação de elementos Rex em B. cephalus e B. orbignyanus demonstrou a presença destes retrotransposons não-LTR (Long Terminal Repetition) em um maior número de espécies de Characiformes e, especificamente, no grupo Characidae. Os segmentos analisados de Rex1 e Rex3 correspondem aos domínios codificantes 3-7 e 1, 2, 2A, A e B do gene da transcriptase reversa (RT), respectivamente. O fragmento de DNA relativo ao retroelemento Rex6 isolado codifica a porção C-terminal de uma endonuclease. Comparações entre sequências nucleotídicas de diferentes espécies de peixes... / A huge part of the eukaryote genome is constituted by multiple DNA copies, known as repetitive DNAs, which role regarding to the maintenance, structure, and function of the genome needs to be better understandable. The repetitive DNAs that are classified as transposable elements have been considered one of the main parts of the vertebrate genome and, particularly, fishes have gain attention due to the presence of many different classes of these elements in their genomes. In order to improve data on fish transposable elements, the present work intent to isolate and characterize retrotransposons of the Rex family in two Characidae species - Brycon amazonicus and B. orbignyanus - and infer on the organization and evolutionary dynamics of these elements. Therefore, DNA samples were used on PCR (Polymerase Chain Reaction) in order to amplify segments of the Rex1, Rex3, and Rex6 elements, and the obtained fragments were cloned and sequenced. Additionally, these DNA segments were used as probes throughout in situ hybridization procedures to identify the chromosome localization of these retrotransposons. The identification of Rex elements in B. cephalus e B. orbignyanus evidenced the presence of these non-LTR (Long Terminal Repetition) retrotransposons in a large number of Characiformes species and, specifically, in Characidae. The analyzed fragments of Rex1 and Rex3 correspond to the coding domains 3-7 and 1, 2, 2A, A and B of the reverse transcriptase (RT) gene, respectively. The DNA segment correlated to the Rex6 element codifies a C-terminal portion of an endonuclease. Nucleotide sequence comparisons among different fish species showed that these regions are highly conserved in diverse groups. Although the obtained data for B. amazonicus seemed to point to a higher similarity between Rex1 and Rex3 of... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-11-27Bitstream added on 2014-06-13T19:54:03Z : No. of bitstreams: 1 sousa_mc_me_jabo.pdf: 1262141 bytes, checksum: 754a27f31e87b5e771e534235e7eb0a7 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A severidade dos sintomas provocados pelo Huanglongbing (HLB) ou Greening, a rápida progressão na incidência de plantas afetadas nos pomares e o fato de esta doença afetar indistintamente todas as variedades comerciais de citros, contribuíram para este estudo que visou conhecer o padrão de colonização da bactéria Candidatus Liberibacter americanus (Lam) e Candidatus Liberibacter asiaticus (Las) em plantas cítricas. O PCR convencional é o teste atualmente utilizado na diagnose. Apesar de ser uma técnica reconhecidamente sensível, para o caso do HLB tem sido apenas confirmatório, ou seja, somente permite detecção da presença da bactéria em amostras de folhas sintomáticas. Surgiram aprimoramentos da técnica de PCR, como é o caso do Nested PCR e o PCR quantitativo (qPCR), demonstrado neste trabalho ser o método empregado mais sensível que o PCR convencional. Assim, através deste estudo pode-se concluir que Las e Lam se concentraram prioritariamente nas partes com sintomas de HLB das plantas de campo, naturalmente inoculadas e infectadas por liberibacter, se diferenciando na média do número estimado de cópias de liberibacter por grama de folha de plantas afetadas, sendo Las com 5,63 contra 5,01 em plantas afetadas por Lam (título bacteriano). A proporção de amostras positivas para Lam foram de 21 (19%) contra 12 (11,2%) amostras positivas para Las. A maior parte das amostras foi negativa para ambas as liberibacters (96 – Las e 90 – Lam). O pequeno acréscimo nos resultados positivos obtido pelo método de qPCR, aliado ao seu alto custo, não justifica a substituição do PCR convencional por este método na diagnose laboratorial do HLB, ficando