A prevalência da obesidade vem aumentando em todas as idades e na população infantil é considerada um problema de saúde pública. Os fatores relacionados à patogênese da obesidade não estão completamente elucidados, envolvendo questões comportamentais, biológicas, hormonais, culturais e genéticas. O comportamento alimentar é regulado pelo eixo hormonal entero neuroendócrino o qual modula o apetite, os processos fisiológicos, metabólicos e psicológicos. A grelina teria um papel importante neste processo de modulação alimentar, pois está envolvida na regulação central da ingestão alimentar e do balanço energético, estimulando o apetite, a lipogênese e reduzindo a taxa metabólica. Estudos demonstram que na obesidade as concentrações plasmáticas de grelina são significantemente menores e estão negativamente relacionadas ao índice de massa corporal, à porcentagem de gordura corporal, à insulina e à leptina; ainda, a grelina também está implicada na regulação do tecido adiposo, protegendo o estoque de gordura em depósitos sensíveis à sua ação para posterior utilização, sendo um hormônio com múltiplas funções no mecanismo de homeostase do estado de adiposidade e no desenvolvimento da síndrome metabólica. A ação da grelina esta ligada ao eixo grelina/ receptor secretagogo do hormônio do crescimento (GHSR) em humanos. O gene GHSR localiza-se no cromossomo 3q 26.31, lócus que foi associado a múltiplos fenótipos relacionados à obesidade e à síndrome metabólica. Deste modo, o presente estudo avaliou se variantes do GHSR poderiam estar associados com o quadro de obesidade e se influenciariam a síndrome metabólica e a compulsão alimentar em crianças e adolescentes obesos. Observamos que a adiposidade influencia o aparecimento da resistência à insulina, as complicações metabólicas e a prevalência de síndrome metabólica, no entanto, nenhuma das variantes analisadas no gene do GHSR esteve associada à obesidade infantil. Notamos que a presença do alelo C (homozigose para o alelo ancestral e heterozigose) da variante rs495225 (171 C/T) resultou em maior ingestão de carboidrato e uma tendência a maior ingestão de calorias nas crianças e adolescentes obesos, também associou-se com maior escore para compulsão alimentar periódica nas meninas obesas. Nesta variante, observamos que a presença do alelo T (homozigose para o alelo polimórfico) resultou em maior resistência à ação da insulina nas crianças e adolescentes obesos. Avaliando a variante rs572169 (477 G/A), observamos que a presença do alelo G (homozigose para o alelo ancestral) levou a uma maior ingestão calórica e a maiores valores de colesterol total e LDLc nas crianças e adolescentes obesos. Desta forma, a presença de alterações polimórficas no gene do GHSR frequentes na nossa população pode influenciar o comportamento alimentar e as co-morbidades associadas à obesidade infantil e levar a um maior risco de doenças metabólicas e cardiovasculares. / Obesity´s prevalence, which is increasing in all ages, is considered, in children, a public health problem. The factors related to the pathogenesis of obesity are not fully elucidated, and are involving behavioral, biological, hormonal, genetic and cultural factors. The eating behavior is regulated by the hormonal entero neuroendocrine axis which modulates appetite, physiological, metabolic and psychological processes. Ghrelin would have an important role in the modulation of the process of eating. Ghrelin is involved in the central regulation of food intake and energy balance by stimulating appetite, reducing lipogenesis and metabolic rate. Studies show that, in obese the plasma concentrations of ghrelin are significantly smaller and is negatively correlated with body mass index, percent body fat, insulin and leptin levels; yet, this ghrelin is also implicated in the regulation of adipose tissue, protecting the stock of fat deposits sensitive to its action for later use, being an hormone with multiple functions in the homeostasis mechanism of the state of adiposity and development of metabolic syndrome. The action of ghrelin is linked to ghrelin axis/ growth hormone secretagogue receptor (GHSR), in humans. The GHSR gene is located on chromosome 3q 26.31, which locus was associated with multiple phenotypes related to obesity and metabolic syndrome. Thus, the present study evaluated whether the GHSR variants could be associated with obesity and the metabolic syndrome and binge eating in obese children and adolescents. We found that adiposity influences the onset of insulin resistance, metabolic complications and prevalence of metabolic syndrome, however none of the variants analyzed in the GHSR gene was associated with childhood obesity. We note that the presence of the C allele (homozygous and heterozygous ancestral allele) variant rs495225 (171 C/T) resulted in higher carbohydrate intake and a trend toward greater calorie intake in obese children and adolescents, it was also associated with higher scores for periodic binge eating in obese girls. We observed that the presence of the T allele (homozygous for the polymorphic allele) has resulted in increased resistance to insulin action in obese children and adolescents. Assessing the variant rs 572169(477 G/A), we observed that the presence of the G allele (homozygous for the ancestral allele) led to greater caloric intake and higher values of total cholesterol and LDL-c in obese children and adolescents. Thus, the presence of polymorphic alterations in the gene GHSR is frequent in our population and may influence eating behavior and the co-morbidities associated with obesity and lead to an increased risk of metabolic and cardiovascular diseases.

