Made available in DSpace on 2014-06-12T18:02:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3672_1.pdf: 2497903 bytes, checksum: cc3087d67434a06af59f087e20d56fc9 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Papilomavírus bovinos (BPVs), vírus da família Papillomaviridae, acometem o gado com a indução do aparecimento de verrugas, cânceres de bexiga e do trato digestório, causando importantes prejuízos à economia pecuarista. Dez tipos de BPV já foram bem caracterizados (BPV-1 a 10). O presente trabalho teve como foco detectar seqüências do genoma de BPVs em amostras de sangue de animais de uma fazenda leiteira em Pernambuco e nas culturas de linfócitos correspondentes, visando investigar a presença dos tipos virais, mais especificamente 1, 2 e 4, verificar a presença simultânea de mais de um tipo viral e o eventual tipo mais freqüente. Para o diagnóstico viral, utilizou-se a técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR), empregando-se iniciadores específicos para os tipos 1, 2 e 4, direcionados aos genes L1, L2 e E7, respectivamente. A confirmação dos produtos amplificados foi realizada com digestão enzimática e posterior seqüenciamento. Foram detectadas seqüências virais em todos os animais trabalhados, independente da presença de papilomas aparentes. Os tipos 1 e 2 foram detectados diretamente de amostras de sangue e em cultura celular de linfócitos, enquanto que o tipo 4 não foi detectado em nenhuma das amostras. Os resultados positivos puderam ser confirmados por digestão enzimática. A presença viral em sangue corrobora trabalhos descritos na literatura que discutem a disseminação do BPV pelo sangue, enquanto que a detecção em cultura indica manutenção viral neste sistema. A partir do seqüenciamento de algumas amostras positivas para BPV-1, sugeriu-se uma nova variante viral, quando comparadas às seqüências depositadas no GenBank. Faz-se necessário a ampliação deste estudo, abordando-se outras fazendas importantes do Estado. Em conclusão, os resultados obtidos neste trabalho geram maiores conhecimentos acerca de BPV em Pernambuco, mais especificamente no município de Ribeirão

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:36:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_6843_RESUMO NAYARA.pdf: 95537 bytes, checksum: c7dc2ac95e7ea64f2eafa92433cdfb1f (MD5) Previous issue date: 2013-07-29 / As hortaliças são uma fonte importante de vitaminas, minerais e fibras, que são essenciais para o bom funcionamento do organismo, por isso cada vez mais cresce o seu consumo. A alface é uma das hortaliças mais consumidas no Brasil, principalmente na sua forma crua, entretanto nos últimos anos tem sido associada a surtos alimentares. Várias metodologias podem ser utilizadas para determinação de micro-organismos em alimentos. No entanto, é crescente a necessidade da utilização de métodos que proporcionem resultados mais rápidos. Dessa forma a técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) tem se mostrado uma ferramenta eficaz para tal finalidade. Este trabalho objetivou em avaliar a ocorrência de Salmonella spp. em alface (Lactuca sativa) do tipo crespa, comercializada no município de Alegre-ES. Para realização do estudo foram utilizadas 60 amostras de alface do tipo crespa e cultivo convencional comercializadas na feira livre e outros estabelecimentos da cidade. Foi realizada a determinação dos seguintes grupos microbianos nas amostras avaliadas: mesófilos aeróbios, fungos filamentos e leveduras, coliformes totais e termotolerantes. A determinação da ocorrência de Salmonella spp. ocorreu por meio das seguintes etapas: pré-enriquecimento, enriquecimento seletivo, plaqueamento seletivo-diferencial e para confirmação foi utilizada a técnica de PCR. Foram avaliados 11 estabelecimentos, incluindo a feira livre. As amostras analisadas apresentaram contagens médias de mesófilos aeróbios de 6,80 log UFC.g-1 e fungos filamentosos e leveduras de 4,07 log UFC.g-1. Foi constatado que 100 % das amostras apresentaram coliformes totais e, com relação à presença de coliformes termotolerantes, 58 % das amostras apresentaram valores < 3 NMP g-1, 30 % entre 4 e 21 NMP g-1, e 12 % entre 43 e 93 NMP g-1. Pela técnica de PCR, 21,66 % (n = 13) das 60 amostras de alface avaliadas foram consideradas positivas para Salmonella spp. As amostras positivas para Salmonella spp. foram provenientes de oito dos 11 estabelecimentos avaliados. A partir dos resultados obtidos ressalta-se a importância da adoção de medidas preventivas para reduzir a contaminação da alface in natura e demais hortaliças ao longo de toda cadeia produtiva, como uma forma de reduzir os riscos à saúde associados ao consumo deste alimento.