restrito somente a pesquisa / The degree of severity of the symptoms developed by Huanglongbing (HLB) or Greening, the fast incidence of diseased plants at different orchards and the fact that this phytopathogen affects various commercial citrus varieties have contributed to the proposition of the present work, that aimed to know the colonization pattern developed by the bacteria Candidatus Liberibacter americanus (LAM) and Candidatus Liberibacter asiaticus (LAS) on citrus plants. The conventional PCR is the current used assay to detect HLB. Besides being a sensitive and specific technique it is currently seen and a molecular technique that confirms the already symptomatic leaves of diseased plants. Improvements of the PCR technique named the Nested PCR and the quantitative PCR is described in this work as the most sensitive to detect the phytopathogen prior to the development of the symptoms disease. So, based on the results obtained in this work it was possible to conclude that LAS and LAM concentrate showed a tendency to appear mostly on parts of the plants exhibiting symptoms and that are already infected by these bacteria, showing difference when mean number of copies of liberibacter per g of leaf of infected plants, with LAS value of 5.63 as compared to 5.01 for LAM on plants with LAM detectable symptoms (high bacterial titer). The ratio of LAM positive samples was 21 (19%) against 12 (11.2%) positive for LAS. The majority of the samples were detected as negative for both bacteria (96% for LAS and 90% for LAM). The small increase on the positive results obtained when qPCR was used and considering its present high analysis cost, this type of PCR is not seen as adequate to diagnose LAM or LAS

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-13Bitstream added on 2014-06-13T20:14:44Z : No. of bitstreams: 1 morales_amr_me_jabo.pdf: 2247542 bytes, checksum: 86246681e04ea55e109f11ef3ef48d68 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho teve como objetivo analisar a expressão de genes de soja envolvidos na resistência ao nematóide de galhas, Meloidogyne javanica, utilizando a técnica de PCR em tempo real (RT-PCR). Foram avaliadas raízes de soja inoculadas e não inoculadas com o nematóide. Linhagens de soja resistentes (genótipo PI595099) e suscetíveis (cultivar BRS133) e indivíduos resultantes deste cruzamento foram inoculados com juvenis do nematóide. Raízes foram coletadas após um, três e seis dias de inoculação. O RNA total foi extraído e em seguida foi feita a síntese de cDNA, para ser utilizado nas reações de PCR em tempo real. As reações para quantificação do nível de expressão relativa foram preparadas em triplicatas, e um controle endógeno, o gene RNAr 18S também foi incluído. Os resultados mostraram que comparando os indivíduos resistentes com os suscetíveis, os resistentes apresentaram maior expressão dos genes, Chs, Xet, Hs1pro-1, Sth-2. / This work objective was to analyze the expression of soybean genes involved in the resistance to the root nematode, Meloidogyne javanica, using the Real Time PCR (RT-PCR) technique. Soybean roots inoculated and not inoculated with the nematode were evaluated. Resistant soybean lineages (genotype PI595099) and susceptible lineages (cultivate BRS133) and resulting individuals of this crossing were inoculated with juvenile of the nematode. Roots were collected after one, three and six days after inoculation. The Total RNA was extracted and, afterwards cDNA synthesis was made, to be used in the reactions of Real Time PCR. The reactions for quantification relative expression level were prepared in triplicate, and an endogenous control, gene rRNA 18S, was also included. The results showed that comparing the resistant individuals with the susceptible ones, resistants showed higher expression level of the genes, Chs, Xet, Hs1pro-1, Sth-2.