A predisposição de recém-nascidos às doenças infecciosas é atribuída, em parte, a falta da memória imunológica pré-existente. Em recém-nascidos pré-termo, é presumido que o sistema imune seja menos desenvolvido ao nascimento, mas pouco se sabe sobre o tamanho e as características das subpopulações de linfócitos. Células T reguladoras (Treg) possuem papel crucial no controle do desenvolvimento de um sistema imune saudável incluindo a manutenção da autotolerância e, sua ausência, é responsável pela gama de manifestações inflamatórias e autoimunes observadas em pacientes com IPEX (Immunodeficiency, Poliendocrinopathy and Enteropathy X-linked Syndrome). Essas células são fenotipicamente caracterizadas pela presença do fator de transcrição Foxp3 (forkhead box P3) e pela alta expressão da cadeia ? do receptor de IL-2 (CD25), já que esta citocina é essencial para a geração, manutenção e funcionamento das células Treg. Pouco se sabe sobre a frequência destas células em recém-nascidos, particularmente em recém-nascidos muito prematuros ou moderados e recém-nascidos prematuros tardios, estudados como grupos separados. Resultados preliminares do nosso grupo revelaram uma maior capacidade dos recém-nascidos de produzir resposta pró-inflamatória em comparação aos adultos, a qual foi ainda mais acentuada pela diminuição da produção de IL-10, o que sugere uma função reguladora reduzida. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi caracterizar fenotipicamente e quantificar a população de células Treg, por meio de citometria de fluxo, em sangue de cordão umbilical de 15 recém-nascidos pré-termo nascidos entre 30-336/7 semanas de gestação (Grupo 1), 19 recém-nascidos pré-termo nascidos entre 34-366/7 semanas de gestação (Grupo 2) e 20 recém-nascidos a termo nascidos entre 37-41 semanas de gestação (Grupo 3), todos clinicamente saudáveis e com peso adequado para a idade gestacional, em comparação com 26 adultos saudáveis. Os resultados demonstraram que existe uma correlação inversa entre a frequência de Treg e a idade gestacional, com frequências significativamente maiores de células Treg CD4+CD25hiCD127loFoxp3+ no Grupo 1 quando comparado aos Grupos 2 e 3 e no Grupo 2 comparado ao Grupo 3, assim como frequências e números de Treg mais elevados em todos os recém-nascidos comparados aos adultos. Todos os recém-nascidos exibiram maior frequência de células Treg com fenótipo naïve comparados aos adultos. A expressão de CTLA-4 nas células Treg naïve foi reduzida nos dois grupos de pré-termo comparados aos grupos de recém-nascidos a termo e adultos, assim como nas células Treg de memória do Grupo 1 comparado aos demais grupos. As frequências de Tregs alfa4beta7+ e alfa4beta1+ foram maiores em ambos os grupos de pré-termo, mas significativamente diferentes somente no Grupo 1, quando comparado aos recém-nascidos a termo e adultos. Em conclusão, foram observadas altas frequências de células Treg em recém-nascidos pré-termo e a termo, e essas frequências mostraram correlação inversa com a idade gestacional. Essas células exibiram um perfil naïve quando comparadas às dos adultos, com alta expressão de CD45RA e alfa4beta7+ e menor expressão de CTLA-4, sugerindo uma menor função, particularmente em recém-nascidos muito prematuros / The predisposition of newborn infants to infectious diseases is attributed, in part, to the lack of pre-existing immunological memory. In preterm newborns, it is assumed that the immune system is less developed at birth, but little is known about the size and characteristics of lymphocyte subpopulations. Regulatory T cells (Tregs) have a crucial role in controlling the development of a healthy immune system including the maintenance of self-tolerance and, their absence, is responsible for the range of inflammatory and autoimmune manifestations observed in patients with IPEX (Immunodysregulation Polyendocrinopathy Enteropathy X-linked Syndrome). These cells are phenotypically characterized by the presence of the transcription factor Foxp3 (forkhead box P3) and by the high expression of the ? chain of the IL-2 receptor (CD25), as this cytokine is essential for the generation, maintenance and function of Treg cells. Little is known about the frequency of these cells in neonates, particularly in very and moderate preterm newborns and late preterm newborns studied as separate groups. Preliminary results from our group revealed greater ability of newborns to produce