Submitted by Regina Adriana de Oliveira Calsolari null (reginaocalsolari@hotmail.com) on 2016-03-29T12:32:41Z No. of bitstreams: 1 tesefinal290320162.pdf: 1741802 bytes, checksum: 7ee9a12184c5ee4dff772984cbbe4e58 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-03-29T20:34:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 calsolari_rao_dr_bot.pdf: 1741802 bytes, checksum: 7ee9a12184c5ee4dff772984cbbe4e58 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-29T20:34:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 calsolari_rao_dr_bot.pdf: 1741802 bytes, checksum: 7ee9a12184c5ee4dff772984cbbe4e58 (MD5) Previous issue date: 2016-03-01 / Estima-se que um em cada quatro brasileiros esteja infectado pelo bacilo de Koch, e apenas em 2013, 80 mil casos de tuberculose foram notificados ao Ministério da Saúde, dos quais 6,5 mil foram a óbito. O exame laboratorial para o diagnóstico da tuberculose é feito pelos seguintes métodos tradicionais: Baciloscopia (BAAR) e Cultura, considerada o padrão ouro, porém com um tempo de realização demorado (em torno de oito semanas). A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) é um método de amplificação de DNA que pode ser útil no diagnóstico diferencial da tuberculose com outras infecções pulmonares. Além disso, a PCR pode confirmar a identificação da micobactéria em materiais clínicos que apresentem uma difícil positividade. Objetivos – Avaliar a positividade de Mycobacterium spp. em diferentes materiais biológicos utilizando a técnica de PCR para os alvos Internal Transcribed Spacer (ITS) 16S-23S rDNA e gene hsp 65. Material e métodos – Cento e trinta materiais biológicos de pacientes com suspeita de tuberculose pulmonar ou extrapulmonar foram investigados para pesquisa de Mycobacterium spp. por ITS-PCR e pesquisa de fragmento do gene hsp65, no período de março de 2012 a abril de 2013. Para identificação das espécies de micobactérias foi utilizada a pesquisa do gene IS6110, e técnica Restriction Enzyme Pattern Analysis (PCR-PRA). Para algumas amostras positivas pela PCR foi realizado o sequenciamento para identificação da espécie. Foram avaliados dados demográficos e condições associadas. A comparação entre as técnicas foi verificada pelo teste χ2. Das amostras pesquisadas no escarro foram calculadas a sensibilidade e especificidade da PCR e da baciloscopia em relação à cultura. Foi considerado estatisticamente significante quando o valor do p foi < 0,05. Resultados - A positividade da técnica de PCR (31,6%) foi maior quando comparada ao BAAR (23,4%) e cultura (22,4%), (p=0,00). A sensibilidade e especificidade da baciloscopia em relação à cultura foram de 100% e 54%, respectivamente. Na comparação do PCR para as amostras de escarro a sensibilidade foi de 100% e especificidade de 81%. Ao avaliarmos os fatores de risco observamos uma associação positiva entre BAAR positivo, PCR positivo e cultura positiva com consumo de álcool e entre PCR positivo e tabagismo. Conclusão- O estudo demonstrou que a pesquisa de Mycobacterium spp. diretamente de materiais biológicos pela técnica de PCR pode ser uma perspectiva viável para diagnóstico, principalmente quando realizada em amostras extrapulmonares. / It is estimated that one in every four Brazilians is infected with Koch's bacillus, and just in 2013, eighty thousand cases of tuberculosis were reported to the Department of Health, of which 6.5 million died. The laboratory test for the diagnosis of tuberculosis is made by the following traditional methods: baciloscopy and culture, considered the gold standard, but with a long holding time (around 8 weeks). Polymerase chain reaction (PCR) is a DNA amplification method that can be useful in the differential diagnosis of pulmonary tuberculosis with other infections. In addition, PCR can confirm the identification of mycobacteria in clinical materials that exhibit a difficult positivity. Objectives - To evaluate the positivity of Mycobacterium spp. in different biological materials using the PCR technique for the Internal Transcribed Spacer (ITS) 16S-23S rDNA gene and hsp 65 targets. Materials and Methods - One hundred and thirty biological materials of patients with suspected pulmonary or extrapulmonary tuberculosis were investigated for Mycobacterium tuberculosis spp. by ITS-PCR research and gene fragment hsp65 research, from March 2012 to April 2013. To identify the species of mycobacteria was used the IS6110 gene research and PCR-PRA technique). For some positive samples was performed by PCR sequencing to species identification. They evaluated demographics and associated conditions. The comparison between the techniques was checked by χ² test. The samples surveyed in sputum were calculated sensitivity and specificity of PCR and baciloscopy in relation to culture. It was considered statistically significant when the p value was <0.05. Results - The PCR positivity (31.6%) was greater when compared to baciloscopy (23.4%) and culture (22.4%) (p = 0.00). The sensitivity and specificity of baciloscopy in relation to culture for sputum samples was 100% and 54%, respectively. When comparing the PCR for sputum samples, sensitivity was 100% and specificity of 81%. To evaluate the risk factors it was observed a positive association between baciloscopy positive, and culture positive with alcohol consumption and between PCR positive and smoking. Conclusion - The study demonstrated that the research for Mycobacterium spp. PCR directly from the biological material can be a viable approach to diagnosis, especially when performed in extrapulmonary samples.