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-27Bitstream added on 2014-06-13T19:03:21Z : No. of bitstreams: 1 silva_fm_dr_arafcl.pdf: 1278468 bytes, checksum: 487a79c54335104ccde5441b3c11ada4 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A proposta do trabalho é analisar a imagem do leitor brasileiro de blog. Para fazêlo, é preciso analisar primeiro o escrevente das páginas, já que, ao construir a imagem de quem produz o texto, projeta automaticamente a imagem de seu destinatário. A pesquisa será norteada pela semiótica francesa ou da Escola de Paris, focando os eixos da modalização e enunciação. Com a modalização, trabalharemos as modalidades intencionais e existenciais. Da enunciação, faremos uso dos conceitos de enunciador e de enunciatário, instâncias linguísticas que correspondem ao que a Retórica chama, respectivamente, de ethos e de pathos: imagens construídas ao longo do texto do destinador e do destinatário do enunciado. Dentre várias possibilidades e critérios de escolha do material a ser analisado, estabeleço como parâmetro de investigação os blogs mais acessados, pois neles estaria, em teoria, a representação da maioria desses leitores. Parto do pressuposto de que nos blogs mais visitados estaria a maioria dos blogueiros, e onde estivesse a maioria dos blogueiros estaria o retrato de sua constituição. Para chegar a um corpus que contivesse os blogs mais acessados do país, vali-me de duas metodologias, reunindo uma amostragem referente a todo o ano de 2006, ano-base sobre o qual se debruça o estudo. O primeiro método foi proceder a um levantamento dos blogs mais votados pelos próprios internautas. Das 41 listas colhidas ao longo do ano, dois blogs se destacavam, ambos do portal UOL: “Paz, amor e magia” e “EspalhaMerda”. No segundo método, apreendi meu corpus a partir de duas listas publicadas na mídia. A Revista Época publicou em julho de 2006 os oito blogs com maior número de acessos. Ao final de 2006, foi a vez do site IDG Now! lançar um ranking com os dez blogs mais populares da internet brasileira. As duas listas foram construídas pelo número de links... / The proposed study is to analyze the image of the brazilian reader blog. To do so, we must first examine the scribe of the pages, since to build the image of who produces the text, automatically project the image of your addressee. The research will be guided by french semiotics or the School of Paris, focusing on areas of modalization and enunciation. With modalization, we work intentional and existential modalities. With enunciation, we will make use of the concepts of enunciator and enunciatee, linguistic instances that match the rhetoric that would, respectively, ethos and pathos: images constructed by the text of the addresser and addressee of the statement. Among various possibilities and criteria for choosing the material to be analyzed, establish research as a parameter of the most popular blogs, as they would in theory represent the majority of readers. On the assumption that it would most visited blogs in the majority of bloggers, and where were the majority of bloggers would be a portrait of its constitution. To reach a corpus that contains the most popular blogs in the country, validated me of two methodologies, bringing together a sample for the entire year of 2006, the base year which focuses on the study. The first method was to conduct a survey of blogs most voted by the internet. Of the 41 lists collected over the years, two blogs stood out, both the UOL site: “Paz, amor e magia” e “EspalhaMerda”. In the second method, my corpus comes from two lists published in the media. The “Época” magazine published in July 2006 the eight blogs with the highest number of hits. At the end of 2006, was once the site “IDG Now!” launch with a ranking the ten most popular blogs of Brazilian internet. The two lists were constructed by the number of links to each blog in the blogosphere has, according to monitoring of “Technorati”, a service specializing... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-08-05Bitstream added on 2014-06-13T19:43:38Z : No. of bitstreams: 1 troncarelli_mz_dr_botfmvz.pdf: 4588450 bytes, checksum: a779f6cb9a1e51d0648806d5715dc5d8 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Com o objetivo de normatizar a cadeia produtiva visando à melhoria da qualidade do leite no Brasil, o MAPA delineou a IN n° 51, em vigor desde julho de 2005. Em linha com estes parâmetros, objetivou-se, no presente estudo, padronizar o método de mPCR para a detecção de S. aureus, S. agalactiae e E. coli em amostras de leite bovino obtidas de tanques de expansão, e avaliar esta técnica como possível recurso diagnóstico a ser empregado em programas de controle de qualidade do