proinflammatory response compared to adults, which was further accentuated by the decreased production of IL-10, which suggests a reduced regulatory function. Thus, the aim of this study was to phenotypically characterize and quantify the population of Treg cells, by flow cytometry, in the cord blood of 15 preterm newborns born at 30-336/7 gestation weeks (Group 1), 19 preterm newborns born at 34-366/7 gestation weeks (Group 2) and 20 term newborns born at 37-41 gestation weeks (Group 3), all clinically healthy and adequate-for-gestational-age, compared to 26 healthy adults. The results demonstrated that there is an inverse correlation of the Treg frequency and gestational age, with significantly higher frequencies of CD4+CD25hiCD127loFoxp3+ Treg cells in Group 1 compared to Groups 2 and 3 and in Group 2 compared to Group 3, as well as significantly higher Treg frequencies and numbers in all the neonates compared to the adults. All of the newborns exhibited increased Treg frequencies with a naive phenotype compared to the adults. CTLA-4 expression in the naive Tregs was decreased in both preterm groups compared with those from term newborns and adults, as well as in the memory Treg cells from Group 1 compared with the other groups. The frequencies of alfa4beta7+ and alfa4beta1+ Tregs were higher in both preterm groups, but significantly different only in Group 1, when compared with those from the term newborns and the adults. In conclusion, high frequencies of Tregs were observed in term and preterm newborns, and these frequencies showed an inverse correlation with gestational age. These cells exhibited a naive profile when compared with adults, with high expression of CD45RA and alfa4beta7+ and lower expression of CTLA-4, implying a decreased function, particularly in very preterm newborns

O sistema imune neonatal tem sido considerado funcionalmente imaturo e recentes estudos sugerem que a suscetibilidade do neonato às infecções pode ser devido a alterações funcionais de células apresentadoras de antígenos que podem levar a deficiências secundárias nas respostas adaptativas. A ativação das células apresentadoras de antígenos é desencadeada pela estimulação de receptores, como os Toll-like Receptors (TLRs) e alterações na ativação desses receptores podem levar a uma subsequente redução da ativação de proteínas da via de sinalização intracelular e consequente alterações dos níveis das citocinas pró- e anti-inflamatórias, contribuindo assim, para uma resposta imune ineficiente do neonato. O Toll-like receptor 2 (TLR-2) é um receptor essencial para o reconhecimento seletivo de vários antígenos bacterianos e virais, em especial, o peptideoglicano, que compreende cerca de 50% da parede celular de bactérias Grampositivas, como os estafilococos, que são agentes infecciosos que prevalecem nas Unidades de Terapia Intensiva Neonatal. O objetivo deste estudo foi avaliar a ativação e resposta de monócitos de sangue do cordão umbilical de recém-nascidos pré-termo saudáveis < 34 semanas de gestação (Grupo 1), recém-nascidos pré-termo : 34 e < 37 semanas de gestação (Grupo 2) e recém-nascidos a termo (Grupo 3) e de adultos saudáveis, como controles, após a estimulação de TLR-2 ex-vivo com Pam3CSK4. Após a estimulação dos monócitos, foram determinados os níveis de expressão dos marcadores de ativação celular, os níveis das citocinas pró- e anti-inflamatórias e a expressão de moléculas envolvidas na sinalização intracelular. A caracterização das populações leucocitárias, bem como a capacidade fagocítica de Staphylococcus aureus e geração de burst oxidativo por monócitos e neutrófilos foram analisados por Citometria de Fluxo. Os resultados demonstraram que as células dendríticas e monócitos de neonatos expressam TLR-2 em níveis semelhantes aos de adultos. A expressão adequada de TLR-2 sugere um reconhecimento antigênico eficiente que é refletido em uma ativação apropriada das moléculas da cascata de sinalização e uma potente produção de citocinas pró-inflamatórias, apesar da reduzida produção de IL-10. Fagócitos neonatais apresentaram capacidade fagocítica de S. aureus reduzida em relação aos adultos e geração do burst oxidativo semelhante entre os grupos, no entanto neonatos prétermo apresentaram produção de peróxido de hidrogênio deficiente, o que poderia contribuir com uma reduzida morte intracelular deste microrganismo. Em conclusão, o recém-nascido não apresenta uma imaturidade funcional, mas