Made available in DSpace on 2015-04-17T15:02:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1055876 bytes, checksum: 1d5b64610f0c2a45fece3ac00bc89543 (MD5) Previous issue date: 2011-05-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The goat milk provides nutrients essential for the proper operation of human organism has gained importance in consumer market. There is an urgent need for studies that provide tools for detection of adulteration in goat milk by addition of bovine milk, a practice that has become a recidivist. This study aimed to provide a tool for validation in Brazilian species of goat milk and cow milk technique of polymerase chain reaction, which had a detection threshold of 0,5%. And used the method of phenol-chloroform and a commercial kit for the extraction of DNA of high quality and purity. The technique was used in conjunction milk samples collected from processing plants of goat milk in western cariri paraibano and found the presence of bovine milk in 37,5% of samples. / O leite caprino além de fornecer nutrientes indispensáveis ao funcionamento adequado do organismo humano tem ganhado espaço no mercado consumidor. Há uma necessidade premente de estudos que disponibilizem ferramentas para detecção de adulteração em leite caprino por adição de leite bovino, uma prática que tem se tornado reincidente. O presente trabalho teve como objetivo disponibilizar uma ferramenta para validação em espécies caprinas e bovinas brasileiras a técnica de reação em cadeia da polimerase, a qual obteve um limiar de detecção de 0,5%. E, utilizou o método a base de fenol-clorofórmio e um kit comercial para a realização da extração de DNA de melhor qualidade e grau de pureza. A técnica foi utilizada em amostras de leite de conjunto coletadas em usinas de beneficiamento de leite caprino da região ocidental do cariri paraibano e encontrou a presença de leite bovino em 37,5% das amostras.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-12-18T20:46:06Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2017-12-18T20:46:43Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-18T20:46:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Reprodução Não Autorizada.pdf: 47716 bytes, checksum: 0353d988c60b584cfc9978721c498a11 (MD5) Previous issue date: 2017-06-12 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Women in the gestation period undergo several physiological, immunological, hormonal and anatomical changes in their body, changes that leave them vulnerable to some infections. One of the pathogens that frequently infects women and which may have a considerable impact on pregnant women is the bacterium Chlamydia trachomatis (CT), whose infection is generally silent and can have serious consequences for the mother and fetus, such as premature birth, tubal pregnancy, and spontaneous abortion. The routine screening of this bacterium in women of childbearing age and in pregnant women has been carried out in some developed countries, but not yet in Brazil. The objective of this study was to study CT infection in pregnant women attended at the Basic Health Units of the Municipality of Coari, Amazonas, Brazil, and to verify possible associations between the presence of CT and clinical-epidemiological variables. It is a descriptive and cross-sectional study, with pregnant women attended at these units during the prenatal visit between July 2016 and March 2017. The pregnant women answered a questionnaire containing socio-demographic, behavioral and clinical data. The diagnosis of CT was performed using the polymerase chain reaction (PCR) technique in urine and cervix-vaginal samples. Of a total of 164 pregnant women selected, 100 were included in the study. The mean age was 22.87 years (SD = 6.24). The prevalence rate of CT infection was 18% (18/100). The prevalence of CT in the urine samples was 15% (95% CI: 8.65 - 23.53) and in the cervix-vaginal samples was 11% (95% CI: 5.62 - 18.83). The prevalence of CT was found in pregnant women with a mean age of 21.15 years (SD = 4.65), and was higher in those who started sexual activity before 15 years of age, and in the primigravida, but it was only Associated with those who had more than two partners in the last 12 months (p = 0.022) and those with gynecological complaint of "pain after intercourse" (p = 0.05). This study showed a high prevalence (18%) of CT infection among pregnant women in the