leite oferecido para consumo. Foram visitadas 20 propriedades leiteiras do Estado de São Paulo, com sistema de ordenha mecânica e tanque de expansão próprio, nas quais foram colhidas amostras de leite para a realização da mPCR, cultivo microbiológico, CCS e CBT. S. aureus, S. agalactiae e E. coli foram isolados, em 30%; 10% e 40% das amostras de leite dos tanques de expansão, respectivamente, e detectados pela mPCR em 0; 10% e 35%, respectivamente. A mPCR apresentou acurácia de 78,3%; sensibilidade de 37,5% e especificidade de 93,2% e limiar de detecção de 100 picogramas. A CCS apresentou mediana de 395.000 células/mL, e 55% das amostras avaliadas resultou em valores de CBT satisfatórios para mesófilos. O índice de mastite subclínica nos rebanhos avaliados pelo CMT foi de 28,3%. Conclui-se que a mPCR para a detecção de S. aureus, S. agalactiae e E. coli foi padronizada com êxito no presente estudo, e pode ser indicada como método complementar aos utilizados na rotina diagnóstica de mastite bovina e qualidade do leite / Brazilian Ministry of Agriculture and Supply, objecting the improvement of milk quality in Brazil, published the Normative Instruction n. 51, a technical group of rules for milk business that has been attended since July 2005. In line with these parameters, the aim of the present study was to standardize the mPCR test for S. aureus, S. agalactiae and E. coli detection in bovine milk samples obtained from bulk tanks, in order to evaluate this method as a possible tool to be used in milk quality control programs. Twenty milk farms with milking machine system and individual bulk tank, of different regions of Sao Paulo state were sampled. Bulk milk samples were collected for mPCR, microbiological culture, Somatic Cell Count and Total Bacterial Count. S. aureus, S. agalactiae e E. coli were isolated in 30%; 10% and 40% samples, respectively, and detected by mPCR in 0; 10% and 35% samples, respectively. mPCR presented 78,3% accuracy; 37,5% sensitivity and 93,2% specitivity and detection lower of 100pg for each pathogen. CCCs presented medium of 395.000 cells/mL and 55% of evaluated samples resulted in TBC satisfactory values for mesophilus. Subclinical mastitis index in evaluated cattle, by CMT, was 28,3%. In conclusion, mPCR for S. aureus, S. agalactiae and E. coli detection was successfully standardized in the present study and can be indicated as a complementary diagnosis to the routine methods for bovine mastitis and milk quality’s monitoring

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-06Bitstream added on 2014-06-13T19:43:39Z : No. of bitstreams: 1 faccioli_py_dr_botfmvz.pdf: 1990690 bytes, checksum: 7e2419e37a55f0133432db74f5707b3e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O leite é de extrema importância na alimentação humana. A exigência quanto à sua qualidade tem aumentado, inclusive com relação à transmissão de patógenos. Staphylococcus aureus é um dos principais agentes da mastite bovina e tem grande importância em saúde pública por produzir enterotoxinas. Os objetivos do trabalho foram avaliar o perfil dos produtores da região considerando-se a atual legislação e a qualidade do leite produzido com ênfase na presença de Staphylococcus enterotoxigênicos, utilizando a PCR na detecção de S. aureus e dos genes codificadores das enterotoxinas sea, seb, sec e sed diretamente do leite de tanque em comparação ao exame microbiológico tradicional, e realizando a detecção das respectivas enterotoxinas pelo método de aglutinação passiva reversa em látex (RPLA) diretamente do leite, comparando com os resultados genotípicos. Utilizaram-se 104 amostras de leite de tanque, estudadas a fresco e após incubação por 5 horas, uma alíquota a 7°C e outra a 25°C concomitantemente. A PCR foi altamente sensível, detectando S. aureus em 99% das amostras, mas com moderada concordância com o microbiológico nas amostras positivas. As amostras de Staphylococcus enterotoxigênicos apresentaram predomínio do gene sec (58,65%), seguido pelo gene sea (43,27%), seb (23,27%) e sed (1,28). Quanto às enterotoxinas, houve a sua detecção em 9% das amostras em quantidades que variaram de 1 a 5 ng/μL. Verifica-se a importância do estudo do potencial do leite como fonte de S. aureus enterotoxigênico e de suas enterotoxinas, fornecendo