A prevalência da obesidade vem aumentando em todas as idades e na população infantil é considerada um problema de saúde pública. Os fatores relacionados à patogênese da obesidade não estão completamente elucidados, envolvendo questões comportamentais, biológicas, hormonais, culturais e genéticas. O comportamento alimentar é regulado pelo eixo hormonal entero neuroendócrino o qual modula o apetite, os processos fisiológicos, metabólicos e psicológicos. A grelina teria um papel importante neste processo de modulação alimentar, pois está envolvida na regulação central da ingestão alimentar e do balanço energético, estimulando o apetite, a lipogênese e reduzindo a taxa metabólica. Estudos demonstram que na obesidade as concentrações plasmáticas de grelina são significantemente menores e estão negativamente relacionadas ao índice de massa corporal, à porcentagem de gordura corporal, à insulina e à leptina; ainda, a grelina também está implicada na regulação do tecido adiposo, protegendo o estoque de gordura em depósitos sensíveis à sua ação para posterior utilização, sendo um hormônio com múltiplas funções no mecanismo de homeostase do estado de adiposidade e no desenvolvimento da síndrome metabólica. A ação da grelina esta ligada ao eixo grelina/ receptor secretagogo do hormônio do crescimento (GHSR) em humanos. O gene GHSR localiza-se no cromossomo 3q 26.31, lócus que foi associado a múltiplos fenótipos relacionados à obesidade e à síndrome metabólica. Deste modo, o presente estudo avaliou se variantes do GHSR poderiam estar associados com o quadro de obesidade e se influenciariam a síndrome metabólica e a compulsão alimentar em crianças e adolescentes obesos. Observamos que a adiposidade influencia o aparecimento da resistência à insulina, as complicações metabólicas e a prevalência de síndrome metabólica, no entanto, nenhuma das variantes analisadas no gene do GHSR esteve associada à obesidade infantil. Notamos que a presença do alelo C (homozigose para o alelo ancestral e heterozigose) da variante rs495225 (171 C/T) resultou em maior ingestão de carboidrato e uma tendência a maior ingestão de calorias nas crianças e adolescentes obesos, também associou-se com maior escore para compulsão alimentar periódica nas meninas obesas. Nesta variante, observamos que a presença do alelo T (homozigose para o alelo polimórfico) resultou em maior resistência à ação da insulina nas crianças e adolescentes obesos. Avaliando a variante rs572169 (477 G/A), observamos que a presença do alelo G (homozigose para o alelo ancestral) levou a uma maior ingestão calórica e a maiores valores de colesterol total e LDLc nas crianças e adolescentes obesos. Desta forma, a presença de alterações polimórficas no gene do GHSR frequentes na nossa população pode influenciar o comportamento alimentar e as co-morbidades associadas à obesidade infantil e levar a um maior risco de doenças metabólicas e cardiovasculares. / Obesity´s prevalence, which is increasing in all ages, is considered, in children, a public health problem. The factors related to the pathogenesis of obesity are not fully elucidated, and are involving behavioral, biological, hormonal, genetic and cultural factors. The eating behavior is regulated by the hormonal entero neuroendocrine axis which modulates appetite, physiological, metabolic and psychological processes. Ghrelin would have an important role in the modulation of the process of eating. Ghrelin is involved in the central regulation of food intake and energy balance by stimulating appetite, reducing lipogenesis and metabolic rate. Studies show that, in obese the plasma concentrations of ghrelin are significantly smaller and is negatively correlated with body mass index, percent body fat, insulin and leptin levels; yet, this ghrelin is also implicated in the regulation of adipose tissue, protecting the stock of fat deposits sensitive to its action for later use, being an hormone with multiple functions in the homeostasis mechanism of the state of adiposity and development of metabolic syndrome. The action of ghrelin is linked to ghrelin axis/ growth hormone secretagogue receptor (GHSR), in humans. The GHSR gene is located on chromosome 3q 26.31, which locus was associated with multiple phenotypes related to obesity and metabolic syndrome. Thus, the present study evaluated whether the GHSR variants could be associated with obesity and the metabolic syndrome