municipality of Coari/AM, and reinforces the need to screen for this infection during prenatal care in this population. / As mulheres, no período da gestação, passam por diversas alterações fisiológicas, imunológicas, hormonais e anatômicas em seu corpo, alterações estas que as deixam vulneráveis a algumas infecções. Um dos patógenos que frequentemente infecta mulheres e que pode ter considerável impacto sobre gestantes é a bactéria Chlamydia trachomatis (CT), cuja infecção é geralmente silenciosa e pode trazer sérias consequências para a mãe e o feto, tais como o parto prematuro, gravidez tubária e aborto espontâneo. O rastreamento rotineiro dessa bactéria em mulheres em idade fértil e em gestantes tem sido realizado em alguns países desenvolvidos, mas ainda não no Brasil. O objetivo desta pesquisa foi estudar a infecção por CT em gestantes atendidas nas Unidades Básicas de Saúde do Município de Coari, Amazonas, Brasil, e verificar possíveis associações entre a presença de CT e variáveis clínico-epidemiológicas. Trata-se de um estudo descritivo e transversal, com gestantes atendidas nessas unidades durante a consulta de pré-natal, entre julho de 2016 e março de 2017. As gestantes responderam um questionário contendo dados sócio-demográficos, comportamentais e clínicos. O diagnóstico da CT foi realizado pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) em amostras de urina e cérvico-vaginais. De um total de 164 gestantes selecionadas, 100 foram incluídas no estudo. A média de idade foi de 22,87 anos (DP= 6,24). A taxa de prevalência da infecção por CT encontrada foi de 18% (18/100). A prevalência da CT nas amostras de urina foi de 15% (IC95%: 8,65 – 23,53) e nas amostras cérvico-vaginais foi de 11% (IC95%: 5,62 – 18,83). A prevalência da CT foi encontrada nas gestantes com média de idade de 21,15 anos (DP=4,65), e foi maior nas que tiveram o início da atividade sexual antes dos 15 anos de idade, e nas primigesta, no entanto, somente associada com as que tiveram mais de dois parceiros nos últimos 12 meses (p= 0,022) e as que apresentaram queixa ginecológica “dor após a relação sexual” (p= 0,05). Este estudo mostrou uma alta prevalência (18%) da infecção causada por CT entre gestantes do município de Coari/AM, e reforça a necessidade do rastreio dessa infecção durante o pré-natal nessa população.

INTRODUÇÃO: A síndrome de Williams-Beuren (SWB; OMIM #194050) é causada por microdeleções em hemizigose de genes contíguos na região 7q11.23. Fácies típico, estenose aórtica supravalvar (EASV), deficiência intelectual, personalidade amigável e hiperacusia constituem as principais características da SWB. A deleção mais freqüente é de 1,55Mb, porém deleção de 1,84Mb também já foi descrita. Embora a técnica de hibridização in situ por fluorescência (FISH) ser amplamente utilizada na detecção da deleção, os marcadores microssatélites são considerados altamente informativos e de fácil manejo. OBJETIVOS: Testar os marcadores microssatélites para o diagnóstico da SWB, determinar o tamanho e origem parental da microdeleção, comparar as características clínicas entre os pacientes com diferentes tamanhos da deleção e origem parental. MÉTODOS: Foram estudados 97 pacientes com diagnóstico clínico de SWB utilizando cinco marcadores microssatélites: D7S1870, D7S489, D7S613, D7S2476 e D7S489_A. A partir do DNA genômico dos probandos e de seus genitores, foi realizada reação em cadeia da polimerase (PCR), seguida de eletroforese em gel de poliacrilamida desnaturante (uréia, com 7,5 M) e os resultados visualizados com coloração de prata. RESULTADOS E DISCUSSÃO: Com cinco marcadores juntos, o resultado foi informativo em todos os pacientes. O marcador mais informativo foi D7S1870 (78,4%), seguido por D7S613 (75,3%), D7S489 (70,1%) e D7S2476 (62,9%). A deleção foi encontrada em 84 (86,6%) pacientes e sua ausência em 13 (13,4%) pacientes. A deleção de 1,55 Mb foi observada em 76/84 pacientes (90,5%) e 1,84 Mb em 8/84 pacientes (9,5%). A origem parental da deleção foi materna em 44/84 pacientes (52,4%) e paterna em 40/84 pacientes (47,6%). Alterações oculares foram mais freqüentes em pacientes com deleção. Não houve diferença nos achados clínicos entre o tamanho ou a origem parental da deleção, exceto para EASV, presente em maior freqüência nos pacientes com deleção paterna. Os resultados por marcadores microssatélites foram concordantes com FISH positivos, no entanto, em dois pacientes