risco para a saúde pública caso o leite não seja refrigerado adequadamente / Milk has extreme importance to human feed. The demand for quality milk has increased, including pathogens transmission. Staphylococcus aureus is one of the main agents of mastitis and has importance in public health for producing enterotoxins. The study aims were to evaluate the region producer’s profile, considering the present legislation and the quality of milk produced with emphasis in enterotoxigenic Staphylococcus presence, using PCR in detection of S. aureus and enterotoxins encoding genes sea, seb, sec and sed directly from bulk tank milk in comparison with traditional microbiological test, and carring out the detection of respective enterotoxins by reverse passive latex agglutination method (RPLA) directly from milk comparing with genotypic results. A total of 104 samples of bulk tank milk were used, studied fresh and after 5-hour storage, one bracket at 7°C the another at 25°C concurrently. PCR was highly sensitive, detecting S. aureus in 99% of samples, but with moderate concordance with microbiological test in positive samples. The samples of enterotoxigenic Staphylococcus presented predomination of sec (58.65%), followed by sea (43.27%), seb (23.27%) and sed (1.28%) genes. As the enterotoxins, its detection occurred in 9% of samples in quantities that ranged from 1 to 5 ng/μL. The importance of the study of milk potential as enterotoxigenic S. aureus and enterotoxins source is verified, providing risk to public health if milk is not refrigerated properly

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002Bitstream added on 2014-06-13T19:23:19Z : No. of bitstreams: 1 alcantara_tm_dr_botfm.pdf: 920701 bytes, checksum: 3964c80e93a3f0ffd43c1b9743c630cc (MD5) / A paracoccidioidomicose (Pbmicose) é micose sistêmica na qual complexos eventos inflamatórios e imunológicos são desencadeados pela interação fungo-hospedeiro, resultando em duas características importantes da doença: freqüente instalação de distúrbios imunorregulatórios e reação inflamatória granulomatosa. Este trabalho teve por objetivo estudar em pacientes portadores da forma crônica multifocal da Pbmicose, na fase pré-tratamento, as características da resposta granulomatosa em lesões de pele e mucosa, considerando suas populações celulares e a presença in situ de citocinas de padrão Th1 e Th2. Estes achados foram correlacionados com a gravidade clínica, níveis de competência imunológica humoral e celular e níveis séricos dessas mesmas citocinas. Foram estudados 27 pacientes com gravidade clínica moderada (13 pacientes), moderada/grave (8 pacientes), grave (5 pacientes) e não avaliada (1 paciente). As biópsias foram realizadas por punch de lesões de pele ou mucosa. Os soros foram separados de sangue obtido por punção venosa, e o teste cutâneo realizado pela paracoccidioidina. Nas biópsias foram analisados o número e padrão de distribuição de neutrófilos, eosinófilos, células gigantes, plasmócitos, linfócitos T CD3+ e CD8+, linfócitos B e células NK (estes três últimos caracterizados pela imuno-histoquímica), contagem de fungos e a detecção imuno-histoquímica de IL-4, IFN- , IL-10, TNF- e TGF- . No soro dos pacientes foram realizadas dosagens de IL-2, IL-4, IL-10 e TGF- e de anticorpos específicos anti-Pb por ensaio imunoenzimático (ELISA)... / Paracoccidioidomycosis (Pbmycosis) is a systemic mycosis in which a complex inflammatory and immunological events are unchained by the interaction of the fungus (Pb) with the host tissues, resulting in two important characteristics of the disease: frequent immunoregulatory disturbances and a granulomatous inflammation. The aim of this work was to study in patients with the chronic multifocal form of Pbmycosis, before treatment, the characteristics of the granulomatous response in skin and mucosal lesions, considering the cellular populations and the presence in situ of Th1 and Th2 cytokines patterns. These results were correlated with the clinical severity, the levels of humoral and cellular immune competence and serum levels of those cytokines. Twenty seven patients were studied, distributed accordingly to clinical severity: moderate (13 patients), moderate/severe (8 patients), severe (5 patients), and not evaluated (1 patient). Punch biopsies