and binge eating in obese children and adolescents. We found that adiposity influences the onset of insulin resistance, metabolic complications and prevalence of metabolic syndrome, however none of the variants analyzed in the GHSR gene was associated with childhood obesity. We note that the presence of the C allele (homozygous and heterozygous ancestral allele) variant rs495225 (171 C/T) resulted in higher carbohydrate intake and a trend toward greater calorie intake in obese children and adolescents, it was also associated with higher scores for periodic binge eating in obese girls. We observed that the presence of the T allele (homozygous for the polymorphic allele) has resulted in increased resistance to insulin action in obese children and adolescents. Assessing the variant rs 572169(477 G/A), we observed that the presence of the G allele (homozygous for the ancestral allele) led to greater caloric intake and higher values of total cholesterol and LDL-c in obese children and adolescents. Thus, the presence of polymorphic alterations in the gene GHSR is frequent in our population and may influence eating behavior and the co-morbidities associated with obesity and lead to an increased risk of metabolic and cardiovascular diseases.

A ghrelina, hormônio secretado principalmente por células gástricas, liga-se ao seu receptor, o receptor de secretagogo de GH (GHSR - Growth hormone secretagogue receptor), localizado no hipotálamo e na hipófise, estimulando a síntese e secreção do GH. Recentemente foram identificadas mutações no gene GHSR em crianças com baixa estatura idiopática (BEI) e com deficiência isolada de GH (DGH). No presente estudo investigamos a presença de mutações no gene GHSR em crianças com DGH isolada de causa não identificada e crianças com BEI, incluindo um subgrupo de crianças com atraso constitucional de crescimento e desenvolvimento (ACCD). Foram selecionados 14 pacientes com deficiência isolada de GH sem alterações anatômicas da região hipotálamo-hipofisária e 96 pacientes com BEI, destes 31 (32%) apresentavam ACCD. Também foram estudados 150 controles adultos e 197 crianças controle com crescimento e puberdade normais. A região codificadora do GHSR foi amplificada utilizando-se oligonucleotídeos iniciadores específicos, seguida de purificação enzimática e seqüenciamento automático. Encontramos 6 variantes alélicas em heterozigose no GHSR: nenhuma delas presente nos controles estudados, e quatro destas variantes estão localizadas em regiões conservadas do gene. Uma variante foi encontrada em uma paciente do grupo DGH (p.Val249Leu) e as outras cinco (c.-6 G>C, p.Ser84Ile, p.Val182Ala, p.Ala169Thr e p.Ala358Thr) foram encontradas em pacientes do subgrupo ACCD do grupo BEI. As variantes missense foram submetidas a estudo funcional que evidenciou que as mutações p.Ser84Ile e p.Val182Ala possuem diminuição na atividade basal associadas à diminuição da expressão do receptor na superfície celular. Adicionalmente, a mutação p.Ser84Ile também apresenta redução na atividade do GHSR induzida pelo ligante. A variante p.Val249Leu foi encontrada em uma paciente do sexo feminino com diagnóstico de DGH isolado. A falta de segregação familiar associada à ausência de déficit funcional da variante nos estudos in vitro sugere que, neste caso, a variante p.Val249Leu não é a causa do fenótipo de DGH nesta família e trata-se de uma variante alélica rara. As 5 variantes alélicas no GHSR (c.-6 G>C, p.Ser84Ile, p.Val182Ala, p.Ala169Thr e p.Ala358Thr) encontradas nos pacientes com BEI foram identificadas apenas naqueles com puberdade atrasada, ou seja, pertencentes ao subgrupo ACCD (3 do sexo masculino e 2 do sexo feminino). A freqüência de variantes neste grupo de pacientes foi de 16%, significativamente maior que nos outros grupos, e a ausência de variantes gênicas novas no grupo de crianças obesas com altura normal e mesmo no grupo de crianças com BEI sem ACCD sugere que nosso achado não foi casual e que as alterações descritas podem estar associadas ao fenótipo de ACCD. Os estudos in vitro mostraram prejuízos funcionais em 2 destas variantes (p.Ser84Ile e p.Val182Ala) porém, devido à limitação dos estudos funcionais (celulas heterólogas) não podemos afastar que as demais não tenham algum impacto funcional in vivo. Em conclusão, nossos resultados sugerem um envolvimento dos defeitos no GHSR na etiologia do atraso constitucional do crescimento e