com FISH negativos, a microdeleção foi detectada apenas pelos marcadores. CONCLUSÃO: O uso de cinco marcadores microssatélites selecionados foi informativo em todos os pacientes. Em dois casos, os marcadores foram mais eficientes que FISH, portanto pode ser considerado um método alternativo para o diagnóstico molecular da SWB / INTRODUCTION: Williams-Beuren syndrome (WBS; OMIM 194050) is caused by hemizygous contiguous gene microdeletions at 7q11.23. Typical facies, supravalvular aortic stenosis (SVAS), mental retardation, overfriendliness and hiperacusis comprise typical symptoms in WBS. The most common deletion is 1.55 Mb, however 1.84 Mb deletion also has been described. Although fluorescence in situ hybridization (FISH) is widely used in the detection of deletion, microsatellite markers are considered highly informative and easily manageable. PURPOSE: Test the microsatellite markers for the diagnosis of WBS, to determine the size and parental origin of microdeletion, compare the clinical characteristics between patients with different sizes of the deletion and parental origin. METHODS: We studied 97 patients with clinical diagnosis of WBS using five microsatellite markers: D7S1870, D7S489, D7S613, D7S2476 and D7S489_A. From the genomic DNA of probands and their parents was performed polymerase chain reaction (PCR), followed by electrophoresis on denaturing polyacrylamide gel (urea, 7.5 M) and the results visualized with silver staining. RESULTS AND DISCUSSION: Using five markers together, the result was informative in all patients. The most informative marker was D7S1870 (78.4%) followed by D7S613 (75.3%), D7S489 (70.1%) and D7S2476 (62.9%). The deletion was found in 84 (86.6%) patients and absent in 13 (13.4%) patients. The deletion of 1.55 Mb was observed in 76/84 patients (90.5%) and 1.84 Mb in 8 / 84 patients (9.5%). The parental origin was maternal in 44/84 patients (52.4%) and paternal in 40/84 patients (47.6%). Abnormalities ocular were more frequent in the patients with a deletion. There were no clinical differences in relation to either the size or parental origin of the deletion, except for SVAS, present in more frequency in the patients with paternal deletion. The results for microsatellite markers were concordant with FISH positive, however, in two patients with negative FISH, the microdeletion was detected only by the markers. CONCLUSION: Using these five selected microsatellite markers was informative in all patients. In two cases, the markers were more efficient than FISH, thus can be considered an alternative method for molecular diagnosis in SWB

Orientador: Maria Cristina Carlan da Silva / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2014

Made available in DSpace on 2015-04-11T13:38:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Norma Suely de Lima Freitas.pdf: 2299430 bytes, checksum: 139bbbb8dc0c714ef7d443c796111a50 (MD5) Previous issue date: 2007-02-28 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Chlamydia trachomatis is a sexually transmitting bacterium that causes great impact on females reproductive health and also, constitutes an important problem for the publichealth. The infection by C. trachomatis is estimated about 90 million cases worldwide. C. trachomatis is considerated the most prevalent sexually transmitting bacterium mainly in developing countries and causes diseases on urogenital tract, venereal limphogranuloma and others. One of the risks of infection is the practice without protection among adolescents. The recurring risk is common without the use of preservatives. The diagnostic is critical because most of the times the infection is assynptomatic. In females, the infection by C. trachomatis cause pelvic inflammatory disease (PID) and the consequences can lead to infertility, ectopic pregnancy and chronicle pelvic pain. The nucleic acid amplification techniques allow us to use small amount of samples to detect Chlamydia. The choice of the technique to detect Chlamydia trachomatis was Polymerase Chain Reaction (PCR) that offers greater sensitivity and specificity than tests as immunoassay and bacteria culture, for estimate the prevalence of this pathogen in endocervical samples of infertiles women attended in the clinic of infertility of the Dona Francisca Mendes University Hospital, in Manaus-Am-Brazil. The study population consisted of 106 women with infertility diagnosis and was realized