sim, um desequilíbrio em sua resposta imune inata, com uma aparente menor produção de fatores antiinflamatórios, o que pode levar a predisposição à sepse / The neonatal immune system has been considered functionally immature and recent studies suggest that susceptibility of the neonate to infections may be due to functional alterations in antigen-presenting cells that can prompt to secondary deficiencies in adaptive responses. The activation of antigen-presenting cells is triggered by stimulation of receptors such as Toll-like receptors (TLRs) and changes in the activation of these receptors may lead to a subsequent reduction in the activation of intracellular signaling pathway proteins and consequent changes in pro- and anti-inflammatory cytokine levels, thus contributing to an inefficient immune response of the neonate. Toll-like Receptor 2 (TLR-2) is an essential receptor for the selective recognition of several bacterial and viral antigens, in particular, peptidoglycan, which comprises about 50% of the Gram-positive bacteria cell wall, such as staphylococci, which are infectious agents that prevail in Neonatal Intensive Care Units. The aim of this study was to evaluate the activation and response of monocytes derived from umbilical cord blood of healthy preterm newborns <34 weeks of gestation (Group 1), preterm newborns :34 and <37 weeks of gestation (Group 2) and term newborns (Group 3) and from healthy adults, as controls, after ex-vivo TLR-2 stimulation with Pam3CSK4. After monocyte stimulation, it was determined the expression levels of cellular activation markers, pro- and anti-inflammatory cytokine levels and the expression of molecules involved in downstream intracellular signaling. The characterization of leukocyte populations, as well as the phagocytic ability of Staphylococcus aureus and generation of oxidative burst by monocytes and neutrophils were analyzed by flow cytometry. The results demonstrated that neonatal dendritic cells and monocytes express TLR- 2 at similar levels to those of adults. The proper expression of TLR-2 suggests an efficient antigen recognition which is reflected in an appropriate activation of downstream signaling molecules and potent production of pro-inflammatory cytokines, in spite of the reduced production of IL-10. Neonatal phagocytes showed reduced phagocytic capacity of S. aureus compared to adults and similar generation of oxidative burst between groups, however preterm neonates showed deficient production of hydrogen peroxide, which could contribute to a reduced intracellular killing of this microorganism. In conclusion, the newborn does not present a functional immaturity, but an imbalance in its innate immune response, with an apparent lower production of antiinflammatory factors, which can lead to a predisposition to sepsis

Submitted by Miriam Lucas (miriam.lucas@unioeste.br) on 2018-04-18T17:23:41Z No. of bitstreams: 2 Rosilene_Berres_2017.pdf: 3247343 bytes, checksum: 97680419cf0c605450559d10c4c7af3b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-18T17:23:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Rosilene_Berres_2017.pdf: 3247343 bytes, checksum: 97680419cf0c605450559d10c4c7af3b (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-10-09 / The neonatal component has relevance in infant mortality rates, with prematurity being one of the main causes. Prematurity requires that the care of preterm infants be started in the hospital environment and be continued after leaving the health care environment. It is a qualitative study using the Grounded Theory as a methodological reference and the Complexity Theory as theoretical reference. It was aimed to understand the continuity of care to the preterm newborn in the health care environment in a frontier region in the experience of families and health and nursing professionals. Data collection was done through semi-structured interviews, at the Child Nutrition Center of Foz do Iguaçu, Paraná. The study consisted of seventeen participants, divided into three theoretical samples. The first consisted of eight main caregivers of preterm newborns (mothers), the second consisted of eight health professionals (psychologist, physiotherapist, pediatrician) and nursing professionals (nursing assistants and nurses) and the third had the participation of a manager. Data were collected from July 2016 to March 2017. Data collection and analysis occurred concurrently, according