desenvolvimento em uma parcela de pacientes com esta condição / Ghrelin, hormone secreted by gastric cells, stimulates growth hormone secretion by acting on its receptor GHSR, located in the hypothalamus and pituitary. Recently, mutations in the GHSR gene were described in patients with growth hormone deficiency (GHD) and idiopathic short stature (ISS). In the present study we analyzed the GHSR gene in patients with isolated GHD and patients with ISS, including a subgroup of patients with constitutional delay of growth and puberty (CDGP). We studied 14 GHD patients with normal pituitary magnetic resonance imaging and 96 patients with ISS, 31 of them with CDGP. We also studied 150 adults and in 197 children with normal stature. The entire coding region as well as the exon-intron boundaries of GHSR were PCR amplified in all patients and control group and PCR products were bidirectionally sequenced. Six different heterozygous variants in GHSR were identified: none of them were found in the control group and four of these amino acid substitutions occurred at a conserved position within the GHSR. One variant (p.Val249Leu) was found in a GHD patient and the other five (c.-6 G>C, p.Ser84Ile, p.Val182Ala, p.Ala169Thr e p.Ala358Thr) were found in patients with CDGP. The missense variants were submitted to functional studies. Two of these variants (p.Ser84Ile and p.Val182Ala) result in a decrease in basal activity that was in part explained by a reduction in cell surface expression. The p.Ser84Ile mutation was also associated with a defect in ghrelin potency. The p.Val249Leu variant, found in a female patient with isolated GHD, did not segregate with the phenotype in the family and had no functional impairment in vitro. This suggests that p.Val249Leu is not the cause of the GHD in the family and may be a rare allelic variant. The other variants (c.-6 G>C, p.Ser84Ile, p.Val182Ala, p.Ala169Thr e p.Ala358Thr) were identified only in patients with CDGP (3 male and 2 female). The frequency of allelic variants observed in this group (16%) was higher than expected by chance in contrast with ISS and GHD children, and the absence of other GHSR mutations in the large group of control children suggests that the association between GHSR mutations and CDGP phenotype is unlikely to be fortuitous. Functional studies revealed that two of the identified missense variants (p.Ser84Ile and p.Val182Ala) are functionally significant. These functional studies were performed in heterologous cell expression systems; therefore it is not possible to completely rule out that the other identified variants might cause some unrevealed impairment on GHSR function or expression in vivo. In conclusion, our data raise the possibility that abnormalities in ghrelin receptor function may be implicated in the ethiology of CDGP in some patients

A ghrelina, hormônio secretado principalmente por células gástricas, liga-se ao seu receptor, o receptor de secretagogo de GH (GHSR - Growth hormone secretagogue receptor), localizado no hipotálamo e na hipófise, estimulando a síntese e secreção do GH. Recentemente foram identificadas mutações no gene GHSR em crianças com baixa estatura idiopática (BEI) e com deficiência isolada de GH (DGH). No presente estudo investigamos a presença de mutações no gene GHSR em crianças com DGH isolada de causa não identificada e crianças com BEI, incluindo um subgrupo de crianças com atraso constitucional de crescimento e desenvolvimento (ACCD). Foram selecionados 14 pacientes com deficiência isolada de GH sem alterações anatômicas da região hipotálamo-hipofisária e 96 pacientes com BEI, destes 31 (32%) apresentavam ACCD. Também foram estudados 150 controles adultos e 197 crianças controle com crescimento e puberdade normais. A região codificadora do GHSR foi amplificada utilizando-se oligonucleotídeos iniciadores específicos, seguida de purificação enzimática e seqüenciamento automático. Encontramos 6 variantes alélicas em heterozigose no GHSR: nenhuma delas presente nos controles estudados, e quatro destas variantes estão localizadas em regiões conservadas do gene. Uma variante foi encontrada em uma paciente do grupo DGH (p.Val249Leu) e as outras cinco (c.