medical gynecologic examination to obtain samples for the amplification of Chlamydia trachomatis DNA plasmid. Informations of the socialeconomic-demographs variations and clinics variations were obtained through questionaire and through signature consent term that were aplicated for each patient that participated in this study. For the statistical analysis were used the software Epi-Info 3.3 for Windows and the significant level used in the tests were 5%. The prevalence found for Chlamydial infection by the PCR method were 52,8%. To confirm the weak band found of 241 pb at the amplification region, were realized the analysis on the 6% Poliacrilamid gel and DNA sequencing of DNA Chlamydial plasmid. In relation to the PCR test and socialdemographs variations, the statistical analysis demonstrated significant assocation of 5% (p < 0,05) only for the family income (2 to 4 salaries). About variability of genes, were verified at ten samples that were sequenced minimal variations from 1,1% up to 3,3% comparing to the Chlamydia trachomatis plasmid. Due to the high prevalence found of Chlamydia trachomatis in this study, were verified the necessity to implant the detections programs in large scale, using the PCR method in clinicals samples, for having the most sensitive and specificity to determine the reduction of this pathogen in sexually active men and women. / A Chlamydia trachomatis é uma bactéria sexualmente transmissível, de grande impacto no sistema reprodutivo das mulheres, sendo também um importante problema para a Saúde Pública. A estimativa dos casos de infecção por C. trachomatis é de 90 milhões em todo o mundo. A C. trachomatis é considerada a bactéria sexualmente transmissível de maior prevalência, principalmente em países desenvolvidos e causa doenças do trato urogenital, linfogranuloma venéreo (LGV) e outras. Um dos fatores de risco para a infecção é a prática sexual sem proteção que é comum em adolescentes. O risco da recorrência sem uso do preservativo é comum. O diagnóstico é crítico devido à freqüência de infecções assintomáticas. Em mulheres, a infecção pela C. trachomatis causa doença inflamatória pélvica (DIP) e as suas conseqüências podem ser a infertilidade, gravidez ectópica e dor pélvica crônica. As técnicas de amplificação de ácidos nucléicos permitem utilizar pequenas quantidades de amostras para a detecção da clamídia. A escolha da técnica para detecção de Chlamydia trachomatis foi Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) que apresenta uma maior sensibilidade e especificidade do que os testes de imunodetecção e de cultura celular, para estimar a prevalência desse patógeno em amostras endocervicais de mulheres inférteis atendidas na clínica de infertilidade do Hospital Universitário Dona Francisca Mendes, na cidade de Manaus-AM-Brasil. A população de estudo consistiu de 106 mulheres com diagnóstico de infertilidade e foi realizado o exame médico ginecológico para a obtenção de amostras para o exame de amplificação do DNA plasmidial da Chlamydia trachomatis. As informações das variáveis sócio-econômico-demográficas e variáveis clínicas foram obtidas através de questionário, mediante da assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido aplicado para cada paciente que participou do estudo. Para a análise estatística foi utilizado o software Epi-Info 3.3 para Windows e o nível de significância utilizado nos testes foi de 5%. A prevalência por infecção clamidial encontrada pelo método de PCR foi 52,8%. Para confirmação das bandas fracas de 241 pb encontradas na região amplificada, realizou-se a análise no gel de Poliacrilamida 6% e sequenciamento do DNA plasmidial de Chlamydia trachomatis. Com relação ao teste da PCR e variáveis sócio-demográficas, a análise estatística realizada demonstrou associação significativa de 5% (p < 0,05) apenas para renda familiar (2 a 4 salários mínimos). Quanto à variabilidade gênica verificou-se que nas dez amostras seqüenciadas houve mínima variabilidade genética variando de 1,1% a 3,3% em relação ao plasmídio de Chlamydia trachomatis. Devido a alta prevalência de Chlamydia trachomatis encontrada neste estudo, verificou-se a necessidade de implantação de programas de detecção em massa, utilizandose o método da PCR em amostras clínicas, por possuir maior sensibilidade e especificidade para determinar a diminuição na incidência deste patógeno em homens e mulheres sexualmente ativas.