were collected from skin or mucosal lesions, the serum obtained from venous blood samples to measured antibodies levels, and the skin test accomplished by the paracoccidioidin. In biopsies the following parameters were evaluated: the number and distribution pattern of neutrophils, eosinophils, giant cells, plasma cells, T CD3+ and CD8+ cells, B cells and NK cells (the last three characterized by immunohistochemistry), number of fungi, and detection of IL-4, IFN- , IL-10, TNF- and TGF- by immunohistochemistry. It was also measured the serum levels of IL-2, IL-4, IL-10 and TGF- and the level of specific antibodies anti-Pb by ELISA test. Specific granulomatous lesions, composed with epithelioid, well organized granuloma together with epithelioid loose, ill organized granuloma were observed in the same lesion of the dermis and submucosa. Neutrophils... (Complete abstract, click electronic address below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-10-31Bitstream added on 2014-06-13T20:44:54Z : No. of bitstreams: 1 seki_mc_dr_jabo.pdf: 502036 bytes, checksum: 7c1793c29b37113530548456e8f0b879 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho teve o objetivo de realizar o diagnóstico sorológico de Chlamydophila felis utilizando duas técnicas sorológicas: imunofluorescência indireta, nas modalidades de kit comercial (RIFI COMERCIAL), e ensaio in house (RIFI OVO), e ELISA, sendo estes testes de RIFI OVO e ELISA preparados com antígeno de Chlamydophila abortus produzidos em ovos embrionados SPF de galinha. Adicionalmente, objetivou-se a realização do diagnóstico molecular de C. felis e estabelecimento do diagnóstico diferencial da clamidiose felina em relação à infecção pelo herpesvírus felino tipo 1 (HVF-1), vírus da Imunodeficiência felina (FIV) e vírus da leucemia felina (FeLV). Anticorpos anti-Chlamydiaceae foram detectados pela RIFI COMERCIAL em 81% dos animais (162/201), pela RIFI OVO em 55% (111/201) e pelo ELISA em 31% (69/201) das amostras. Verificou-se que o antígeno de Chlamydophila abortus inoculado em ovos embrionados não é indicado para utilização em técnicas imunológicas, devido à baixa sensibilidade, especificidade e correlação entre os testes estudados. Das amostras de suabes de conjuntiva submetidas à PCR, em 5,1% (12/235) foi amplificado o gene MOMP de C. felis e três amostras (1,3%) foi detectado DNA de herpesvírus. Houve coinfecção para os dois agentes em 0,4% (1/235) das amostras analisadas. Ademais, 150 amostras de soro foram avaliadas, sendo anticorpos anti-FIV detectados em 8 amostras (5,3%) e o antígeno de FeLV detectado em 11 amostras (7,3%). Não houve coinfecção por C. felis e HVF-1 com os vírus imunossupressores, demonstrando não haver correlação entre a infecção de FIV e/ou FeLV e o complexo respiratório felino / This study aimed at perfoming the serological diagnosis of Chlamydophila felis by three serological approaches, using a commercial kit for Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT COMMERCIAL), and Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT EGG) and ELISA prepared with Chlamydophila abortus with antigen produced in SPF embryonated chicken eggs. Additionally, our study aimed at performing the molecular diagnosis of C. felis and establishing the differential diagnosis of feline chlamydiosis in relation to Feline Herpesvirus type-1 (HVF-1) in cat conjunctival swab samples, as well as investigate the presence of antibodies to Feline Immunodeficiency Virus (FIV) and presence of Feline Leukemia Virus (FeLV) antigen in cat serum samples. IgG antibodies to Chlamydophila sp. were detected by in 81% (162/201), 55% (111/201), and 31% (69/201) of serum samples, by IFA Chlamydiaceae COMMERCIAL, IFA EGG and ELISA, respectively. The use of Chlamydophila spp antigen produced in embryonated eggs is not indicated for serological tests due to its low sensitivity, specificity and correlation with other serological tests. Twelve (5.1%) out of 235 conjunctival swab samples were positive to C. felis- MOMP gene PCR; three samples (1.3%) were positive to herpesvirus PCR. Co-infection for both agents (C. felis and Herpesvirus) was found in 1 cat (0.4%). Furthermore, 150 serum samples were evaluated by commercial ELISA kit-Snap ® Combo FeLV-FIV. IgG antibodies to FIV were detected in 8 samples (5.3%), and FeLV antigen was detected in 11 samples (7.3%). The presence of co-infection for C. felis and HVF-1 with immunosuppressive viruses was not observed, showing no correlation between FIV infection and / or FeLV and upper respiratory tract disease