to the method. Having reached the depth of the data, came the understanding of the study. The three interdependent steps of the data analysis were processed: open, axial and selective coding, according to Strauss and Corbin's paradigmatic perspective, which consists of five components (context, causal condition, intervening condition, strategies and consequences), which explain the phenomenon, forming five categories and nine subcategories. The category "Describing the structure and functioning of the Child Nutrition Center of Foz do Iguaçu" forms the context; the category "Preterm birth and the need for care of a preterm newborn" indicates the causal conditions; the category "Identifying conditions that intervene in the process of continuity of care of the preterm newborn" reveals the intervening conditions; the category "Identifying strategies to ensure continuity of care for the preterm newborn" identifies the strategies and the category "Identifying flows of (dis) continuity of care to the preterm newborn in border region" represent the consequences of the phenomenon and also of the central category. It is concluded that the (dis)continuity of care to preterm newborns in the border region presents a disordered and disconnected flow between the care services to the child who was born premature, since hospital discharge. Reference and counter-referral systems seem to be disarticulated, and primary health care has no role in the follow-up of the child and the family at the Child Nutrition Center of Foz do Iguaçu, a reference service for preterm care. Health professionals and managers are required to reflect on the (un)continuity of preterm newborn care, taking into account the multiple social, economic, and health vulnerabilities of individuals in a border region to ensure continued care and interconnected to different health services and meet the multiple needs of the child and his family. / El componente neonatal tiene relevancia en los índices de mortalidad infantil, siendo la prematuridad una de las principales causas. La prematuridad requiere que el cuidado al recién nacido pretérmino sea iniciado en el ambiente hospitalario y tenga continuidad después del alta del hospital, en la red de atención de salud. Se trata de estudio cualitativo con uso de la Teoría Fundamentada en los Datos como referencial metodológico y la Teoría de la Complejidad como referencial teórico. Fue objetivo comprender la continuidad del cuidado al recién nacido pretérmino en la red de atención de salud en una región de frontera en la experiencia de las familias y de los profesionales de salud y de enfermería. La colecta de datos se ha realizado por medio de entrevista semiestructuradas, en el Centro de Nutrición Infantil de Foz de Iguazú, Paraná, Brasil. El estudio ha tenido diecisiete participantes, divididos en tres muestras teóricas. La primera fue formada por ocho cuidadores principales de los recién nacidos pretérminos (madres), la segunda contó con ocho profesionales de salud (psicóloga, fisioterapeuta, médica pediatra) y de enfermería (auxiliares de enfermería y enfermeros) y la tercera tuvo la participación de un gestor. Los dados fueron colectados en el periodo de julio de 2016 a marzo de 2017. La colecta y análisis de datos ocurrieron concomitantemente, conforme previsto en el método. Alcanzado la profundidad de los datos, se ha llegado a la comprensión del estudio. Las tres etapas interdependientes del análisis de los datos fueron procesadas, siendo ellas: codificación abierta, axial y selectiva, según la perspectiva paradigmática, de Strauss y Corbin, que es constituida por cinco componentes (contexto, condición causal, condición interviniente, estrategias y consecuencias), que explican el fenómeno, formando cinco categorías y nueve subcategorías. La categoría “Describiendo la estructura y funcionamiento del Centro de Nutrición Infantil de Foz de Iguazú” forma el contexto; la categoría “Sucediendo el nacimiento pretérmino y la necesidad de cuidado de un recién nacido pretérmino” indica las condiciones causales; la categoría “Identificando condiciones que intervienen en el proceso de continuidad del cuidado del recién nacido prétermino” revela las condiciones intervinientes; la categoría “Identificando estrategias para asegurar la continuidad del cuidado al recién nacido pretérmino” apunta las estrategias y la categoría “Identificando flujos de (des)continuidad del cuidado al recién