-6 G>C, p.Ser84Ile, p.Val182Ala, p.Ala169Thr e p.Ala358Thr) foram encontradas em pacientes do subgrupo ACCD do grupo BEI. As variantes missense foram submetidas a estudo funcional que evidenciou que as mutações p.Ser84Ile e p.Val182Ala possuem diminuição na atividade basal associadas à diminuição da expressão do receptor na superfície celular. Adicionalmente, a mutação p.Ser84Ile também apresenta redução na atividade do GHSR induzida pelo ligante. A variante p.Val249Leu foi encontrada em uma paciente do sexo feminino com diagnóstico de DGH isolado. A falta de segregação familiar associada à ausência de déficit funcional da variante nos estudos in vitro sugere que, neste caso, a variante p.Val249Leu não é a causa do fenótipo de DGH nesta família e trata-se de uma variante alélica rara. As 5 variantes alélicas no GHSR (c.-6 G>C, p.Ser84Ile, p.Val182Ala, p.Ala169Thr e p.Ala358Thr) encontradas nos pacientes com BEI foram identificadas apenas naqueles com puberdade atrasada, ou seja, pertencentes ao subgrupo ACCD (3 do sexo masculino e 2 do sexo feminino). A freqüência de variantes neste grupo de pacientes foi de 16%, significativamente maior que nos outros grupos, e a ausência de variantes gênicas novas no grupo de crianças obesas com altura normal e mesmo no grupo de crianças com BEI sem ACCD sugere que nosso achado não foi casual e que as alterações descritas podem estar associadas ao fenótipo de ACCD. Os estudos in vitro mostraram prejuízos funcionais em 2 destas variantes (p.Ser84Ile e p.Val182Ala) porém, devido à limitação dos estudos funcionais (celulas heterólogas) não podemos afastar que as demais não tenham algum impacto funcional in vivo. Em conclusão, nossos resultados sugerem um envolvimento dos defeitos no GHSR na etiologia do atraso constitucional do crescimento e desenvolvimento em uma parcela de pacientes com esta condição / Ghrelin, hormone secreted by gastric cells, stimulates growth hormone secretion by acting on its receptor GHSR, located in the hypothalamus and pituitary. Recently, mutations in the GHSR gene were described in patients with growth hormone deficiency (GHD) and idiopathic short stature (ISS). In the present study we analyzed the GHSR gene in patients with isolated GHD and patients with ISS, including a subgroup of patients with constitutional delay of growth and puberty (CDGP). We studied 14 GHD patients with normal pituitary magnetic resonance imaging and 96 patients with ISS, 31 of them with CDGP. We also studied 150 adults and in 197 children with normal stature. The entire coding region as well as the exon-intron boundaries of GHSR were PCR amplified in all patients and control group and PCR products were bidirectionally sequenced. Six different heterozygous variants in GHSR were identified: none of them were found in the control group and four of these amino acid substitutions occurred at a conserved position within the GHSR. One variant (p.Val249Leu) was found in a GHD patient and the other five (c.-6 G>C, p.Ser84Ile, p.Val182Ala, p.Ala169Thr e p.Ala358Thr) were found in patients with CDGP. The missense variants were submitted to functional studies. Two of these variants (p.Ser84Ile and p.Val182Ala) result in a decrease in basal activity that was in part explained by a reduction in cell surface expression. The p.Ser84Ile mutation was also associated with a defect in ghrelin potency. The p.Val249Leu variant, found in a female patient with isolated GHD, did not segregate with the phenotype in the family and had no functional impairment in vitro. This suggests that p.Val249Leu is not the cause of the GHD in the family and may be a rare allelic variant. The other variants (c.-6 G>C, p.Ser84Ile, p.Val182Ala, p.Ala169Thr e p.Ala358Thr) were identified only in patients with CDGP (3 male and 2 female). The frequency of allelic variants observed in this group (16%) was higher than expected by chance in contrast with ISS and GHD children, and the absence of other GHSR mutations in the large group of control children suggests that the association between GHSR mutations and CDGP phenotype is unlikely to be fortuitous. Functional studies revealed that two of the identified missense variants (p.Ser84Ile and p.Val182Ala) are functionally significant. These functional studies were performed in heterologous cell expression systems; therefore it is not possible to completely rule out that the other identified variants might cause some unrevealed impairment on GHSR function or expression in vivo. In conclusion, our data raise the possibility that abnormalities in ghrelin receptor function may be implicated in the ethiology of CDGP in some patients