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-05-24Bitstream added on 2014-06-13T19:44:13Z : No. of bitstreams: 1 soares_mjv_dr_jabo.pdf: 432886 bytes, checksum: 76cfc7d7c9a96733b63b45c9424324b3 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A leishmaniose é uma enfermidade provocada por protozoários do gênero Leishmania, que pode produzir manifestações cutâneas, mucocutâneas ou viscerais. Os objetivos deste ensaio foram os de identificar a espécie Leishmania (Leishmania) chagasi, utilizando o método PCR-RFLP em amostras de tecido de cães com leishmaniose visceral; seqüenciar o fragmento amplificado de DNA das amostras de linfonodos de diferentes animais, em busca de homologia e polimorfismos; comparar os métodos de imunoistoquímica e de PCR dos rins, na identificação da Leishmania e comparar as técnicas sorológicas em relação à PCR como auxílio diagnóstico da leishmaniose. Para tanto, foram utilizadas amostras de 48 cães com leishmaniose, diagnosticados por meio de testes IFI, ELISA e por PCR. Realizou-se PCR com amostras de linfonodo poplíteo, baço e rins, utilizando ‘primers’ específicos para o gênero Leishmania. A partir de amostras amplificadas, o DNA foi submetido à digestão enzimática (técnica PCR-RFLP) com as enzimas Hae III, Bsr I e Rsa I. Para o seqüenciamento de DNA, produtos de PCR foram amplificados com ‘primer sense’, precipitados e submetidos ao seqüenciamento automático. Com fragmentos histológicos renais, realizou-se a técnica imunoistoquímica utilizando anticorpo policlonal anti-Leishmania produzido em coelho. O método PCR-RFLP permitiu identificar a espécie Leishmania (Leishmania) chagasi em todas as amostras de DNA dos diferentes tecidos. No seqüenciamento de DNA, os fragmentos amplificados mostraram-se pertencentes às espécies causadoras de leishmaniose visceral, porém não foi possível diferenciá-las. A técnica de imunoistoquímica mostrou presença de formas amastigotas íntegras em meio ao infiltrado inflamatório intersticial em dois (4%) dos 48 animais avaliados, enquanto a PCR confirmou Leishmania sp em 77% dos cães. Conclui-se que a técnica... / Leishmaniasis is a disease caused by organisms belonging to the genus Leishmania. Clinical forms of leishmaniasis are found as being cutaneous, mucocutaneous or visceral. The objectives of the present study were to identify the Leishmania (Leishmania) chagasi species in tissue specimen from dogs presenting visceral disease diagnosed by PCR-RFLP assay; to determine the fragment sequence (120bp) from lymph node samples from different animals searching for homologies and polymorphism; and to compare immunohistochemistry method to PCR assay with renal tissue and Leishmania local identification. Forty eight samples from dogs clinically diagnosed positive to leishmaniasis by IFAT, ELISA and PCR assays were used in this study. The PCR were performed with samples of popliteo lymph node, spleen and kidneys, and specific oligonucleotides to genus Leishmania. PCR products were digested with enzymes Hae III, Bsr I and Rsa I. The nucleotide sequences were determined automatically. For immunohistochemical purposes the sections of kidneys and anti-Leishmania polyclonal antibody were used. PCR-RFLP assay allowed us to identify the Leishmania (Leishmania) chagasi specie in all DNA samples from different tissues samples. DNA sequencing revealed products amplified belonging to specie responsible to cause visceral leishmaniasis, but it was not possible to distinguish the species. The immunohistochemical study revealed the presence of amastigotes organisms on intersticial inflammatory infiltrate from two dogs (4%), while the PCR assay detected the Leishmania sp in 37 dogs (77%). Based on the PCR-RFLP results, we concluded that it characterized as being Leishmania (Leishmania) chagasi species, etiologic agents of visceral leishmaniasis, in this group of animals; DNA sequence presented homology of 55 bp among all Leishmania spp studied. Additionally, the PCR performed... (Complete abstract click electronic access below)