nacido pretérmino en región de frontera” representan las consecuencias del fenómeno y también de la categoría central. Se concluye que la (des)continuidad del cuidado al recién nacido pretérmino en región de frontera presenta un flujo desordenado y desconectado entre los servicios de atención al niño que nació prematuro, desde el alta del hospital. Los sistemas de referencia y de contra referencia parecen desarticulados y la atención primaria a la salud no tiene participación en el acompañamiento al niño y a la familia junto al Centro de Nutrición Infantil de Foz de Iguazú, servicio de referencia al cuidado del pretérmino. Es requerido a los profesionales y gestores en salud reflexionar sobre la (des)continuidad del cuidado del recién nacido pretérmino, considerando las múltiples vulnerabilidades sociales, económicas y de los agravios a la salud, particulares de una región de frontera, para asegurar un cuidado continuado e interconectado a los diferentes servicios de atención a la salud y atender a las múltiples necesidades del niño y su familia. / O componente neonatal tem relevância nos índices de mortalidade infantil, sendo a prematuridade uma das principais causas. A prematuridade requer que o cuidado ao recém-nascido pré-termo seja iniciado no ambiente hospitalar e tenha continuidade após a alta hospitalar, na rede de atenção à saúde. Trata-se de estudo qualitativo com uso da Teoria Fundamentada nos Dados como referencial metodológico e a Teoria da Complexidade como referencial teórico. Foi objetivo compreender a continuidade do cuidado ao recém-nascido pré-termo na rede de atenção à saúde em uma região de fronteira na experiência das famílias e dos profissionais de saúde e de enfermagem. A coleta dos dados foi realizada por meio de entrevistas semiestruturadas, no Centro de Nutrição Infantil de Foz do Iguaçu, Paraná. O estudo contou com dezessete participantes, divididos em três amostras teóricas. A primeira foi formada por oito cuidadores principais dos recém-nascidos pré-termos (mães), a segunda contou com oito profissionais de saúde (psicóloga, fisioterapeuta, médica pediatra) e de enfermagem (auxiliares de enfermagem e enfermeiros) e a terceira teve a participação de um gestor. Os dados foram coletados no período de julho de 2016 a março de 2017. A coleta e análise de dados aconteceram concomitantemente, conforme prevê o método. Tendo alcançado a profundidade dos dados, chegou-se à compreensão do estudo. As três etapas interdependentes da análise dos dados foram processadas, sendo elas: codificação aberta, axial e seletiva, segundo a perspectiva paradigmática, de Strauss e Corbin, que é constituída por cinco componentes (contexto, condição causal, condição interveniente, estratégias e consequências), que explicam o fenômeno, formando cinco categorias e nove subcategorias. A categoria “Descrevendo a estrutura e funcionamento do Centro de Nutrição Infantil de Foz do Iguaçu” forma o contexto; a categoria “Acontecendo o nascimento pré-termo e a necessidade de cuidado de um recém-nascido pré-termo” indica as condições causais; a categoria “Identificando condições que intervém no processo de continuidade do cuidado do recém-nascido pré-termo” revela as condições intervenientes; a categoria “Identificando estratégias para assegurar continuidade do cuidado ao recém-nascido pré-termo” aponta as estratégias e a categoria “Identificando fluxos de (des)continuidade do cuidado ao recém-nascido pré-termo em região de fronteira” representam as consequências do fenômeno e também da categoria central. Conclui-se que a (des)continuidade do cuidado ao recém-nascido pré-termo em região de fronteira apresenta um fluxo desordenado e desconexo entre os serviços de atenção à criança que nasceu prematura, desde a alta hospitalar. Os sistemas de referência e de contrarreferência parecem desarticulados e a atenção primária à saúde não tem participação no acompanhamento da criança e da família junto ao Centro de Nutrição Infantil de Foz do Iguaçu, serviço de referência ao cuidado do pré-termo. É requerido aos profissionais e gestores em saúde refletir sobre a (des)continuidade do cuidado do recém-nascido pré-termo, considerando as múltiplas vulnerabilidades sociais, econômicas e de agravos a saúde, particulares de uma região de fronteira, para assegurar um cuidado continuado e interligado aos diferentes serviços de atenção à saúde e atender às múltiplas necessidades da criança e sua família.