INTRODUÇÃO: A síndrome de Williams-Beuren (SWB; OMIM #194050) é causada por microdeleções em hemizigose de genes contíguos na região 7q11.23. Fácies típico, estenose aórtica supravalvar (EASV), deficiência intelectual, personalidade amigável e hiperacusia constituem as principais características da SWB. A deleção mais freqüente é de 1,55Mb, porém deleção de 1,84Mb também já foi descrita. Embora a técnica de hibridização in situ por fluorescência (FISH) ser amplamente utilizada na detecção da deleção, os marcadores microssatélites são considerados altamente informativos e de fácil manejo. OBJETIVOS: Testar os marcadores microssatélites para o diagnóstico da SWB, determinar o tamanho e origem parental da microdeleção, comparar as características clínicas entre os pacientes com diferentes tamanhos da deleção e origem parental. MÉTODOS: Foram estudados 97 pacientes com diagnóstico clínico de SWB utilizando cinco marcadores microssatélites: D7S1870, D7S489, D7S613, D7S2476 e D7S489_A. A partir do DNA genômico dos probandos e de seus genitores, foi realizada reação em cadeia da polimerase (PCR), seguida de eletroforese em gel de poliacrilamida desnaturante (uréia, com 7,5 M) e os resultados visualizados com coloração de prata. RESULTADOS E DISCUSSÃO: Com cinco marcadores juntos, o resultado foi informativo em todos os pacientes. O marcador mais informativo foi D7S1870 (78,4%), seguido por D7S613 (75,3%), D7S489 (70,1%) e D7S2476 (62,9%). A deleção foi encontrada em 84 (86,6%) pacientes e sua ausência em 13 (13,4%) pacientes. A deleção de 1,55 Mb foi observada em 76/84 pacientes (90,5%) e 1,84 Mb em 8/84 pacientes (9,5%). A origem parental da deleção foi materna em 44/84 pacientes (52,4%) e paterna em 40/84 pacientes (47,6%). Alterações oculares foram mais freqüentes em pacientes com deleção. Não houve diferença nos achados clínicos entre o tamanho ou a origem parental da deleção, exceto para EASV, presente em maior freqüência nos pacientes com deleção paterna. Os resultados por marcadores microssatélites foram concordantes com FISH positivos, no entanto, em dois pacientes com FISH negativos, a microdeleção foi detectada apenas pelos marcadores. CONCLUSÃO: O uso de cinco marcadores microssatélites selecionados foi informativo em todos os pacientes. Em dois casos, os marcadores foram mais eficientes que FISH, portanto pode ser considerado um método alternativo para o diagnóstico molecular da SWB / INTRODUCTION: Williams-Beuren syndrome (WBS; OMIM 194050) is caused by hemizygous contiguous gene microdeletions at 7q11.23. Typical facies, supravalvular aortic stenosis (SVAS), mental retardation, overfriendliness and hiperacusis comprise typical symptoms in WBS. The most common deletion is 1.55 Mb, however 1.84 Mb deletion also has been described. Although fluorescence in situ hybridization (FISH) is widely used in the detection of deletion, microsatellite markers are considered highly informative and easily manageable. PURPOSE: Test the microsatellite markers for the diagnosis of WBS, to determine the size and parental origin of microdeletion, compare the clinical characteristics between patients with different sizes of the deletion and parental origin. METHODS: We studied 97 patients with clinical diagnosis of WBS using five microsatellite markers: D7S1870, D7S489, D7S613, D7S2476 and D7S489_A. From the genomic DNA of probands and their parents was performed polymerase chain reaction (PCR), followed by electrophoresis on denaturing polyacrylamide gel (urea, 7.5 M) and the results visualized with silver staining. RESULTS AND DISCUSSION: Using five markers together, the result was informative in all patients. The most informative marker was D7S1870 (78.4%) followed by D7S613 (75.3%), D7S489 (70.1%) and D7S2476 (62.9%). The deletion was found in 84 (86.6%) patients and absent in 13 (13.4%) patients. The deletion of 1.55 Mb was observed in 76/84 patients (90.5%) and 1.84 Mb in 8 / 84 patients (9.5%). The parental origin was maternal in 44/84 patients (52.4%) and paternal in 40/84 patients (47.6%). Abnormalities ocular were more frequent in the patients with a deletion. There were no clinical differences in relation to either the size or parental origin of the deletion, except for SVAS, present in more frequency in the patients with paternal deletion. The results for microsatellite markers were concordant with FISH positive, however, in two patients with negative FISH, the microdeletion was detected only by the markers. CONCLUSION: Using these five selected microsatellite markers was informative in all patients. In two cases, the markers were more efficient than FISH, thus can be considered an alternative method for molecular diagnosis in SWB