Orientador: Cristina Maria Garcia de Lima Parada / Resumo: O presente estudo teve por objetivo comparar o processo e resultado do cuidado pré-natal considerando-se as Unidades Básicas de Saúde de modelo tradicional e Estratégia Saúde da Família, identificar a influência da qualidade da assistência pré-natal desenvolvida sobre a prematuridade e a situação do aleitamento materno no primeiro ano de vida do lactente prematuro. A tese a ser defendida é que há diferenças no resultado pré-natal quando se consideram os diferentes modelos de atenção, com melhor situação na Estratégia Saúde da Família e que a baixa qualidade pré-natal é fator de risco para prematuridade. Estudo de coorte prospectiva tomou por base a Coorte de Lactentes de Botucatu – CLaB. Utilizou-se amostra intencional de 273 duplas mães/bebês. Os dados foram colhidos em sete momentos. Durante o recrutamento foi realizada entrevista para caracterização das duplas e sobre o processo de atenção pré-natal e nascimento. Nos outros momentos investigou-se a situação do aleitamento materno. A inclusão na coorte ocorreu entre junho de 2015 e janeiro de 2016 e o seguimento foi concluído em janeiro de 2017. Para avaliação da qualidade do pré-natal criou-se escore que variou de zero (pior situação) a sete pontos (melhor situação), a partir de indicadores de processo (início precoce, número de consultas, exames de primeiro e terceiro trimestres, ultrassom precoce, educação em saúde e revisão de parto) propostos pelo Ministério da Saúde. Considerou-se escore baixo quando igual ou inferior... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to compare the process and the result of the prenatal care considering the traditional Basic Health Units model and Family Health Strategy, identify the influency of the quality of the prenatal assistance carried on the prematurity and the situation of the breastfeeding during the premature first year of life. The hypothesis to be defended is that there are differences in the prenatal results when we take into account the different models of prenatal health care, with a better situation in the Family Health Care and that in a low quality prenatal is a risk factor for prematurity. A prospective cohort study was based on the Infant Cohort of Botucatu – ICB. An intentional sample of 273 mother/baby pairs was used. The data were collected in five moments. An interview for the characterization of the pairs and the prenatal and birth process was carried out during the recruitment. On the other moments the situation of the breastfeeding was investigated. The inclusion of the cohort occurred between June, 2015 and January, 2016 and the follow-up period was concluded in January 2017. For the prenatal quality evaluation a score which varied from zero (worst situation) to seven points (best situation) was created, taking into account some indicators of process (early start, number of visits, first and third quarters exams, early ultrasound exam, health education and review of labour) proposed by the Ministry of Health. It was considered low score when it was equal or be... (Complete abstract click electronic access below) / Resumen: El presente estúdio tuvo por objetivo comparar el processo y el resultado del cuidado prenatal considerando las Unidades de Salud de modelo tradicional y Estrategia Salud de la Familia, identificar la influencia de la calidad de la asistencia prenatal desarrollada sobre la prematuridade y la situación de la lactancia materna en el primer año de vida del lactante prematuro. La tesis a ser defendida es que hay diferencias en el resultado prenatal cuando se consideran los diferentes modelos de atención, con mejor situación en la Estrategia Salud de la Familia y que la baja calidad prenatal es fator de riesgo para prematuridad. El estúdio de cohorte prospectiva se basó en la Cohorte de Lactantes de Botucatu – CLaB. Se utilizó una muestra intencional de 273 dobles madres/bebés. Los datos fueron recogidos en cinco momentos. Durante el recrutamento se realióo una entrevista para caracterizar las dobles y sobre el proceso de atención prenatal e nacimiento. En los otros momentos se investigó la situación de la lactancia materna. La inclusión en la cohorte ocurrió entre junio de 2015 y enero de 2016 y el seguimiento se concluyó en enero de 2017. Para la evaluación de la calidad del prenatal se creó una puntuación que varía de cero (peor situación) a siete puntos (mejor sitación), a partir de indicadores de proceso (inicio precoz, número de consultas, exámenes de preimer y tercer trimestres, ultrasonido precoz, educación en salud y revisión de parto) propuestos por el Ministerio de Salu... (Resumen completo clicar acceso eletrônico abajo) / Doutor