There are more than 500,000 new cases of uterine cervical cancer (CCU) worldwide, which is the second most common cancer among women, and the second leading cause of death among women aged between 14 and 44 years. There is a known relationship between the CCU and the presence of human papillomavirus (HPV). In Brazil, one in four sexually active women are infected with HPV (in the Northeast, one in three), resulting in 19 cases of uterine cancer per 100,000 inhabitants. Laboratory evidence shows that, at present, preventive molecular test HPV-linked cancer through the detection and typing of viral DNA, may be associated with reduced mortality between men and women infected with HPV. It is known that there is a discrepancy between the histological and cytomorphological detection of HPV lesions in routine tests, so the molecular test is very important in this scenario. Thus, this study aimed to determine the HPV prevalence and the socio-demographic profile of infected women in State of Alagoas, hence propose a low cost kit for the more prevalent high risk HPV detection. Cervical samples from women living in the state of Alagoas - Brazil were assessed; these patients were submitted to a questionnaire and signed the free and informed consent form, through which we could collect information relating to the main co-factors commonly associated with the development of cervical lesions. Genomic DNA extraction was performed according to Illustra kit methodology (Asmersham Biosciences), while the DNA concentration in each sample was estimated using spectrophotometry. Viral evidence was obtained by PCR amplification of a 450bp viral DNA region (L1 gene) using the degenerate primers MY09 and MY11 We used the co-amplification of human β- globin gene (268 bp) as positive control, through GH20 and PC04 primers, and human DNA without HPV as negative control. The expected size PCR products were sequenced automatically. To identify the virus type, the sequences were aligned and compared with others using the Blastn tool in NCBI (National Center for Biotechnology Information). From the 757 samples analyzed, 123 (16.3%) were positive for HPV. There was a prevalence of high-risk HPV types (58,5%), with 12,3% HPV 16 positive samples. Individually, the most frequent type was the HPV 6 (21.5%), considered low risk. Regarding the co-factors, it was observed significant difference in the age of the patients; number of partners; number of children; and being pregnant at the time of data collection. The proposed kit will enable detection of the main oncogenic types present in the state by multiplex PCR analysis. The primers used responded well to the established analysis. Further steps are being taken towards the implementation of a commercial test kit. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Mundialmente ocorrem mais de 500 mil novos casos de câncer cervical uterino (CCU) por ano, sendo a terceira neoplasia mais comum entre mulheres, e a segunda causa de morte na faixa etária entre 14 e 44 anos. Há uma conhecida associação entre CCU e a presença do papilomavírus humano (HPV). No Brasil, uma em cada quatro mulheres sexualmente ativas está infectada pelo HPV (no Nordeste, uma em três), resultando em 19 casos de câncer uterino por 100 mil habitantes. Evidências laboratoriais revelam que a detecção e tipagem do DNA viral para prevenção do câncer causado por HPV, pode estar associado à redução da mortalidade entre pacientes infectados. Sabe-se que há discrepância entre os resultados citomorfológicos e histológicos na detecção de lesões por HPV nos exames rotineiros, por isso o teste molecular assume grande importância. O presente trabalho teve como objetivos definir a prevalência do HPV no Estado de Alagoas e o perfil sociodemográfico das mulheres infectadas, com o intuito de propor um “kit” de baixo custo para detecção dos HPV de alto risco mais prevalentes. Amostras cervicais de mulheres residentes no Estado foram analisadas; as pacientes foram submetidas a um questionário, para a coleta de informações referentes aos principais cofatores comumente associados ao desenvolvimento de lesões cervicais. A extração do DNA genômico foi realizada conforme metodologia do kit Illustra (Asmersham Biosciences), enquanto a concentração de DNA em cada amostra foi estimada através de espectrofotometria. A comprovação da presença viral foi feita por PCR, através da amplificação de uma região de 450pb do DNA viral (gene L1), com iniciadores degenerados MY09 e MY11. Como controle positivo utilizou-se a co-amplificação do gene humano β-globina (268 pb) com os iniciadores GH20 e PC04, além de um controle negativo, DNA humano sem HPV. Os produtos de PCR foram sequenciados automaticamente. Para identificar o tipo viral, as sequências foram alinhadas e comparadas a outras utilizando-se a ferramenta Blastn no NCBI (National Center for Biotechnology Information). Foi possível estabelecer que das 757 amostras analisadas 123 (16,3%) foram positivas para HPV. Houve prevalência dos tipos de HPV de alto risco (58,5%), sendo o HPV16 observado em 12,3% das amostras positivas. O HPV de maior frequência foi o HPV 6 (21,5%), considerado de baixo risco. Sobre os cofatores, pôde-se observar diferença significativa em relação à idade das pacientes; número de parceiros; número de filhos; e ser gestante no momento da coleta de dados. O kit de detecção proposto possibilitará a determinação dos principais tipos oncogênicos presentes no Estado por PCR multiplex. Os iniciadores utilizados responderam bem às análises estabelecidas. Novas etapas se fazem necessárias para implementação do “kit”.